動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體上課

1、2.2 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程植物細(xì)胞植物細(xì)胞A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體原生質(zhì)體A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂分化發(fā)育分化發(fā)育愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物體細(xì)胞雜交過程植物體細(xì)胞雜交過程動(dòng)物細(xì)胞融合請(qǐng)閱讀課本52頁，回答問題1.動(dòng)物細(xì)胞融合的定義？2.細(xì)胞融合的結(jié)果？3.常用的誘導(dǎo)方法有哪些？4.動(dòng)物細(xì)胞融合的原理材料1: 1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什

2、么用途呢？一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.1.概念：概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合（動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion），是指兩個(gè)），是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程,也稱也稱細(xì)胞雜交。細(xì)胞雜交。2.2.結(jié)果：結(jié)果：3.3.誘導(dǎo)方法：誘導(dǎo)方法：形成形成雜交細(xì)胞。雜交細(xì)胞。（融合后形成的具有原來（融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞單核細(xì)胞）。）。聚乙二醇（化學(xué)）、聚乙二醇（化學(xué)）、滅活的病毒滅活的病毒（生物）、電擊（物理）等（生物）、電擊（物理）等5.融合過程：融合過程：誘導(dǎo)方法：誘導(dǎo)方法：物理方法：物理方法：化學(xué)法：化學(xué)法：

3、生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒電激等電激等聚乙二醇（聚乙二醇（PEG) 為什么滅活的為什么滅活的 病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過程：融合過程：植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合原理原理融合前處理融合前處理使用的酶使用的酶誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法主要用途主要用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶胰蛋白酶 物理方法物理方法（離心、振蕩、電激）離心、振蕩、電激） 化學(xué)方法（化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法物理

4、、化學(xué)方法滅活的病毒滅活的病毒獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合6.意義：意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。7.應(yīng)用：應(yīng)用：最重要的用途是最重要的用途是制備單克隆抗體制備單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 物理法：物理法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法：誘導(dǎo)融合的方法誘導(dǎo)融合的方法原理：原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性過程：過程：離心、震動(dòng)、電激離心、震動(dòng)、電激聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)滅活的病毒滅活的病毒動(dòng)、植物細(xì)胞

5、融合的主要區(qū)別動(dòng)、植物細(xì)胞融合的主要區(qū)別用途：用途：最重要的用途是最重要的用途是制備單克隆抗體制備單克隆抗體思考思考？1. 1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生如何產(chǎn)生？2. 2. 抗體抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里？主要分布在哪里？3. 3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？動(dòng)物細(xì)胞融合的重要應(yīng)用單克隆抗體n1.抗體是什么n2.抗體是如何產(chǎn)生的n3.抗體主要分布于哪里？回顧舊知識(shí)？可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免球蛋白蛋白機(jī)體接受抗原刺激后，B細(xì)胞增殖分化為效應(yīng)B細(xì)胞，分泌產(chǎn)生抗體動(dòng)物細(xì)胞融合的

6、重要應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合的重要應(yīng)用單克隆抗體單克隆抗體n1.抗體是什么n2.抗體是如何產(chǎn)生的n3.抗體主要分布于哪里？回顧舊知識(shí)？可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免球蛋白蛋白主要分布在血清中。4.4.與抗原作用的特點(diǎn)？用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？思考思考？1. 1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生如何產(chǎn)生？2. 2. 抗體抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里？主要分布在哪里？3. 3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該

7、法制備抗體的特點(diǎn)：該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動(dòng)動(dòng)物物體體內(nèi)內(nèi)抗抗體體抗抗原原 思考：n1. 一種效應(yīng)B細(xì)胞能產(chǎn)生幾種抗體？n2.免疫反應(yīng)中，產(chǎn)生的效應(yīng)B細(xì)胞種類？n3.能否通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)得到大量能產(chǎn)生單一抗體的效應(yīng)B細(xì)胞？n4.如何使效應(yīng)B細(xì)胞獲得無限增殖的能力？1種很多種，多達(dá)百萬種以上不能，效應(yīng)B細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下不能無限增殖讓效應(yīng)B細(xì)胞與能在體外無限增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合（二）單克隆抗體的制備一、請(qǐng)大家閱讀課本P53-54啊單克隆抗體制備的文字及示意圖，思考下列問題n根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)想

