環(huán)氧化酶-2在乳腺癌中高表達(dá)的臨床意義

1、環(huán)氧化酶-2在乳腺癌中高表達(dá)的臨床意義作者：胡春宏文芳鄧超馬芳【摘要】目的探討環(huán)氧化酶-2 (c0x-2)在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素和預(yù)后的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方 法檢測(cè)60例乳腺癌石蠟包埋組織中c0x-2、her-2/neu和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 子(vegf)的表達(dá)。結(jié)果60例乳腺癌組織中c0x-2的高表達(dá)率為3& 3% (23/60)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組和陰性組以及不同臨床分期病人c0x-2的 表達(dá)差異有顯著性(p<0. 05) ； c0x-2的表達(dá)與her-2/neu. vegf表達(dá)密切 相關(guān)(p<0. 01) oc0x-2和her-2/neu共同表達(dá)

2、的患者tnm分期較晚oc0x-2 低表達(dá)的患者總生存期較長(zhǎng)，與高表達(dá)患者的總生存期有顯著性差異(p <0. 05) o 結(jié)論乳腺癌組織中c0x-2的高表達(dá)可提示乳腺癌惡性程度 高和預(yù)后不良，c0x-2和her-2/neu同時(shí)高衣達(dá)預(yù)后更差?！娟P(guān)鍵詞】乳腺腫瘤 環(huán)氧化酶-2 her-2/neu血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子免疫組織化學(xué)high expression of cox-2 in breast cancer and its clinical significanceabstract: purpose to explore the expression ofcyclooxygenase-2 (co

3、x-2)and its correlation withclinicopatholgical factors and prognosis in breast cancer method paraffin imbedding tissues from 60 cases with breastcancer were detected for expression of cox-2, her-2/neu and vegf by immunohistochemistry. results the expression of cox-2 increased in 23/60 patients (38.3

4、%), which was significant difference between positive lymph node and negative one, and between different tnm stages (p&lt;0. 05). the expressi on of cox-2 corresponded to the expression of her-2/neu and vegf(p&lt;0.01). the co-expression of cox-2 and her-2/neu indicated the breast cancer in

5、advaneed tnm stage. the overall survival of patients with low expression of cox-2 was longer than that with high expression(p05) conclusion high expression of cox-2 in breast cancer tissue suggests aggressive potential and poor prognosis, co-expression of cox-2 and her-2/neu even worsekey words: bre

6、ast neoplasms; cyclooxygenase-2; her-2/neu; vegf; immunohistochemistry近20年的觀察與研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期服用nsaid可降低乳腺癌的發(fā)病 率，而nsaid作用的重要靶分子是環(huán)氧化酶(cox) o環(huán)氧化酶是分解花生 四烯酸，合成不穩(wěn)定前列腺索的限速酶，它有兩種類型：cox-1和cox-2。 c0x-1是一種結(jié)構(gòu)型酶，以穩(wěn)定水平存在于許多正常組織中，被稱為“看 家基因(housekeeping gene)cox-2是一種誘生型酶，靜息狀態(tài)時(shí)不易 檢測(cè)到，在受到各種細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子及腫瘤啟動(dòng)因子等的刺激后， c0x-2的表達(dá)水平可迅

7、速升高，c0x-2又被稱為“快速早期反應(yīng)基因 (immediate to early gene)” 1。原癌基因 her-2/neu 是表皮生長(zhǎng)因 子受體家族成員之一，vegf在腫瘤的新生血管的生成中發(fā)揮重要作用，兩 者都是乳腺癌的重要預(yù)后指標(biāo)。本研究旨在觀察與探討c0x-2在乳腺癌中 的高表達(dá)與臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系，尤其是與her-2/neu和vegf的 相關(guān)性。1 材料與方法1. 1病例來(lái)源收集1999年12月至2003年4月在中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院行乳腺癌 改良根治術(shù)或根治術(shù)患者共60例。術(shù)前均無(wú)長(zhǎng)期服用非第體類抗炎藥病 史,未接受過(guò)放、化療。術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)證實(shí):其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌24例,

8、 單純癌32例，髓樣癌3例，碩癌1例。發(fā)病年齡2871歲，平均49. 2 ±9.9歲。按tnm分期：i期5例，ii期35例，iii期17例，iv期3例。1. 2 試劑與方法兔抗人c0x-2多克隆抗體購(gòu)自武漢博士德公司，鼠抗人her-2/neu 和vegf單克隆抗體免疫組化sp試劑盒及dab顯色劑均購(gòu)自北京屮山生物 技術(shù)有限公司，分別按說(shuō)明書(shū)操作。已知陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照，pbs代替一 抗作為陰性對(duì)照。1. 3結(jié)果判定由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生，用雙盲法進(jìn)行閱片。c0x-2的免疫組化染色以細(xì)胞漿及核膜出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性， 結(jié)果評(píng)分參照文獻(xiàn)2。結(jié)合c0x-2陽(yáng)性細(xì)胞百分比及陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)弱

