天然藥化第一章

1、三、天然藥物有效成分的分離與精制三、天然藥物有效成分的分離與精制（一）溶劑分離法（一）溶劑分離法1 1、采用不同極性有機溶劑依次抽提、采用不同極性有機溶劑依次抽提(1)(1)原理：天然藥物提取液中的各類化學(xué)成分原理：天然藥物提取液中的各類化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度不同。，在不同極性溶劑中的溶解度不同。 (2)(2)常用溶劑：常用溶劑： 石油醚石油醚 氯仿氯仿/ /乙酸乙酯乙酸乙酯 正丁醇正丁醇 乙醇乙醇/ /丙酮丙酮 由低極性到高極性依次由低極性到高極性依次分段抽提分段抽提 （1 1）原理：利用某些成分能在酸或堿中溶解，）原理：利用某些成分能在酸或堿中溶解， 當(dāng)加堿或加酸調(diào)整溶液的當(dāng)加

2、堿或加酸調(diào)整溶液的pHpH值后，所需成分值后，所需成分 又變成不溶物而析出。又變成不溶物而析出。（2 2）舉例：）舉例： 內(nèi)酯類化合物內(nèi)酯類化合物不溶于水，遇堿開環(huán)生成羧不溶于水，遇堿開環(huán)生成羧 酸鹽而溶于水，酸化后形成內(nèi)酯環(huán)重新析出酸鹽而溶于水，酸化后形成內(nèi)酯環(huán)重新析出. .2 2、酸堿分離、酸堿分離CH2OHHOOHOOHCH2OHHOHOOHOKOHKHCO3H2SO4穿心蓮內(nèi)酯穿心蓮內(nèi)酯穿心蓮內(nèi)酯鉀鹽穿心蓮內(nèi)酯鉀鹽（二）溶劑萃取法（二）溶劑萃取法1 1、簡單萃取法、簡單萃取法（1 1）原理：利用總提物中各成分在兩種互不相）原理：利用總提物中各成分在兩種互不相 溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而

3、達到分離溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達到分離. .（2 2）實驗室萃取常用有機溶劑：）實驗室萃取常用有機溶劑： 石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等。石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等。（3 3）儀器）儀器: : 分液漏斗、下口瓶、萃取罐分液漏斗、下口瓶、萃取罐. .下口瓶下口瓶萃取罐萃取罐2 2逆流分配法：又稱逆流分溶法（逆流分配法：又稱逆流分溶法（counter current distribution, CCD)（1 1）概念：是一種多次、連續(xù)的液）概念：是一種多次、連續(xù)的液- -液萃取液萃取 分離過程。分離過程。（2 2）當(dāng)）當(dāng)分離因子分離因子值值較小時，如采用簡單萃較小時，如采用

4、簡單萃取法，通常需要萃取幾十次乃至幾百次，才能取法，通常需要萃取幾十次乃至幾百次，才能滿足分離要求。滿足分離要求。 分離因子分離因子：指：指A A、B B兩種溶質(zhì)在同一溶劑系兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)統(tǒng)( (由兩種互不相溶的溶劑組成由兩種互不相溶的溶劑組成) )中分配系數(shù)中分配系數(shù)K K之比。之比。 = K = KA A K KB B（K KA AK KB B）當(dāng)當(dāng)100100， 1 1次萃取可分離次萃取可分離. .當(dāng)當(dāng)1010100100，10-1210-12次萃取可分離次萃取可分離. .當(dāng)當(dāng)22， 100100次萃取才行次萃取才行. .當(dāng)當(dāng)11時，則時，則K KA AKKB B，意味著兩種組分

5、溶解，意味著兩種組分溶解 性質(zhì)極其相近，無法用萃取法實現(xiàn)分離。性質(zhì)極其相近，無法用萃取法實現(xiàn)分離。 對于酸性、堿性及兩性有機物，其分配系數(shù)對于酸性、堿性及兩性有機物，其分配系數(shù)K受到溶劑受到溶劑pH的影響的影響 (因因pHpH變化可改變?nèi)苜|(zhì)的存在變化可改變?nèi)苜|(zhì)的存在狀態(tài)，通常游離型的脂溶性強，離解型的水溶性大狀態(tài)，通常游離型的脂溶性強，離解型的水溶性大).試樣水溶液試樣水溶液pH=3，有機溶劑萃取水相（水相（1）有機相（有機相（1）pH=12，有機溶劑萃取有機相（有機相（2）堿性物質(zhì)堿性物質(zhì)水相（水相（2）糖類、兩性物質(zhì)糖類、兩性物質(zhì)有機酸與酚類物質(zhì)有機酸與酚類物質(zhì)（3 3）CCDCCD法的分

