布魯氏菌病原學(xué)血清學(xué)診斷

1、布魯氏菌布魯氏菌病原學(xué)、病原學(xué)、血清學(xué)血清學(xué)診斷診斷麗水市疾病預(yù)防控制中心麗水市疾病預(yù)防控制中心蘭進權(quán)蘭進權(quán) 主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：1 1、布魯氏菌病原學(xué)；、布魯氏菌病原學(xué)；2 2、布魯氏菌診斷標準；、布魯氏菌診斷標準；3 3、布魯氏菌血清學(xué)實驗的幾種方法。、布魯氏菌血清學(xué)實驗的幾種方法。（一）（一）布氏菌概述布氏菌概述 18871887年英國醫(yī)生布魯氏首先從死于年英國醫(yī)生布魯氏首先從死于“馬爾他熱馬爾他熱”的英的英國 士 兵 脾 臟 中 分 離 出 羊 種 布 氏 菌 后 ， 布 魯 氏 菌 屬國 士 兵 脾 臟 中 分 離 出 羊 種 布 氏 菌 后 ， 布 魯 氏 菌 屬（Brucella

2、Brucella) )，包括包括6 6個種個種1919個生物型。個生物型。 羊種布氏菌（羊種布氏菌（Br Br melitensismelitensis) ) 牛種布氏菌（牛種布氏菌（Br Br abortusabortus) ) 豬種布氏菌（豬種布氏菌（Br Br suissuis) ) 沙漠森林野鼠種布氏菌（沙漠森林野鼠種布氏菌（Br Br neotomaeneotomae) ) 綿羊附睪種布氏菌（綿羊附睪種布氏菌（Br Br ovisovis) ) 犬種布氏菌（犬種布氏菌（Br Br caniscanis) ) 布魯氏菌的發(fā)展史布魯氏菌的發(fā)展史年份年份菌名菌名發(fā)現(xiàn)人發(fā)現(xiàn)人國家國家宿主宿主

3、1887羊種菌羊種菌Bruce馬爾他馬爾他羊羊1897牛種菌牛種菌Bang丹麥丹麥牛牛1914豬種菌豬種菌Traun美國美國豬豬1953綿羊附睪種菌綿羊附睪種菌Buadle新西蘭新西蘭公綿羊公綿羊1956沙漠森林鼠種菌沙漠森林鼠種菌Stoennen美國美國沙漠森林野鼠沙漠森林野鼠1966犬種菌犬種菌Carmichael美國美國小獵犬小獵犬（一）病原學(xué)概述（一）病原學(xué)概述布魯氏菌屬（布魯氏菌屬（BrucellaBrucella) ) 包括包括6 6個種個種1919個生物型。個生物型。 牛種布氏菌（牛種布氏菌（Br Br abortusabortus) ) ： 1 1、2 2、3 3、4 4、5

4、5、6 6、7 7、9 9型型 羊種布氏菌（羊種布氏菌（Br Br melitensismelitensis) ) ：1 1、2 2、3 3型型 豬種布氏菌（豬種布氏菌（Br Br suissuis) ) ： 1 1、2 2、3 3、4 4、5 5型型 沙漠森林野鼠種布氏菌（沙漠森林野鼠種布氏菌（Br Br neotomaeneotomae) ) 綿羊附睪種布氏菌（綿羊附睪種布氏菌（Br Br ovisovis) ) 犬種布氏菌犬種布氏菌 （Br Br caniscanis) ) 1 1、形、形 態(tài)態(tài)n布魯氏菌是一組微小的球狀、球桿狀、短布魯氏菌是一組微小的球狀、球桿狀、短桿狀細菌；桿狀細菌；

