血液常規(guī)檢查檢驗程序

1、第 八 章 血液常規(guī)檢查檢驗程序檢測血液中紅細(xì)胞、 白細(xì)胞和血小板數(shù)量、 白細(xì)胞分類及相關(guān)參數(shù) （HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC RDWMP等）的變化對臨床有關(guān)疾病的診斷、觀察疾病的變化及治療效果具有重要參 考價值?，F(xiàn)根據(jù)ISO15189文件一醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量與能力專用要求的規(guī)定，以SF-3000、ADVIA-120和BC-2000血細(xì)胞分析儀為例進行介紹。第一節(jié) 血細(xì)胞分析儀檢測原理血常規(guī)檢查方法采用血細(xì)胞自動分析儀法，參見全國臨床檢驗操作規(guī)程p711,白細(xì)胞分類計數(shù)采用顯微鏡檢查法，參見全國臨床檢驗操作規(guī)程p57?，F(xiàn)簡要介紹如下。一、電阻抗法血細(xì)胞計數(shù)在細(xì)胞檢測器微孔的兩側(cè)各有一個

2、電極,兩電極間通有恒定電流,經(jīng)過稀釋液（電解質(zhì)溶液）稀釋的血樣 （血細(xì)胞）在通過檢測器微孔時,產(chǎn)生了一個電脈沖；脈沖的高低代表細(xì)胞 體積的大小,脈沖的個數(shù)代表細(xì)胞的數(shù)目。記錄脈沖的數(shù)目可以得到細(xì)胞計數(shù)的結(jié)果。二、細(xì)胞化學(xué)和光散射法白細(xì)胞計數(shù)將血液經(jīng)過細(xì)胞化學(xué)試劑染色, 不同的白細(xì)胞胞漿內(nèi)部即可出現(xiàn)不同的酶化學(xué)反應(yīng)。 當(dāng) 這些白細(xì)胞通過測量區(qū)時, 由于酶反應(yīng)強度不同和細(xì)胞體積大小差異, 激光束射到細(xì)胞上的 前向角和散射角不同， 以X軸為吸光率，Y軸為光散射，每個細(xì)胞產(chǎn)生兩個信號結(jié)合定位在細(xì) 胞分布散點圖上。 計算機對存儲的測量信息進行分析處理, 得出白細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)結(jié)果。 適用于ADVIA-

3、120血細(xì)胞分析儀。三、多角度激光法白細(xì)胞計數(shù)在白細(xì)胞分類通道： 全血加入溶血劑（FD- I和FD-H ）作用后，嗜酸性粒細(xì)胞內(nèi)顆粒被染 色；其他白細(xì)胞略有皺縮。 WBC/BAS通道：全血加入溶血劑（FB）溶血。除BAS0卜，其他白細(xì) 胞均明顯皺縮。 儀器從低角度及高角度分析白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 計算機對存儲的測量信息進 行分析處理，得出白細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)結(jié)果。適用于 SF-3000血細(xì)胞分析儀。四、光電比色法測量血紅蛋白在稀釋的血樣中加入溶血劑使紅細(xì)胞膜破裂釋放出血紅蛋白,后者與溶血劑中有關(guān)成分結(jié)合形成Ht衍生物，進入Hb測試系統(tǒng)，在特定波長（一般在530550nm）下比色，吸光度的變 化與

4、液體中Hb含量成正比，儀器便可顯示其濃度。 不同型號的血細(xì)胞分析儀配套溶血劑配方 不同，形成的Hb衍生物亦不同，其吸收光譜各異但最大吸收均接近540nm五、光散射法紅細(xì)胞和血小板計數(shù)以二維激光散射法檢測紅細(xì)胞和血小板。 紅細(xì)胞測試原理是： 在測試系統(tǒng)中, 全血與紅 細(xì)胞 /血小板稀釋液混合，使自然狀態(tài)下雙凹盤狀扁平圓形的紅細(xì)胞成為球形并經(jīng)戊二醛固定，此種處理并不影響 MC體積。紅細(xì)胞無論以何種方位通過測量區(qū)時，被激光束照射后所 得的信號是相同的。 激光束以低角度前向光散射和高角度光散射同時測量一個紅細(xì)胞， 根據(jù) 低角度光散射轉(zhuǎn)換能量大小， 測量單個紅細(xì)胞體積與總數(shù)； 根據(jù)高角度光散射得出單個紅