6、離過程法的分離過程（15-2015-20分液漏斗）分液漏斗） 樣品初始溶入流動相，再轉(zhuǎn)入樣品初始溶入流動相，再轉(zhuǎn)入1 1號分液漏斗（其中號分液漏斗（其中已載入固定相溶劑，已載入固定相溶劑，2 2號、號、3 3號等相同。號等相同。流動相溶劑流動相溶劑（密度大）（密度大）固定相溶劑固定相溶劑（密度小）（密度?。┬绿砑有绿砑恿鲃酉嗔鲃酉嗳軇┤軇膹?號轉(zhuǎn)入號轉(zhuǎn)入2號號 的流動相的流動相（4 4）CCDCCD法特點：法特點： 操作條件溫和，試樣容易回收。操作條件溫和，試樣容易回收。 特別適合于中等極性、不穩(wěn)定物質(zhì)的分特別適合于中等極性、不穩(wěn)定物質(zhì)的分 離，尤其是理化性質(zhì)非常相似的混合物離，尤其是理化性

7、質(zhì)非常相似的混合物 之分離。之分離。 溶質(zhì)濃度越低，分離效果越好。溶質(zhì)濃度越低，分離效果越好。（5 5） CCDCCD法缺點：操作復(fù)雜、不方便，現(xiàn)已法缺點：操作復(fù)雜、不方便，現(xiàn)已 很少使用。很少使用。（1 1）原理：依據(jù)離心力場作用，使無載體支持）原理：依據(jù)離心力場作用，使無載體支持 的固定相穩(wěn)定地保留在蛇形管內(nèi)，使流動相的固定相穩(wěn)定地保留在蛇形管內(nèi)，使流動相 單向、低速通過固定相，可實現(xiàn)連續(xù)逆流單向、低速通過固定相，可實現(xiàn)連續(xù)逆流 萃取分離萃取分離. .（2 2）HSCCCHSCCC分離的關(guān)鍵：選擇溶劑系統(tǒng)，經(jīng)典分離的關(guān)鍵：選擇溶劑系統(tǒng)，經(jīng)典 溶劑系統(tǒng)為溶劑系統(tǒng)為【正己烷【正己烷- -甲醇甲

8、醇- -水】水】等體系等體系. .3 3、高速逆流色譜（、高速逆流色譜（high speed countercurrent chromatography, HSCCC）（三）沉淀法（三）沉淀法1 1、醇沉法、醇沉法（1 1）原理：在中草藥水提濃縮液中）原理：在中草藥水提濃縮液中, ,加入乙醇加入乙醇使達不同含醇量，一些成分因在醇溶液中溶解使達不同含醇量，一些成分因在醇溶液中溶解度降低而析出，固液分離后水提液得以精制度降低而析出，固液分離后水提液得以精制. .（2 2）醇沉法用于中草藥水提液的純化，整個過）醇沉法用于中草藥水提液的純化，整個過程稱為程稱為水提醇沉法水提醇沉法。（3 3）水提醇沉法

9、）水提醇沉法 提取的有效成分提取的有效成分：生物堿鹽、苷類、糖：生物堿鹽、苷類、糖、 有機酸鹽、氨基酸、少量揮發(fā)油、糖等有機酸鹽、氨基酸、少量揮發(fā)油、糖等. . 去除的水溶性雜質(zhì)去除的水溶性雜質(zhì)：淀粉、蛋白質(zhì)、酶、：淀粉、蛋白質(zhì)、酶、 多糖、色素、無機鹽等。多糖、色素、無機鹽等。 往水煎液中加乙醇使其濃度達往水煎液中加乙醇使其濃度達606070%70%時，時， 除鞣質(zhì)、樹脂外，其他雜質(zhì)基本沉淀除去。除鞣質(zhì)、樹脂外，其他雜質(zhì)基本沉淀除去。 可溶解的水溶性成分可溶解的水溶性成分： 生物堿及其鹽類、苷類、糖類等生物堿及其鹽類、苷類、糖類等. . 可溶解的脂溶性成分可溶解的脂溶性成分：樹脂、揮發(fā)油、：