5、n寬約寬約0.30.30.50.5微米、長微米、長0.60.61.51.5微米。電微米。電鏡下見到的羊種菌為明顯的球桿狀、牛種鏡下見到的羊種菌為明顯的球桿狀、牛種菌和豬種菌為短桿狀；菌和豬種菌為短桿狀；n6 6種布魯氏菌靠形態(tài)很難區(qū)分，一般來說，種布魯氏菌靠形態(tài)很難區(qū)分，一般來說，羊種菌最小，牛種菌產(chǎn)次之，豬種菌較大；羊種菌最小，牛種菌產(chǎn)次之，豬種菌較大；n布魯氏菌沒有鞭毛，不形成芽胞和夾膜。布魯氏菌沒有鞭毛，不形成芽胞和夾膜。2 2、染、染 色色n涂片染色檢查多為單個排列，少見成對涂片染色檢查多為單個排列，少見成對短鏈排列。短鏈排列。n布魯氏菌可被堿性染料著色；布魯氏菌可被堿性染料著色；n革

6、蘭染色陰性；革蘭染色陰性；n柯茲羅夫斯基提出用柯茲羅夫斯基提出用0.5%0.5%沙黃水溶液染沙黃水溶液染色，加熱出現(xiàn)氣泡，水洗后用色，加熱出現(xiàn)氣泡，水洗后用0.5%0.5%孔雀孔雀綠或綠或1%1%美蘭復(fù)染，布魯氏菌呈美蘭復(fù)染，布魯氏菌呈紅色紅色，其，其它細菌呈綠色和蘭色。它細菌呈綠色和蘭色。布魯氏菌布魯氏菌： 革蘭陰性，革蘭陰性， 長約長約0.6-1.5m, 寬約寬約0.3-0.6m, 用柯氏染色染成紅用柯氏染色染成紅色色,無鞭毛、不形成無鞭毛、不形成芽胞和莢膜。芽胞和莢膜。3 3、培養(yǎng)特性、培養(yǎng)特性1.1.布魯氏菌培養(yǎng)營養(yǎng)要求高：布魯氏菌培養(yǎng)營養(yǎng)要求高： 需要各種氨基酸和各種金屬離子，有的菌

7、種需需要各種氨基酸和各種金屬離子，有的菌種需要血清才能生長。要血清才能生長。2.2.生長緩慢：生長緩慢：一般需經(jīng)一般需經(jīng)4 46 6天，有的甚至天，有的甚至21213030天才能長出菌落。天才能長出菌落。3.3.生長所需溫度：生長所需溫度：20204040，最適為，最適為37,37,超過超過4242則不生長。則不生長。4. 4. C0C02:2: 綿羊附睪種菌和牛種菌的某些生物型菌需嚴格綿羊附睪種菌和牛種菌的某些生物型菌需嚴格的的C0C02 2(5(51010) )。 （4 4） 細菌變異細菌變異n布氏菌在各種理化因素作用下易發(fā)生變異布氏菌在各種理化因素作用下易發(fā)生變異; ;n即從光滑型（即從

8、光滑型（S S）變?yōu)榉枪饣妥優(yōu)榉枪饣痛植诖植? (R)R)或粘液或粘液( (M)M)狀。狀。n變異菌落常比光滑型稍長，表面有顆粒。變異菌落常比光滑型稍長，表面有顆粒。菌落顏色為灰白色或褐色，菌落顏色為灰白色或褐色，（5 5） 抵抗力抵抗力 n布氏菌在合適條件下能生存布氏菌在合適條件下能生存很長時間很長時間，有，有較高的抗滅活能力。較高的抗滅活能力。n對濕熱、紫外線和各種射線以及常用的消對濕熱、紫外線和各種射線以及常用的消毒劑、抗生素、化學(xué)藥物比較敏感；毒劑、抗生素、化學(xué)藥物比較敏感；n對對低溫低溫和和干燥有較強干燥有較強的抵抗力，故可用冷的抵抗力，故可用冷凍真空干燥法保存菌種。凍真空干燥法

