南京大學(xué)儀器分析色譜分析類總結(jié)

1、南京大學(xué)儀器分析色譜分析類息結(jié)一、色譜法概論1 .分類以流動(dòng)相分：化相色譜（氣液、氣固）、液相色譜（液液、液固）以固定相分：柱色譜（Column Chromatography）薄層色譜（Thin Layer Chromatography在鋪成薄層固體上進(jìn)行色譜的方法）紙色譜（利用混合物在纖維素的水分中分配系數(shù)不同而使混合物分離） 以分離原理分：吸附色譜（利用混合物各組分對(duì)吸附劑的吸附能力不同，而將各組分分離）分配色譜（利用混合物的各組分在相間的分配系數(shù)不同，而進(jìn)行各組分的分離）離子交換色譜（基于溶液中離子與離子交換劑的吸附劑表面的離子間的交換作用） 凝膠色譜（根據(jù)分子量大小不同來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的目的

2、）以應(yīng)用領(lǐng)域分：分析色譜、制備色譜2 .基本術(shù)語(yǔ)A.比移值：把溶質(zhì)與溶劑移動(dòng)之速度比稱比移值（&）。tRyI IXRI* X>>B.半高峰寬：是在峰高一半處的色譜峰的寬度CD,單位可用時(shí)間或距離表示。C.峰寬：是在流出曲線拐點(diǎn)處作切線，于基線上交于E, F處，此兩點(diǎn)間的距離叫峰 寬，有些色譜書(shū)上叫做 “基線寬度”。D.標(biāo)準(zhǔn)偏差：在色譜峰高0.607處峰寬AB距離的一半叫標(biāo)準(zhǔn)偏差。其值越小，表 示譜帶展寬越小，也即組分濃度集中，檢測(cè)器信號(hào)越強(qiáng)。_ W1/2 _ W0 =,='2V21n24E.死時(shí)間m）： 一些不被固定相吸收或吸附的氣體通過(guò)色譜柱的時(shí)間，如用熱導(dǎo)池 作

3、檢測(cè)器時(shí)，從注射空氣樣品到空氣峰頂出現(xiàn)時(shí)的時(shí)間，以s或min為單位表示。F.死體枳（Vm）：指色譜柱中不被固定相占據(jù)的空間及進(jìn)樣系統(tǒng)管道和檢測(cè)系統(tǒng)的總 體積，等于死時(shí)間乘以載弋的流速。G.死區(qū)域（Vg）：指色譜柱中不被固定相占據(jù)的空間。H.保留時(shí)間（tQ :從注射樣品到色譜峰頂出現(xiàn)時(shí)的時(shí)間，以s或min為單位表示。1. 調(diào)整保留時(shí)間（t,R）：保留時(shí)間減去死時(shí)間即為調(diào)整保留時(shí)間（tR-tM）oJ.保留體積（Vr）：從注射樣品到色譜峰頂出現(xiàn)時(shí)，通過(guò)色譜系統(tǒng)載氣的體積，一般 可用保留時(shí)間乘以載氣流速求得，以mL為單位表示。K.調(diào)整保留體積（V%）：保留體積減去死體積即為調(diào)整保留體積（Vr-Vm）。

4、L.凈保留體枳（Vn）：經(jīng)壓力修正的調(diào)整保留體積。M.比保留體積（Vg）：把凈保留體積進(jìn)一步校正到單位質(zhì)量固定液和273K時(shí)的保留 體積。N.相對(duì)保留值, 5）：在一定色譜條件卜被測(cè)化合物和標(biāo)準(zhǔn)化合物調(diào)整保留時(shí)間之比。0.容量因子K （也稱為分配容量或分配比）：在平衡狀態(tài)卜組分在固定相與流動(dòng)相中 質(zhì)量之比。3.P.定量校正因子：要進(jìn)行組分定量，就要測(cè)定組分峰面積，其次要知道比例因數(shù)fi， 以便把峰面積換算成物質(zhì)的量，比例因素6即定量校正因子。（色譜定量中，一般 都是采用相對(duì)于某一標(biāo)準(zhǔn)物（S）的相對(duì)重量校正因子或相對(duì)摩爾校正因子°） 基本理論與計(jì)算A.分配系數(shù)與分配比分配系數(shù)即組分達(dá)到