10、樹脂、揮發(fā)油、 脂溶性色素、脂肪等。脂溶性色素、脂肪等。 多糖、蛋白質(zhì)、淀粉等無效成分不易溶出多糖、蛋白質(zhì)、淀粉等無效成分不易溶出。 醇提取液濃縮后，加水置于冰箱中冷藏一定醇提取液濃縮后，加水置于冰箱中冷藏一定時間，葉綠素?？沙恋砦龀?。時間，葉綠素?？沙恋砦龀觥＃? 4）醇提水沉法）醇提水沉法2 2、酸堿沉淀法、酸堿沉淀法（1 1）原理：利用某些成分在酸或堿液中溶解，）原理：利用某些成分在酸或堿液中溶解， 再加堿或加酸后，所需成分又恢復(fù)成原來再加堿或加酸后，所需成分又恢復(fù)成原來 結(jié)構(gòu)，形成不溶物而析出。結(jié)構(gòu)，形成不溶物而析出。（2 2）應(yīng)用舉例）應(yīng)用舉例: : 提取黃酮、蒽醌、酚酸性成分時，提

11、取黃酮、蒽醌、酚酸性成分時， 可采用可采用堿提取堿提取酸沉淀法酸沉淀法。 3 3、鉛鹽沉淀法、鉛鹽沉淀法(1)(1)原理：中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛在水、醇原理：中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛在水、醇 溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的 鉛鹽或絡(luò)合物沉淀，進而與雜質(zhì)分離。鉛鹽或絡(luò)合物沉淀，進而與雜質(zhì)分離。(2)(2)使用范圍：使用范圍： 中性醋酸鉛：沉淀有機酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、中性醋酸鉛：沉淀有機酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、酸性皂苷及部分黃酮等。粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、酸性皂苷及部分黃酮等。 堿式醋酸鉛堿式醋酸鉛Pb(OH)AcPb(OH)Ac：具中性醋酸鉛性

12、質(zhì)，：具中性醋酸鉛性質(zhì)， 且更易與酸性物質(zhì)作用，其生成不溶性鉛鹽且更易與酸性物質(zhì)作用，其生成不溶性鉛鹽 或絡(luò)合物的范圍比中性醋酸鉛更廣?；蚪j(luò)合物的范圍比中性醋酸鉛更廣。 其他試劑沉淀法其他試劑沉淀法(1)(1)雷氏銨鹽使雷氏銨鹽使生物堿生物堿生成雷氏鹽沉淀。生成雷氏鹽沉淀。(2)(2)蛋白質(zhì)能在其等電點沉淀析出。蛋白質(zhì)能在其等電點沉淀析出。(3)(3)明膠、蛋白質(zhì)溶液可沉淀鞣質(zhì)等。明膠、蛋白質(zhì)溶液可沉淀鞣質(zhì)等。 （四）鹽析法（四）鹽析法1 1、原理：在中草藥水提液中加入無機鹽使之達、原理：在中草藥水提液中加入無機鹽使之達到一定的濃度到一定的濃度( (半飽和或飽和狀態(tài)半飽和或飽和狀態(tài)) )后，可

13、使某后，可使某些成分因在水中溶解度降低而沉淀析出。些成分因在水中溶解度降低而沉淀析出。2 2、使用范圍：蛋白質(zhì)、生物堿、皂苷等。、使用范圍：蛋白質(zhì)、生物堿、皂苷等。3 3、常用作鹽析的無機鹽：氯化鈉、氯化鉀、常用作鹽析的無機鹽：氯化鈉、氯化鉀、 硫酸鈉、硫酸鎂、碳酸鉀等。硫酸鈉、硫酸鎂、碳酸鉀等。（五）透析法（五）透析法 1 1、原理：小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜、原理：小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜 ，大分子物質(zhì)不能通過半透膜。，大分子物質(zhì)不能通過半透膜。2 2、半透膜舉例：、半透膜舉例： 細(xì)胞膜、膀胱膜、羊皮紙膜、玻璃紙膜等。細(xì)胞膜、膀胱膜、羊皮紙膜、玻璃紙膜等。3 3、在分離純化蛋白質(zhì)