9、保存菌種。布氏菌在自然條件下的生存能力自然條件自然條件生存時間（天）生存時間（天）自然條件自然條件生存時間（天）生存時間（天）水水50120奶油奶油2565塵塵4120奶酪奶酪2190糞糞2172凍肉凍肉1447畜舍墻棚畜舍墻棚4150腌肉腌肉2045地面地面4150培養(yǎng)基培養(yǎng)基60318衣服衣服3080干燥胎膜干燥胎膜120皮毛皮毛45120腐敗臟器腐敗臟器死亡死亡鮮牛乳鮮牛乳2550人工胃液人工胃液2050 (1)(1)對物理因子的抵抗力對物理因子的抵抗力 物理因子對布氏菌的影響物理因子對布氏菌的影響物理因子物理因子 生存時間生存時間 物理因子物理因子 生存時間生存時間濕熱濕熱5656 6

10、060分鐘以上分鐘以上 干熱干熱8080 6060分鐘以上分鐘以上濕熱濕熱6363 6060分鐘以上分鐘以上 干熱干熱9090 6060分鐘以上分鐘以上濕熱濕熱8080 3030分鐘以上分鐘以上 干熱干熱100100 7 7分鐘以上分鐘以上濕熱濕熱9090 10 10分鐘以上分鐘以上 直射陽光直射陽光 1 14 4小時小時濕熱濕熱100100 半分鐘死亡半分鐘死亡 散射陽光散射陽光 7 78 8天天 (2)(2)對化學(xué)因子的抵抗力對化學(xué)因子的抵抗力 化學(xué)因子對布氏菌的影響化學(xué)因子對布氏菌的影響 藥物名稱藥物名稱 濃度濃度(%) (%) 生存時間生存時間 藥物名稱藥物名稱 濃度濃度(%) (%)

11、 生存時間生存時間 新潔爾滅新潔爾滅 0.1 300.1 30秒鐘秒鐘 漂白粉漂白粉 0.20.22.52.5 2 2分鐘以內(nèi)分鐘以內(nèi) 石炭酸石炭酸 1 12 2 1 15 5分鐘分鐘 紅紅 汞汞 2 72 7分鐘分鐘 來蘇兒來蘇兒 2 12 13 3分鐘分鐘 過錳酸鉀過錳酸鉀 0.10.10.2 70.2 71515分鐘分鐘 來蘇兒來蘇兒 3 13 1分鐘以內(nèi)分鐘以內(nèi) 甲甲 醛醛 0.2 200.2 20分鐘以上分鐘以上 氯亞明氯亞明 0.2 50.2 57 7分鐘分鐘 乳乳 酸酸 0.50.5 1 1分鐘以內(nèi)分鐘以內(nèi) 氯亞明氯亞明 0.5 30.5 35 5分鐘分鐘 氫氧化鉀氫氧化鉀 2

12、32 3分鐘分鐘 升升 汞汞 0.05 1 0.05 1分鐘以內(nèi)分鐘以內(nèi) 肥皂肥皂 2 20 2 20分鐘以上分鐘以上主要化學(xué)藥品對三型菌的影響主要化學(xué)藥品對三型菌的影響 濃度濃度 布魯氏菌生存時間布魯氏菌生存時間( (分鐘分鐘) 化學(xué)藥品名稱化學(xué)藥品名稱 (%) (%) 羊型羊型 牛型牛型 豬型豬型 石石 碳碳 酸酸 1 5 3 5 1 5 3 5 石石 碳碳 酸酸 2 1 2 1 2 1 2 1 來來 蘇蘇 兒兒 2 3 1 3 2 3 1 3 來來 蘇蘇 兒兒 3 3 瞬間瞬間 瞬間瞬間 瞬間瞬間 漂白粉澄清液漂白粉澄清液 0.2 1-2 0.2 1-2 瞬間瞬間 瞬間瞬間 漂白粉乳劑漂

