生物化學第01章蛋白質的結構與功能臨床5年制第7版

1、目錄目錄第一篇：生物大分子的結構與功能第一篇：生物大分子的結構與功能 生物大分子生物大分子：由某些基本：由某些基本結構單位結構單位按一按一定定順序和連接順序和連接方式所形成的多聚體。方式所形成的多聚體。 蛋白質：氨基酸蛋白質：氨基酸 核酸：核苷酸核酸：核苷酸 酶酶：（：（蛋白質）蛋白質） 糖復合物：單糖糖復合物：單糖 目錄目錄蛋白質的結構與功能蛋白質的結構與功能第一章第一章structure and function of protein目錄目錄分布廣：分布廣：所有器官、組織都含有蛋白質；所有器官、組織都含有蛋白質； 細胞的各個部分都含有蛋白質。細胞的各個部分都含有蛋白質。含量高：含量高：占人

2、體干重的占人體干重的45， 某些組織，例如脾、肺及橫紋肌等高達某些組織，例如脾、肺及橫紋肌等高達80。蛋白質的生物學重要性蛋白質的生物學重要性1. 蛋白質是生物體重要組成成分蛋白質是生物體重要組成成分(結構蛋白結構蛋白)protein derives from greek protos，meaning “first” or “foremost”.目錄目錄1 1）作為生物催化劑（酶）作為生物催化劑（酶）2 2）代謝調節(jié)作用）代謝調節(jié)作用3 3）免疫保護作用）免疫保護作用4 4）物質的轉運和存儲）物質的轉運和存儲5 5）運動與支持作用）運動與支持作用6 6）參與細胞間信息傳遞）參與細胞間信息傳遞2

3、. 蛋白質具有重要的生物學功能蛋白質具有重要的生物學功能(功能蛋白功能蛋白)3. 氧化供能氧化供能目錄目錄病例：老年癡呆癥病例：老年癡呆癥 蛋白質結構變化引起疾病蛋白質結構變化引起疾病記憶力明顯減退記憶力明顯減退，經常忘，經常忘記剛剛說過的話或做過的記剛剛說過的話或做過的事，對于熟悉的人或物品，事，對于熟悉的人或物品，不能回憶其名稱。不能回憶其名稱。語言不流暢語言不流暢，經常間斷，經常間斷，與人交流困難。與人交流困難。睡眠欠佳睡眠欠佳，表情淡漠表情淡漠，反反應遲鈍。應遲鈍。里根里根撒切爾撒切爾目錄目錄目錄目錄什么是蛋白質什么是蛋白質? ? 蛋白質（蛋白質（protein）是由許多是由許多氨基酸

4、氨基酸通通過過肽鍵肽鍵相連形成的高分子含氮化合物。相連形成的高分子含氮化合物。目錄目錄蛋白質的分子組成蛋白質的分子組成the molecular component of protein第一節(jié)第一節(jié)目錄目錄組成蛋白質的元素：組成蛋白質的元素：主要有主要有c、h、o、n和和s。有些蛋白質含有少量有些蛋白質含有少量磷磷或金屬元素或金屬元素鐵、銅、鋅、鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬錳、鈷、鉬，個別蛋白質還含有，個別蛋白質還含有碘碘 。蛋白質分子組成蛋白質分子組成：目錄目錄 蛋白質的含氮量平均為蛋白質的含氮量平均為1616。 體內含氮物質以蛋白質為主，測定生物樣品體內含氮物質以蛋白質為主，測定生物樣品含氮量，

5、可根據以下公式推算蛋白質大致含量：含氮量，可根據以下公式推算蛋白質大致含量：100克樣品中蛋白質的含量克樣品中蛋白質的含量 ( g % )= 每克樣品含氮克數每克樣品含氮克數 6.251001/16%蛋白質元素組成的特點：蛋白質元素組成的特點：三氯氫胺事件三氯氫胺事件目錄目錄一、組成人體蛋白質的一、組成人體蛋白質的2020種氨基酸均屬于種氨基酸均屬于 l-l-氨基酸氨基酸自然界中氨基酸自然界中氨基酸300余種，余種，人體蛋白質氨基酸人體蛋白質氨基酸20種，均屬種，均屬 l-氨基酸氨基酸（甘氨（甘氨酸除外）。酸除外）。 cooh cooh h2nch hcnh2 r r l- l- -氨基酸氨基