5、細(xì) 胞內(nèi)血紅蛋白濃度。 血小板與紅細(xì)胞在一個系統(tǒng)中測量， 其原理是： 根據(jù)同質(zhì)性球體光散射 的Mie理論，當(dāng)球形化的血小板單個通過激光照射區(qū)時，儀器在兩個角度測定激光的散射強 度：高角度主要測細(xì)胞的折射指數(shù) (RI) ，它與細(xì)胞的密度有關(guān)； 低角度主要測細(xì)胞體積的大 小。血小板的體積在130fl , RI在1.351.40。計算機對存儲的測量信息進行分析處理， 得出紅細(xì)胞和血小板計數(shù)結(jié)果。適用于 ADVIA-120血細(xì)胞分析儀。六、顯微鏡白細(xì)胞分類計數(shù)把血液制成細(xì)胞分布均勻的薄膜涂片， 經(jīng)瑞氏染料染色后， 在顯微鏡下根據(jù)白細(xì)胞形態(tài) 特征予以分類計數(shù)，得出相對比值 (百分率 )，并觀察細(xì)胞形態(tài)的

6、變化。第二節(jié) 儀器性能參數(shù)血細(xì)胞分析儀的操作性能因儀器的種類與型號不同而異。一、SF-3000血細(xì)胞分析儀1. 該儀器檢測血細(xì)胞的測量范圍為WBC: (0.099.99) X 109/L ; RBC (0.00X 1012/L、HGB 1 300g/L ; PLT: (0 999) X 109/L。2. 本儀器檢測血細(xì)胞的精密度為WBC：±3.0%； RBC：±1.5%； HGB：± 1 .5%；5.0%。二、ADVIA-12C血細(xì)胞分析儀1. 本儀器檢測血細(xì)胞的測量范圍為WBC：(0.00 400)X 109/L； RBC： (0.00X1012/L ； HGB

7、：0225g/L ； PLT： (0 3980) X 109/L 。2. 本儀器檢測血細(xì)胞的精密度為WBC：±3.0%； RBC：±1.5%； HGB：± 1 .5%；5.0%。三、BC-2000血細(xì)胞分析儀1. 本儀器檢測血細(xì)胞的測量范圍為WBC：(0.0 99.99) X109/L； RBC：(0.00X1012/L； HGB：0300g/L； PLT：(0999)X109/L。2. 本儀器檢測血細(xì)胞的精密度為WBC：± 3.0%； RBC：± 2.0%； HGB：± 2.0%； 9.99)PLT：± 6.76)PLT：

8、± 9.99)PLT：±5%。第三節(jié) 血常規(guī)檢驗程序主要內(nèi)容標(biāo)本1. 臨床護士抽取患者抗凝靜脈血 2ml。2. 采血后立即送到臨床檢驗科。3. 血量不夠1ml或血液凝固、溶血或嚴(yán)重脂血標(biāo)本不能進行檢測。二、設(shè)備和試劑1. 設(shè)備 SF-3000、ADVIA-120、MEK-6108K和 BC-2000血細(xì)胞分析儀。2. 試劑(1) 稀釋液、溶血劑和清洗液。(2) CB(試劑、DIFF試劑、消泡劑和鞘液沖洗液。( 3)瑞氏染液及緩沖液。3. 購買的試劑應(yīng)放室溫保存，注意防塵、防潮。4. 開封后的試劑應(yīng)盡快用完，變質(zhì)、超過有效期的試劑不能使用。三、容器及試劑添加劑血液標(biāo)本采集的容