13、白粉乳劑 2.5 1-2 2.5 1-2 瞬間瞬間 瞬間瞬間 肥肥 皂皂 水水 2 20 20 20 2 20 20 20 （二）布魯氏菌分離培養(yǎng)（二）布魯氏菌分離培養(yǎng)n采用何種方法、采用何種方法、n取何種材料、取何種材料、n何種培養(yǎng)基何種培養(yǎng)基 n實驗室條件實驗室條件布氏菌的分離培養(yǎng)布氏菌的分離培養(yǎng)n一、一、從可疑病人分離布氏菌從可疑病人分離布氏菌 n血培養(yǎng)：血培養(yǎng)： 3030天未培養(yǎng)出菌，可定位陰性天未培養(yǎng)出菌，可定位陰性 。 n骨髓培養(yǎng)：抽取骨髓（接種雙相培養(yǎng)基）骨髓培養(yǎng)：抽取骨髓（接種雙相培養(yǎng)基）n尿培養(yǎng)：尿培養(yǎng)：n其他病原材料培養(yǎng)其他病原材料培養(yǎng): :乳、腦脊液、關(guān)節(jié)液乳、腦脊液、關(guān)

14、節(jié)液和滑囊液分離布氏菌，參照血培養(yǎng)觀察和滑囊液分離布氏菌，參照血培養(yǎng)觀察結(jié)果，結(jié)果，1515天不長菌定為陰性天不長菌定為陰性 二、從牲畜材料中分離布氏菌二、從牲畜材料中分離布氏菌 n 從牲畜流產(chǎn)羔檢菌：從牲畜流產(chǎn)羔檢菌： n 從胎衣檢菌：從胎衣檢菌： n 從陰道分泌物檢菌：從陰道分泌物檢菌： n 尿液檢菌：尿液檢菌：n 乳汁檢菌：乳汁檢菌：n 膿汁檢菌：膿汁檢菌： n 血液培養(yǎng)：血液培養(yǎng)： n 臟器檢菌：臟器檢菌：我國出菌宿主及材料我國出菌宿主及材料n我國從人、羊、牛、豬、犬、鹿、馬、駱駝等家畜及黃我國從人、羊、牛、豬、犬、鹿、馬、駱駝等家畜及黃羊、巖羊、黃鼠、黃胸鼠等野生動物檢出布氏菌。從牧

15、羊、巖羊、黃鼠、黃胸鼠等野生動物檢出布氏菌。從牧區(qū)水塘水和羊毛中也檢出過布氏菌。區(qū)水塘水和羊毛中也檢出過布氏菌。n出菌材料有血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、骨髓、腦髓液、胸出菌材料有血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、骨髓、腦髓液、胸液、淋巴結(jié)、乳汁、膿汁、膽汁、尿、陰道分泌物、等液、淋巴結(jié)、乳汁、膿汁、膽汁、尿、陰道分泌物、等2020余種。余種。n由于取材難易等原因，人多由血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、由于取材難易等原因，人多由血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、骨髓出菌；羊多由流產(chǎn)羔、胎盤、死羔檢出菌；牛多由骨髓出菌；羊多由流產(chǎn)羔、胎盤、死羔檢出菌；牛多由流產(chǎn)犢、乳汁檢出菌；豬多由流產(chǎn)仔豬、胎盤出菌。流產(chǎn)犢、乳汁檢出菌；豬多由流產(chǎn)仔豬

16、、胎盤出菌。布氏菌的鑒定及分型布氏菌的鑒定及分型 ( (一一) )常規(guī)確定布氏菌屬細菌的方法常規(guī)確定布氏菌屬細菌的方法n菌落生長時間和形態(tài)菌落生長時間和形態(tài); ;n菌體形態(tài)和染色菌體形態(tài)和染色; ;n布氏菌血清凝集試驗布氏菌血清凝集試驗; ;( (二二) )特殊方法：特殊方法：n1 1細菌細菌DNADNA鳥嘌呤十胞嘧啶克分子百分比鳥嘌呤十胞嘧啶克分子百分比( (C+CMOLC+CMOL) )的測定的測定; ;n2 2布氏菌布氏菌DNADNA與可疑菌與可疑菌DNADNA雜交試驗雜交試驗; ;n3 3應(yīng)用色譜技術(shù)鑒定布氏菌應(yīng)用色譜技術(shù)鑒定布氏菌; ; 布氏菌屬的種、型鑒定方法布氏菌屬的種、型鑒定方