6、酸 d-d- -氨基酸氨基酸目錄目錄h甘氨酸甘氨酸ch3丙氨酸丙氨酸l-l-氨基酸的通式氨基酸的通式rc+nh3coo-h目錄目錄非極性脂肪族氨基酸非極性脂肪族氨基酸極性中性氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸堿性氨基酸二、氨基酸二、氨基酸根據根據側鏈結構側鏈結構和和理化性質理化性質進行分類進行分類目錄目錄( (一一) )側鏈含側鏈含烴鏈烴鏈的氨基酸屬于的氨基酸屬于 非極性脂肪族氨基酸非極性脂肪族氨基酸目錄目錄n幾種特殊氨基酸幾種特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸（亞氨基酸）（亞氨基酸）ch2chcoo-nh2+ch2ch2ch2chcoo-nh2+ch2ch2目錄

7、目錄( (二二) )側鏈有側鏈有極性但不帶電荷極性但不帶電荷的氨基酸是的氨基酸是 極性中性氨基酸極性中性氨基酸 (-oh(-oh、-sh-sh、n n2 2h h）目錄目錄半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫鍵二硫鍵-hh-ooc-ch-ch2-s+nh3s-ch2-ch-coo-+nh3-ooc-ch-ch2-s+nh3s-ch2-ch-coo-+nh3-ooc-ch-ch2-sh+nh3-ooc-ch-ch2-sh+nh3hs-ch2-ch-coo-+nh3hs-ch2-ch-coo-+nh3目錄目錄( (三三) )側鏈含側鏈含芳香基團芳香基團的氨基酸是的氨基酸是 芳香族氨基酸芳香族氨基酸

8、tyrtrp目錄目錄( (四四) )側鏈含側鏈含負性解離基團負性解離基團的氨基酸是的氨基酸是酸性氨基酸酸性氨基酸目錄目錄( (五五) )側鏈含側鏈含正性解離基團正性解離基團的氨基酸屬于的氨基酸屬于 堿性氨基酸堿性氨基酸 ( (五五) )側鏈含側鏈含正性解離基團正性解離基團的氨基酸是的氨基酸是 堿性氨基酸堿性氨基酸目錄目錄三、三、20種氨基酸具有共同或特異的理化性質種氨基酸具有共同或特異的理化性質兩性解離及等電點兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。處溶液的酸堿度。 等電點等電點(isoelectric point, pi)

9、在某一在某一ph的溶液中，氨基酸解離成陽離子和的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的中性。此時溶液的ph值值稱為該氨基酸的稱為該氨基酸的等電點等電點。（一）氨基酸具有兩性解離的性質（一）氨基酸具有兩性解離的性質目錄目錄ph=piphpiphpi -h+h+ -h+h+ph25%25%。分類分類序列相似程度序列相似程度相同蛋白相同蛋白95 %亞家族亞家族8095 %家族家族5080%超家族超家族2550%蛋白質的分類蛋白質的分類目錄目錄n根據蛋白質組成成分根據蛋白質組成成分:單純蛋白質單純蛋白質結合蛋白質

10、結合蛋白質 = = 蛋白質部分蛋白質部分 + + 非蛋白質部分非蛋白質部分n根據蛋白質形狀根據蛋白質形狀:纖維狀蛋白質纖維狀蛋白質球狀蛋白質球狀蛋白質目錄目錄（三）（三）氨基酸序列提供重要的生物化學信息氨基酸序列提供重要的生物化學信息細胞色素細胞色素(cytochrome c)，比較一級結構，比較一級結構，可以幫助了解物種可以幫助了解物種進化間的關系。進化間的關系。 目錄目錄（四）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾病（四）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾病n例：鐮刀形紅細胞貧血例：鐮刀形紅細胞貧血 glu: gta val:gaa n-val his leu thr pro glu glu