5、分配平衡后在固定相與流動(dòng)相間的濃度之比。決定于組分與兩 相熱力學(xué)性質(zhì)。依據(jù)熱力學(xué)函數(shù)有：InK = - RTC故有柱溫越低，分配系數(shù)K越大，柱內(nèi)存在量越大，越難留出：反之易流出（影響GC）。分配比即組分在平衡狀態(tài)下組分在固定相與流動(dòng)相中質(zhì)量之比。存在式：-# -其中，0為色譜柱相比：Vm為流動(dòng)相體積，即死體枳：Vs為固定相體積。B.基本保留方程用于表示保留時(shí)間和柱長(zhǎng)、流動(dòng)速度、分配比、分配系數(shù)以及兩相體積間的關(guān)系（或 者也可用保留體枳表示）其中，L為柱長(zhǎng)：u為流動(dòng)相線速度；k，為分配比：K為分配系數(shù) 由上式可得：,tR-t（） 4 Kk =“0PC.相對(duì)保留值a相對(duì)保留值用來(lái)討論相對(duì)組分的分離

6、能力，決定于固定相性質(zhì)和柱溫，值越大，選 擇性越大，分離越徹底。值為1，兩組分流出峰有重疊。相對(duì)保留值可以消除由于流動(dòng)相流速、柱長(zhǎng)、填充情況等不能完全重復(fù)而帶來(lái)的實(shí) 驗(yàn)誤差。當(dāng)柱溫和固定相物質(zhì)不變時(shí)，相對(duì)保留值不變。D.理論塔板數(shù)塔板理論假定：塔板間不連續(xù)：塔板間無(wú)分子擴(kuò)散；相間平衡瞬時(shí)達(dá)到；塔板分配系數(shù)相等；流動(dòng)相不連續(xù)。色譜柱的理論塔板數(shù)一般為1。3106,越大分離效果越好。理論塔板數(shù)故有下式：南京大學(xué)僅器分析色譜分析類總結(jié)-3-且存在H=L/n, H為單位塔板高度。E.速率理論方程（范式方程）上述理論塔板對(duì)于一些現(xiàn)象無(wú)法解粒，其忽略傳質(zhì)過(guò)程影響因素，故有下式:1f 。"瓏+*+

7、於 小,2yDm 3ud： qkzud?H = 2入 dn H；=-L u Dm （l + k，）2DsBH = A + - + Cu其截距為A,斜率為C,從截距A對(duì)U軸作其中，5為渦流擴(kuò)散項(xiàng)，dp為固定相顆 粒平均直徑，入為不規(guī)則填充因子； 6為縱向分子擴(kuò)散項(xiàng)，V為彎曲因子， Dm為組分在流動(dòng)相中擴(kuò)散系數(shù)： Om為流動(dòng)相傳質(zhì)阻力,3為柱性質(zhì)因子； d為固定相傳質(zhì)阻力，q為固定相結(jié)構(gòu) 性質(zhì)因子，df為有效平均液膜厚度；Ds 組分在固定液中擴(kuò)散系數(shù)。當(dāng)U很大時(shí)，即U 8 ,H=A+Cu曲線呈直線，即為曲線漸延線,平行線，則此線與u軸間距離為A項(xiàng)之大小。由曲線最低點(diǎn)（Hmm）向U作垂線，此點(diǎn) 與漸

8、近線間距離為B/u耐H的作用，漸近線與A線距離為Cu H的作用，為確定最佳 操作條件：H = A + 2麻，u =質(zhì)后。故板高與我化線速度有關(guān)系，亦稱速率理論方程。由于許多參數(shù)還不能定量求出, 因此，還只能定性說(shuō)明影響板高的因素。F.分離度用于定量描述兩個(gè)色譜峰的分離程度的指標(biāo)，即相鄰兩組分色譜峰保留值之差與峰 底寬總和的一半的比值，如下式：ctRl tR2S 1/2 （W1 + W2）注：Rs>1.5作為完全分離指標(biāo)G.基本分離方程x/nZ a 1 kor = 2_£ xx 2S 4 a 1 + k；由上式可得：Rs正比于VH,且l正比于赤，知增加柱長(zhǎng)可提高分離度。給定分離

