高三年級生物《生物技術實踐》識記資料

1、高三年級生物生物技術實踐識記資料專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用1、果酒:2、果醋:（1）（2）（3）（4）（5）（1）（2）（3）（4）（5）【課題一：果酒和果醋的制作】 菌種：酵母菌（耐酸單細胞真核生物）代謝類型：兼性厭氧型材料條件時間菌種葡萄汁溫度:18259,密封缺氧1012d醋酸菌（耐酸原核牛-物）代謝類型：好氧型材料：衙萄汁或衙萄酒條件：溫度：3035°c,不斷通入氧氣 吋間：78d （在已有葡萄酒的基礎上）過程:細節(jié):（1）3、4、挑選葡萄一沖洗一榨汁一酒精發(fā)酵（果酒）一醋酸發(fā)酵（果醋） 在制作衙萄酒的過程中，每隔12h將蓋擰松，這樣做的原因是放出c02,但不打開的原因是防止雜

2、 菌進入，污染酒液。（2）將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時，留有1/3空間的原因是制造短暫的有氧環(huán)境，有利于酵母菌的繁殖，并可防止葡萄汁溢出。（3）在制作果醋的過程中，通入的空氣一定是火菌后的空氣，而鵝頸口可以防止雜菌進入。（4）在清洗葡萄時，要先沖洗再除去枝梗，原因是除去枝梗容易使衙萄破損，使空氣中的微生物進入衙 萄的內部，且會洗掉葡萄表而的野生酵母菌。（5）在變酸的酒的表而觀察到的菌膜就是大量繁殖的醋酸菌。（6）檢驗酒精的原理：重餡酸鉀與酒精反應呈現(xiàn)灰綠色。檢驗過程：先加入發(fā)酵液，再滴入稀硫酸，最 后加入重骼酸鉀，振蕩。用酒精代替發(fā)酵液可以作為標準對照，用蒸館水可以作為空白對照。【課題二：腐乳的制作】

3、1、材料：含水量小于70%的豆腐2、菌種：主要為毛蠱（需氧型的真核生物）3、原理：能夠產生多種酶，包括蛋口酶（將蛋口質分解為多肽和氨基酸）和脂肪酶（將脂肪分解為廿汕和脂 肪酸）4、條件：溫度：1518°c,冇氧條件5、時間：5d6、過程：讓豆腐上長岀毛霉一加鹽腌制一加鹵湯裝瓶一密封腌制7、細節(jié):（1）加鹽的作用：析出水分，抑制微生物的生長，調味，提取蛋白酚。（2）加酒的作用（量一般為12%左右）：抑制微生物的生長，調味。（3）加香辛料的作用：調味，防腐殺菌，參與發(fā)酵。（4）豆腐與鹽的比例：5 : k（5）隨豆腐層的加高而增加鹽用量的原因是因為越靠近瓶口，被微生物污染的可能性越大，加鹽

4、可以抑 制微生物的生長?！菊n題三：制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量】1、材料：新鮮蔬菜2、菌種：乳酸菌（厭氧型的原核生物）3、條件：無氧環(huán)境4、細節(jié)：（1）清水與鹽的比例為4 ： 1。（2）發(fā)酵時間超過lid后食用才較為健康。（3）檢測亞硝酸鹽含量的原理：亞硝酸鹽與對氨棊苯碳酸發(fā)生重氮化反應后與n-1-蔡基乙二胺鹽酸鹽 結合形成玫瑰紅色染料。專題二微生物的培養(yǎng)與應用【課題一：微生物的實驗室培養(yǎng)】k培養(yǎng)基：分為液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基兩種，在液體培養(yǎng)基屮加入凝固劑（如瓊脂）后就可以制成固體培 養(yǎng)基，微生物在固體培養(yǎng)基上由固體培養(yǎng)基提供營養(yǎng)物質生長繁殖，形成菌落。一般含有：水、碳源、氮源、 無機鹽，在有特

5、殊要求的情況下可以更改或添加物質。培養(yǎng)真菌需要酸性環(huán)境，培養(yǎng)細菌需要中性或堿性環(huán)2、消毒與火菌：消毒為使用溫和手段殺死部分微生物，不包括芽砲和砲子；火菌為使用強烈手段殺死所有微 生物，包括芽他和砲了。3、常用手法：（1）能耐髙溫、需要保持干燥的物站，使用干熱滅菌。（2）培養(yǎng)基使用高壓蒸汽滅菌。（3）接種工具使用灼燒滅菌。（4）微生物接種通常使用平板劃線法和稀釋涂布平板法。4、細節(jié)：（1）稱好的牛肉膏要連同稱量紙一同放入燒杯，牛肉膏溶化后再用玻璃林取岀稱量紙。（2）培養(yǎng)基滅菌后冷卻到50°c左右后倒平板，用手廿觸摸不燙手。（3）平板冷凝后倒置平板的原因：使平板冷凝產生的水滴快速蒸發(fā)，防