9、器是一次性含EDTA-K2抗凝劑的真空采血管；血液標(biāo)本必需添加劑是EDTA-K抗凝劑。四、校準(zhǔn)步驟血細(xì)胞分析儀的操作過程分別見SF-3000血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序(PLA 301-LJK-ZY-YQ-07)、ADVIA-120 血細(xì)胞分析 儀標(biāo)準(zhǔn) 操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-08)和 BC-2000血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (PLA301-LJK-ZY-YQ-09)中6儀器校準(zhǔn)程序。五、操作步驟1. 申請單及標(biāo)本編號 整理血液常規(guī)檢驗申請單及血液標(biāo)本， 審核合格后， 對檢驗申請 單和血液標(biāo)本進行編號。2. 上 機 測 試 操 作 過 程 分 別 見 SF-3000 血 細(xì) 胞

10、 分 析 儀 標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序(PLA301-LJK-ZY-YQ-07)、ADVIA-120血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-08)、BC-2000血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-09)和MEK6108-K血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (PLA301-LJK-ZY-YQ-06) 。3. 檢驗結(jié)果的輸入( 1 )打開電腦，啟動“檢驗程序”，輸入用戶名及口令后，進入檢驗程序。( 2)單擊“檢驗”菜單，選擇“檢驗結(jié)果錄入修改”，進行檢驗結(jié)果的錄入及修改。通過申請序號進行結(jié)果的輸入，選擇“工作單號”（SF-3000自動傳輸：S+星期幾

11、+當(dāng)前檢驗標(biāo)識序號；ADVIA-120自動傳輸：B+星期幾+當(dāng)前檢驗標(biāo)識；BC-2000測定結(jié)果和其他非自動 傳輸標(biāo)本：NK+星期幾+當(dāng)前檢驗標(biāo)識序號序號），儀器會自動傳輸入檢測結(jié)果；同時輸入當(dāng) 前患者的樣品“采集時間”和“接收時間”。（3）儀器檢測結(jié)果進一步做鏡檢的標(biāo)準(zhǔn) BC-2000 血細(xì)胞分析儀等三分類儀器檢測的標(biāo)本全部需要鏡檢血涂片。 SF-3000和ADVIA-120血細(xì)胞分析儀等五分類儀器檢測結(jié)果根據(jù)本程序第三節(jié)十五白細(xì)胞五分類血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞分類篩選原則 篩選出需要做血涂片檢查的血標(biāo)本。 臨床醫(yī)師要求做紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等形態(tài)檢查的血標(biāo)本。 血液病患者的檢測標(biāo)本全部鏡檢血

12、涂片。4. 顯微鏡檢查操作步驟（1）制片：靜脈抗凝血標(biāo)本混勻或末梢血標(biāo)本，采血后推成厚薄適宜的血膜片，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可分。推好的血膜在空氣中晃動，以促使快干，以免細(xì)胞變形縮 小。（2）染色：平置玻片于染色架上， 滴加瑞氏染色液58滴，使其迅速蓋滿血膜，約1min 后，滴加緩沖液810滴，輕輕搖動玻片或用吸耳球?qū)?zhǔn)血片吹氣，與染液充分混合，1520min后用水沖去染液，待干。（ 3）鏡檢：先用低倍鏡或高倍鏡閱覽全片，注意觀察血片染色情況：如有無血小板或 紅細(xì)胞聚集，片尾有無巨大異常細(xì)胞，再結(jié)合儀器警告的內(nèi)容，分別重點從白細(xì)胞分類、紅 細(xì)胞參數(shù)和血小板參數(shù)等方面進行觀察，記錄各類細(xì)胞

