保健食品中總黃酮的測(cè)定方法(精)

1、作者簡(jiǎn)介肖香蘭（1964-,女,主管檢驗(yàn)技師，主要從事理化檢驗(yàn)研究。【化學(xué)測(cè)定方法】保健食品中總黃酮的測(cè)定方法肖香蘭羅仁才，張楠（北京市疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生所，北京 100013摘要目的:建立以石油醚作為洗脫劑測(cè)定保健食品中總黃酮的方法。方法：樣品經(jīng)甲醇提取，用聚酰胺粉吸附，經(jīng)石油醚洗脫雜質(zhì)后，在波長(zhǎng) 360n m 處，用分光光 度法測(cè)定保健食品中總黃酮的含量。 結(jié)果：采用石油醚作為洗脫劑，總黃酮濃度的含 量在 02010 卩 g/mI 范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系（r=019998 方法的檢出限為 215 卩g測(cè)定樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在 4160%6149%之間，回收率在 861

2、67%101150%之間。與用苯作為洗脫劑方法測(cè)定結(jié)果比較,兩者無(wú)顯著性差異。 結(jié)論:該方法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性好，線性范圍寬，特別是減少了苯對(duì)檢測(cè)人員 和環(huán)境的污染，可用于保健食品中總黃酮的測(cè)定。關(guān)鍵詞保健食品；總黃酮；t 檢驗(yàn)中圖分類號(hào)R15515文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A8685（200706-1037-02D eter m i n a ti on of tot a l fl avono i ds i n hea lth foodX iao X ian g2la n,L uo Ren 2cai,Zha ng N an(Beiji ng Center f or D isease Con tr ol

3、a nd Preve nti on ,Beiji ng100013,Chi naAbstract O bjecti ve:To establish a method for deter m ining flav ono ids in health food1Methods:The t otal flav ono ids in health f ood were deter m ined by s pectr ophot omet after the samp les were distilled by methanol and purified by petr oleu m ether1The

4、 detec2 ti on wavele ngthwas360n m1Results:Data bet w een the flav ono ids content and文章編號(hào)1004-abs orban had doetter linear relati onshi p in the range of02010deter m inati on li m its were215卩 g1The relative standard deviati ons were bet w een4160%6149% 仃 he recoveries were in the range of86167%101

5、150%1Purified by petr oleu mether in stead of benzen e,the results had no obvi ous differe nce1Co nclusi on: The method is sim p le,stable and accurate,a nd it has bee n app lied successfully t o deter m ine flav ono ids inhealth food1Key words Health f ood;Total flav ono ids;t detecti on黃酮類化合物也稱類黃酮

6、，是廣泛存在于植物界的一大類多酚化合物，多以 甙類形式存在，也有一類以游離形式存在。黃酮類化合物泛指兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)中央三 碳鏈相互連接而形成的一系列化合物，母體結(jié)構(gòu)為二苯基色酮。許多黃酮類化合物 都有重要的生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)心血管、抗突變等功能。類黃酮以 其獨(dú)有的特性日益成為全世界研究的熱點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)、食品、保健食品等領(lǐng)域得到廣 泛的應(yīng)用。目前保健食品中總黃酮的測(cè)定通常方法有硝酸鋁比色法和直接紫外測(cè)定 法，在保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范中，采用的是直接紫外測(cè)定法，在測(cè)定中需以 苯洗脫雜質(zhì)，但是，苯的毒性很強(qiáng)且用量大，對(duì)環(huán)境極易造成污染，并對(duì)實(shí)驗(yàn)者造成傷 害。因此本文用石油醚替代苯，實(shí)驗(yàn)

7、結(jié)果滿意。1 材料與方法111 儀器與設(shè)備7220 型分光光度計(jì)，恒溫水浴箱,25m l 具塞比色管，濾紙，漏斗，分析天平（萬(wàn)分之 一。112 試劑11211 甲醇分析純。11212 石油醚 沸程 30C60C。11213 總黃酮（以蘆丁計(jì)標(biāo)準(zhǔn)溶液 稱取蘆丁 010100g 加甲醇溶解并定容至 100m I,即得0110mg/m l。卩 g/m l(r=019998 仃 he113 測(cè)定方法11311 標(biāo)準(zhǔn)曲線 吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：0100、0105、0110、0120、0140、110、1150、2100m I 于 10m I 比色管中,加甲醇至刻度，搖勻,于波長(zhǎng) 360nm 比色，求回 歸方

8、程，計(jì)算試樣中總黃酮含量。11312 樣品處理。11313 樣品測(cè)定 稱取適量試樣 加乙醇定容至 2510m I,搖勻,80C水浴提取23h,放冷，重新定容,吸取上清液 110m I 于蒸發(fā)皿中,加聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去 乙醇，轉(zhuǎn)入層析柱，先用 2010m I 石油醚洗脫，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至 25m I。此 液于波長(zhǎng) 360n m測(cè)定吸收值。2 結(jié)果與討論211 波長(zhǎng)選擇黃酮類化合物是母體結(jié)構(gòu)為二苯基色酮的一類化合物的（下轉(zhuǎn)第 1142 頁(yè)和小批量樣品的測(cè)定。其原理：樣品的 BP O 經(jīng)乙醚提取濃縮后，被 KI 還原成苯 甲酸，在氣相色譜上分離測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)品比較定量。氣相色譜儀附