9、度下有：./ an = 16R2 （a-還可以通過(guò)改變a和K來(lái)提高分析效果。二、氣相色譜分析1 .基本原理與使用條件氣相色譜是一種以氣體為流動(dòng)相的柱色譜的分離方法JL是在儀器允許條件卜.能夠汽化 且熱穩(wěn)定、不具行腐蝕性的液體或氣體均可采取氣相色譜法；對(duì)于一些因沸點(diǎn)過(guò)高無(wú)法汽化 或熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，通過(guò)化學(xué)衍生化法使其轉(zhuǎn)變后再進(jìn)行分析。2 .儀器組成與結(jié)構(gòu)A.氣路系統(tǒng)氣路系統(tǒng)是一個(gè)我氣連續(xù)運(yùn)行的密閉系統(tǒng)，常見(jiàn)的有單柱單氣路和雙柱雙氣路兩種。 單包路適用于恒溫分析，雙氣路適用于程序升溫分析并同時(shí)補(bǔ)償檢測(cè)器噪聲和基線漂移。其載氣多為氮?dú)?、氮?dú)狻錃獾?，進(jìn)入前需凈化劑（分子篩、硅膠、活性炭）處理。氣路壓

10、力由穩(wěn)壓閥或穩(wěn)流閥調(diào)節(jié)。其作用包括調(diào)節(jié)氣流量和氣路氣壓兩方面。B.進(jìn)樣系統(tǒng)液體樣品需汽化后進(jìn)入。其進(jìn)樣器液體采取微量注射器，點(diǎn)體則采取醫(yī)用注射器或 六通閥;在氣化室（金屬纏繞加熱絲,50500T,要求熱容量大,瞬間氣化且死體 積小）氣化，然后進(jìn)入色譜柱C.色譜柱色譜柱包括填充柱和開(kāi)管柱（毛細(xì)管柱）兩類。填充柱采取不銹鋼或玻璃材質(zhì)，內(nèi) 徑36mm,其載體可先以液體形式配比混勻，干燥后填充：開(kāi)管柱以石英制成， 固定相涂布在毛細(xì)管內(nèi)壁或化學(xué)鍵和在內(nèi)壁上。D.溫度控制系統(tǒng)用于設(shè)置、控制和測(cè)量氣化室、柱室、檢測(cè)室的溫度。氣化室溫度應(yīng)使試樣瞬間氣化但不分解，略高于沸點(diǎn)；柱室溫度引起柱溫變化，影 響柱效和選

11、擇性；檢測(cè)室溫度影響檢測(cè)器的靈敏度或穩(wěn)定性，一般高于柱溫十倍。 精度 ±0.1。（：。E.檢測(cè)系統(tǒng)（檢測(cè)器）檢測(cè)器按檢測(cè)原理分為質(zhì)銅型和濃度型；按響應(yīng)分為通用型和選擇型。其優(yōu)良性能指標(biāo) 包括靈敏度高（組分濃度對(duì)響應(yīng)信號(hào)圖的斜率S）、檢測(cè)限和最小檢測(cè)量低（產(chǎn)生的信號(hào)是 基線高的兩倍時(shí)的最小檢測(cè)量D=2R/S）、線性范國(guó)寬（最大進(jìn)樣量和最小進(jìn)樣量的比值或最大檢測(cè)濃度與最小檢測(cè)濃度的比值，其值越大越有利于檢測(cè)）。檢測(cè) 器響應(yīng) 特性噪聲水平敏感度線性范 圍響應(yīng)時(shí) 間/s最小檢測(cè)量/g應(yīng)用TCD濃度0.005-0.0110缶1010<110«4108有機(jī)和無(wú)機(jī)物FID質(zhì)量l-5

12、xl014<2x10-12106107<0.1<5x10-13含碳化合物ECD濃度10-14102105<1IO14鹵素及親電子 農(nóng)藥FPD質(zhì)量1O9ioioP： <lxl012S： <lxio nP： >103S： 5xio2<0.1<1O10P、S化合物TID/ NPD質(zhì)量<10-14N<1013P<1014104105<1<1013N、P化合物PID質(zhì)量l5xl041013107108<0.1<10n注：TID熱離子檢測(cè)器、PID光離子檢測(cè)器a. TCD熱導(dǎo)檢測(cè)器測(cè)最原理：依據(jù)不同物質(zhì)的導(dǎo)熱系