14、、多肽、多糖、皂苷、在分離純化蛋白質(zhì)、多肽、多糖、皂苷等相對分子質(zhì)量較大的物質(zhì)時，常采用本法等相對分子質(zhì)量較大的物質(zhì)時，常采用本法. .（六）結(jié)晶法（六）結(jié)晶法 1 1、結(jié)晶、結(jié)晶：把含有固體溶質(zhì)的飽和溶液加熱蒸發(fā)：把含有固體溶質(zhì)的飽和溶液加熱蒸發(fā)溶劑或降低溫度后，原來溶解的溶質(zhì)將成為有溶劑或降低溫度后，原來溶解的溶質(zhì)將成為有一定幾何形狀的固體析出的過程。一定幾何形狀的固體析出的過程。2 2、結(jié)晶溶劑的選擇、結(jié)晶溶劑的選擇：是結(jié)晶的關(guān)鍵：是結(jié)晶的關(guān)鍵 （1 1）冷溶劑溶解度要小，熱溶劑溶解度應(yīng)大）冷溶劑溶解度要小，熱溶劑溶解度應(yīng)大. . （2 2）溶劑的沸點不宜過高）溶劑的沸點不宜過高. .（

15、3 3）常用結(jié)晶溶劑：甲醇、丙酮、氯仿、）常用結(jié)晶溶劑：甲醇、丙酮、氯仿、 乙醇、乙酸乙酯等。乙醇、乙酸乙酯等。（4 4）制備結(jié)晶溶液也常用混合溶劑）制備結(jié)晶溶液也常用混合溶劑. .3 3、結(jié)晶的操作方法、結(jié)晶的操作方法（1 1）蒸發(fā)結(jié)晶法：依靠蒸發(fā)除去一部分溶劑。）蒸發(fā)結(jié)晶法：依靠蒸發(fā)除去一部分溶劑。（2 2）冷卻結(jié)晶法：用適量溶劑將待結(jié)晶物在較）冷卻結(jié)晶法：用適量溶劑將待結(jié)晶物在較高溫度下制成飽和溶液，再逐步冷卻致析晶。高溫度下制成飽和溶液，再逐步冷卻致析晶。4 4、重結(jié)晶、重結(jié)晶：對已有晶體再次進行結(jié)晶操作。：對已有晶體再次進行結(jié)晶操作。（七）色譜法：是分離科學(xué)中最有效的制備（七）色譜法

16、：是分離科學(xué)中最有效的制備性分離技術(shù)，應(yīng)用十分廣泛。性分離技術(shù)，應(yīng)用十分廣泛。 根據(jù)參與分離的兩相狀態(tài)來分類：氣相色譜根據(jù)參與分離的兩相狀態(tài)來分類：氣相色譜( (流動相是氣體流動相是氣體) )與與液相色譜液相色譜( (流動相是氣體流動相是氣體) )等等。 根據(jù)分離原理根據(jù)分離原理：分：分吸附色譜、分配色譜、凝吸附色譜、分配色譜、凝膠過濾色譜、大孔吸附樹脂與離子交換色譜等膠過濾色譜、大孔吸附樹脂與離子交換色譜等 根據(jù)操作方法的不同根據(jù)操作方法的不同: : 分為薄層色譜、柱色分為薄層色譜、柱色譜與紙色譜等。譜與紙色譜等。7.1 7.1 吸附柱色譜吸附柱色譜1 1、原理：利用混合物中各組分在固體吸附

17、劑、原理：利用混合物中各組分在固體吸附劑 上吸附能力的不同達到分離。上吸附能力的不同達到分離。 液液- -固吸附色譜固吸附色譜是應(yīng)用較多的一種方法，特是應(yīng)用較多的一種方法，特別適用于中等分子量的樣品（相對分子質(zhì)量小別適用于中等分子量的樣品（相對分子質(zhì)量小于于10001000的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶性化學(xué)成分的分離。性化學(xué)成分的分離。2 2、常用吸附劑：硅膠、氧化鋁、活性碳、常用吸附劑：硅膠、氧化鋁、活性碳、 聚酰胺、硅藻土等。聚酰胺、硅藻土等。（1 1）硅膠）硅膠 常用常用SiOSiO2 2xHxH2 2O O表示，是極性吸附劑。表示，是極性吸附劑。

