脫鈣骨支架材料和人脂肪干細(xì)胞復(fù)合相容性實(shí)驗(yàn)探究

1、脫鈣骨支架材料和人脂肪干細(xì)胞復(fù)合相容性實(shí)驗(yàn)探究【中圖分類號(hào)】r54【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】b【文章編號(hào)】1004-7484 (2013) 04-0256-01骨組織工程支架材料首先要有良好的細(xì)胞相容性，種子 細(xì)胞能夠在支架材料上粘附并生長(zhǎng)1h2。骨組織經(jīng)脫鈣處 理形成脫鈣骨基質(zhì)，移植無(wú)明顯免疫排斥反應(yīng)3,有良好 的組織相容性。國(guó)內(nèi)外學(xué)者將它作為植骨材料進(jìn)行了大量的 實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用研究。組織工程研究為脫鈣骨基質(zhì)的應(yīng)用提 供了新的思路，即體外分離培養(yǎng)自體細(xì)胞，細(xì)胞增殖分化后 與脫礦骨基質(zhì)復(fù)合，應(yīng)用于臨床修復(fù)工作。目前的脫鈣骨產(chǎn) 品多為異體完全脫鈣的骨基質(zhì)，在本實(shí)驗(yàn)中，我們將部分脫 鈣骨與hadsc：復(fù)合，觀

2、察部分脫鈣骨的細(xì)胞相容性。1材料與方法1.1材料及試劑：人脂肪干細(xì)胞：由脂肪抽吸組織中分 離、培養(yǎng)。部分脫鈣骨：由上海組織工程中心提供。3, 3' -dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (dio) mol probes 公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2. 1 hadscs在部分脫鈣骨上粘附率的測(cè)定將第2代 hadscs 按 5 x 105/0. 1 ml/塊的濃度接種于 5mm x 5mm x 3mm 部分脫鈣骨支架上，共8塊，將細(xì)胞支架復(fù)合物于37°c , 5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中放置4h后，換于另一平皿，加入培養(yǎng)液, 將原平皿中加入0.2

3、5%胰酶0. 02%edta,消化收集細(xì)胞，計(jì) 數(shù)儀計(jì)數(shù)，得出流失的細(xì)胞量；細(xì)胞材料復(fù)合物培養(yǎng)24h后, 將細(xì)胞材料復(fù)合物于培養(yǎng)液中輕輕晃動(dòng)，并換入另一培養(yǎng)皿 培養(yǎng)，收集原培養(yǎng)皿培養(yǎng)液，加0. 25%胰酶0. 02%edta于原 培養(yǎng)皿中消化收集貼壁的細(xì)胞，并與原培養(yǎng)液中細(xì)胞一并計(jì) 數(shù)，得出未粘附的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞粘附率二（接種的細(xì)胞數(shù)-流 失的細(xì)胞數(shù)-未粘附的細(xì)胞）/ （接種的細(xì)胞數(shù)-流失的細(xì)胞 數(shù)）。1. 2. 2 alp定量檢測(cè)3討論細(xì)胞在材料上的粘附率是評(píng)價(jià)組織工程支架材料的重 要指標(biāo)，我們檢測(cè)了人脂肪干細(xì)胞在部分脫鈣骨上的粘附 率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，人脂肪干細(xì)胞能較好地粘附在部分脫 鈣骨上

4、，在部分脫鈣骨的表面及內(nèi)部孔隙中都能粘附，并能 正常生長(zhǎng)。符合骨組織工程支架材料的基本要求。人脂肪干 細(xì)胞與部分脫鈣骨的粘附率為96%,與kasten的研究結(jié)果相 符合。alp是成熟成骨細(xì)胞標(biāo)志酶之一，通過(guò)檢測(cè)成骨的重要 指標(biāo)alp表明，對(duì)成骨誘導(dǎo)的hadscs在三維立體培養(yǎng)環(huán)境 下alp仍呈上升趨勢(shì)，14d達(dá)高峰，隨后下降。表明細(xì)胞在 支架材料上三維誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)仍表達(dá)成骨細(xì)胞表型，體外實(shí)驗(yàn) 支持成骨。參考文獻(xiàn)：1 li, h. ， dai, k. , tang, t. ， et al. boneregeneration by implantation ofadipose-derived stromal cells expressing bmp-2 biochem biophys res commun, 356：836-842,2007.2 王坷裴國(guó)獻(xiàn)陳濱金丹魏寬海任高宏珊瑚經(jīng)基磷灰石的細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)研究.中華創(chuàng)傷骨科雜志，2002, 4：278-280