苦豆子有效成分對(duì)解脲支原體體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究

1、苦豆子有效成分對(duì)解腺支原體體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究徐文錦湯建中楊鳳琴（寧夏醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院寧夏銀川750021）【摘要】目的：觀察解服支原體（uu）對(duì)苦豆子有效成分的敏感性。方法：運(yùn) 用幾何級(jí)稀釋法測(cè)定最小抑菌濃度（mic）。結(jié)果：苦豆子總堿、苦參素對(duì)uu有 一定的抑菌作用，其mic分別為0.125mg/ml和0.25mg/ml。結(jié)論：苦豆子有效 成分對(duì)uu有體外抑菌作用?！娟P(guān)鍵詞】有效成分；解嫌支原體；非淋菌性尿道炎【中圖分類(lèi)號(hào)】r285.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】1008-6455 （ 2010） 11-0183-02近年來(lái)，非淋菌性尿道炎（ngu）已成為當(dāng)今常見(jiàn)的性傳播疾病d） 1,受到

2、人們廣泛關(guān)注。臨床用于治療的抗牛素耐藥菌株日益增多，給治療帶來(lái) 了很大困難。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)中草藥進(jìn)行了大量的抑菌實(shí)驗(yàn)研究，取得很大進(jìn)展 。我們用寧夏道地藥材苦豆子作體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究，為中醫(yī)藥治療uu感染性 疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株：uu3型由首都兒科研究所饋贈(zèng)。1.1.2培養(yǎng)基：珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)。注冊(cè)號(hào)：粵食藥管械（試）字 2004 第 2060096 號(hào)。1.1.3藥品與儀器：苦豆子總堿（國(guó)藥準(zhǔn)字：h64020286）；苦參堿（國(guó) 藥準(zhǔn)字：h64020273）；槐果堿均為寧夏紫荊花藥業(yè)股份有限公司提供。羅紅霉 素 江蘇黃河藥業(yè)股份有限公

3、司牛產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字h19991092；電熱恒溫培養(yǎng)箱（d np9 2 7 2,上海）；生物安全柜（bhc 1 3 0 0 ii a / b 3 ,蘇州安泰）。1.2方法1.2.1解豚支原培養(yǎng)：將uu3型標(biāo)準(zhǔn)菌株用2ml培養(yǎng)基在室溫下混勻溶 于無(wú)菌試管中，密封。置于37°c恒溫培養(yǎng)箱中孵育18-36h,當(dāng)培養(yǎng)液顏色由黃 變?yōu)榧t色且液體澄清，表示支原體培養(yǎng)陽(yáng)性，保存于一37°c冰柜備用。1.2.2支原體菌液的制備及菌數(shù)測(cè)定(ccu測(cè)定)3：取無(wú)菌試管10支, 各管分別加0.9ml的uu培養(yǎng)液，第1支試管加第三代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液0.1ml,輕 輕混勻，從第1管中取出0.1ml加入第2

4、支試管，混勻，依次將待測(cè)菌液用培養(yǎng) 基以10倍稀釋法逐管稀釋成101-1010系列濃度，置37 °c恒溫培養(yǎng)箱，一周后 觀察uu生長(zhǎng)情況，以發(fā)生顏色變化的最高稀釋度作為顏色改變單位(color change unitccu),貝！j菌液濃度以ccu/ml計(jì)。1.2.3mic的測(cè)定4：將uu菌株連續(xù)傳代三次，取第三代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 菌液(106ccu/ml),用其相應(yīng)培養(yǎng)基稀釋至l×105ccu/ml作為工作液。在 96(8×12)孔聚乙烯細(xì)胞培養(yǎng)板的每排每孔加培養(yǎng)液100ul,每排第二孔分別 加100ul藥液8mg/ml,從第二孔開(kāi)始，用微量移液管

5、反復(fù)吹打10次混勻，吸出 100ul至下一孔，再混勻，依此類(lèi)推，直至第十一孔，混勻后吸出100ul棄去。 從第一孔至第十一孔，每孔依次加工作菌液100ul,第十二孔再補(bǔ)加培養(yǎng)液looul 這樣藥物濃度從第2 11孔，依次為，4mg/ml, 2mg/ml, lmg/ml, 0.5mg/ml, 0.25mg/ml, 0.125mg/ml, 00625mg/ml 0.0312mg/ml, 0.016mg/ml, 0.008mg/ml共十個(gè)稀釋濃度。第1空為陽(yáng)性對(duì)照，第12孔為陰性對(duì)照，蓋上板蓋，用液體 石蠟密封，輕搖混勻，置于37°c溫箱孵育。不加藥組培養(yǎng)基中酚紅指示劑由橘 黃色變?yōu)榧t色，

6、表示uu生長(zhǎng)，加藥組不出現(xiàn)顏色變化的最小濃度為最小有效抑 制支原體生長(zhǎng)的藥物濃度(mic)。2結(jié)果苦豆子總堿、苦參堿有明顯抑菌效果，其mic為0.125mg/ml和025mg/ml；槐果堿抑菌效果較差，最低抑菌濃度mic lmg/ml，見(jiàn)表表1幾種藥品的不同濃度對(duì)解腺支原體的抗菌活性3討論3.1解腺支原體是引起泌尿生殖道炎癥(ngu)及男女不孕不育的主要病 原體,也是性傳播的常見(jiàn)病原體。目前，在臨床上,以抗生素為主要治療手段，首 選藥物主要以四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和氟嗤酮類(lèi)為主。越來(lái)越多的研究顯示uu 對(duì)四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)藥物產(chǎn)生明顯耐藥性,嗤諾酮類(lèi)藥物目前也發(fā)現(xiàn)有較多耐 藥的uu菌株。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)

7、道，常用的抗生素耐藥性由高到低為:環(huán)丙沙星 (57.0%)羅紅霉素(47.3%)、氧氟沙星(43.9%)、壯觀霉素(35.2%)、司帕霉素(25.5%) 等。在這種情況下，尋找對(duì)uu具有抗菌作用的中草藥作新藥源，尤顯重要，且 中草藥可復(fù)方使用，不易產(chǎn)生耐藥菌株，臨床應(yīng)用前景樂(lè)觀，值得研究開(kāi)發(fā)和利 用。3.2苦豆子是多年生草木根莖地下芽植物，為豆科槐屬植物。1930年被 正式列入美國(guó)藥典，在世界上廣泛引起重視并用于醫(yī)藥界。寧夏產(chǎn)區(qū)苦豆子 生物總堿含量最高可達(dá)5.218%,又產(chǎn)量較高，已成為中國(guó)第二個(gè)國(guó)家級(jí)藥材基 地。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，苦豆子有效成分對(duì)uu有抑制作用，mic為0.125mg/ml 和

8、0.25mg/ml,為開(kāi)發(fā)苦豆子在抗uu感染性疾病方面提供一定依據(jù)。參考文獻(xiàn)吳移謀，余敏君，占利生，等尿素支原體所致生殖道疾病的實(shí)驗(yàn)研究中國(guó)皮 膚性病學(xué)雜志1991;5:83陳星燦，劉安定，宮錫坤.中藥抗菌作用研究中醫(yī)藥學(xué)報(bào)1998;1:36-373 roberson ja, stemke gm.expanded serotyping scheme for ureaplasma urealyticum strains isolated from humans.j clin microbiol 1982;15:8124 ke nny ge, hoot on tm, roberts mc, et al.susceptibilities of genital mycoplasmas to the newer quinolones as determined by the agar dilution method.antimicrob agents che mothe