18、 為多孔性物質(zhì)，其顆粒表面具有很多為多孔性物質(zhì)，其顆粒表面具有很多硅醇硅醇基基( (致硅膠具吸附能力的活性基團，且呈弱酸性致硅膠具吸附能力的活性基團，且呈弱酸性pH=4.5)pH=4.5)。 其吸附能力取決于表面有效硅醇基的數(shù)目其吸附能力取決于表面有效硅醇基的數(shù)目（成正比），并隨所吸附水分的增多而降低。（成正比），并隨所吸附水分的增多而降低。 吸附色譜常用含水量吸附色譜常用含水量10-12%10-12%的硅膠，適用于的硅膠，適用于中性或酸性成分的分離分析。中性或酸性成分的分離分析。 硅膠的主要優(yōu)點：化學(xué)惰性、具有較大的吸硅膠的主要優(yōu)點：化學(xué)惰性、具有較大的吸附量、易于制成不同類型與孔徑的多孔性

19、硅膠。附量、易于制成不同類型與孔徑的多孔性硅膠。 市售硅膠分類：市售硅膠分類： 硅膠硅膠G G 含粘合劑；含粘合劑； 硅膠硅膠H H 不含粘合劑；不含粘合劑； 硅膠硅膠HFHF含熒光物質(zhì)含熒光物質(zhì)( (檢測可吸收檢測可吸收UVUV者者).).柱層析硅膠（柱層析硅膠（100-200目，常壓操作）目，常壓操作）（2 2）氧化鋁）氧化鋁: :僅次于硅膠的分離填料，屬于僅次于硅膠的分離填料，屬于極性吸附劑，吸附能力比硅膠更強。極性吸附劑，吸附能力比硅膠更強。 按制備方法不同分類：按制備方法不同分類： 堿性氧化鋁堿性氧化鋁(pH=9-10):(pH=9-10):常用于烴類、某些色常用于烴類、某些色素、甾

20、族、生物堿及其他中性、堿性物質(zhì)分離素、甾族、生物堿及其他中性、堿性物質(zhì)分離. . 中性氧化鋁（中性氧化鋁（pH=7.5pH=7.5）：）：適合于醛、酮、醌適合于醛、酮、醌、某些苷及在酸堿中不穩(wěn)定的化合物，如酯、內(nèi)、某些苷及在酸堿中不穩(wěn)定的化合物，如酯、內(nèi)酯等化合物的分離，應(yīng)用范圍較廣。酯等化合物的分離，應(yīng)用范圍較廣。 供柱層析用氧化鋁，粒度要求供柱層析用氧化鋁，粒度要求100-160100-160目目. . （粒度（粒度100100目，分離效果差；粒度目，分離效果差；粒度160 A B A ，硅膠為極性吸附劑，硅膠為極性吸附劑， 吸附劑對吸附劑對B B的吸附力較大，的吸附力較大，B B洗脫較難

21、洗脫較難 R Rf f(B) R(B) （3-23-2）被分離分子內(nèi)部成鍵位置對其吸附能力）被分離分子內(nèi)部成鍵位置對其吸附能力有影響（易形成分子內(nèi)氫鍵者，吸附力較?。?。有影響（易形成分子內(nèi)氫鍵者，吸附力較?。HOHOHOHHOCOOHOHCOOH( (吸附力強，吸附力強，R Rf f較小較小) )( (吸附力弱，吸附力弱，R Rf f值較大值較大) )分子內(nèi)氫鍵分子內(nèi)氫鍵(3-3)(3-3)分子結(jié)構(gòu)中芳香化程度高，吸附性增強。分子結(jié)構(gòu)中芳香化程度高，吸附性增強。OHOH（4 4）裝柱：通常使試樣做成水溶液上柱（）裝柱：通常使試樣做成水溶液上柱（聚酰聚酰胺與被吸附物在水中形成氫鍵締合的能力最