13、數(shù)不同，在參比池和測(cè)最池分別通入純?cè)?氣和組分我氣，此時(shí)由于氣體導(dǎo)熱系數(shù)不同而帶走熱量使電阻值不同，從而獲得信 號(hào)：當(dāng)參比與測(cè)量池均為純?cè)詺鈺r(shí)，帶走熱量相同使電阻相同，無(wú)信號(hào)產(chǎn)生。特點(diǎn)：一種樣品非破壞型檢測(cè)翡，具有較高靈敏度和穩(wěn)定性，可檢出IO。級(jí)的 低含量組分；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、成本低、使用范圍廣。它是根據(jù)不同氣體導(dǎo)熱能力不同及 南京大學(xué)儀器分析色譜分析類息結(jié)金屬熱絲具有電阻溫度系數(shù)兩個(gè)原理設(shè)計(jì)的檢測(cè)器。靈敏度影響因素：1）橋電流:熱導(dǎo)池靈敏度與橋電流三次方成正比,較大使池體熱絲溫差增大, 提高靈敏度，過(guò)大使熱絲溫度過(guò)高，影響壽命，同時(shí)池壁溫差較大，增大噪聲。2）載氣：載氣與組分的導(dǎo)熱系數(shù)差越大，其

14、信號(hào)越強(qiáng)，一般采用熱導(dǎo)系數(shù)較 大我氣（H、He）,兩熱絲溫差越大，靈敏度越高。3）檢測(cè)器溫度：柱室溫度波動(dòng)影響熱絲溫度穩(wěn)定性，使靈敏度和穩(wěn)定性下降, 一般要求檢測(cè)室溫度較低，但高于柱溫（防止冷凝污染）。4）池體溫度：池體溫度與鐺絲溫度相差越大，越有利于熱傳導(dǎo)，檢測(cè)器的靈 敏度也就越高。b. FID氫火焰離子化檢測(cè)器測(cè)量原理：以氫氣在空氣中燃燒，生成的火焰為能源，使進(jìn)入火焰的有機(jī)物 高溫離解，生成正負(fù)離子，在火焰外圍，設(shè)置一個(gè)電場(chǎng)，在電場(chǎng)作用下，離子定向 運(yùn)動(dòng)形成離子流，經(jīng)放大得到信號(hào)。特點(diǎn)：一種樣品破壞型檢測(cè)器；靈敏度高，最低檢出量達(dá)IO?克：線性范圍 廣；死體積小，響應(yīng)快，可用在快速色譜分析

15、上；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，造價(jià)低；操作條件 要求不高，操作條件的變化，對(duì)靈敏度影響較小。靈敏度影響因素：一般包括噴嘴內(nèi)徑、電極形狀及間距、極化電壓高低以及 氣體流量四個(gè)方面。其中，氣體流量需要選擇，其他因素則已經(jīng)由儀器廠家優(yōu)化。 c. ECD電子捕獲檢測(cè)器測(cè)量原理：是一種放射性離子化檢測(cè)器。在放射源（63即或屈）作用卜二我氣 通過(guò)檢測(cè)器時(shí)被電離（離解為Ni?和e）,產(chǎn)生自由離子形成基流，當(dāng)電負(fù)性化合 物進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)，捕獲電子，使基流下降，產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)的。特點(diǎn)：高選擇性檢測(cè)器，對(duì)含有電負(fù)性原子或基團(tuán)的化合物具有很高的靈敏 度，如囪化物、含氧、含硫、含磷的有機(jī)物及緇體化合物、金屬有機(jī)物、金屬螯和 物、多環(huán)芳嫌

16、等，但對(duì)一般非電負(fù)性如烷慌等影響應(yīng)很小。d. FPD火焰光度檢測(cè)器測(cè)量原理：在溫度高達(dá)20003000K富氨火焰中，破、磷化合物分別發(fā)出 350430nm及526nm的特征波長(zhǎng)光，分別用394nm （S）和526nm （P）的濾光片 濾光，然后將濾后之光電倍增管轉(zhuǎn)化為電信號(hào)測(cè)量。特點(diǎn):線性范圍窄,測(cè)磷為10s,測(cè)硫?yàn)?02103o是一種對(duì)硫、磷化合物有 高選擇性的檢測(cè)器，比對(duì)一般有機(jī)物敏感度高IO4倍。3 .固定相A.載體能夠牢固保留固定液并使它呈均勻薄膜狀的無(wú)活性物質(zhì)。要求：具有化學(xué)情性，無(wú) 表面吸附作用，空穴均勻，比表面大，耐熱性強(qiáng)，無(wú)催化活性有一定機(jī)械強(qiáng)度和浸潤(rùn)性。多采用硅藻土我體，分紅