17、法 初代分離培養(yǎng)對二氧化碳的需要初代分離培養(yǎng)對二氧化碳的需要 硫化氫產(chǎn)生試驗硫化氫產(chǎn)生試驗 染料抑菌試驗染料抑菌試驗 單項特異性血清單項特異性血清A A、M M、R R凝集試驗?zāi)囼?粗糙型（粗糙型（R R型）血清凝集試驗（玻片、試管法）型）血清凝集試驗（玻片、試管法） 噬菌體裂解試驗噬菌體裂解試驗 尿素酶活性試驗?zāi)蛩孛富钚栽囼灢剪斒暇蛛x用培養(yǎng)基布魯氏菌分離用培養(yǎng)基n血清葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基血清葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基n胰酶大豆培養(yǎng)基胰酶大豆培養(yǎng)基n土豆瓊脂培養(yǎng)基土豆瓊脂培養(yǎng)基n胰示瓊脂胰示瓊脂nAlbimiAlbimi瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基n肝瓊脂培養(yǎng)基肝瓊脂培養(yǎng)基n土豆土豆+10%+10%馬血清培養(yǎng)

18、基馬血清培養(yǎng)基 效果最好效果最好 SAT滴度與培養(yǎng)陽性的符合率0 010102020303040405050606070708080909010010020204040808016016032032064064012801280符合率符合率BSLBSL2 2：實驗室設(shè)施實驗室設(shè)施 ( (二級屏障二級屏障) )人間布病診斷方法和判定標準人間布病診斷方法和判定標準1 1、流行病學(xué)接觸史：流行病學(xué)接觸史： 密切接觸家畜、野生動物、畜產(chǎn)品、密切接觸家畜、野生動物、畜產(chǎn)品、 布魯氏菌培養(yǎng)物等或生活在疫區(qū)內(nèi)的居民。布魯氏菌培養(yǎng)物等或生活在疫區(qū)內(nèi)的居民。2 2、臨床癥狀和體征、臨床癥狀和體征: :應(yīng)排除其他

19、疑似疾病。應(yīng)排除其他疑似疾病。3 3、實驗檢查：、實驗檢查：病原分離病原分離 試管凝集試管凝集試驗試驗 補體結(jié)合試驗補體結(jié)合試驗 抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗參考：（參考：（皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗試驗、虎紅平板凝集試驗）虎紅平板凝集試驗） 人間布病血清學(xué)陽性判定標準人間布病血清學(xué)陽性判定標準病原分離病原分離: :檢出布魯氏菌；檢出布魯氏菌；試管凝集試管凝集試驗試驗: :1:100(+)1:100(+)及以上為陽性；及以上為陽性；補體結(jié)合試驗補體結(jié)合試驗:1:1: :10 (10 (+)+)及以上為陽性；及以上為陽性；抗人球蛋白試抗人球蛋白試:1:400(:1:400(+)+)及以上為陽性

20、；及以上為陽性； 人間布病診斷方法和判定標準人間布病診斷方法和判定標準 凡具備凡具備1 1、2 2和第和第3 3項中的任何一項檢項中的任何一項檢查陽性即可確定為布病病人。查陽性即可確定為布病病人。 對已確診的慢性布病病人和接種過對已確診的慢性布病病人和接種過菌苗的人，應(yīng)以臨床癥狀為主要依菌苗的人，應(yīng)以臨床癥狀為主要依據(jù)，血清學(xué)試驗效價高低，皮變反據(jù)，血清學(xué)試驗效價高低，皮變反應(yīng)僅供參考。應(yīng)僅供參考。(1(1）布氏菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗布氏菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗原理：原理：當機體受布氏菌抗原作用之后，導(dǎo)致當機體受布氏菌抗原作用之后，導(dǎo)致T T細胞細胞過敏。致敏過敏。致敏T T細胞再遇到相同抗原后進行