11、c(146)hbs 肽鏈肽鏈hba 肽肽 鏈鏈 n-val his leu thr pro val glu c(146) 這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，稱為稱為“分子病分子病”。目錄目錄目錄目錄二、蛋白質空間結構與功能的關系二、蛋白質空間結構與功能的關系1 1、蛋白質蛋白質功能需要功能需要完整完整的空間結構。的空間結構。 單亞基單亞基蛋白質蛋白質( (單聚體單聚體): ): 結構域沒有完整的功能。結構域沒有完整的功能。 多亞基蛋白質多亞基蛋白質( (寡聚體寡聚體): ): 三級結構三級結構沒有完整沒有完整功能。功能。2、空間結構改變（變構）、空間結

12、構改變（變構）, 功能改變。功能改變。3、空間結構破壞（變性）、空間結構破壞（變性）, 功能喪失。功能喪失。目錄目錄n肌紅蛋白（肌紅蛋白（mbmb） / /血紅蛋白（血紅蛋白（hbhb）血紅素結構血紅素結構: : 鐵卟啉化合物鐵卟啉化合物 4個吡咯環(huán)、個吡咯環(huán)、 4個甲炔基、個甲炔基、 2個丙酸基與個丙酸基與aa連接連接fe2+ 6個配位鍵：個配位鍵： 4n、組、組aa、o2（一）（一）血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似目錄目錄 肌紅蛋白（肌紅蛋白（mb）一條肽鏈，含一條肽鏈，含1個血紅素，個血紅素，可結合可結合1個個o2血紅蛋白（血紅蛋白（hb）4個亞基，亞基結構與

13、個亞基，亞基結構與mb相相似似含含4個血紅素，各結合個血紅素，各結合4個個o2亞基之間亞基之間8對鹽鍵對鹽鍵。目錄目錄氧合氧合hb（mb）：）：與與o2結結合后的合后的hb （mb） 百分飽和度：百分飽和度：氧合氧合hb(mb)占總占總hb(mb)的百分數。的百分數。氧解離曲線：氧解離曲線：氧分壓與氧氧分壓與氧百分飽和度的關系曲線。百分飽和度的關系曲線。血紅蛋白的構象變化與結合氧的功能血紅蛋白的構象變化與結合氧的功能 目錄目錄肌紅蛋白肌紅蛋白(mb)和血紅蛋白和血紅蛋白(hb)的氧解離曲線的氧解離曲線mb: 呈直角雙曲線呈直角雙曲線 mb易與易與o2結合結合 hb: 呈呈s狀曲線狀曲線 o2分

14、壓低時：分壓低時：hb不易與不易與o2結合；結合； o2分壓升高：逐漸分壓升高：逐漸增強結合力。增強結合力。目錄目錄緊密型（緊密型（t態(tài)）態(tài)）： 鹽鍵連接，亞基緊密結合，鹽鍵連接，亞基緊密結合，o2親合力低。親合力低。松弛型（松弛型（r態(tài)）：態(tài)）： 鹽鍵斷裂，亞基松弛結合，鹽鍵斷裂，亞基松弛結合，o2親合力高。親合力高。（二）血紅蛋白亞基構象變化影響亞基與氧結合（二）血紅蛋白亞基構象變化影響亞基與氧結合亞基之間亞基之間8對鹽鍵對鹽鍵，使，使hb形成形成2種空間結構。種空間結構。目錄目錄 缺缺o2 時，時，hb呈呈t態(tài)；態(tài)； o2升高與升高與亞基結合，鹽鍵斷裂；亞基結合，鹽鍵斷裂； hb由由t態(tài)

15、轉變?yōu)閼B(tài)轉變?yōu)閞態(tài)；態(tài)； r態(tài)態(tài)hb與與o2親合力提高。親合力提高。目錄目錄o2血紅素與血紅素與o2結合結合；鐵原子半徑變小，進鐵原子半徑變小，進入卟啉環(huán)小孔中；入卟啉環(huán)小孔中；肽鏈位置變動肽鏈位置變動,影響亞影響亞基的構象；基的構象；鹽鍵斷裂，鹽鍵斷裂，t態(tài)轉變態(tài)轉變?yōu)闉閞態(tài)；態(tài)；亞基結合亞基結合o2能力增強。能力增強。目錄目錄協同效應協同效應(cooperativity)(cooperativity) 一個多聚體蛋白質的一個亞基與配體結合，一個多聚體蛋白質的一個亞基與配體結合，能影響此多聚體的另一個亞基與配體結合，這種能影響此多聚體的另一個亞基與配體結合，這種現象稱為現象稱為協同效應協同效