17、色（適宜非極性固定液）和白色（適宜極性固定液）兩種。 由于硅藻土表面存在Si-OH,易形成氫鍵，故需采取酸洗、堿洗、烷基化等方法處理, 消除堿性中心、酸性中心以及硅醇基活性氫與組分的作用，提高分離效果。B.固定液a.要求：化學(xué)惰性：熱穩(wěn)定：操作溫度下蒸汽壓低，不易流失：選擇性好：黏度 小：凝固點(diǎn)低：良好浸潤(rùn)性b.特征常數(shù)（保留指數(shù)）：Kovats指數(shù)：將兩相鄰正構(gòu)烷燃保留值的對(duì)數(shù)之間差值分為100份，保留值位于兩相鄰正構(gòu)烷燒之間組分i的保留指數(shù)Igtov - Igto nIx = 100n + 100-V警LIgtRn+z - 3Rji其中，t可為調(diào)整保留時(shí)間（或體積）Rohrschneide

18、r常數(shù)：即用保留指數(shù)差A(yù)I表示固定液相對(duì)極性，值越大，固定液與 組分作用力越大，選擇性越高。McReynolds常數(shù)：即采取特殊五種物質(zhì)的120。（:條件下的!之和表示固定液極性。注：此處的AI均采取固定液對(duì)角鯊?fù)榈牟?c.選擇原則非極性物質(zhì)采取非極性固定液，且沸點(diǎn)低先流出，極性越低越難流出：中極性物質(zhì)采取中等極性固定液,低沸點(diǎn)先流出，與固定液極性越相近，越難流出：強(qiáng)極性物質(zhì)采取極性固定液，極性小的先流出；分子間氫健越易形成，越難流出: C.固體吸附劑a.碳：非極性吸附劑，分離醉、酸、酚、胺多種極性物質(zhì)或異構(gòu)體。b.氧化鋁：中等極性，分析CrJ及其異構(gòu)體，其含水量對(duì)效果影響較大。c.硅膠：強(qiáng)極

19、性，分析硫化物。d.分子篩：強(qiáng)極性，活化后分離出、。2、M、CH4> CO等混合物。e.高分子多孔微球：根據(jù)所帶基團(tuán)分為極性非極性兩種，可分析極性多元醇、脂 肪酸、臍、胺或非極性的短、雁、酮等，尤其是對(duì)有機(jī)物中微量水（先出管）分離。4 .流動(dòng)相流動(dòng)相為氣體，常用為氮?dú)?、氫氣、氮?dú)獾惹乙罁?jù)檢測(cè)器選擇，通入前須經(jīng)過(guò)凈化裝置 并調(diào)節(jié)合適的載R流速和流量。5 .分析方法A.定性a.保留值定性：采用多柱比較，將Kovats保留值時(shí)比文獻(xiàn)或標(biāo)準(zhǔn)物來(lái)定性物慣。 也可采取比保留值定性分析，其值僅受溫度影響。V f _ t'iFJ 出.P 水 J柱丫網(wǎng)整保陽(yáng) - IrFc - tRjk -_ V調(diào)

20、 273 _ K 273V凈保留mT - n Tm固定液T 柱P T柱其中，j為壓力校正因子，K為分配系數(shù)，P為固定液密度。 31（P 入/P 由 丫-1（P入/P出）b.色-質(zhì)聯(lián)用定性B.定量rDj = fj Aj峰面積 A=1.065hWi/2校正因子：絕對(duì)校正因子£受儀器及操作條件限制很大，故多用相對(duì)校正因子匕'._工一叫/ A 一叫.A'fs ms / 4 叫 A其中，s為標(biāo)準(zhǔn)物，i為組分a.歸一化法條件：僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況：必須已知所有組分的校正因 子且不適合微量組分的測(cè)定。c, % =2X1OO= GA X 100 p"呵+叫+A

21、+%£（/£（九幻i=li=lb.內(nèi)標(biāo)法條件：試樣中不含有該物質(zhì)；與被測(cè)組分性質(zhì)比較接近（揮發(fā)度、極性、溶 解度等）：不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；出峰位置應(yīng)位于被測(cè)組分附近，且無(wú)組分峰影 響：內(nèi)標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì)；內(nèi)標(biāo)物的加入最應(yīng)接近于己知物 質(zhì)。通過(guò)加入性質(zhì)相近的已知標(biāo)準(zhǔn)物，進(jìn)行色譜分離，獲得被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物峰 面積，計(jì)算相對(duì)量再換算為絕對(duì)量。m,m,msAjfjmsAjf.ms$% =x = t- x =x mm,mA-LmA cfms s $ Asfsc.校準(zhǔn)曲線法條件：操作條件穩(wěn)定，進(jìn)樣體積一致，適合無(wú)內(nèi)標(biāo)物的物質(zhì)測(cè)定。通過(guò)已知樣品標(biāo)準(zhǔn)成線性關(guān)系的前提卜