21、分化，細胞再遇到相同抗原后進行分化，衍變，產(chǎn)生能釋放各種淋巴因子的效應(yīng)細胞，局衍變，產(chǎn)生能釋放各種淋巴因子的效應(yīng)細胞，局部的皮膚變態(tài)反應(yīng)就是各種淋巴因子綜合作用的部的皮膚變態(tài)反應(yīng)就是各種淋巴因子綜合作用的結(jié)果，是一種遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果，是一種遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。注意：注意： 布氏菌素注射后，不會使人感染布??；也不會布氏菌素注射后，不會使人感染布?。灰膊粫?dǎo)致常規(guī)檢測的抗體增加。導(dǎo)致常規(guī)檢測的抗體增加。器材及試劑：器材及試劑： 布氏菌素、酒精棉球，布氏菌素、酒精棉球，1 1mlml注射器，測量尺注射器，測量尺皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)操作方法皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)操作方法1.1.每次注射前必須詳細詢問職業(yè)、健康情況曾否每

22、次注射前必須詳細詢問職業(yè)、健康情況曾否接種過布氏菌活菌苗等。接種過布氏菌活菌苗等。2.2.前臂掌側(cè)中部皮膚用前臂掌側(cè)中部皮膚用75%75%酒精棉球消毒，待干酒精棉球消毒，待干后，用后，用1 1mlml注射器皮內(nèi)注射注射器皮內(nèi)注射0.10.1mlml。3.3.判定反應(yīng)時間：注射后判定反應(yīng)時間：注射后2424、4848h h各觀察一次各觀察一次（以（以4848H H結(jié)果為準）。結(jié)果為準）。4.4.判定反應(yīng)標準：陽性反應(yīng)局部紅腫達判定反應(yīng)標準：陽性反應(yīng)局部紅腫達2 2x2cmx2cm或或面積面積4 4cmcm2 2皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)注意事項注意事項 部位：要皮內(nèi)注射，切勿皮下注射部位：要皮內(nèi)注

23、射，切勿皮下注射 劑量：為劑量：為0.10.1mlml，注射后應(yīng)在注射部位有小注射后應(yīng)在注射部位有小白泡隆起，注射液不得從針口漏出。白泡隆起，注射液不得從針口漏出。 消毒：用酒精，切勿用碘酒，以免引起假陽消毒：用酒精，切勿用碘酒，以免引起假陽性反應(yīng)。性反應(yīng)。 面積計算：浸潤、偽足都屬于測量范圍面積計算：浸潤、偽足都屬于測量范圍 制品渾濁，有搖不散的沉淀，有異物，安瓶制品渾濁，有搖不散的沉淀，有異物，安瓶有裂紋，標簽不清，過期失效者不可使用。有裂紋，標簽不清，過期失效者不可使用。 保存：保存：布氏菌素于布氏菌素于4-104-10冷暗處冷暗處. .皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)禁忌禁忌 既往有各種過敏史

24、者，既往有各種過敏史者， 支氣管哮喘病者支氣管哮喘病者 不可使用不可使用評價：評價： 此法敏感性較好，呈陽性反應(yīng)的人只此法敏感性較好，呈陽性反應(yīng)的人只表示受過布氏菌感染，不能做最后判定。表示受過布氏菌感染，不能做最后判定。 此法用于流行病學(xué)調(diào)查和大量檢疫，此法用于流行病學(xué)調(diào)查和大量檢疫，所以布病監(jiān)測時為初診方法，若皮變陽所以布病監(jiān)測時為初診方法，若皮變陽性，應(yīng)采血進一步做特異性抗體檢測。性，應(yīng)采血進一步做特異性抗體檢測。（2 2）試管凝集試驗）試管凝集試驗原理：原理：Ag+AbAg-AbNaclNacl電介質(zhì)電介質(zhì)布氏菌侵入機體后，就會刺激布氏菌侵入機體后，就會刺激機體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗機

