趙雪艷微生物基礎知識培訓

1、微生物基礎微生物基礎 知識培訓知識培訓目的目的無菌定義微生物污染的相關知識藥品微生物污染的來源和預防藥典對無菌保證定量標準藥典對無菌保證定量標準沒有任何活的微生物Fo不小于8分鐘經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品中污染菌存活的概率不大于百萬分之一。無菌保證值：污染菌存活概率負對數(shù)，經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品的無菌保證值不小于6不同工藝無菌保證比較表過度殺過度殺滅法滅法Fo1210-6熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以殺滅微生物作為實現(xiàn)無菌的手段以殺滅微生物作為實現(xiàn)無菌的手段殘存概殘存概率法率法Fo810-6熱穩(wěn)定性較差產(chǎn)品熱穩(wěn)定性較差產(chǎn)品工藝過程將防止產(chǎn)品被耐熱菌污染放在首位，而工藝過程將防止產(chǎn)品被耐熱菌污染放在首位，而不是

2、僅依賴最終滅菌去消除污染不是僅依賴最終滅菌去消除污染 流通蒸流通蒸汽法汽法不計算不計算Fo0.1%熱不穩(wěn)定產(chǎn)品熱不穩(wěn)定產(chǎn)品加熱是無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾）的補充手段加熱是無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾）的補充手段除菌除菌過濾法過濾法LRV70.1%不能加熱的產(chǎn)品不能加熱的產(chǎn)品LRV=log reduction value 過濾對數(shù)下降值，一般過濾對數(shù)下降值，一般上游為上游為107下游為下游為1，則，則LRV=7由于后續(xù)無菌操作較多，最終產(chǎn)品達到的無菌保由于后續(xù)無菌操作較多，最終產(chǎn)品達到的無菌保證水平遠低于除菌過濾的本身的能力證水平遠低于除菌過濾的本身的能力什么是微生物什么是微生物 它們是非常小的單細胞或

3、多細胞生物，肉眼無法看到。它們對營養(yǎng)的要求非常低。它們是一類繁殖非?？斓纳铩Ｋ鼈兎浅Ｈ菀装l(fā)生變異。它們無處不在。大多數(shù)微生物對人類有益。有些微生物對人類有害。 微生物的分類微生物的分類（1）原核細胞型原核細胞型：細胞核分化程度低，僅有原始核質，沒有核膜與核仁；細胞器不很完善。包括：細菌、放線菌、支原體、衣原體、螺旋體等。（2）真核細胞型：真核細胞型：細胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞質內有完整的細胞器。包括：真菌（酵母菌和霉菌）、原生動物和顯微藻類。（3）非細胞型非細胞型：沒有典型的細胞結構，亦無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細胞內生長繁殖。包括病毒、類病毒等。藥品微生物檢驗主要相關

4、微生物藥品微生物檢驗主要相關微生物 細菌、霉菌、酵母菌、例如：飲用水：細菌總數(shù)每1ml不得過100cfu純化水：細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100cfu注射用水：細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每100ml不得過10個cfu原核細胞型原核細胞型-細菌細菌細菌是一類細胞細而短，細胞壁堅韌，以二分裂方式無性繁殖的原核微生物，即一個細胞就是一個個體。細菌的基本形態(tài)有三種：球狀、桿狀和螺旋狀，分別被稱為球菌、桿菌和螺旋菌?；窘Y構：細胞壁、細胞膜、細胞質及細胞核特殊結構：莢膜、芽孢等 絕大多數(shù)在3237最適宜生長，最適宜pH6.57.2(藥典規(guī)定細菌培養(yǎng)溫度為3035)微生物存在微生物存在水空氣衣服地面

5、廢水排水口洗手池嘴頭發(fā)皮膚鼻子腸道食物昆蟲動物等等微生物的主要類群：桿菌微生物的主要類群：桿菌( (大腸桿菌大腸桿菌) ) 大腸桿菌大腸桿菌( (帶鞭毛帶鞭毛) ) 微生物的主要類群：桿菌微生物的主要類群：桿菌( (碳疽碳疽) ) 沙門氏菌沙門氏菌 微生物的主要類群：葡萄球菌微生物的主要類群：葡萄球菌 微生物的主要類群：鏈球菌微生物的主要類群：鏈球菌 微生物的主要類群：弧狀菌微生物的主要類群：弧狀菌 微生物的主要類群：四疊球菌微生物的主要類群：四疊球菌 細菌的繁殖：二分裂繁殖細菌的繁殖：二分裂繁殖 微生物的主要類群：黑曲霉菌微生物的主要類群：黑曲霉菌 微生物的主要類群：絲狀真菌微生物的主要類群