6、止蓋上的水進入平板屮造成 污染。（4）若培養(yǎng)基濺在iiil蓋與1iil底z間的部位，這個平板不能用來培養(yǎng)微生物，因為此部位與空氣相接觸, 被污染的機會大（5）在每次接種操作后都要灼燒接種環(huán)，這樣可以防i上空氣小的細菌污染培養(yǎng)基，使本身附著的細菌被 殺死，防止污染空氣和感染操作者。（6）保藏菌種使用斜面包藏的原因可以擴大面積,能夠保存更多的菌種;使用甘油可以隔絕空氣,保溫, 使細菌休眠【課題二：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)】1、過程：土壤取樣一無菌水一土壤溶液一梯度稀釋一將樣品涂布到培養(yǎng)基上一選擇培養(yǎng)一計數(shù)2、篩選目的菌株可使用選擇培養(yǎng)基，利用牛:長環(huán)境抑制或阻止其他微生物的生長。3、統(tǒng)計菌

7、落數(shù)冃：重復實驗，選擇菌落數(shù)在30300 z間的平板，求平均數(shù)。4、鑒別培養(yǎng)基也町以選擇h的菌株：如大腸桿菌可以使伊紅美藍培養(yǎng)基呈現(xiàn)黑色；纖維素分解菌可以使剛果 紅培養(yǎng)基形成透明圈。【課題三：分解纖維素的微生物的分離】1、纖維素是白然界含最最多的多糖，主要參與構造生物體cell （植物、真菌的cell壁），不能被人多數(shù)生 物分解。2、復合酶：指由多種酶構成，共同分解同一種物質的酶的統(tǒng)稱，例如：纖維素酚，果膠他。專題三植物的組織培養(yǎng)技術【課題一：菊花的組織培養(yǎng)】1、材料：年齡小、已保存的時間短（原因：生理狀況好，細胞分化程度低，容易誘導脫分化與再分化）2、ms培養(yǎng)基：水、無機鹽、蔗糖（調節(jié)滲透壓

8、、營養(yǎng)作用）、特殊營養(yǎng)物質（調節(jié)作用）、植物激素（啟動 細胞）（ms培養(yǎng)基以無機營養(yǎng)為主，微牛物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主）。3、條件：（菊花組織培養(yǎng)）（1）ph： 5. 8 左右（2）溫度:1曠22°c（3）光照：每天用fl光燈照射12h4、激素使用順序：先使用生長素，后使川細胞分裂素，冇利于細胞分裂，但細胞不分化；先使用細胞分裂素, 后使用生長素，細胞既分裂也分化；同時使用，分化頻率提高。5、脫分化：山告訴分化的植物組織或細胞產生愈傷組織（排列疏松無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀太的薄 壁細胞）的過程。6、再分化：愈傷組織重新分化成根或芽等器官。7、夕卜植體消毒:（1）用流水沖洗后加洗衣

9、粉刷洗再沖洗，用無菌紙擦干。（2）放入70%的酒粹中搖動數(shù)秒，在無菌水中清洗，用無菌紙擦干。（3）放入氯化汞溶液中，在無菌水小清洗23次。8、細節(jié)：（1）接種時注意用形態(tài)學下端插入培養(yǎng)基。（2）在植物組織培養(yǎng)的過程中，耍進行一系列的消毒滅菌操作的原因是因為培養(yǎng)基同樣適合于部分微生 物的生所使用的植物組織材料體積小，抗性差，競爭中處于劣勢，容易被感染，導致實驗失敗。【課題二：月季的花藥培養(yǎng)】1、花藥（形成花粉的場所）：花藥壁、花粉囊壁（都由父木的體細胞發(fā)冇而來）、花粉囊（含有花粉母細胞）2、花粉母細胞一減數(shù)分裂一小他了一冇絲分裂一單核花粉粒一冇絲分裂一雙核花粉粒（生殖細胞核發(fā)育成精 子營養(yǎng)細胞核