25、體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗體可與相應(yīng)抗原（布氏菌體）體可與相應(yīng)抗原（布氏菌體）發(fā)生特異性結(jié)合，在電介質(zhì)作發(fā)生特異性結(jié)合，在電介質(zhì)作用下，就會形成肉眼可見的凝用下，就會形成肉眼可見的凝集反應(yīng)，我們就是用已知抗原集反應(yīng)，我們就是用已知抗原查未知抗體。查未知抗體。試管凝集反應(yīng)步驟試管凝集反應(yīng)步驟1 1、加入倍比稀釋受檢血清、加入倍比稀釋受檢血清0.50.5mlml2 2、加入、加入1 1：1010稀釋布氏菌抗原稀釋布氏菌抗原0.50.5mlml3737度度2424小時觀察結(jié)果小時觀察結(jié)果同時配置比濁管便于結(jié)果判定同時配置比濁管便于結(jié)果判定0.50.50.50.5試管凝集反應(yīng)（試管凝集反應(yīng)（SATSAT

26、）示意圖示意圖(1)(1)0.50.50.50.50.50.5稀釋血清稀釋血清1:251:501:1001:2001:4000.5棄去棄去稀釋度稀釋度比濁管的制備比濁管的制備管號1:20稀釋抗原生理鹽水清亮度標記10.001.00100%+20.250.7575%+30.500.5050%+40.750.2525%+ +51.000.000%-每次試驗須作三種對照每次試驗須作三種對照 陰性血清對照陰性血清對照 陽性血清對照陽性血清對照 抗原對照抗原對照結(jié)果判定：結(jié)果判定： 根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄凝集反根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄凝集反應(yīng)程度（滴度），特別是應(yīng)程度（滴度），特別是50%

27、50%清亮度（清亮度（+）對判）對判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對比判定。定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對比判定。+ + 等于完全凝集，上層液等于完全凝集，上層液100%100%清亮。清亮。+ + 等于幾乎完全凝集，上層液等于幾乎完全凝集，上層液75%75%清亮。清亮。+ + 等于顯著凝集，上層液等于顯著凝集，上層液50%50%清亮。清亮。+ + 等于有凝集出現(xiàn)，液體等于有凝集出現(xiàn)，液體25%25%清亮。清亮。- - 等于無凝集，液體不清亮。等于無凝集，液體不清亮。人的診斷標準：人的診斷標準：1:100+1:100+為陽性，為陽性，1:50+1:50+為可疑。為可疑。評價：試管凝集試驗是評價

28、：試管凝集試驗是WrightWright和和SampleSample于于18981898年首先建立的，是布病診斷在國年首先建立的，是布病診斷在國際上唯一的全標化方法，使用廣泛，際上唯一的全標化方法，使用廣泛，經(jīng)久不衰。特異性好，也較敏感，實經(jīng)久不衰。特異性好，也較敏感，實用性強，診斷、流調(diào)、監(jiān)測均適用。用性強，診斷、流調(diào)、監(jiān)測均適用。缺點：缺點： 有前帶現(xiàn)象。有前帶現(xiàn)象。 不能區(qū)別人工免疫和自然感染。不能區(qū)別人工免疫和自然感染。 產(chǎn)生一定的交叉反應(yīng)。產(chǎn)生一定的交叉反應(yīng)。 慢，需要兩天。慢，需要兩天。（3 3）、虎紅平板凝集試驗）、虎紅平板凝集試驗 ( (一一) )器材及試劑器材及試劑 清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，0 0. .1 1毫升毫升吸管或微量加樣器、牙簽或細鐵絲?；⒓t平吸管或微量加樣器、牙簽或細鐵絲。虎紅平板凝集抗原、被檢血清。板凝集抗原、被檢血清。( (二二) )操作方法操作方法 在玻片上加在玻片上加0 0. .0303毫升被檢血清，然后加入虎毫升被檢血清，然后加入虎紅平板抗原紅平板抗原0 0. .0303毫升，搖勻或用牙簽混勻，毫升，搖勻或用牙簽混勻，在在5 5分鐘內(nèi)判定結(jié)果。判定級別同平板凝集分鐘內(nèi)判定結(jié)果。判定級別同平板凝集反應(yīng)。亦可只分為反應(yīng)。亦可只分為(+)(+)陽性，陽性，(-)(-)陰性兩類。陰性兩類。評價評