石斛實(shí)驗(yàn)方案

1、實(shí)驗(yàn)方案一、鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)（一）、扭體法1、動(dòng)物：昆明小鼠，雄性，18-22g2、實(shí)驗(yàn)藥物：舊石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、舊石斛水提（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、消炎痛（5mg/kg）3、試劑：生理鹽水、0.6%醋酸溶液（新鮮配制）4、儀器：鼠籠、電子天平、灌胃針及注射器、秒表5、方法：1）將96只小鼠隨機(jī)分為八組：每組12只，分別為：空白對(duì)照組，消炎痛組（陽性組），舊石斛榨汁（高低劑量）、毛石斛榨汁（高低劑量）、舊石斛水提（高低劑量）。2）小鼠按0.1ml/10g給藥或蒸餾水，空白對(duì)照組以蒸餾水灌胃，

2、消炎痛陽性組以消炎痛溶液灌胃，其余各組分別以同體積高低劑量的石斛提取液灌胃。1次/d，連續(xù)5天。3）最后一次給藥，如上。給藥后30min，各組小鼠腹腔注射0.6%醋酸液0.2ml/只，記錄15min內(nèi)各組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。4）計(jì)算藥物鎮(zhèn)痛百分率,將所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。藥物鎮(zhèn)痛百分率=（對(duì)照組平均扭體反應(yīng)次數(shù)-給藥組平均扭體反應(yīng)次數(shù)）/對(duì)照組平均扭體反應(yīng)次數(shù)×100%6、注意事項(xiàng)：1）醋酸有揮發(fā)性,宜用前新鮮配制,濃度為0.6-0.9%均可,實(shí)驗(yàn)前須作預(yù)實(shí)驗(yàn)2）每只動(dòng)物腹腔注射部位和操作技術(shù)力求一致.（二）、熱板法1、動(dòng)物：昆明小鼠，雌性，18-22g2、實(shí)驗(yàn)藥物：舊石斛榨汁（高劑

3、量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、舊石斛水提（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、消炎痛（5mg/kg）3、試劑：生理鹽水、0.6%醋酸溶液（新鮮配制）4、儀器：熱板測(cè)痛儀、電子天平、灌胃針及注射器、秒表5、方法：1）將96只小鼠隨機(jī)分為八組：每組12只，分別為：空白對(duì)照組，消炎痛組（陽性組），舊石斛榨汁（高低劑量）、毛石斛榨汁（高低劑量）、舊石斛水提（高低劑量）。2）小鼠按0.1ml/10g給藥或蒸餾水，空白對(duì)照組以蒸餾水灌胃，消炎痛陽性組以消炎痛溶液灌胃，其余各組分別以同體積高低劑量的石斛提取液灌胃。1次/d，連續(xù)5天。

4、3）篩選小鼠。接通電源，溫度控制在55。將小鼠放于55的恒溫?zé)岚迳?，記錄小鼠痛閾值（疼痛反?yīng)發(fā)生的時(shí)間），測(cè)定2次痛閾值，以5-30d內(nèi)不出現(xiàn)疼痛反應(yīng)（舔足）者棄之不用。4）最后一次給藥，如上。給藥后30min，將各組小鼠置于55恒溫?zé)岚迳?，立即開始計(jì)時(shí)，以小鼠疼痛發(fā)生為痛閾潛伏期5）計(jì)算痛閾提高百分率，將所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。痛閾提高百分率=（用藥后痛閾值-用藥前平均痛閾值）/用藥前痛閾值×100%6、注意事項(xiàng)：1）小鼠個(gè)體差異較大,宜選用痛閾值在5-30s內(nèi)者為合格,不合格者棄之不用。小鼠不能連續(xù)進(jìn)行測(cè)定。2）室溫對(duì)本實(shí)驗(yàn)有一定影響，15-20為宜，過低小鼠反應(yīng)遲鈍，過高小鼠易

5、于敏感易引起跳躍，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。3）正常小鼠放入熱板后易出現(xiàn)不安、舉前肢、舔前足、踢后肢等現(xiàn)象，這些動(dòng)作不能作為疼痛指標(biāo)，只有舔后足才作為疼痛指標(biāo)。二、鎮(zhèn)靜實(shí)驗(yàn)（一）、對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響1、動(dòng)物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠曾做鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，自然飼養(yǎng)兩日） 各組的扭體（雄性）1-6號(hào)+熱板（雌性）7-12號(hào)小鼠2、實(shí)驗(yàn)藥物：舊石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、舊石斛水提（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、戊巴比妥（5mg/kg）3、試劑：生理鹽水4、儀器：XZC-4型小動(dòng)物自主活動(dòng)測(cè)定儀、電子天平、

6、灌胃針及注射器5、方法：1）將96只小鼠隨機(jī)分為八組：每組12只，分別為：空白對(duì)照組，戊巴比妥組（陽性組），舊石斛榨汁（高低劑量）、毛石斛榨汁（高低劑量）、舊石斛水提（高低劑量）。2）小鼠按0.1ml/10g給藥或蒸餾水，空白對(duì)照組以蒸餾水灌胃，戊巴比妥陽性組以戊巴比妥溶液灌胃，其余各組分別以同體積高低劑量的石斛提取液灌胃。1次/d，連續(xù)3天。3）實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12h，最后一次給藥，如上，安定組以安定溶液灌胃，給藥后30分鐘，將各組小鼠置于小鼠自主活動(dòng)測(cè)定儀內(nèi)（除可待因組），適應(yīng)3分鐘后測(cè)定5分鐘內(nèi)小鼠活動(dòng)次數(shù)（包括活動(dòng)次數(shù)與站立次數(shù)）。5）將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理6、注意事項(xiàng)：小鼠自主活動(dòng)