13、結(jié)果。5. 鏡檢結(jié)果的輸入及報告確認(rèn) 單擊“結(jié)果處理”菜單，選擇“報告確認(rèn)”進入結(jié)果確 認(rèn)，通過選擇“工作單元”、“報告日期”、“單張”或“批量”后，按“提取”鍵提取檢 測結(jié)果，對檢驗結(jié)果進行逐一確認(rèn)。6. 檢測過標(biāo)本及廢物的處理 檢測過的血液標(biāo)本、 廢液及經(jīng)血液標(biāo)本污染的各種廢物按 血液常規(guī)標(biāo)本的采集與處理程序 （詳見第七章第四節(jié) ）進行處理。六、質(zhì)量控制1. 室內(nèi)質(zhì)控 周一周五每天做室內(nèi)質(zhì)控 （廠家提供的質(zhì)控物）。測定過程是：從48 C冰箱取出全血質(zhì)控物置室溫，血細(xì)胞分析儀開機后預(yù)熱20min，分別將質(zhì)控物混勻后上機檢測，打印結(jié)果并與允許值范圍對比， 質(zhì)控合格后才能檢測病人血標(biāo)本。 對于失

14、控應(yīng)按質(zhì)量控 制程序處理，儀器質(zhì)量控制當(dāng)天的情況進行逐一登記。2. 室間質(zhì)控每月參加科內(nèi)的室間質(zhì)控考評 2次。每年參加衛(wèi)生部和 WH室間質(zhì)控。七、干擾因素1. 嚴(yán)重的黃疸或脂血使血紅蛋白結(jié)果假性增高。（ 電阻抗法 ）2. 紅細(xì)胞冷凝集可使紅細(xì)胞和血小板計數(shù)結(jié)果假性減低，白細(xì)胞假性增高 或假性減低（激光法）和MCV假性增高。3. 冷凝球蛋白增高使白細(xì)胞和血小板計數(shù)結(jié)果假性增高。4. 有血小板凝集者可使血小板計數(shù)結(jié)果假性減低。八、結(jié)果計算及測量不確定度按儀器設(shè)計原理，只對紅細(xì)胞常數(shù)(紅細(xì)胞平均體積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度)進行計算，可根據(jù)RBC HG及HCT吉果求出。1. 紅

15、細(xì)胞平均體積(MCV):根據(jù)RBCS HCT由下式求出。每升血液中紅細(xì)胞比積 HetMCV(fl)_" RBC2. 紅細(xì)胞平均血紅蛋白量(MCH):根據(jù)RB(及HGB由下式來求出。_每升血液中血紅蛋白含量 HbMCHg)每升血液中紅細(xì)胞個數(shù)_ rbc3. 紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度 (MCHC):根據(jù)HC及HGB由下式來求出。每升血液中血紅蛋白含量 Hb抽加扎)二每升血液中紅細(xì)胞比積二花4. RDW由血細(xì)胞分析儀測量獲得，是反映周圍血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。當(dāng)紅細(xì)胞通過小孔的一瞬間，計數(shù)電路得到一個相應(yīng)大小的脈沖，不同大小的脈沖信號分別貯存在儀器內(nèi)裝計算機的不同通道，計算出相應(yīng)的體積及細(xì)

16、胞數(shù)，統(tǒng)計處理而得RDW/5. 測量不確定度(1) SF-3000血細(xì)胞分析儀檢測血細(xì)胞測量不確定度為：WBC ± 0.22 X 109/L(=3.87)、± 0.46 X 109/L(=6.07) 和土 0.80 X 109/L(=13.27) ; RBC ± 0.22 X 1012/L(=2.39) 、土 0.24 X 1012/L(=4.18) 和土 0.36 X 1012/L(=6.02); HGB ± 2.60g/L(=82.60) 、土 3.66g/L(=129.53)和土 5.48g/L(=168.07); PLT:± 15.66

17、 X 109/L(=64.60) 、土 25.80 X 109/L(=200.40) 和土40.82 X 109/L(=340.93)/(2) ADVIA 120血細(xì)胞分析儀儀器檢測血細(xì)胞測量不確定度為：WBC ± 0.26 X109/L(=3.69) 、 ± 0.32 X 109/L(=5.36) 和 土 0.74 X 109/L(=13.32) ; RBC: ± 0.20 X 1012/L(=2.41) 、± 0.22 X 1012/L(=4.13)和土 0.30 X 1012/L(=5.19) ; HGB ± 2.90g/L(=82.90