16、應。 如果是促進作用則稱為如果是促進作用則稱為正協同效應正協同效應 (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為如果是抑制作用則稱為負協同效應負協同效應 (negative cooperativity)hb的第一個亞基與的第一個亞基與o2結合結合，促進第二個亞基與促進第二個亞基與o2結合。結合。目錄目錄別構效應別構效應(allosteric effect)蛋白質空間結構（構象）的改變伴隨其蛋白質空間結構（構象）的改變伴隨其功能的變化，稱為功能的變化，稱為別構效應（別構效應（變構效應）變構效應）。hb的第一個亞基與的第一個亞基與o2結合結合，引起，引起hbhb的空間結的空

17、間結構改變構改變，從，從t態(tài)變構為態(tài)變構為r態(tài)，態(tài)，o2結合力改變。結合力改變。目錄目錄（三）蛋白質構象改變（三）蛋白質構象改變可引起疾病可引起疾病蛋白質構象疾?。旱鞍踪|構象疾?。?蛋白質構象發(fā)生改變，影響蛋白質功能，蛋白質構象發(fā)生改變，影響蛋白質功能，所導致的疾病，稱之。所導致的疾病，稱之。 蛋白質的折疊發(fā)生錯誤，一級結構不變。蛋白質的折疊發(fā)生錯誤，一級結構不變。 人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。目錄目錄蛋白質構象改變導致疾病的機制：蛋白質構象改變導致疾病的機制： 蛋白質錯誤折疊后相互聚集，蛋白質錯誤折疊后相互聚

18、集， 聚集蛋白抵抗蛋白水解酶，聚集蛋白抵抗蛋白水解酶， 產生淀粉樣纖維沉淀，而致病。產生淀粉樣纖維沉淀，而致病。病理改變病理改變：蛋白質淀粉樣纖維沉淀蛋白質淀粉樣纖維沉淀目錄目錄瘋牛病：瘋牛?。河呻貌《镜鞍子呻貌《镜鞍?prion protein, prp) 引起的一組人和動物神經退行性病變。引起的一組人和動物神經退行性病變。朊病毒蛋白的分型：朊病毒蛋白的分型： 正常細胞型正常細胞型prp：prpc 異常致病型異常致病型prp：prpsc朊病毒蛋白的特點：朊病毒蛋白的特點： 同一同一基因編碼，氨基酸順序和共價修飾相同?；蚓幋a，氨基酸順序和共價修飾相同。 prpc：螺旋構成、螺旋構成、 蛋白酶

19、敏感型蛋白酶敏感型 prpsc：折疊構成、折疊構成、抗抗蛋白酶消化型。蛋白酶消化型。瘋牛病中的蛋白質構象改變瘋牛病中的蛋白質構象改變目錄目錄在某種未知蛋白質的作用下，在某種未知蛋白質的作用下，prpc轉變成為轉變成為-折疊的折疊的prpsc，從而致病。，從而致病。prpc-螺旋螺旋prpsc-折疊折疊正常正常瘋牛病瘋牛病 以外源或新生的以外源或新生的prpsc為模板，使為模板，使prpc轉變?yōu)檗D變?yōu)閜rpsc。 prpsc經蛋白酶消化后剩下的核心部分分子量約經蛋白酶消化后剩下的核心部分分子量約2730kd(prp2730)仍具感染性。仍具感染性。目錄目錄目錄目錄第四節(jié)第四節(jié)蛋白質的理化性質蛋白