9、兩個(gè)方面對(duì)c0x-2免疫組化染色評(píng)分(irs, immunoreactive score): a. 陽(yáng)性細(xì)胞百分比：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞=0,陽(yáng)性細(xì)胞v1o% = 1, 10%50%=2, 51%80%=3, 81%100%=4； b.陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)弱(陰性=0,弱陽(yáng)性=1,中度陽(yáng)性=2,強(qiáng)陽(yáng)性= 3）； a與b的乘積即為該例標(biāo)本的c0x-2 免疫組化評(píng)分。如在同一標(biāo)本中存在多個(gè)不同評(píng)分的視野，則取最大值和 最小值的平均值作為免疫組化評(píng)分。按其評(píng)分分為低表達(dá)（06）及高表 達(dá)（712）。her-2/neu的免疫組化染色以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞， vegf的免疫組化染色以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性

10、細(xì)胞。以陽(yáng)性細(xì)胞百 分比評(píng)判，將陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%定為陰性（-）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%50% 定位弱陽(yáng)性（ + ）； 51%75%定為中度陽(yáng)性（+）； >75%定位強(qiáng)陽(yáng)性（+）。1. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用spss12.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)c0x-2的高表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān) 系進(jìn)行chi-square檢驗(yàn)和logistic回歸分析；對(duì)c0x-2的表達(dá)與預(yù)后繪 制 kaplan-meier 曲線，并用 log-rank 檢驗(yàn)。對(duì) c0x-2 與 her-2/neu 及 vegf 的農(nóng)達(dá)相關(guān)性進(jìn)彳亍spearman等級(jí)相關(guān)分析；用fisher確切概率法檢驗(yàn)比 較c0x-2分別和her-2/neu、

11、vegf共同表達(dá)的患者與單獨(dú)表達(dá)的患者在臨 床分期上的差異。均以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2. 1c0x-2、her-2/neu 和 vegf 表達(dá)83.3% （50/60）乳腺癌組織屮存在不同程度的c0x-2表達(dá)，其屮 23例（38. 3% ）有c0x-2高表達(dá)。76. 7%（46/60）乳腺癌組織中有her-2/neu 表達(dá)，其中20例（33.3%）有+表達(dá)。85.0% （51/60）的乳腺癌組 織中有vegf表達(dá)，其中40.0% （24/40）有vegf+表達(dá)。對(duì)c0x-2高表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系進(jìn)行chi-square檢驗(yàn)的結(jié) 果見(jiàn)表1。在淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組和有轉(zhuǎn)移組之間

12、以及不同的臨床分期中c0x-2 的表達(dá)差異冇顯著性(p<0. 05),而在年齡、腫瘤大小、病理類型、er、 pr之間的差異無(wú)顯著性(p>0.05)o2. 3c0x-2 表達(dá)與 her-2/neu 及 vegf 關(guān)系以spearman等級(jí)相關(guān)分析得到：cox-2與her-2/neu的表達(dá)顯著 相關(guān)(r = 0. 573, p<0. 01)；cox-2 與 vegf 的表達(dá)顯著相關(guān)(r = 0. 802, pv0.01)。用fisher確切概率法檢驗(yàn)得知：c0x-2和her-2/neu共同表達(dá)較兩 者單獨(dú)表達(dá)時(shí)tnm分期更晚(p = 0. 027),提示惡性程度更高，預(yù)后可能 更

13、差。c0x-2和vegf共同表達(dá)較兩者單獨(dú)表達(dá)時(shí)的tnm分期差異無(wú)顯著性 (p = 0.479)o2. 4c0x-2的高表達(dá)與預(yù)后將c0x-2低表達(dá)和高表達(dá)兩組，分別繪制kaplan-meier曲線(見(jiàn) 圖1),用log-rank檢驗(yàn)低表達(dá)組生存期較高表達(dá)組長(zhǎng)，差異有顯著性(p <0. 05)o3 討論國(guó)內(nèi)外研究者已應(yīng)用多種方法檢測(cè)乳腺癌屮cox-2蛋白或基因的衣 達(dá)，并結(jié)合臨床、病理及隨訪資料進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)cox-2高表達(dá)與乳腺癌 的一些惡性特征有關(guān)24。本組60例乳腺癌組織中23例(38.3%)有 cox-2的高表達(dá)，口與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期，尤其是臨床分期顯著相關(guān)。顯示cox