7、前禁食12h，使其增加覓食活動(dòng)；小鼠放入自主活動(dòng)儀中有一個(gè)適應(yīng)過程，各組間實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)力求一致，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)盡量保持安靜，避免影響小鼠活動(dòng)。(二)、對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響1、動(dòng)物：昆明小鼠，雄性，25g（小鼠曾做鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，自然飼養(yǎng)4日） 2、實(shí)驗(yàn)藥物：舊石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、舊石斛水提（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、3、試劑：生理鹽水，0.4%戊巴比妥鈉4、儀器：手表、電子天平、灌胃針及注射器5、方法：1）將96只小鼠隨機(jī)分為八組：每組12只，分別為：空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組、舊石斛榨汁（高低劑量）、

8、毛石斛榨汁（高低劑量）、舊石斛水提（高低劑量）。2）小鼠按0.1ml/10g給藥或蒸餾水，空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組以蒸餾水灌胃，其余各組分別以同體積高低劑量的石斛提取液灌胃。1次/d，連續(xù)3天。3）最后一次給藥，如上，給藥后60min，除空白對(duì)照組外，各組腹腔注射0.4%戊巴比妥鈉0.1ml/10g，空白對(duì)照組夫妻那個(gè)注射等量生理鹽水。記錄各組動(dòng)物睡眠時(shí)間（以小鼠翻正反射消失1min以上為入睡指標(biāo)，從翻正反射消失至恢復(fù)時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間）。5）將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理6、注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)前要進(jìn)行預(yù)試，找出戊巴比妥的閾劑量；實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)除睡眠時(shí)間外，還可以記錄入睡潛伏期，閾下劑量小鼠睡眠個(gè)數(shù)及睡眠百分率

9、；天氣冷時(shí)，動(dòng)物不易蘇醒，注意保溫。三、鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)（一）、小鼠氨水引咳法1、動(dòng)物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠曾做鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，自然飼養(yǎng)2日） 扭體（雄性）7-12號(hào)+熱板（雌性）1-6號(hào)小鼠2、實(shí)驗(yàn)藥物：舊石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、舊石斛水提（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、氫溴酸右美沙芬（5mg/kg）3、試劑：濃氨水4、儀器： 500ml玻璃鐘罩、橡皮管、超聲霧化器（或空氣壓縮機(jī)+玻璃噴霧頭）、電子天平、灌胃針及注射器等5、方法：1）將96只小鼠隨機(jī)分為八組：每組12只，分別為：空白對(duì)照組

10、，右美沙芬（陽性組），舊石斛榨汁（高低劑量）、毛石斛榨汁（高低劑量）、舊石斛水提（高低劑量）。2）小鼠按0.1ml/10g給藥或蒸餾水，空白對(duì)照組以蒸餾水灌胃，右美沙芬陽性組以右美沙芬溶液灌胃，其余各組分別以同體積高低劑量的石斛提取液灌胃。1次/d，連續(xù)3天。3）最后一次給藥，如上，給藥后1h后，將各組小鼠放入玻璃鐘罩內(nèi)（除安定組外），打開通過橡皮管與之相連的超聲霧化器，將濃氨水均勻地噴入玻璃鐘罩內(nèi)，噴霧10s，立即取出小鼠，觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。5）將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理6、注意事項(xiàng)：咳嗽潛伏期是指噴霧氨水開始時(shí)間至發(fā)生咳嗽所需的時(shí)間，小鼠咳嗽表現(xiàn)以其腹肌收縮（縮胸）

11、，同時(shí)張大嘴為準(zhǔn)，有時(shí)可有咳聲，需與噴嚏區(qū)別，需仔細(xì)觀察；每鼠氨水噴霧量應(yīng)一致；四、祛痰實(shí)驗(yàn)（一）、小鼠酚紅排泄法1、動(dòng)物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠均做鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，再做過鎮(zhèn)靜或鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)，自然飼養(yǎng)2日）2、實(shí)驗(yàn)藥物：舊石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、舊石斛水提（高劑量：2g/kg、低劑量0.5g/kg）、氯化銨（5mg/kg）3、試劑：生理鹽水、0.5%酚紅生理鹽水溶液、5%碳酸氫鈉溶液4、儀器： 721型分光光度計(jì)、電子天平、灌胃針及注射器、秒表、鼠籠、手術(shù)剪、眼科鑷、試管架、離心管、蛙板、絲線等5、方法

12、：1）將192只小鼠隨機(jī)分為八組：每組24只，分別為：空白對(duì)照組，氯化銨（陽性組），舊石斛榨汁（高低劑量）、毛石斛榨汁（高低劑量）、舊石斛水提（高低劑量）。2）小鼠按0.1ml/10g給藥或蒸餾水，空白對(duì)照組以蒸餾水灌胃，氯化銨陽性組以氯化銨溶液灌胃，其余各組分別以同體積高低劑量的石斛提取液灌胃。1次/d，連續(xù)3天。3）禁食不禁水12h，最后一次給藥，如上，給藥后30min，有腹腔注射0.5%粉紅溶液0.5ml/只。30min后，頸椎脫臼處死小鼠，仰位固定于手術(shù)板上，剪開頸前皮膚，分離器官，剝?nèi)夤苤車M織，剪下至甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管，放進(jìn)盛有3ml生理鹽水的試管中沖洗，再加入5%碳酸氫鈉溶液0.1ml，離心。取上清液，用721型分光光度計(jì)（波長546n