22、，配制近似樣品濃度的標(biāo)準(zhǔn)物，測(cè)定濃度，則可以下式計(jì)算:Aj rCj% = C %6 .優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：高效能、靈敏度高、速度快、應(yīng)用范圍、儀器造價(jià)低缺點(diǎn)：從色譜峰不能直接給出定性結(jié)果。對(duì)高沸點(diǎn)（沸點(diǎn)在5（xrc以上）物質(zhì)，目前包 相色譜分析還有困難。7 .應(yīng)用氣固色譜常用于永久性氣體及的低碳數(shù)化合物的分離?；荷V則應(yīng)用更廣，凡是在氣 相色譜儀允許的條件卜可以氣化而不分解的物質(zhì)均可以采取氣相色譜法。除此之外，氣相色 譜還可用于物理化學(xué)研究中的多種參數(shù)測(cè)量。8 .附加知識(shí)點(diǎn)A.開(kāi)管柱色譜特點(diǎn)：a.總柱效高：內(nèi)徑小使得傳質(zhì)阻力極小，渦流擴(kuò)散不存在，譜帶展寬變小。b.分析速度快c.柱容量?。合啾雀邔?dǎo)致進(jìn)

23、樣量小，最多0.5咋。類型：涂壁開(kāi)管柱（固定液涂布玻璃柱內(nèi)壁）、多孔層開(kāi)管柱（管壁涂多孔材料，在 涂布固定液）、鍵合型（固定液化學(xué)鍵合丁玻璃表面）、交聯(lián)型（自由基原位分子共 價(jià)交聯(lián)使固定液固化）。B,手性分離色譜法可用于手性化合物的分離，可以分為直接法和間接法兩種。-7 -南京大學(xué)僅器分析色譜分析類總結(jié)直接法即采取手性選擇劑（手性固定相和手性流動(dòng)相添加劑，后者只用于液相色 譜和毛細(xì)管電泳法）進(jìn)行分離。間接法即讓手性衍生化試劑和被分析組分反應(yīng)，使時(shí)映體轉(zhuǎn)變?yōu)榉菍?duì)映體，后利 用物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)的不同，使其在非手性固定相上分離，最后通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)化，使其 還原。三點(diǎn)作用模式：即在手性分離過(guò)程中，要實(shí)現(xiàn)

24、有效識(shí)別對(duì)映體，需要手性固定相 與其中一種對(duì)映體的至少三個(gè)作用中心發(fā)生相互作用，其中一個(gè)必定由立體化學(xué)結(jié)構(gòu)決 定。C.定量方法比較各A定方法的比較雙 B日-化法內(nèi)標(biāo)法外馀法計(jì)算公式匕%,今售X100%由標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)線 直接叁得林承肥樣不需要不If要進(jìn)樣俄不得準(zhǔn)。不需戊病需戊*嫌作條件Q定性一次分析過(guò)程中條 件定一次分析過(guò)&中條件僑 國(guó)定付過(guò)*中條 件需尸&不變對(duì)蛆分出 峰的要求全都姐分內(nèi)標(biāo)物及所測(cè)組分所測(cè)期分校正因子金年ifl分的校正因子71?1需內(nèi)標(biāo)及所測(cè)組分的校正因子7?_不，要三、高效液相色譜分析1 .基本原理與使用條件高效液相色譜是一種以液體為流動(dòng)相的現(xiàn)代柱色譜分離技術(shù)，其主

25、要通過(guò)與氣相色譜儀 及經(jīng)典液相色譜不同的實(shí)驗(yàn)條件，提供高壓加速分離，對(duì)于高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定的有機(jī)及生化 試樣的高效分離分析方法。2 .儀器組成與結(jié)構(gòu)A.貯液罐存放溶劑，材料要耐腐蝕、對(duì)溶劑呈惰性，配有過(guò)漉器。B.脫氣裝置為防止流動(dòng)相高壓輸出氣泡，影響檢測(cè)器，增大噪聲，故通常采取氮?dú)夤呐莩龤狻?C.高壓泵材料耐化學(xué)腐蝕；高壓連續(xù)工作：輸出流曷范圍寬；輸出流量穩(wěn)定，重復(fù)性高D.梯度洗脫裝置在分離過(guò)程中逐漸改變流動(dòng)相組成以提高發(fā)雜分析的分離效果特點(diǎn)：改善峰形、提高柱效、減少分析時(shí)間、殘留少：換流動(dòng)相時(shí)平衡時(shí)間更長(zhǎng) E.進(jìn)樣器F.色譜柱以不銹鋼制成，要求內(nèi)壁平滑光潔，接頭死體積小，柱長(zhǎng)為10-25cm內(nèi)

