分解纖維素的微生物的分離(

1、1 1.1.尿素轉(zhuǎn)化成氨的反應(yīng)方程式。尿素轉(zhuǎn)化成氨的反應(yīng)方程式。 2.2.篩選微生物的原理。篩選微生物的原理。 3.3.選擇培養(yǎng)基的定義。選擇培養(yǎng)基的定義。 4.4.設(shè)置對(duì)照的目的以及方法。設(shè)置對(duì)照的目的以及方法。 4.4.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法。 5.5.鑒定某細(xì)菌能夠分解尿素的方法。鑒定某細(xì)菌能夠分解尿素的方法。 6.6.測(cè)定飲水中大腸桿菌的數(shù)目的而方測(cè)定飲水中大腸桿菌的數(shù)目的而方法。法。 234劃分標(biāo)準(zhǔn)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類特點(diǎn)特點(diǎn)用途用途物理性質(zhì)物理性質(zhì)化學(xué)成分化學(xué)成分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途用途鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類不加

2、凝固劑不加凝固劑加凝固劑，如加凝固劑，如瓊脂瓊脂工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定分類鑒定微生物分離、鑒定、微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種種含化學(xué)成分不明確的天然物含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)質(zhì), ,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)的生長(zhǎng), ,促進(jìn)所需要的微生促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特培養(yǎng)、分離出特定微生物定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品或化學(xué)藥品, ,用以鑒別不同用

3、以鑒別不同種類的微生物種類的微生物鑒別不同種類微鑒別不同種類微生物生物選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基5 纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的成的高分子化合物，是含量最豐富的多多糖類物質(zhì)糖類物質(zhì)。植物的根、莖、葉等器官都植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。含有大量的纖維素。纖維素能被土壤中纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，這是因?yàn)樗鼈兡苣承┪⑸锓纸饫?，這是因?yàn)樗鼈兡軌虍a(chǎn)生夠產(chǎn)生纖維素酶纖維素酶。草食性動(dòng)物是怎樣消化食草食性動(dòng)物是怎樣消化食物中纖維素的？物中纖維素的？6 草食性

4、動(dòng)物腸胃中的草食性動(dòng)物腸胃中的共生微生物共生微生物。除自然環(huán)境中存在分解纖維素的微生除自然環(huán)境中存在分解纖維素的微生物外，在物外，在草食性動(dòng)物等的消化道內(nèi)草食性動(dòng)物等的消化道內(nèi)，也共生有分解纖維素的微生物，其原也共生有分解纖維素的微生物，其原理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素，理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素，而而人沒有分解纖維素的能力人沒有分解纖維素的能力。7學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo): 1 1、知道纖維素酶的、知道纖維素酶的種類種類及及作用作用2 2、初步掌握、初步掌握從土壤中分離出分從土壤中分離出分解纖維素的微生物解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法的實(shí)驗(yàn)方法8 棉花棉花是自然界中纖維素含量最是自然界中纖維素含量

5、最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈中高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈中也含大量的纖維素。纖維素的分解也含大量的纖維素。纖維素的分解需要在需要在纖維素酶纖維素酶的催化作用下完成。的催化作用下完成。（一）纖維素與纖維素酶（一）纖維素與纖維素酶9葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶纖維素酶是一種纖維素酶是一種_，它包括，它包括_、_和和_，具有催化分解纖維素的作用。具有催化分解纖維素的作用。復(fù)合酶復(fù)合酶C C1 1酶酶C CX X酶酶纖維素纖維素 纖維二糖纖維二糖 葡萄糖葡萄糖C C1 1酶酶C CX X酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶101. 2支支試管試管中，中，2. 放入放入濾紙條濾紙條3. 再分別再分別醋酸醋酸-醋酸鈉醋酸