6、：絲狀真菌 真菌的繁殖：分生孢子真菌的繁殖：分生孢子 微生物的益處微生物的益處啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)面包酵母的生產(chǎn)奶酪的生產(chǎn)醋的生產(chǎn)酸奶的生產(chǎn)維生素的生產(chǎn)類固醇的生產(chǎn)抗菌素、干擾素的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用幫助腸道中的食物消化除蟲微生物的害處微生物的害處導致傷口感染導致胃腸不適引起感冒，咳嗽尿道感染敗血癥癌癥腦脊膜炎破傷風艾滋病藥品生產(chǎn)中微生物控制藥品生產(chǎn)中微生物控制 為什么要對藥品生產(chǎn)進行微生物控制？ 微生物可以致病。特別是注射劑的危害。如果細菌得到了必要的養(yǎng)料、一定量的水份和合適的溫度，它們就能迅速繁殖，它們繁殖的速度快得驚人。通常一個細菌在僅僅24小時后可產(chǎn)生出281兆(百萬)個的細菌。 主要

7、的微生物污染源主要的微生物污染源 空氣 水 設備 原輔料 人員微生物的污染途徑微生物的污染途徑 自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生 物而污染。 接觸污染：由于和非無菌的用具、器械或 人的接觸而污染。 空氣污染：由于空氣中所含微生物的沉降、 附著或被吸入而污染。 其他污染：由于其他因素（如昆蟲）而污染?？刂莆⑸锏奈廴就緩娇刂莆⑸锏奈廴就緩?有效地阻止室外的污染侵入室內。 迅速有效地排除室內已發(fā)生的污染。 控制污染源，減少污染發(fā)生量?？刂莆⑸镂廴就緩娇刂莆⑸镂廴就緩轿廴就緩郊敖鉀Q措施人、機、料、法、環(huán)控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑一、人在潔凈室中人體是主要菌源之一，不僅皮膚帶有細菌

8、(其中約l為病原性的)，人通過呼吸、講話、操作也會散布細菌?？刂莆⑸镂廴就緩娇刂莆⑸镂廴就緩礁鶕?jù)國外實驗資料，可以認為人員的發(fā)菌量有以下數(shù)據(jù)可供參考。潔凈室內當工作人員穿無菌服時： 靜止時的發(fā)菌量一般為10300 個(min人)； 軀體一般活動時的發(fā)菌量為1501000 個(min人)； 快步行走時的發(fā)菌量為9002500 個(min人)。咳嗽一次的發(fā)菌量一般為70700 個(min人)，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為400060000 個(min人)。穿平常衣服時發(fā)菌量為330062000 個(min人)。無口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為(1：7)(1：14)。人員不良行為所產(chǎn)生的污染人員不良行為所

9、產(chǎn)生的污染: :當有如下行為時將相應增加微粒的產(chǎn)生量:- 吸煙者的呼吸 500%-噴嚏 2000%-搓手 200%-行走 200%-跺腳 5000%控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑人員需要規(guī)范或注意的部分：凈化工作服穿戴凈化工作服穿戴更衣更衣更衣更衣標準更衣程序： 一更：脫衣?lián)Q鞋洗手二更：穿潔凈服/戴帽子/戴口罩緩 沖 ： 消 毒 雙 手 潔 凈 區(qū) . . .更衣更衣著衣種類著衣種類 測定日期測定日期 細菌數(shù)細菌數(shù)/100CM/100CM上衣內側 使用五日后 300 外側 使用五日后 200褲子內側 使用五日后 450 外側 使用五日后 70帽子內側 使用五日后 100 外側 使用五日后

10、 150口罩內側 使用一日后 22000 使用一日后 100更衣的目的：更衣的目的：想混進去，沒門！想混進去，沒門！操作幅度操作幅度潔凈區(qū)行為要控制，要緩慢移動，保持好的身體姿勢，輕聲談話，減少交談頻率等。人的行為是維持潔凈區(qū)平衡不可或缺的。個人衛(wèi)生（洗手消毒）個人衛(wèi)生（洗手消毒）手的衛(wèi)生手的衛(wèi)生每只手可攜帶40萬個細菌；剛洗過的手，每平方厘米也可檢驗出3200個細菌 。110萬個細菌/ /1cm2 皮膚表面!洗手的重要性洗手的重要性: :用流水（如自來水）洗手，能使手上的致病微生物減少80%；用皂液充分洗手，再用自來水沖洗能使致病微生物減少95%。洗手后正確使用消毒劑能使致病微生物減少到99