26、徑45mm。 柱前加短柱即衛(wèi)柱，防止污染固定相。G.檢測(cè)系統(tǒng)（檢測(cè)器）a. UVD紫外吸收檢測(cè)器選擇性濃度型檢測(cè)器，僅對(duì)紫外波長(zhǎng)有吸收的物質(zhì)有響應(yīng)。以笊燈為光源，通 過(guò)參比池和測(cè)量池兩者之間的透射光的強(qiáng)度差來(lái)輸出信號(hào)。b. FD熒光檢測(cè)器選擇性濃度型檢測(cè)器，先以光源通過(guò)分光器分離特定波長(zhǎng)的紫外光激發(fā)被測(cè)物, 再以光電倍增管測(cè)定產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度，適宜痕量分析。c. RID示差折光率檢測(cè)器通用性檢測(cè)器,包括偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種，依據(jù)參比池與測(cè)量池的折 光率差不同而產(chǎn)生光電信號(hào)。d. ECD電化學(xué)檢測(cè)器-般依據(jù)電化學(xué)原理，分為電導(dǎo)、庫(kù)侖、伏安和安培四種，常用安培檢測(cè)器。性能紫外檢測(cè)招檢測(cè)器電號(hào)檢

27、測(cè)罌折光檢測(cè)野熒光檢測(cè)器測(cè)量參數(shù)吸光度折光指數(shù)熒光強(qiáng)度電導(dǎo)率類型詵樣性通用性選擇性選擇性線性范用105廿10，104最小檢出濃度101010 710 1110 1裝小檢出屋Inglug1P8Img梯度洗脫可以不可以可以不可僅對(duì)流散或總性不依感量隔不敢礴敏感對(duì)溫度敏短性低104c抵2%/C3 .固定相按照承受壓力大小分為剛性固體（多為二氧化硅）和硬膠（多為聚苯乙烯和二乙烯基苯 交聯(lián)物）兩類。按照孔隙深度分為表面多孔型（實(shí)心玻璃外覆蓋多孔活性物質(zhì)）和個(gè),孔微 粒型（直徑lOWm的硅膠微粒）兩類。表面多孔型孔淺、相對(duì)死體積小、出峰快、柱效高但最大進(jìn)樣量受限；全多孔型孔也淺、 傳質(zhì)速率快、柱效高、但需

28、較高壓力，最大進(jìn)樣比表面多孔大五倍。4,流動(dòng)相要求：純度高、黏度低、化學(xué)穩(wěn)定性好、溶劑沸點(diǎn)高于55。（2、溶劑可完全浸潤(rùn)固定相 并與流動(dòng)相匹配、與檢測(cè)器匹配。5 .優(yōu)缺點(diǎn)A.高效液相色譜的特點(diǎn)：分離效能高、選擇性高、檢測(cè)靈敏度高、分析速度快B.高效液相色譜法局限性：a.在高效液相色譜法中，使用多種溶劑作為流動(dòng)相，當(dāng)進(jìn)行分析時(shí)所需成本高 于氣相色譜法，且易引起環(huán)境污染。當(dāng)進(jìn)行梯度洗脫操作時(shí)，它比氣相色譜 法的程序升溫操作更雜。b.高效液相色譜法中缺少通用型檢測(cè)器（如氣相色譜法中使用熱導(dǎo)檢測(cè)器和氫 火焰離子化檢測(cè)器）。c.高效液相色譜法不能替代氣相色譜法，去完成要求柱效高達(dá)10萬(wàn)塊理論塔板 數(shù)以.