6、鈉緩沖液緩沖液11mL、10mL。4. 在加入在加入10mL試管中加入試管中加入1mL纖維素酶纖維素酶5. 在在搖床搖床上振蕩反應(yīng)上振蕩反應(yīng)1h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。纖維素酶活性的纖維素酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)：測(cè)定實(shí)驗(yàn)：11 在一支試管中添加纖維素酶，在一支試管中添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶；盡管另一支試管不添加纖維素酶；盡管醋酸醋酸鈉緩沖液用量不同，但醋酸醋酸鈉緩沖液用量不同，但都能都能維持相同的維持相同的pHpH。思考思考1實(shí)驗(yàn)分析：實(shí)驗(yàn)分析：P27P27的的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？12下列生物能分解纖維素的是（下列生物能分解纖維素的是（ ） 人人 兔兔 牛牛

7、 蘑菇蘑菇 纖維桿菌纖維桿菌A. B.C. D.C13方法方法-選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基以纖維素為唯一碳源以纖維素為唯一碳源-剛果紅染色法剛果紅染色法( (鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基) )紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物剛果紅剛果紅纖維素纖維素紅色消失，紅色消失，出現(xiàn)透明圈出現(xiàn)透明圈14可根據(jù)是可根據(jù)是否產(chǎn)生否產(chǎn)生透透明圈明圈來(lái)篩來(lái)篩選纖維素選纖維素分解菌分解菌15( (三三) )、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤土壤取樣取樣選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)梯度梯度稀釋稀釋將樣品涂將樣品涂布到布到鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基挑選挑選菌落菌落什么什么樣的樣的環(huán)境環(huán)境取樣取樣?選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)特點(diǎn)? ?培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ?挑選什挑選什

8、么樣的么樣的菌落菌落? ?鑒別培養(yǎng)鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)基的特點(diǎn)? ?如何鑒別如何鑒別? ?本實(shí)驗(yàn)流程與課題本實(shí)驗(yàn)流程與課題2 2中實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同中實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同? ?前者直接稀釋涂布在以尿素為唯一前者直接稀釋涂布在以尿素為唯一N N源的源的選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基上，上，直接分離得到目的菌落；后者先進(jìn)行選擇培養(yǎng)，使纖維直接分離得到目的菌落；后者先進(jìn)行選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到素分解菌得到增殖增殖后，再將菌液稀釋涂布到后，再將菌液稀釋涂布到鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基161、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于基屬于_（固體、液（固體、液體）培養(yǎng)基，原因是體）培養(yǎng)基，原因是_【資料二資料二】

9、選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)閱讀資料二閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問(wèn)題：，回答以下幾問(wèn)題：液體液體沒有添加瓊脂沒有添加瓊脂172、該培養(yǎng)基對(duì)微生物該培養(yǎng)基對(duì)微生物_（具有，不具有）選擇作用。如（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是果具有，其選擇機(jī)制是_。以纖維素粉為唯一碳源，能分解以纖維素粉為唯一碳源，能分解纖維素的微生物可以大量繁殖纖維素的微生物可以大量繁殖 具有具有 18若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明選擇培若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將_改為改為_。3、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基的作用？說(shuō)明選擇培

10、養(yǎng)基的作用？葡萄糖葡萄糖纖維素粉纖維素粉19思考思考2實(shí)驗(yàn)流程中實(shí)驗(yàn)流程中“選擇培選擇培養(yǎng)養(yǎng)” 的目的是什么？的目的是什么？ 其目的是增加纖維素分其目的是增加纖維素分解菌的濃度，解菌的濃度，以確保能夠從以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生樣品中分離到所需要的微生物。物。20旁欄思考題旁欄思考題為什么選擇培養(yǎng)能為什么選擇培養(yǎng)能夠夠“濃縮濃縮”所需的微生物？所需的微生物？ 在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖

11、被抑制，因此可以起到因此可以起到“濃縮濃縮”的作用。的作用。21培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na 510g碳碳 源源酵母膏酵母膏 1g1g碳源、氮源、生長(zhǎng)因子碳源、氮源、生長(zhǎng)因子KH2PO4 0.25g無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽土豆汁土豆汁 100mL100mL碳源、生長(zhǎng)因子碳源、生長(zhǎng)因子瓊脂瓊脂 15g15g凝固劑凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至餾水定容至1000mL1000mL氫元素、氧元素氫元素、氧元素鑒別鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉)22【資料三資料三】剛果紅染色法剛果紅染色法方法一

12、：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛在倒平板時(shí)就加入剛果紅果紅23方法一中方法一中NaClNaCl溶液的作用？溶液的作用？思思 考考： 漂洗作用漂洗作用，洗去與纖維素結(jié)合，洗去與纖維素結(jié)合不牢的剛果紅，以免出現(xiàn)的透明圈不牢的剛果紅，以免出現(xiàn)的透明圈不夠清晰。不夠清晰。24染色法染色法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)方法一方法一 方法二方法二 顏色反應(yīng)基本顏色反應(yīng)基本上是纖維素分上是纖維素分解菌的作用解菌的作用操作繁瑣，剛果紅操作繁瑣，剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜混雜操作簡(jiǎn)便，操作簡(jiǎn)便，不存在菌落不存在菌落混雜問(wèn)題

13、混雜問(wèn)題 產(chǎn)生淀粉酶的微生產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生物能圈，有些微生物能降解色素，形成明降解色素，形成明顯的透明圈。顯的透明圈。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足25挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在基上，在30300 0C C 37370 0C C培養(yǎng)，可獲得培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。純培養(yǎng)。26 為了確定分離得到的是纖維素為了確定分離得到的是纖維素分

14、解菌，還需要進(jìn)行分解菌，還需要進(jìn)行_實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有_ _ 發(fā)酵和發(fā)酵和_ _ 發(fā)酵。纖維發(fā)酵。纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的紙等纖維素所產(chǎn)生的_ _ 含量含量進(jìn)行定量測(cè)定。進(jìn)行定量測(cè)定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 液體液體 固體固體 葡萄糖葡萄糖 27分解分解纖維纖維素的素的微生微生物的物的分離分離纖維素酶纖維素酶種類、作用、催化活力種類、作用、催化活力剛果紅染色剛果紅染色篩選原理篩選原理實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)設(shè)設(shè)計(jì)計(jì)土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法前置染色法后置染色法后置染

15、色法富含纖維素土壤富含纖維素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鑒別染色鑒別分離出分解菌分離出分解菌28D1 1、下列材料中纖維素含量最高的、下列材料中纖維素含量最高的是是 ( )( ) A A楊樹楊樹 B B小麥小麥 C C玉米玉米 D D棉花棉花29C2 2、纖維素酶能夠分解、纖維素酶能夠分解 ( )( ) A A纖維素的微生物纖維素的微生物 B B淀粉的微生物淀粉的微生物 C C纖維素纖維素 D D淀粉淀粉30B3 3、剛果紅能與哪項(xiàng)物質(zhì)形成紅色、剛果紅能與哪項(xiàng)物質(zhì)形成紅色復(fù)合物復(fù)合物 ( )( ) A A纖維二糖纖維二糖 B B纖維素纖維素 C C葡萄糖葡萄糖 D D麥芽糖麥芽糖31B4、尋找纖維素分解菌應(yīng)到、尋找纖維素分解菌應(yīng)到( ) A濕潤(rùn)的環(huán)境中濕潤(rùn)的環(huán)境中 B富含纖維素的環(huán)境中富含纖維素的環(huán)境中 C富含無(wú)機(jī)鹽的環(huán)境中富含無(wú)機(jī)鹽的環(huán)境中 D池塘中池塘中32D5、纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基有選、纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基有選擇作用，原因在于其含有擇作用，原因在于其含有 ( ) ANaNO3 BKCl C酵母膏酵母膏 D纖維素粉纖維素粉33A6、下列哪種生物能產(chǎn)生纖維素、下列哪種生物能產(chǎn)生纖維素酶酶 ( ) A纖維素分解