14、-2高表達(dá)的病人預(yù)后較差，但與病人年齡、腫瘤的大小、 受體狀態(tài)、病理類型沒(méi)有顯著相關(guān)性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)cox-2高表達(dá)的患者比低 表達(dá)患者的生存期短，可以認(rèn)為，c0x-2表達(dá)對(duì)于未接受化放療及內(nèi)分泌 治療的患者是一個(gè)冇意義的預(yù)測(cè)指標(biāo)。但ristim?觀ki等4運(yùn)用多因素 生存分析顯示c0x-2不是乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后因素，它與參與腫瘤生成發(fā)展 的各種因子相互影響、共同作用。her-2/neu和vegf就是其中兩個(gè)重要因 子。冃前，her-2/neu的表達(dá)水平在確定乳腺癌預(yù)后、常規(guī)化療的反應(yīng) 性、激素治療的敏感性方面已被普遍認(rèn)可；her-2/ncu水平的檢測(cè)日益為 臨床所依賴；抗her-2/neu單克隆抗

15、體赫賽汀已經(jīng)應(yīng)用于臨床。近兒年研 究發(fā)現(xiàn)，her-2/neu信號(hào)傳導(dǎo)與cox-2表達(dá)z間關(guān)系密切。本組60例乳腺 癌患者標(biāo)本中20例有her-2/neu高表達(dá)，與cox-2的表達(dá)顯著相關(guān)。而 且c0x-2和her-2/neu同時(shí)高表達(dá)的患者與單獨(dú)一種因子高水平表達(dá)相 比，前者tnm分期更晚,但其作用機(jī)制仍不清楚。subbaramaiah等認(rèn) 為her-2/neu是通過(guò)ras/mapk激活ap-1/camp傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)c0x-2的表 達(dá)。simeone等6發(fā)現(xiàn)akt信號(hào)傳導(dǎo)可能是her-2/neu調(diào)節(jié)c0x-2表達(dá)的 另一途徑。但benoit等7也通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)cox-2也可以誘導(dǎo)iier-2/n

16、eu 的表達(dá)，且celecoxib可阻斷her-2/neu的表達(dá)；作者進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)， c0x-2對(duì)her-2/neu的調(diào)節(jié)主要是通過(guò)pge2發(fā)揮作用，并依賴于camp傳 導(dǎo)通路。表明c0x-2與her-2/neu可互相誘導(dǎo)，互相促進(jìn)，但究竟哪個(gè)起 更重要的作用還需要進(jìn)一步研究。血管形成在腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，它受到一系列促進(jìn)和抑制因子的調(diào)節(jié)，其中最重要的促進(jìn)因子之一是腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程 中分泌的vegfo本研究結(jié)果顯示，乳腺癌中c0x-2與vegf表達(dá)高度相關(guān)。 與katharine等8用rt-pcr技術(shù)分析40例乳腺癌標(biāo)本得到的結(jié)果一致(相關(guān)系數(shù)=0. 5528, p = 0

17、0076)o關(guān)于c0x-2和vegf之間作用機(jī)制 的研究較少。有研究表明c0x-2高表達(dá)促使pge2的合成增加，誘導(dǎo)hif-1 a轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核，激活arnt/hif-1 a ,從而促vegf生長(zhǎng)。另外，pgs作用 于相關(guān)受體，通過(guò)ep/camp、ras/mapk等途徑，激活vegf的合成通路。 無(wú)論是何種來(lái)源的vegf,最后均作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，通過(guò)增高血管內(nèi)皮 細(xì)胞的滲透性和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞變性、遷移等促進(jìn)腫瘤新牛血管的生成9。 此外，pgs可作為一個(gè)重要的、特異性的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞 增殖，雖然現(xiàn)在關(guān)于乳腺癌中c0x-2表達(dá)對(duì)血管，尤其是腫瘤新生血管生 成的作用機(jī)制的研究很有限，但其

18、重要性預(yù)示它將會(huì)成為今后的研究熱 點(diǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 singh-ranger g, mokbel k. the role of cyclooxygenase-2 (cox-2) in breast cancer, and implications of cox-2 inhibition j eur j surg oncol, 2002, 28(7): 729-737.2 jang tj, jung hg, jung kh, et al. chemopreventive effect of celecoxib and expression of cyclooxygenase-1 and cyc

19、looxygenase-2 on chemi cal 1 y_i nduced rat mammary tu mors j. int j exp pat hoi, 2002, 83(4) : 173-182.3 parrett ml, harris re, joarder fs, et al. cyclooxygenase-2 gene expression in human breast cancer j. int j oncol, 1997, 10 (3):503-507.4 ristim-ki a, sivula a, lundin j, et al. prognostic signif

20、icanee of elevated cyclooxygenase-2 expression in breast cancer j. cancer res, 2002, 62 (3): 632-6355 subbaramaiah k, norton l, gerald w, et al. cyclooxygenase-2 is overexpressed in iier-2/neu-positive breast cancer: evidence for involvement of ap-1 and pea3 j. j biol chem, 2002, 277 (21): 18649-18657.6 simeone am, li yj, broemeling ld, et al. cyclooxygenase-2 i s essential for her2/neu to suppress n-(4-hydroxyphenyl) retinamide