9、F ID 檢測(cè)器，色譜 柱為玻璃柱 2m3312mm 內(nèi)裝 6080 目 Chr om s orb WAW DMCS 涂以 5%+ 11%DEGS+磷酸。方法的檢出限為015mg/kg。方法的準(zhǔn)確度和精密度為：過(guò)氧化苯 甲酰濃度在 0102012g/kg 范圍內(nèi)，回收率為8318%9410%,RSD 為 315%511%。線 性范圍在每毫升含有過(guò)氧化苯甲酰 20200go3 建議鑒于從 1999 年2002 年 6 月,3 年半時(shí)間內(nèi)各地及國(guó)家質(zhì)檢總局檢測(cè)BP O 使用狀況，建議:(1 禁止添加過(guò)氧化苯甲酰于面粉中，因?yàn)?0106g/kg 限量對(duì)面粉增白效果 不理想。(2 如不能禁止使用，則應(yīng)

10、對(duì)小面粉加工廠采取嚴(yán)管措施，實(shí)施衛(wèi)生許可制度，對(duì)不 具備有添加設(shè)備的小企業(yè)不允許向小麥中添加過(guò)氧化苯甲酰，對(duì)具有添加設(shè)備的企 業(yè)，要求有專人負(fù)責(zé)，并增加對(duì)產(chǎn)品的檢測(cè)頻次，以確保添加量控制在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量之 內(nèi)。(3 建議企業(yè)使用過(guò)氧化苯甲酰替代品，如使用生物酶與乳化劑結(jié)合而增白等。(4 加強(qiáng)市場(chǎng)監(jiān)督管理力度。(5 加大宣傳力度，暴光有問(wèn)題的面粉，使老百姓在政府的指導(dǎo)下，選購(gòu)合格面粉，將不合格面粉從市場(chǎng)淘汰出局。參考文獻(xiàn)1 G B2760-19961 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)S12 F AO/nyo 食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)法典M1 第 1 版 1 北京沖國(guó)輕工業(yè)出版社,1993118013 郭萬(wàn)春，陸守政 1

11、 市售面粉中過(guò)氧化苯甲酰添加和殘留量的檢測(cè)與分析J1 中國(guó)公共衛(wèi)生，1999,15(6:51914 王燕 1 面粉中過(guò)氧化苯甲酰含量的檢測(cè)報(bào)告J1 中國(guó)公共衛(wèi)生，2000,16(2:11215 丁鴻簡(jiǎn)，李林，楊其富 1 高效液相色譜測(cè)定面粉中面粉中過(guò)氧化苯甲酰J1 中國(guó)公共衛(wèi)生,2001,17(11:104716 0fficial Methods of A ss ociati on of official Che m ists14th ED,AOAC,VA,1984;Sec14:03817 王萌國(guó) 1HP LC 測(cè)定過(guò)氧化苯甲酰J1 環(huán)境與健康雜志,1999,16（1:9818 劉仁鳳，易小軍

12、,祁世凱，等 1 面粉中過(guò)氧化苯甲酰含量檢測(cè)與分析J1 中國(guó)公共衛(wèi)生,2001,17（增刊:1201（收稿日期:2007-02-05（上接第 1037 頁(yè)總稱，包括:黃酮、黃酮醇、脫氫黃酮、異黃酮和查耳酮等，這一類化合物有兩個(gè) 紫外吸收區(qū)，即 240280n m 和 300 400n m 本方法測(cè)定的是在 300400n m 有吸收 的黃酮，某些在該波長(zhǎng)無(wú)吸收的黃酮成分不包括在內(nèi)，如異黃酮。212 溶劑選擇包括甙和甙原形式的黃酮化合物都有較強(qiáng)的極性，易溶于甲醇、乙醇等溶劑。 使用乙醇作為提取液在 80C水浴提取 2h 可提取完全。213 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)采用不同種類的樣品，進(jìn)行了高低兩濃度的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)

13、,3 種不同樣品高低兩濃度 的平均回收率分別為：93160%、97147%和 96176%,見(jiàn)表 1。表 1 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6樣品加標(biāo)量(mg測(cè)定結(jié)果（mg回收范圍(%平均回收率(%硬膠囊 32167217121902161216421608616798100891836518751795192517251855190951339816797136軟膠囊 331113102312421983107310089167100167961726611261095198610261095193941510115098122茶葉 3218421962197310321792185881331011

14、00951836518851945191518451775181961179913397169214 精密度實(shí)驗(yàn)對(duì)不同種類的樣品，分別測(cè)定 6 次，其 RSD 分別為 5127%、6149%、4160%見(jiàn)表2。215 線性范圍在本實(shí)驗(yàn)條件下，黃酮濃度在 020 卩 g/m I 的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好 尸 019998。表 2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6樣品測(cè)定結(jié)果(mg/g平均結(jié)果(mg/gRSD（%硬膠囊 9142914081337189818681198168014688512 軟膠囊1111813614129151301412519126131261781227614 茶葉181721121

15、914201320181918201030192234160216 與保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范所載方法的比較采用5 種不同的樣品,分別用保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范所載方法和本法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，兩種測(cè)定方法測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表 3。表 3 兩種測(cè)定方法的 t 檢驗(yàn)結(jié)果均無(wú)顯著性差異樣品規(guī)范方法測(cè)定結(jié)果（mg/g 本方法測(cè)定結(jié)果（mg/gt 硬膠囊912691239137915591349114914291408133718981198186211 軟膠囊110189514921796159118126131261410915110141251994149810110 茶 葉18161812191721121914191518172112201319141