苦豆子有效成分對解脲支原體體外抑菌實驗研究

1、苦豆子有效成分對解腺支原體體外抑菌實驗研究徐文錦湯建中楊鳳琴（寧夏醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)院寧夏銀川750021）【摘要】目的：觀察解服支原體（uu）對苦豆子有效成分的敏感性。方法：運 用幾何級稀釋法測定最小抑菌濃度（mic）。結(jié)果：苦豆子總堿、苦參素對uu有 一定的抑菌作用，其mic分別為0.125mg/ml和0.25mg/ml。結(jié)論：苦豆子有效 成分對uu有體外抑菌作用?！娟P(guān)鍵詞】有效成分；解嫌支原體；非淋菌性尿道炎【中圖分類號】r285.5【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】a【文章編號】1008-6455 （ 2010） 11-0183-02近年來，非淋菌性尿道炎（ngu）已成為當(dāng)今常見的性傳播疾病d） 1,受到

2、人們廣泛關(guān)注。臨床用于治療的抗牛素耐藥菌株日益增多，給治療帶來 了很大困難。目前，國內(nèi)外對中草藥進(jìn)行了大量的抑菌實驗研究，取得很大進(jìn)展 。我們用寧夏道地藥材苦豆子作體外抑菌實驗研究，為中醫(yī)藥治療uu感染性 疾病提供實驗依據(jù)。1材料與方法1.1實驗材料1.1.1支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株：uu3型由首都兒科研究所饋贈。1.1.2培養(yǎng)基：珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)。注冊號：粵食藥管械（試）字 2004 第 2060096 號。1.1.3藥品與儀器：苦豆子總堿（國藥準(zhǔn)字：h64020286）；苦參堿（國 藥準(zhǔn)字：h64020273）；槐果堿均為寧夏紫荊花藥業(yè)股份有限公司提供。羅紅霉 素 江蘇黃河藥業(yè)股份有限公

3、司牛產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字h19991092；電熱恒溫培養(yǎng)箱（d np9 2 7 2,上海）；生物安全柜（bhc 1 3 0 0 ii a / b 3 ,蘇州安泰）。1.2方法1.2.1解豚支原培養(yǎng)：將uu3型標(biāo)準(zhǔn)菌株用2ml培養(yǎng)基在室溫下混勻溶 于無菌試管中，密封。置于37°c恒溫培養(yǎng)箱中孵育18-36h,當(dāng)培養(yǎng)液顏色由黃 變?yōu)榧t色且液體澄清，表示支原體培養(yǎng)陽性，保存于一37°c冰柜備用。1.2.2支原體菌液的制備及菌數(shù)測定(ccu測定)3：取無菌試管10支, 各管分別加0.9ml的uu培養(yǎng)液，第1支試管加第三代對數(shù)生長期菌液0.1ml,輕 輕混勻，從第1管中取出0.1ml加入第2

4、支試管，混勻，依次將待測菌液用培養(yǎng) 基以10倍稀釋法逐管稀釋成101-1010系列濃度，置37 °c恒溫培養(yǎng)箱，一周后 觀察uu生長情況，以發(fā)生顏色變化的最高稀釋度作為顏色改變單位(color change unitccu),貝！j菌液濃度以ccu/ml計。1.2.3mic的測定4：將uu菌株連續(xù)傳代三次，取第三代對數(shù)生長期 菌液(106ccu/ml),用其相應(yīng)培養(yǎng)基稀釋至l×105ccu/ml作為工作液。在 96(8×12)孔聚乙烯細(xì)胞培養(yǎng)板的每排每孔加培養(yǎng)液100ul,每排第二孔分別 加100ul藥液8mg/ml,從第二孔開始，用微量移液管

5、反復(fù)吹打10次混勻，吸出 100ul至下一孔，再混勻，依此類推，直至第十一孔，混勻后吸出100ul棄去。 從第一孔至第十一孔，每孔依次加工作菌液100ul,第十二孔再補(bǔ)加培養(yǎng)液looul 這樣藥物濃度從第2 11孔，依次為，4mg/ml, 2mg/ml, lmg/ml, 0.5mg/ml, 0.25mg/ml, 0.125mg/ml, 00625mg/ml 0.0312mg/ml, 0.016mg/ml, 0.008mg/ml共十個稀釋濃度。第1空為陽性對照，第12孔為陰性對照，蓋上板蓋，用液體 石蠟密封，輕搖混勻，置于37°c溫箱孵育。不加藥組培養(yǎng)基中酚紅指示劑由橘 黃色變?yōu)榧t色，

6、表示uu生長，加藥組不出現(xiàn)顏色變化的最小濃度為最小有效抑 制支原體生長的藥物濃度(mic)。2結(jié)果苦豆子總堿、苦參堿有明顯抑菌效果，其mic為0.125mg/ml和025mg/ml；槐果堿抑菌效果較差，最低抑菌濃度mic lmg/ml，見表表1幾種藥品的不同濃度對解腺支原體的抗菌活性3討論3.1解腺支原體是引起泌尿生殖道炎癥(ngu)及男女不孕不育的主要病 原體,也是性傳播的常見病原體。目前，在臨床上,以抗生素為主要治療手段，首 選藥物主要以四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和氟嗤酮類為主。越來越多的研究顯示uu 對四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)脂類藥物產(chǎn)生明顯耐藥性,嗤諾酮類藥物目前也發(fā)現(xiàn)有較多耐 藥的uu菌株。據(jù)文獻(xiàn)報

7、道，常用的抗生素耐藥性由高到低為:環(huán)丙沙星 (57.0%)羅紅霉素(47.3%)、氧氟沙星(43.9%)、壯觀霉素(35.2%)、司帕霉素(25.5%) 等。在這種情況下，尋找對uu具有抗菌作用的中草藥作新藥源，尤顯重要，且 中草藥可復(fù)方使用，不易產(chǎn)生耐藥菌株，臨床應(yīng)用前景樂觀，值得研究開發(fā)和利 用。3.2苦豆子是多年生草木根莖地下芽植物，為豆科槐屬植物。1930年被 正式列入美國藥典，在世界上廣泛引起重視并用于醫(yī)藥界。寧夏產(chǎn)區(qū)苦豆子 生物總堿含量最高可達(dá)5.218%,又產(chǎn)量較高，已成為中國第二個國家級藥材基 地。本實驗研究結(jié)果，苦豆子有效成分對uu有抑制作用，mic為0.125mg/ml 和

8、0.25mg/ml,為開發(fā)苦豆子在抗uu感染性疾病方面提供一定依據(jù)。參考文獻(xiàn)吳移謀，余敏君，占利生，等尿素支原體所致生殖道疾病的實驗研究中國皮 膚性病學(xué)雜志1991;5:83陳星燦，劉安定，宮錫坤.中藥抗菌作用研究中醫(yī)藥學(xué)報1998;1:36-373 roberson ja, stemke gm.expanded serotyping scheme for ureaplasma urealyticum strains isolated from humans.j clin microbiol 1982;15:8124 ke nny ge, hoot on tm, roberts mc, et al.susceptibilities of genital mycoplasmas to the newer quinolones as determined by the agar dilution method.antimicrob agents che mothe