20、質的理化性質the physical and chemical characters of protein目錄目錄一、一、蛋白質兩性電離的性質蛋白質兩性電離的性質n蛋白質的等電點蛋白質的等電點( isoelectric point, pi)蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液phph條條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。當蛋白質溶液處于某一當蛋白質溶液處于某一ph時，蛋白質解離成時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電正

21、、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的荷為零，此時溶液的ph稱為稱為蛋白質的等電點蛋白質的等電點。目錄目錄phpi目錄目錄利用電荷性質差異進行蛋白質分離利用電荷性質差異進行蛋白質分離蛋白質在高于或低于其蛋白質在高于或低于其pi的溶液中為帶電的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術蛋白質的技術, 稱為稱為電泳電泳(elctrophoresis)(elctrophoresis) 。目錄目錄 二、蛋白質膠體性質二、蛋白質膠體性質蛋白質分子量蛋白

22、質分子量1 1萬至萬至100100萬之間，分子萬之間，分子的直徑的直徑1 1100nm100nm，為膠粒范圍之內。，為膠粒范圍之內。 蛋白質膠體穩(wěn)定的因素蛋白質膠體穩(wěn)定的因素: :水化膜：水化膜：表面極性基團吸附表面極性基團吸附h2o分子。分子。顆粒表面電荷：顆粒表面電荷：靜電斥力，靜電斥力，使蛋白質顆粒使蛋白質顆粒不易聚集。不易聚集。 目錄目錄+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋白質在等電點的蛋白質水化膜水化膜+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質不穩(wěn)定的蛋白質顆粒不穩(wěn)定的蛋白質顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫水作用

23、脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質的聚沉溶液中蛋白質的聚沉目錄目錄蛋白質沉淀：蛋白質沉淀：蛋白質膠體性質破壞，或疏水基蛋白質膠體性質破壞，或疏水基團暴露，使蛋白質分子聚集，而從溶液中析團暴露，使蛋白質分子聚集，而從溶液中析出的現象。出的現象。使蛋白質沉淀的因素：使蛋白質沉淀的因素： 中和電荷：中和電荷：ph=pi 破壞水化膜：破壞水化膜：脫水劑脫水劑 破壞空間結構：破壞空間結構：蛋白質變性蛋白質變性 結構改變，疏水基團暴露。結構改變，疏水基團暴露。 目錄目錄 在物理和化學因素作用下，在物理和化學因素作用下，蛋白質蛋白質特定特定空間構象被破壞空間構象被破壞，即有序的空間結即有序的空間結

24、構變成無序的空間結構，從而導致其構變成無序的空間結構，從而導致其理理化性質改變和生物學活性的喪失化性質改變和生物學活性的喪失。蛋白質變性蛋白質變性(denaturation)三、蛋白質空間結構破壞而引起變性三、蛋白質空間結構破壞而引起變性目錄目錄引起引起變性的因素：變性的因素：加熱、乙醇等有機溶劑、強加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等 變性的本質：變性的本質：破壞非共價鍵和二硫鍵，破壞非共價鍵和二硫鍵， 不改變蛋白質的一級結構。不改變蛋白質的一級結構。 變性的結果：變性的結果： 理化性質改變：理化性質改變：溶解度降低，粘度提高。溶解度降

25、低，粘度提高。 生物學功能喪失，生物學功能喪失，稱為失活。稱為失活。目錄目錄應用舉例應用舉例: : 使蛋白質變性：使蛋白質變性：臨床醫(yī)學上，變性因臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及滅菌。素常被應用來消毒及滅菌。 防止蛋白質變性：防止蛋白質變性：有效保存蛋白質制有效保存蛋白質制劑（如疫苗等）的必要條件。劑（如疫苗等）的必要條件。 目錄目錄若蛋白質變性程度較輕，去除變性若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其因素后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為原有的構象和功能，稱為復性復性 。蛋白質的復性蛋白質的復性(renaturation) 目錄目錄 天然狀態(tài)，天

26、然狀態(tài)，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性目錄目錄變性的蛋白質易于沉淀：變性的蛋白質易于沉淀：疏水側鏈暴露，水化膜破壞，疏水側鏈暴露，水化膜破壞，調節(jié)調節(jié)ph，蛋白質容易從溶液中沉淀。，蛋白質容易從溶液中沉淀。沉淀的蛋白質并不都變性。沉淀的蛋白質并不都變性。 蛋白質變性與沉淀蛋白質變性與沉淀目錄目錄四、蛋白質四、蛋白質在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收