10、發(fā)育成花粉管細胞）3、子房：子房壁：母本細胞一果皮；胚珠：胚囊；珠被一種皮（母本cell）。4、花粉管為單倍母體細胞組成5、產生花粉植株的兩種途徑：（1）花藥中的花粉脫分化一-胚狀體分化一-從芽誘導一-生根一-移栽（2）花藥中的劃分脫分化一-愈傷組織再分化一-叢芽誘導一-生根一-移栽6、材料：選擇單核靠邊期的花藥7、鑒定方法：酷酸洋紅法一細胞核變?yōu)樽霞t色；焙花青一珞磯法一細胞核變?yōu)樗{黑色。專題四酶的研究與應用【課題一：果膠酶在果汁生產中的作用】1、果膠：一種高分了多糖；基木結構單位：半乳糖醛酸；功能：構成細胞壁和胞間組織。2、果膠酶在果汁生產小的作用：提高出汁率；提高澄清度。3、植物淀粉酶最適

11、溫度：5060°c；唾液淀粉酶最適溫度：37°c；小腸酶（胰蛋白）最適ph： 89；胃蛋白 酶最適ph： 2；唾液淀粉酶最適ph： 704、實驗探究：制備水果泥一配制果膠酶一分別等溫處理一恒溫混合處理一段時間一過濾一記錄果汁量（因變 量）一改變自變量（溫度或ph）,重復上述實驗?！菊n題二：探討加酶洗衣粉的洗滌效果】1、普通洗衣粉的化學組成：表面活性劑（主要作用，原理：使污物與纖維之間的連結變得疏松）、水軟化劑 （含有p）、漂白劑、堿劑（水溶液呈堿性）。2、加酶洗衣粉（無p）的化學組成：酶制劑，包括（堿性）蛋白酶、（堿性）脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、 水軟化劑、漂白劑、堿劑。3

12、、加酶的效果：將不溶丁水的大分子有機物一溶于水的小分子有機物：（1）蛋白質蛋白酶一多肽肽酶一氨基酸（2）脂肪脂肪酶一-甘汕+脂肪酸（3）淀粉淀粉酚一-麥芽糖麥芽糖酶一-葡萄糖4、常見的污漬及成分：油漬一脂肪汗?jié)n一蛋口質果汁漬一多糖、蛋口質奶漬、血漬一蛋口質。【課題三：酵母細胞的固定化】優(yōu)點缺點直接使用 酶效率高，額外污染少成本高，對環(huán)境要求高，易失活，會影響產品質ja固定化酶容易與產物分離，可反復利用不能催化一系列反應固定化細 胞可連續(xù)反應，更易操作，對酶的活性影響較小酶與反應物的接觸不充分1、固定化技術：化學結合法、物理吸附法（詢兩者適合固定酶）、包埋法（適合固定細胞，原因在于細胞比 酶體積

13、耍大，不易從包埋材料中漏出）。2、注意：要求對酶的活性彩響小、反應物是人分子物質時用固定化酶，連續(xù)反應時用固定化細胞。3、制備固定化酵母細胞：酵母細胞的活化（活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微牛物重新恢復正常的?；顮顟B(tài)） -配置cacl2溶液（用于凝聚膠體）一配制海藻酸鈉溶液（關鍵：a：加熱時耍用小火，或者間斷加 熱，防止焦糊；b：海藻酸鈉的濃度要適中，過高生成的凝膠珠不能形成球形或橢球形，偏低生成的凝膠珠數(shù) 量少，體積小，顏色偏淡一一所含酵母少）一海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合固定化酵母細胞（凝 膠珠形成后要在cacl溶液中浸泡半小時，使其結構穩(wěn)定）4、固定化技術若希望增加使川次數(shù)，則需要嚴格消毒與滅菌

14、。專題五dna和蛋白質技術【課題一：dna的粗提取與鑒定】1、基本思路：利用物理或化學方法將dna與其它成份分離。2、分離方法：利丿1 dna與雜質在nacl溶液中溶解度不同，根據dna與雜志對酶、溫度、洗滌劑的耐受 性的差異。3、鑒定的方法：甲基綠+dna-綠色；二苯胺+dna沸水浴一藍色。4、實驗流程：選取實驗材料（以雞血為例）（使用檸檬酸鈉防止血液因c屮而凝固）（離心或者靜宜除去血清, 卞層為紅細胞）破碎細胞，獲収含dna的濾液（如果實驗材料是植物細胞，需要先用洗滌劑溶解細胞膜, 使用食鹽一一促進溶解，進行充分地攪拌和研僭）一去除濾液中的雜質：利用方法，使用2mol/lnacl 溶液（溶