22、強胺與被吸附物在水中形成氫鍵締合的能力最強）。）。（5 5）洗脫劑洗脫能力如下）洗脫劑洗脫能力如下( (由弱至強由弱至強):): 水水甲醇甲醇丙酮丙酮氫氧化鈉水溶液氫氧化鈉水溶液甲酰胺甲酰胺 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺 尿素水溶液尿素水溶液（6 6）最常用洗脫系統(tǒng)：乙醇）最常用洗脫系統(tǒng)：乙醇水。水。 先用不同濃度的含水醇洗脫，并不斷提高醇先用不同濃度的含水醇洗脫，并不斷提高醇的濃度，以逐步增強從柱上洗脫物質(zhì)的能力。的濃度，以逐步增強從柱上洗脫物質(zhì)的能力。（在含水醇中，隨醇濃度升高，氫鍵締合能力將下降）（在含水醇中，隨醇濃度升高，氫鍵締合能力將下降）（7 7）聚酰胺色譜的應(yīng)用：）聚酰胺色譜的應(yīng)用：

23、 特別適合于酚類、黃酮類化合物的制備分離特別適合于酚類、黃酮類化合物的制備分離，其分離效果好，吸附是可逆性的、容量亦大。，其分離效果好，吸附是可逆性的、容量亦大。 用于脫用于脫鞣質(zhì)（屬于不可逆性吸附）鞣質(zhì)（屬于不可逆性吸附）處理。處理。聚酰胺聚酰胺7.2 分配柱色譜分配柱色譜1 1、正相分配色譜（固定相極性較大）、正相分配色譜（固定相極性較大）（1 1）原理：利用混合物在互不相溶的兩相中）原理：利用混合物在互不相溶的兩相中 分配系數(shù)不同將混合物分開。分配系數(shù)不同將混合物分開。（2 2）常用支持劑：吸水硅膠、多孔硅藻土等）常用支持劑：吸水硅膠、多孔硅藻土等（3 3）常用固定相：極性大的溶劑（如水

24、、）常用固定相：極性大的溶劑（如水、 緩沖溶液、甲醇、甲酰胺等）。緩沖溶液、甲醇、甲酰胺等）。（4 4）固定相和流動相理論上應(yīng)不互溶。）固定相和流動相理論上應(yīng)不互溶。 流動相常為親脂性溶劑：流動相常為親脂性溶劑： 石油醚、氯仿、乙酸乙酯等石油醚、氯仿、乙酸乙酯等. .（5 5）本法適合于親水性物質(zhì)的分離，極性小）本法適合于親水性物質(zhì)的分離，極性小 的組分先流出色譜柱。的組分先流出色譜柱。 例如：生物堿、苷類、酚性物質(zhì)、有機酸例如：生物堿、苷類、酚性物質(zhì)、有機酸 及糖類等。及糖類等。（6 6）典型的正向分配層析：典型的正向分配層析：紙層析紙層析 濾紙能吸收濾紙能吸收22%22%25%25%的水，

25、其中的水，其中6%6%7%7%的的 水是以氫鍵與濾紙纖維結(jié)構(gòu)上的羥基結(jié)合水是以氫鍵與濾紙纖維結(jié)構(gòu)上的羥基結(jié)合 （較難脫去）。（較難脫去）。 紙層析：以濾紙纖維的紙層析：以濾紙纖維的結(jié)合水結(jié)合水為固定相。為固定相。 展開過程：流動相有機溶劑在濾紙上流動，展開過程：流動相有機溶劑在濾紙上流動，樣品中各組分在兩相中分配，由于各組分分配樣品中各組分在兩相中分配，由于各組分分配系數(shù)不同，移動速度也就不同，實現(xiàn)分離。系數(shù)不同，移動速度也就不同，實現(xiàn)分離。 例：比較例：比較 CHCH3 3CHCH2 2-CH(NH-CH(NH2 2)-)-CONHCONH2 2（A A）與與 CHCH3 3CHCH2 2C

26、HCH2 2-CH(NH-CH(NH2 2)-)-CONHCONH2 2（B B）在正相在正相 分配色譜上的分配色譜上的R Rf f值值 分子極性大小為：分子極性大小為： A B A B 在紙色譜上的吸附力：在紙色譜上的吸附力：A BA B 洗脫從易到難順序：洗脫從易到難順序： B AB A 故故 R Rf f(B) R(B) Rf f(A) (A) ( (即，即，B B先出柱！）先出柱?。? 2、反相分配層析：流動相的極性大于固定、反相分配層析：流動相的極性大于固定相極性的分配層析技術(shù)。相極性的分配層析技術(shù)。（1 1）原理：用親脂性溶劑（極性較小）做固定）原理：用親脂性溶劑（極性較?。┳龉潭?/p>

