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1、_木聚糖酶活力測(cè)定原理:木聚糖是植物半纖維素的主要成分,為自然界中廣泛存在、含量?jī)H次于纖維素的可再生多糖資源,占細(xì)胞干重的。7一 35 木聚糖酶是一類可將木聚糖降解成低聚糖和木糖的復(fù)合酶系。 它以內(nèi)切方式降解木聚糖主鏈架的-l ,4- 木糖苷鍵, 其水解產(chǎn)物主要是木二糖和木寡糖, 少量的木糖和阿拉伯糖。 木聚糖酶水解木聚糖底物生成的還原性糖,可在煮沸條件下與 DNS顯色劑生成棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi),還原糖的生成量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度成正比。因此可通過(guò)測(cè)定棕紅色的氨基化合物540nm波長(zhǎng)下吸光度來(lái)測(cè)定木聚糖酶活力。試劑:DNS溶液:酒石酸鉀鈉182 g ,溶于 500mL蒸餾水中,加熱,
2、于熱溶液中依次加入3, 5-二硝基水楊酸 6.3 g , NaOH 21g,苯酚 5 g ,攪拌至全溶,冷卻后用蒸餾水定容至1000 mL,貯于棕色瓶中,室溫保存 .1mg/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:無(wú)水木糖于80 °C烘至恒重,稱取0.1 g于燒杯中,加適量蒸餾水溶解 , 轉(zhuǎn)入容量瓶中并定容至100 mL。方法:標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取6支 20mL的試管按下表順序依次加入各試劑試管號(hào)123456試劑 ( 單位: mL)1mg/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.0蒸餾水21.81.61.41.21.0DNS1.51.51.51.51.51.5沸水中煮沸 5min, 流水冷卻 2min
3、, 各管中加 16.5 mL蒸餾水,定容到 20mL,搖勻,放置 20min后,測(cè)定 540nm處吸光度。精品資料_1y = 0.8537x + 0.02150.8R2 = 0.995500.645A0.40.2000.20.40.60.811.21.4木糖量( mg)待測(cè)液木聚糖酶活力的測(cè)定待測(cè)樣品空白對(duì)照1.加底物 1%的木聚糖溶液4 mL1.加酶液 1 mL2.50 °C預(yù)熱 3 min2.沸水煮沸 10 min3.加酶液 1 mL3.加底物 1%的木聚糖溶液 4 mL4.混合4.混合5.50 °C水解 10 min5. 50 °C 水解 10 min6.加 DNS試劑 2 mL6.加 DNS試劑 2 mL7.混合7.混合8.沸水浴中 10 min8.沸水浴中 10 min9.冷卻定容至 20 mL9.冷卻定容至 20 mL10. 樣品 540 nm 下測(cè)定10. 樣品
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