11、%。洗手的正確方法 手的細菌對照實驗手的細菌對照實驗 未洗的手未洗的手 漂洗的手漂洗的手( (只用清水只用清水) ) 洗凈的手洗凈的手( (用皂液用皂液) ) 洗凈的手洗凈的手( (用消毒劑用消毒劑) )正確洗手的步驟：正確洗手的步驟：1. 手心搓手心；2. 手心搓手背；3. 手指交叉； 4. 手心搓拇指；5. 手心搓手腕。其它其它凈化工作服處理運送方式、無菌手套的處理及穿戴、消毒劑更換配制、維修人員操作。控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑二、環(huán)二、環(huán)潔凈度測定包括： 懸浮粒子 微生物 - 浮游菌 - 沉降菌 潔凈區(qū)空氣潔凈度等級潔凈區(qū)空氣潔凈度等級: : 歐盟 GMP 2002 微粒指標A

12、級風速為：級風速為：0.36-0.54m/s（指導值）（指導值）級別分動態(tài)及靜態(tài)；級別分動態(tài)及靜態(tài)；5m ：1 應視作不檢出；應視作不檢出；2005年年9月月21日修改，考日修改，考慮光散射及電子噪聲等可能誤報，標準為慮光散射及電子噪聲等可能誤報，標準為20個個/ m3 應對應對A級區(qū)的空氣粒子進行連續(xù)測定，并建議對級區(qū)的空氣粒子進行連續(xù)測定，并建議對B級區(qū)也連續(xù)測定級區(qū)也連續(xù)測定級別級別靜態(tài)靜態(tài)動態(tài)動態(tài)塵粒最大允許數(shù)塵粒最大允許數(shù)/m30.5m5m0.5m5mA3500135001B350013500002000C3500002000350000020000D350000020000不作規(guī)定

13、不作規(guī)定不作規(guī)定不作規(guī)定USP28 潔凈級別標準表藥典標準中有關鍵區(qū)提法。藥典標準中有關鍵區(qū)提法。FDA無菌制造工藝生產(chǎn)的無菌藥品無菌制造工藝生產(chǎn)的無菌藥品CGMP指南要求：關鍵區(qū)正常情況指南要求：關鍵區(qū)正常情況不得檢出菌。不得檢出菌。表中均為動態(tài)；關鍵區(qū)指標包括地面；表中均為動態(tài)；關鍵區(qū)指標包括地面；*接觸碟或擦拭法接觸碟或擦拭法 24-30cm2區(qū)域區(qū)域級別級別浮游菌浮游菌cfu/m3表面菌表面菌*手套手套*衣服衣服*關鍵區(qū)關鍵區(qū)M3.5100 3 3 3 5控制區(qū)控制區(qū)M5.510 000 20 5 10 地地 10 20控制區(qū)控制區(qū)100 000 100控制微生物污染途徑控制微生物污染

14、途徑環(huán)需要注意或控制的部分A、粒子指標的控制；B、微生物指標的控制。 生產(chǎn)車間、公用工程分別應該注意的部分控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑三、料三、料A、原輔料；B、內包材；C、與藥品接觸的其它部分（氣體、活性炭） 注射用水WFI對產(chǎn)品質量的重要性微生物指標法定：10個/100ml CFU 內控：8個/100ml CFU WFI微生物指標控制 生產(chǎn)車間、公用工程分別應該注意的部分控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑四、機四、機設備和器具與藥品直接接觸特別是設備或設施的衛(wèi)生死角（膠塞機、配制罐及其相關工藝聯(lián)接輸送管道）控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑設備和器具的清洗清潔程序必須經(jīng)過驗證嚴

15、格按清洗周期清洗清洗和存放設備、器具處應與生產(chǎn)區(qū)域潔凈等級相同注重與物料接觸設施及部件處理（特別是F0低品種）控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑五、法五、法上述各種控制方法應該已相關SOP形式存在。SOP執(zhí)行基礎管理人員作用。GMPGMP的信條:GMP照章辦事照章辦事有據(jù)可有據(jù)可查查有章可循有章可循藥品生產(chǎn)中控制微生物的方法藥品生產(chǎn)中控制微生物的方法去除微生物方法主要有：去除微生物方法主要有： 消毒 滅菌 過濾消毒與滅菌消毒與滅菌Disinfection殺死物體上病原微生物的方法殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細菌并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物或非病原微生物消毒：

16、消毒：滅菌：滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。殺滅物體上所有微生物的方法。 Sterilization無菌：無菌：Asepsis不存在活菌的意思。不存在活菌的意思。 防腐：防腐：Antisepsis防止或抑制體外細菌生長繁殖的防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法方法。無菌：是指物體或任一介質中沒有活的微生物的存在，即無論用何種方法，檢不出活的微生物。無菌操作：指在操作中，采用或控制一定條件，盡量避免產(chǎn)品污染微生物的一種操作方法程序。為此目的，所用的一切物品、環(huán)境，均應事先滅菌，操作也應在無菌操作室中進行。無菌觀念：指在無菌操作時，避免污染任何微生物。無菌制劑:不存在活的微生物的制劑.有效有效低破壞

