響應(yīng)面法優(yōu)化地衣芽孢桿菌A2發(fā)酵培養(yǎng)基

1、響應(yīng)面法優(yōu)化地衣芽砲桿菌a2發(fā)酵培養(yǎng)基為了提高地衣芽抱桿菌a2 (bacillus licheniformis a2)發(fā)酵液的活菌含量，采用 hackett-burman設(shè)計(jì)法和響應(yīng)fri分析法對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。先用plackett-burman 設(shè)計(jì)從8種原料屮篩選出對(duì)活菌含量有顯著影響的因素,再川最陡爬坡試驗(yàn)及box-behnken 設(shè)計(jì)進(jìn)一步優(yōu)化。結(jié)果表明，mgso4-7h2o.酵母粉和尿素是影響發(fā)酵液活菌含量的顯著因素，優(yōu)化后的 培養(yǎng)基為:可溶性淀粉 5g / l,尿素 1. 29g / l, k2hpo46g / l, kh2po43g / l, mnso4-h2o 0. 2g

2、/l mgso4-7h2o 0. 41g/l,豆粕 10g/l 和酵母粉 0. 99g / l。在此條件下，發(fā)酵液中a2的活菌含量可以從優(yōu)化前的4. 73x 10a 10cfu / ml捉高到1. 30x10a11cfu/mlo酵母菌的培養(yǎng)大多數(shù)酵母菌為腐牛，其生活最適兇為4.5-6,常見(jiàn)于含糖分較高的壞境屮，例如 果園土、菜地十及果皮等植物表血。酵母菌半長(zhǎng)迅速，易于分離培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中，酵 母菌比霉菌生長(zhǎng)得快。利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點(diǎn)，常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液(這樣做的 好處是酸性培養(yǎng)條件則町抑制細(xì)菌的牛長(zhǎng))，然后在固體培養(yǎng)基上川劃線法分離之。常用的培養(yǎng)基有：(一) 麥芽

3、汁培養(yǎng)基的配制1 培養(yǎng)基成分新鮮麥芽汁，一般為10-15波林。2. 配制方法(1) 用水將大麥或小麥洗凈，用水浸泡6-12h,置于15°c陰涼處發(fā)芽，上蓋紗布，每日 早、中、晚淋水一次，待麥芽仲氏至麥粒的兩倍時(shí)，讓其停止發(fā)芽，曬干或烘干，研磨成麥 芽粉，貯存?zhèn)溆谩?2) 取一份麥芽粉加四份水，在65°c水浴鍋屮保溫3-4h,使其白行糖化，直至糖化完全(檢查方法是取0.5ml的糖化液,加2滴碘液，如無(wú)藍(lán)色出現(xiàn),即表示糖化完全)。(3) 糖化液用4-6層紗布過(guò)濾，濾液如仍混濁，可用雞蛋清澄清(用一個(gè)雞蛋清，加水20 ml,調(diào)勻至生泡沫，倒入糖化液中，攪拌煮沸，轉(zhuǎn)過(guò)濾)。(4)

4、用波美比重計(jì)檢測(cè)糖化液中糖濃度,將濾液用水稀釋到10 15波林,調(diào)ph至6. 4。 如當(dāng)?shù)貎悠【茝S，可用未經(jīng)發(fā)酵，未加酒花的新鮮麥芽汁，加水稀釋到10-15波林后使用。(5) 如配固體麥芽汁培養(yǎng)基時(shí)，加入2%瓊脂，加熱融化，補(bǔ)充失水。(6) 分裝、加塞、包扎。(7) 高壓蒸汽滅菌100 pa滅菌20 mine(二) 馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的配制1、培養(yǎng)基成分馬鈴蔣20g葡萄糖2 g瓊脂1.5-2g水100ml日然ph2 .配制方法配制20%馬鈴薯浸汁 取去皮馬鈴薯200g，切成小塊,加水1000mlo 80°c浸泡lh, 川紗布過(guò)濾，然后補(bǔ)足失水至所需體積。100 pa滅菌20 mino

5、即成20%馬鈴薯浸汁，貯存 備用。(2) 配制時(shí),按每100 ml馬鈴薯浸汁加入2g葡萄糖,加熱煮沸后加入2g瓊脂，繼續(xù)加 熱融化并補(bǔ)足失水。(3) 分裝、加塞、包扎。(4) 高壓蒸汽滅菌100 pa滅菌20 mine(三) 豆芽汁窗萄糟培養(yǎng)基的配制1 培養(yǎng)基成分黃豆芽10g葡萄糖5g瓊脂1.5-2g水100ml日然ph2 .配制方法(1) 稱新鮮黃豆芽log,置于燒杯中,再加入100 ml水,小火煮沸30 min,用紗布過(guò)濾, 補(bǔ)足失水，即制成10%豆芽汁。(2) 配制時(shí)，按每100 ml 10%豆芽汁加入5g衙萄糖，點(diǎn)沸后加入2 g瓊脂，繼續(xù)加熱 融化，補(bǔ)足失水。(3) 分裝、加塞、包扎。

6、(4) 高壓蒸汽滅菌100 pa滅菌20 mino(四) 察氏(czapck)培養(yǎng)基的配制1 培養(yǎng)基成分蔗糖3gnan030. 3gk2hpo40. lgkc10. 05gmgs04 7ii200. 05 gfes040. 001 g瓊脂1. 5-2g蒸憎水100mltl 然 ph2.配制方法(1) 稱量及溶化 量取所需水量約2/3左右加入到燒杯中，分別稱取蔗糖、nano3、k2hp04、kc1、mgs04o依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培養(yǎng)基加入lml 0. 1%的fes04 溶液。(2) 定容 候藥品全部溶解后，將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。(3) 加瓊脂 加入所需量瓊脂，加熱

7、融化，補(bǔ)足失水。(4) 分裝、加塞、包扎。(5) 高壓蒸汽滅菌100 pa滅菌20 mine(五) ypd培養(yǎng)基ypd 或 yped, : yeast extract peptone dextrose medium (il),又叫酵母浸出粉腺葡萄糖培養(yǎng)基，加入瓊脂的乂叫酵母膏月東葡萄糖(ypd)瓊脂培養(yǎng)基，用于酵母菌的培養(yǎng)。1、配方：1% yeast extract （酵母膏），2% peptone （蛋 口j東）,2% dextrose （glucose）（葡萄糖），若制固體培養(yǎng)基，加入2%瓊脂粉2、配制方法：（1）溶解logyeast extract （酵母膏）,20gpeptone （蛋白月東）于900ml水中，如制平 板加入20g瓊脂粉（2）高壓 121 度 20min（3）加入100ml loxdextrose （glucose）（葡萄糖），（葡糖糖溶