27、波長處有特征性吸收峰。蛋白質的峰。蛋白質的od280與其濃度呈正比關系，因與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定量測定。此可作蛋白質定量測定。目錄目錄蛋白質經水解后產生的氨基酸也可發(fā)生茚蛋白質經水解后產生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應。三酮反應。 蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為雙雙縮脲反應縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解程度。程度。五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質溶液含量溶液含量1. 茚三酮反應茚三酮反應(n

28、inhydrin reaction)2. 雙縮脲反應雙縮脲反應(biuret reaction)目錄目錄六、蛋白質組學六、蛋白質組學（一）蛋白質組學基本概念（一）蛋白質組學基本概念蛋白質組蛋白質組（proteome):proteome):是指一種細胞或一種生物所表達的全部蛋白是指一種細胞或一種生物所表達的全部蛋白質，即質，即“一個基因組所表達的全套蛋白質一個基因組所表達的全套蛋白質”。 蛋白表達譜蛋白表達譜蛋白質翻譯后修飾譜蛋白質翻譯后修飾譜目錄目錄（二）蛋白質組學研究技術平臺（二）蛋白質組學研究技術平臺 蛋白質組學是高通量，高效率的研究蛋白質組學是高通量，高效率的研究: :雙向電泳雙向電泳分

29、離樣品蛋白質分離樣品蛋白質 蛋白質點的定位、切取蛋白質點的定位、切取 蛋白質點的蛋白質點的質譜分析質譜分析 （三）蛋白質組學研究的科學意義（三）蛋白質組學研究的科學意義反映蛋白質的表達和功能全貌。反映蛋白質的表達和功能全貌。比較蛋白質組學，尋找疾病特異性蛋白質分子。比較蛋白質組學，尋找疾病特異性蛋白質分子。目錄目錄第五節(jié)第五節(jié)蛋白質的分離純化與結構分析蛋白質的分離純化與結構分析the separation and purification and structure analysis of protein目錄目錄一、一、透析及超濾法透析及超濾法: 清除蛋白質溶液中的小分子化合物。清除蛋白質溶液

30、中的小分子化合物。二、二、蛋白質沉淀：蛋白質沉淀：丙酮沉淀、鹽析、免疫沉淀丙酮沉淀、鹽析、免疫沉淀三、三、電荷性質電荷性質: 電泳法電泳法四、四、相分配或親和結合相分配或親和結合: 層析方法層析方法五、五、蛋白質顆粒沉降蛋白質顆粒沉降: 超速離心分離超速離心分離目錄目錄六、應用化學或反向遺傳學方法六、應用化學或反向遺傳學方法分析多肽鏈氨基酸序列分析多肽鏈氨基酸序列分析已純化蛋白質的氨基酸殘基組成分析已純化蛋白質的氨基酸殘基組成測定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基測定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基把肽鏈水解成片段，分別進行分析把肽鏈水解成片段，分別進行分析測定各肽段的氨基酸

31、排列順序，一般采用測定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用edman降解法降解法一般需用數種水解法，并分析出各肽段中的氨基酸一般需用數種水解法，并分析出各肽段中的氨基酸順序，然后經過組合排列對比，最終得出完整肽鏈中氨順序，然后經過組合排列對比，最終得出完整肽鏈中氨基酸順序的結果?；犴樞虻慕Y果。目錄目錄按照三聯密碼的原則推演出氨基酸的序列按照三聯密碼的原則推演出氨基酸的序列通過核酸來推演蛋白質中的氨基酸序列通過核酸來推演蛋白質中的氨基酸序列測定蛋白質末端氨基酸序列測定蛋白質末端氨基酸序列測定測定cdna序列序列排列出排列出mrna序列序列根據末端氨基酸序列設計根據末端氨基酸序列設計rt-pcr引物引物rt-pcr擴增擴增cdna目錄目錄七、應用物理學、生物信息