17、低破壞低毒低毒方便方便價廉價廉易貯藏易貯藏選擇適當?shù)南緞┻x擇適當?shù)南緞┏Ｒ姷南緞┓诸惓Ｒ姷南緞┓诸惛咚降南緞簹缫磺形⑸铮毦敝丑w、細菌芽孢、真菌、結 核桿菌、病毒（戊二醛、二氧化氯、過氧乙酸、環(huán)氧乙烷等）中水平的消毒劑：可殺滅除芽孢之外的其他微生物（醇類消毒劑、酚類消毒劑、含碘消毒劑等）低水平的消毒劑：可殺滅細菌繁殖體、真菌和親脂病毒，不能殺滅細菌芽孢、結核桿菌和親水病毒（季銨鹽類消毒劑、雙胍類消毒劑等）消毒劑的分類消毒劑的分類消毒劑的化學性質常見的消毒劑醛類甲醛、戊二醛酚類苯酚、甲酚皂溶液含氯次氯酸鈉、二氯異氰酸鈉、二氧化氯含碘碘伏、碘酊氧化型臭氧、二氧化氯、過氧化氫

18、、過氧乙酸等雜環(huán)型環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷季銨鹽類苯扎氯銨、苯扎溴銨（新潔爾滅）雙胍類洗必泰（氯已定）、聚六亞甲基胍醇類乙醇、異丙醇其他類高錳酸鉀、乳酸、強氧化高電位酸性水臭氧產(chǎn)生原理：臭氧是以無聲放電法產(chǎn)生的。在一對交流電極之間隔以介電體，當空氣或氧氣通過高壓電極(60008000V)時，在具有足夠動能的放電電子中，使氧分子氧分子電離電離，一 部分氧分子被聚合為臭氧。臭氧消毒機理：臭氧首先作用于細胞核（細胞核（RNARNA或或DNADNA），繼而破壞膜內組織，直至殺死細胞。 臭氧是一種高效廣譜殺菌劑，對細菌、病毒、霉菌、芽孢、真菌和微生物等都具有極強的殺滅力。臭氧的殺菌能力比紫外線高20%，且在空

19、氣中自行擴散，殺菌無死角，在水中的殺菌速度比氯快600倍。由于臭氧最終還原為氧氣，所以它對人體和環(huán)境沒有任何副作用，沒有二次污臭氧最終還原為氧氣，所以它對人體和環(huán)境沒有任何副作用，沒有二次污染。染。 臭氧消毒臭氧消毒臭氧消毒臭氧消毒空氣消毒空氣消毒： 在封閉空間內、無人狀態(tài)下，采用20mg/m3濃度（約10 ppm）的臭氧，作用30分鐘，對自然菌的殺滅率達到90%以上，消毒后應通風30分鐘以上，人員方可進入；物體表面消毒：物體表面消毒： 在封閉空間內、無人狀態(tài)下，相對濕度在70%以上，采用20mg/m3（約10 ppm）濃度的臭氧，作用60分鐘至120分鐘；人體可接受范圍：人體可接受范圍：在有

20、人情況下，室內空氣中允許臭氧濃度為0.16mg/m3（約0.08 ppm），臭氧濃度在0.02ppm時，嗅覺靈敏的人便可覺察。濃度在0.15ppm時為嗅覺臨界值，一般人都能嗅出。當濃度達到110ppm時，稱為刺激范圍，10ppm以上時為中毒限。臭氧發(fā)生器工作1h后，臭氧自然衰退率（S）為62.25%。甲醛熏蒸甲醛熏蒸甲醛能破壞細菌繁殖體及許多芽孢、真菌和病毒，尤其是臭氧可能難消除的霉菌。每立方米37-40%甲醛液8-9ml，加4-5g高錳酸鉀做氧化劑，加熱熏蒸，密閉一定時間后，通風，置換室內空氣中甲醛。利用濃氨氣體與甲醛分子產(chǎn)生化學反應，生成新物質甲胺。甲胺是一種無毒、無刺激性的物質，不影響滅菌物品的滅菌效果，同時也可以減少刺激氣體對醫(yī)護人員身體的傷害。干霧過氧化氫熏蒸干霧過氧化氫熏蒸原理：原理： 利用物理手段將液體的滅菌劑（主要成分過氧化氫+活性膠質銀離子）轉變成氣溶膠狀態(tài)的“干霧”，能穿透和破壞微生物的細