常用細菌的代謝生理實驗

1、常用細菌的代謝生理實驗實驗?zāi)康模赫莆找恍┗镜奈⑸锞w的鑒別方法：糖發(fā)酵實驗應(yīng)用：觀察細菌對糖度的分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定。甲基紅實驗應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)實驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸 桿菌。靛基質(zhì)實驗應(yīng)用：用于腸道桿菌的鑒定。尿素酶實驗應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒定。實驗原理糖發(fā)酵實驗：代謝途徑：多糖單糖丙酮酸酸性產(chǎn)物（或產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ）。通過指示劑呈酸性變色或者是氣泡的產(chǎn)生情況來判斷多糖是否被利用，進而可以對一些菌株進行區(qū)分。該實 驗主要用于腸道桿菌的鑒定。甲基紅實驗：細菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基 pH 維持在 4.4 以下，加 入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)

2、紅色反應(yīng)。此為甲基紅實驗陽性。靛基質(zhì)實驗：細菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚） ，靛基質(zhì)與試劑對 二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。尿素酶實驗產(chǎn)生脲酶的細菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。材料、器材與試劑材料：實驗用菌體 1，實驗用菌體 2。器材：試管、燒杯、三角燒瓶、臺秤、玻璃棒、滅菌鍋、移液管、超凈臺、酒精燈、鑷子。試劑：甲基紅、尿素、酚紅、培養(yǎng)基： 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基、蛋白胨培養(yǎng)基、尿素培養(yǎng)基。實驗步驟1 、 培養(yǎng)基配置。配足夠量的培養(yǎng)基，分裝后，滅菌。2、接種。分別向四種培養(yǎng)基中接種菌株1、菌株 2，并注明培養(yǎng)基以及所用菌株種類。3、培養(yǎng)。

3、將接種完的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4、觀察。三天后，取出試管，進行實驗結(jié)果觀察。 糖酵解實驗與尿素酶實驗不做任何處理，僅觀察培養(yǎng)基與空白培養(yǎng)基的不同。 向甲基紅實驗的試管中加入甲基紅試劑觀察培養(yǎng)基顏色變化。向靛基質(zhì)實驗的試管中想加入試劑 1，混勻后靜置一段時間后再加入試劑2.最后觀察現(xiàn)象。實驗結(jié)果及分析糖酵解實驗結(jié)果：接種菌株 1 的培養(yǎng)基顏色比接種菌株 2 的培養(yǎng)基顏色淺，但均與空白培養(yǎng)基比并無明顯 顏色變化，沒有酸性顏色產(chǎn)生，也沒有氣泡產(chǎn)生。甲基紅實驗結(jié)果：接種菌株 1 的培養(yǎng)基渾濁，接種菌株 2 的培養(yǎng)基澄清。向培養(yǎng)基中加入甲基紅試劑 后，培養(yǎng)基顏色加深，但并無酸性顏色產(chǎn)生。靛基質(zhì)實驗結(jié)

4、果：接種菌株 1 的培養(yǎng)基與接種菌株 2 的培養(yǎng)基顏色均與空白培養(yǎng)基顏色相同。且在加入 兩種試劑后，培養(yǎng)基均無明顯變化。結(jié)果分析：上述三個實驗均不能分辨出菌株1、 2，且三個實驗都沒有出現(xiàn)預(yù)期的顏色變化。出現(xiàn)上述結(jié)果的可能愿意如下：1、菌株問題。菌株并不能按照預(yù)想途徑進行代謝，從而無法觀察到預(yù)想的現(xiàn)象。2、接種問題。超凈臺不是封閉的，由于操作問題可能引起雜菌污染。3、培養(yǎng)問題。培養(yǎng)時間短或者培養(yǎng)溫度不適宜，使得菌體生長速度緩慢，不足以引起培養(yǎng) 基 pH 變化。尿素酶實驗結(jié)果：圖 4 ：尿素酶實驗圖片有左向右的試管分別是：土壤中混合菌培養(yǎng)基，大腸桿菌培養(yǎng)基，空白培養(yǎng)基。試管 1，2 中培養(yǎng)基均變?yōu)榧t色，說明菌體菌合成尿素酶分解尿素。土壤混合菌中是部分菌種 產(chǎn)尿素酶