18、)、 ± 3.66g/L(=130.63) 和土 4.38g/L(=1625.10) ; PLT:± 10.32 X 109/L(=50.17)、土 24.02 X 109/L(=201.13) 和土 30.54 X 109/L(=329.10)/(3) BC-2000血細(xì)胞分析儀儀器檢測血細(xì)胞測量不 確定度為：WBC± 0.22 X 109/L(=3.87) 、土 0.46 X 109/L(=6.07) 和土 0.80 X 109/L(=13.27) ; RBC: ± 0.22 X 1012/L (=2.39)、土 0.24 X 1012/L(=4.1

19、8) 和土 0.36 X 10叼L(=6.02) ; HGB ± 2.60g/L(=82.60) 、土 3.66g/L(=129.53) 和土 5.48g/L(=168.07); PLT:± 15.66 X 109/L(=64.60)、± 25.80 X109/L(=200.40) 和土 40.82 X 109/L(=340.93)/測量不確定度的來源包括標(biāo)本、標(biāo)本采集過程、送檢時間、保存條件、藥物、測試系統(tǒng)、 員工操作步驟等因素/九、生物參考區(qū)間與實驗室解釋參見第七章第三節(jié)的有關(guān)內(nèi)容。十、 血細(xì)胞檢驗結(jié)果可報告區(qū)間1. 阻抗法儀器 WBC: (0.2 99.99

20、) X 109/L ; RBC (0.50 9.99) X 1012/L ; HGB 0 299g/L ; PLT: (10 999) X 109/L。2. 激光法儀器 WBC: (0.02 400)X109/L； RBC: (0.05 7.00) X1012/L； HGB: 0 225g/L； PLT: (53500)X109/L。十一、血細(xì)胞警告或危急值白細(xì)胞v 0.5 X 109/L ;紅細(xì)胞v 1.0 X 1012/L ;血紅蛋白 v 30g/L ;血小板v 20X 109/L o十二、安全性預(yù)警措施1. 血液標(biāo)本的運輸必須保證運送過程中的生物安全， 防止溢出。 血液標(biāo)本溢出后， 應(yīng)該

21、 立即對污染的環(huán)境和設(shè)備進行消毒處理。 對標(biāo)明有傳染性疾病的血液標(biāo)本應(yīng)特別防護， 以不 污染環(huán)境或保護工作人員安全為前提。2. 在進行血液分析的一切操作活動中，應(yīng)按實驗室安全管理程序執(zhí)行。在進行操作前，首先應(yīng)采取必要的保護性措施如穿戴保護性外套、手套等。3. 與血液標(biāo)本接觸的一切器皿、儀器組裝 / 拆卸組合零件都應(yīng)視為污染源，因此操作人 員不小心接觸了這種污染源時，應(yīng)立即用清水沖洗被污染區(qū)域并進行消毒處理。4. 如果操作人員的皮膚或衣物上沾到了血液及廢液，應(yīng)立刻用清水沖洗并進行消毒處 理。5. 如果眼睛被濺入血液及廢液，用大量的清水沖洗并采取必要的醫(yī)療措施。6. 如血液標(biāo)本采用開蓋程序測試，開蓋時應(yīng)防止氣霧膠污染環(huán)境。7. 所有檢查過的血液樣本及有關(guān)的廢棄物， 都會給您帶來潛在的危險或生物污染。 所有 廢棄樣本及廢棄物的處理方法同血液標(biāo)本的處理程序。十三、變異潛在來源1. 嚴(yán)重的黃疸或脂血標(biāo)本可使血紅蛋白結(jié)果假性增高。2. 標(biāo)本溶血可使紅細(xì)胞結(jié)果假性減低、血小板計數(shù)結(jié)