29、匕必需用毛細(xì)管氣相色譜法分析組成更雜的具有多種沸程的石油產(chǎn)品。d.高效液相色譜法也不能代替中、低壓柱色譜法，在200kPa至IMPa柱壓下去 分析受壓易分解、變性的具有生物活性的生化樣品。6 .附加知識(shí)點(diǎn)A.液固吸附色譜a.原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸。b.固定相：為固體吸附劑，如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是卜10pm的硅膠吸 附劑。c.流動(dòng)相：各種不同極性的一元或多元溶劑。d.附用：適用于分離相對(duì)分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對(duì)具有官能團(tuán)的化合物和 異構(gòu)體有較高選擇性。e.缺點(diǎn)：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾。B.化學(xué)鍵合相色譜a.原理：通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合在載體表面形成柱填充劑，

30、然后混合物和 其形成化學(xué)鍵強(qiáng)弱不同，借此分離物質(zhì)。b.分類：正相（流動(dòng)相極性小于固定相）和反相（流動(dòng)相極性大于固定相）c.反相影響因素：碳鏈長(zhǎng)度、碳負(fù)載量和表面覆蓋率、載體孔徑和純度、殘余硅 醇基團(tuán)數(shù)目。d.反相鍵合色譜以水（紫外截止波長(zhǎng)低，有利于痕量檢測(cè)）為底溶劑，其中加入 各種添加劑（提高選擇性），根據(jù)分離需要再加入不同比例的與水可混溶的有 機(jī)溶劑，還可利用二次化學(xué)平衡，使不易分析的也可用此法分析。一般適用于 極性較小的樣品分離。C.離子交換色譜a.原理：采取離子交換劑為固定相，分為陽(yáng)離子型和陰離子型。b.固定相：合成樹(shù)脂（強(qiáng)酸SO3H和弱酸COOH,強(qiáng)堿季胺和弱堿NHz）、硅膠。c.流動(dòng)

31、相：含有緩沖體系的金屬鹽溶液d.應(yīng)用：離子、離子型化合物或一定條件下可解離的物質(zhì)。離子色戊原理：在離子交換色譜的基礎(chǔ)上，增加抑制柱（即置換流動(dòng)相中離子，使 其全部轉(zhuǎn)變?yōu)樗?，降低背景影響，但抑制柱需定期再生）或膜離子交換管，再采取 電導(dǎo)法測(cè)量。D.尺寸排阻色譜（凝膠色譜）a.原理：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，山其中通過(guò)，出峰最慢： 中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙,中速通過(guò):而大分子被排斥在外，出峰最快； 溶劑分子小，故在最后出峰。b.固定相：無(wú)機(jī)類（凝膠）和有機(jī)類（有機(jī)物共聚物）c.應(yīng)用：可對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在100-105范用內(nèi)的化介物按質(zhì)量分離。E. SFC超臨界流體色譜法a.原理：

32、采取超臨界流體作為流動(dòng)相，結(jié)合GC和HPLC的各自優(yōu)點(diǎn)。b.儀器：精密控壓設(shè)備、精密控溫設(shè)備、柱后有毛細(xì)管限流器，其他同HPLC。c.流動(dòng)相：常用為C02,其中可加入改性劑。d.固定相：采用填充柱或開(kāi)管柱。e.檢測(cè)器：為氫火焰離子化檢測(cè)器或紫外吸收檢測(cè)器（均對(duì)CO2無(wú)響應(yīng)）。f.應(yīng)用：可用于天然產(chǎn)物、農(nóng)藥、高聚物、原油分析，特別適用于一些GC和 HPLC不適介的物質(zhì)分析，但其儀器復(fù)雜，可選擇流動(dòng)和有限。F. HLPC的綜合分析該臺(tái)相色語(yǔ)尺寸排用色潘<2000離子對(duì)或陰離子交換色有離子對(duì)或陽(yáng)離子交換色譜樣品非水源杵2000水濟(jì)性不人同系物/構(gòu)件人小I劃入該合相色諳液色譜尺寸推陽(yáng)色諾尺寸排用

33、色遣（水體系）尺寸排阻色譜（非水體系）分離方式的選擇四、毛細(xì)管電泳分析1 .基本原理與使用條件毛細(xì)管電泳（Capillary Electrophoresis, CE）是離子或者荷電粒子以電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，在毛 細(xì)管中按照其淌度或分配系數(shù)不同進(jìn)行高效、快速分離分析的一種電泳新技術(shù)。2 .儀器組成與結(jié)構(gòu)電源電壓：5-30kV毛細(xì)管：長(zhǎng)10100cm內(nèi)徑25ro0pm石英材質(zhì)進(jìn)樣方式：重力注射；電動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)器：紫外吸收檢測(cè)器、PDAD、熒光檢測(cè)器、碳纖維安培檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器。3 .影響因素A.影響選擇性因素離子遷移率：電解質(zhì)濃度越大，離子強(qiáng)度越大，離子電荷越小，半徑越大，其遷移 率越小。組分電離度合適配體B.影響柱效因