8、，融合后細(xì)胞的雜交細(xì)胞具備什么特點(diǎn)？n 實(shí)驗(yàn)過程中如何獲得效應(yīng)B細(xì)胞？n效應(yīng)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞放在一起，誘導(dǎo)兩種細(xì)胞融合的方法有哪些?n用滅活病毒處理后，培養(yǎng)基中可能有幾種細(xì)胞？n用什么方法篩選出效應(yīng)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞？n經(jīng)過篩選后得到的雜交瘤細(xì)胞有幾種？為什么？二、小組討論，到黑板板書講解，展示成果n如何利用特異性的雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)大量的單克隆抗體？一、請(qǐng)大家閱讀課本P53-54,單克隆抗體制備的文字及示意圖，思考下列問題思考下列問題n1、實(shí)驗(yàn)過程中如何獲得效應(yīng)B細(xì)胞？n2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)想，融合后細(xì)胞的雜交細(xì)胞具備什么特點(diǎn)？n3、用滅活病毒處理后，培養(yǎng)基中可能有幾種細(xì)胞？n

9、4、用什么方法篩選出效應(yīng)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞？n5、經(jīng)過篩選后得到的雜交瘤細(xì)胞有幾種？為什么？n6、如何篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？ 單克隆單克隆抗體抗體: :單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué) 性性質(zhì)單一特異性強(qiáng)的抗體質(zhì)單一特異性強(qiáng)的抗體n利用效應(yīng)利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能n利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性n利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞n利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案： 1、過程、過程 注射抗

10、原注射抗原已免疫的已免疫的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、細(xì)胞融合、篩選篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體的制備2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高（1）作為診斷試劑）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速 看書上看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過

11、程步驟的圖解的請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？字母按正確順序連接起來。順序是？ 有夢(mèng)想，才會(huì)有創(chuàng)造！ 已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人小鼠、人小鼠、人兔、人兔、人雞、鼠雞、鼠兔、雞兔、雞鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成功完成了酵母菌功完成了酵母菌雞雞 、人、人胡蘿卜胡蘿卜 等細(xì)胞的融合。等細(xì)胞的融合。 想了解更多信息，可通過網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注想了解更多信息，可通過網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。生物種間雜交生物種間雜交

12、想像圖想像圖1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.B.沒經(jīng)過免疫的沒經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞A2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ）A. 誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.

13、所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞都能形成雜種細(xì)胞 D3. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（ ）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合 B.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D4.4.只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（只能使動(dòng)

14、物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（ ）A APEGPEG B B滅活的病毒滅活的病毒 C C電刺激電刺激 D D離心離心B5. 5. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A.A. B. B.C.C. D.D. C C6.

15、“6.“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ）A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物在單克隆抗體上連接抗癌藥物 DA A 、 B B細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞, ,請(qǐng)據(jù)圖回答問題請(qǐng)據(jù)圖回答問題: :A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞C細(xì)細(xì)胞胞D細(xì)細(xì)胞胞(1)(1)若若A A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞細(xì)胞為淋巴細(xì)胞, ,那么那么D D細(xì)胞細(xì)胞稱為稱為 細(xì)胞細(xì)胞,D,D細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的特征特征, ,一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的

16、性性質(zhì)質(zhì), ,通過通過 方式產(chǎn)生大量細(xì)胞方式產(chǎn)生大量細(xì)胞, ,我們稱之我們稱之為為 過程過程; ;另一方面能分泌大量的抗體另一方面能分泌大量的抗體, ,我我們把該過程分泌的抗體稱們把該過程分泌的抗體稱 . .雜交瘤雜交瘤連續(xù)分裂連續(xù)分裂有絲分裂有絲分裂單克隆單克隆單克隆抗體單克隆抗體練一練練一練(2)D(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是 , ,合成該物質(zhì)的場(chǎng)所是合成該物質(zhì)的場(chǎng)所是 , ,它是由它是由 控制合成的控制合成的, ,合成過程包括合成過程包括 和和 兩個(gè)重要步驟兩個(gè)重要步驟. .球蛋白球蛋白核糖體核糖體基因基因轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯翻譯(3)D(3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有 作用作用, ,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于 強(qiáng)