27、相，以極性溶劑（極性較大）做流動相。相，以極性溶劑（極性較大）做流動相。（2 2）固定相：硅油或液體石蠟）固定相：硅油或液體石蠟（3 3）支持劑：）支持劑：改性普通硅膠改性普通硅膠 ( (即將硅膠中的羥基酯化即將硅膠中的羥基酯化) )。RP-8RP-18RP-2親油性表面親油性表面親水性表面親水性表面硅膠硅膠化學(xué)修飾化學(xué)修飾SiOHSiOCOCH3Si（4 4）常用流動相：水、甲醇等。）常用流動相：水、甲醇等。（5 5）應(yīng)用：多肽、核苷酸、糖類等分離。）應(yīng)用：多肽、核苷酸、糖類等分離。 例如例如: :反相反相HPLCHPLC（分離規(guī)模為（分離規(guī)模為1mg1mg，參見，參見p p3030） 固定

28、相：固定相：C C1818 流動相：水、醇、乙腈等流動相：水、醇、乙腈等. . （最常用：（最常用：水和甲醇混合溶劑水和甲醇混合溶劑）。）。 極性大組分先出峰，極性小組分后出峰。極性大組分先出峰，極性小組分后出峰。7.3 7.3 凝膠濾過法（凝膠濾過法（gel filtration) )1 1、概念：是以各種凝膠為固定相，利用分子篩、概念：是以各種凝膠為固定相，利用分子篩原理分離物質(zhì)的一種層析技術(shù)。也叫分子篩濾過原理分離物質(zhì)的一種層析技術(shù)。也叫分子篩濾過、排阻色譜或凝膠滲透色譜。、排阻色譜或凝膠滲透色譜。2 2、分離原理：、分離原理： 樣品流經(jīng)凝膠層析柱樣品流經(jīng)凝膠層析柱 大分子難以進入大分子

29、難以進入凝膠顆粒微孔凝膠顆粒微孔沿凝膠顆粒間隙流過凝膠柱沿凝膠顆粒間隙流過凝膠柱 小分子進入凝膠顆粒微孔小分子進入凝膠顆粒微孔 洗脫溶劑下行洗脫溶劑下行 各組分按相對分子質(zhì)量大小先后流出。各組分按相對分子質(zhì)量大小先后流出。3 3、凝膠濾過法的特點：、凝膠濾過法的特點：（1 1）凝膠是具有多孔立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體，）凝膠是具有多孔立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體，其孔隙大小有一定范圍。其孔隙大小有一定范圍。（2 2）凝膠在水中不溶解，但可膨脹。）凝膠在水中不溶解，但可膨脹。（3 3）當(dāng)分離條件一定時，洗脫體積）當(dāng)分離條件一定時，洗脫體積VeVe重現(xiàn)性很重現(xiàn)性很好，并與組分相對分子質(zhì)量呈下列關(guān)系：好，并與組分相對分子質(zhì)量呈下列關(guān)系： MKKVelg21（1 1）葡聚糖凝膠）葡聚糖凝膠(最常用最常用) 由相對分子質(zhì)量為由相對分子質(zhì)量為4 410104 4202010104 4的葡聚糖的葡聚糖和交聯(lián)劑（如環(huán)氧氯丙烷）交聯(lián)聚合而成，在水和交聯(lián)劑（如環(huán)氧氯丙烷）交聯(lián)聚合而成，在水中發(fā)生溶脹，商品名為中發(fā)生溶脹，商品名為Sephadex G。 葡聚糖凝膠的商品型號：是以凝膠吸水量的葡聚糖凝膠的商品型號：是以凝膠吸水量的1010倍數(shù)值來定義，它代表糖鏈之間的交聯(lián)程度。倍數(shù)值來定義，它代表糖鏈之間的交聯(lián)程度。4 4、凝膠的種類與性質(zhì)、凝膠的種類與性質(zhì)OOHOHOCH2OOOOH