15、解）和0. 14mol/lnacl溶液（析出）反復溶解析出dna,過濾以除去雜質一 dna的析出與鑒定：加 入與濾液等體積的體積分數(shù)為95%的酒梢溶液，靜置后用玻璃棒沿一個方向輕柔地港起絲狀物，吸去水分后 加入nacl溶液和二苯胺試劑，沸水浴，冷卻后觀察是否變藍?！菊n題二：多聚酶鏈式反應擴增dna片段】1、pcr技術（1）用途：人為大量復制冃的dna片段（2）原理：利用細胞內dna復制的原理人工模擬合成dna（3）在細胞內合成dna的條件：能量一atp酶一dna聚合酶（特點：只能單向延伸脫氧核卄酸鏈，只能從已有的片段開始延伸，不能從頭開始）、dna解旋酶、模板一dna的兩條鏈、原料一4種脫氧核

16、芹酸、 引物t吏dna聚合酶能夠從引物的3,端延伸dna鏈,即復制方向從子鏈的5'向3'延伸（rna的小片段）、 合適的溫度和ph（4）人工模擬合成dna的條件：能量一atp、酚一taqdna聚合酶（耐高溫）、模板一dna的兩條鏈、原料 4種脫氧核井酸、弓|物一dna的小片段、溫度一恒溫箱、ph利用緩沖液。2、pcr的反應過程：冃的dna片段+引物卜原料卜緩沖液卜atp+酶95°c-冃的dna變性，成為單鏈降溫至55°cdna 復性一-延伸一-循環(huán)（一般三十多次）【課題三：血紅蛋口的提取與分離】1、凝膠色譜法（1）原理：根據相對分子質量人小使用凝膠球（由多糖

17、類化合物構成，含有貫穿的通道）分離蛋白質。（2）結果：洗脫蛋口質混合物，相對分子質量大的蛋白質首先洗脫，真正選擇的是最后流出來的蛋口質 分了。2、透析法（1）原理：利用半透膜的半透性將小分子物質滲出。（2）結果：除去小分子物質。3、電泳（1）原理：利用待分離樣品中各種分了帶電性質的差異以及分了本身的大小、形狀的不同，使帶電分了 產生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。（2）作用：分離蛋口質、測定蛋口質的分子量、測定蛋口質的濃度。4、實驗：蛋口質的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。（1）樣品處理：紅細胞的洗滌（洗去血清）、血紅蛋白的釋放（加入蒸憎水和甲苯，甲苯可

18、以促進 細胞膜的溶解）、分離血紅蛋白溶液（離心分離，沉淀物匕層的紅色透明液體為血紅蛋白溶液）、透析（粗 分離）。（2）凝膠色譜：制作一裝填一樣甜的加入和洗脫（純化）。（3）sds-聚內烯酰胺凝膠電泳（純度鑒定）：可以消除凈電荷對遷移率的影響，使電泳遷移率完全取決 于分子的大小。5、細節(jié)：裝填凝膠柱時不能有旗氣泡存在，氣泡會攪亂洗脫液屮蛋白質的洗脫次序，導致間隙增大，影響分 子運動，降低分離效杲。專題六植物有效成分的提取【課題一：植物芳香汕的提取】1、玫瑰精汕的提取鮮玫瑰花+清水f水蒸氣蒸鐳f油水混合物加入nacl-分離油層（分液漏斗）加入無水na2so4 -除水過濾一-玫瑰油2、橘皮精油的提取石灰水浸泡（分解果膠，防止壓榨時滑脫，提高出汕率）一漂洗一壓榨一過濾一靜置一再次過濾一橘皮 油【課題二：胡蘿卜素的提取】1、胡蘿卜素是合成維生素a的重要原料。2、胡蘿卜一粉碎一干燥（溫度太高、t燥時間太長會導致胡蘿卜索分解）一萃取（避免明火加熱，防止所用 有機溶劑丙酮燃燒爆炸）過濾一濃縮一胡蘿卜素。3、鑒定：使用紙層析裝置：玻璃蓋一防止揮發(fā)、色譜容器、濾紙一上冇標準樣品點和萃取樣品點、u形扣一 濾紙若合成一塊會發(fā)生毛細管現(xiàn)彖，導致附近擴散速度加