藥物qt間期延長潛在作用研究非臨床研究技術(shù)指導原則及起草說明(征求意見稿)

1、指導原則編號:藥物qt間期延長潛在作用研究非臨床研究技術(shù)指導原則二0三年 月一、概述3二、基本原則3三、試驗設(shè)計的基本要求5四、研究內(nèi)容7五、數(shù)據(jù)處理與綜合風險評估9六、附錄 試驗方法七、參考文獻八、起草說明%1. 概述心電圖中qt間期（從qrs波群開始到t波結(jié)束）反映心室去極 化和復極化所需的時間。當心室復極化延遲和qt間期延長時，尤其伴有其他風險因素（如 低血鉀、結(jié)構(gòu)性心臟病、心動過緩）時，患者發(fā)生室性快速心律失常 的風險增加，包括尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速（torsade de pointes, tdp ）。（一）研究目的本指導原則主要是關(guān)于評價受試物延遲心室復極化潛在作用的 非臨床研究策略

2、，以及對非臨床研究信息的分析和綜合風險性評估。qt間期研究結(jié)果可以和其他信息一起，用來闡明藥物作用機理, 以及人體的延遲心室復極化和延長qt間期的風險評估。（二）適用范圍本指導原則適用于指導中藥、天然藥物、化學藥物的qt間期延 長潛在作用研究。%1. 基本原則（一）試驗方法藥物安全藥理學研究技術(shù)指導原則中所述的關(guān)于研究設(shè)計的 基本原則和推薦方法，也適用于本指導原則。建議采用體內(nèi)和體外的 方法進行研究。應基于受試物的藥效學、藥代動力學、安全性的特點來對研究方 法、風險性證據(jù)進行個體化分析。（）執(zhí)行g(shù)lp的要求體外試驗建議執(zhí)行g(shù)lp,其它試驗遵循glp,追加研究應在最大 可行限度內(nèi)遵循glp。（三

3、）受試物中藥、天然藥物：受試物應能充分代表臨床試驗樣品或上市藥品。 應采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應為中試或 中試以上規(guī)模的樣品，否則應有充分的理由。應注明受試物的名稱、 來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，由于中藥的 特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質(zhì)量穩(wěn) 定性及均勻性。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進 行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應標明名稱、標準、批號、規(guī)格 及生產(chǎn)單位?；瘜W藥物：受試物應采用工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映 臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。受試物應注 明名稱、來源、批號、含量（或

4、規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并 附有研制單位的自檢報告。試驗中所用輔料、溶媒等應標明批號、規(guī) 格和生產(chǎn)單位，并符合試驗要求。在藥品研發(fā)的過程中，若受試物的工藝發(fā)生可能影響其安全性的變化，應進行相應的安全性研究?；瘜W藥物試驗過程中應進行受試物樣品分析，并提供樣品分析報 告。成分基本清楚的中藥、天然藥物也應進行受試物樣品分析。三、試驗設(shè)計的基本要求（-）生物材料應選擇合適的試驗體系和動物種屬。成年大鼠和小鼠復極化的離 子機制不同于包括人在內(nèi)的大動物種屬（在成年大鼠.小鼠，復極化 的主要離子流是it0）.因此用這些種屬的組織或動物是不合適的。體外研究可采用離體心肌細胞、培養(yǎng)心肌細胞系或克隆的人離子

5、 通道的異種表達體系、離體心臟標本。用于體外研究的組織和細胞標 本可來源于不同的實驗動物，包括兔、雪貂、豚鼠、犬、豬。當采用 原代組織或細胞時，應考慮所用標本的特點及來源，因為細胞離子通 道的分布因其所處的不同區(qū)域及細胞類型而不同。整體研究的動物包括犬、猴、豬、兔、雪貂以及豚鼠。動物應符 合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求，并具有實驗動物質(zhì)量合格證（動物統(tǒng)一 寫）。（二）樣本量體外：體外樣本量每組不少于4個平行樣本，一般35個組。體內(nèi)試驗：試驗組的組數(shù)及每組動物數(shù)的設(shè)定，應以能夠科學合 理地解釋所獲得的試驗結(jié)果，恰當?shù)胤从秤猩飳W意義的作用，并符 合統(tǒng)計學要求為原則。小動物每組一般不少于10只，大動物每

6、組一 般不少于6只。動物一般要求雌雄各半。（三）劑量體外研究中，受試物的濃度要有較寬的范圍，應涵蓋和超過預期 臨床最大治療血藥濃度。試驗中逐步提高藥物濃度直到出現(xiàn)特征性的 濃度反應曲線或達到因理化特性所限的最高濃度。除了受到細胞或 組織活性的限制外，理想狀態(tài)下應有充分的藥物暴露時間以獲得穩(wěn)態(tài) 電生理效應，應注明藥物暴露時間的長短。體外研究中應使用合適的 陽性對照藥，以明確該體外試驗系統(tǒng)的敏感性。體外研究應確定受試物的濃度效應關(guān)系。無明顯影響作用時，應 對濃度選擇的范圍進行說明。整體試驗劑量范圍應與安全藥理學研究技術(shù)指導原則中所討 論的內(nèi)容一致，如果可能，劑量范圍都應包括和超過預期的人暴露水 平

7、。給藥劑量可能會因動物的耐受性而受到限制，如動物出現(xiàn)嘔吐、 震顫、活動性過度等。當研究用于評價延遲心室復極化程度與原藥及 代謝產(chǎn)物濃度關(guān)系時，可采用持續(xù)靜脈滴注的方式控制藥物暴露水平。監(jiān)測受試物及其代謝產(chǎn)物的暴露量有助于解釋藥物的量效關(guān)系或劑 量或濃度反應，也為設(shè)計可能追加的試驗提供信息。（四）對照體外離子通道和動作電位時程試驗中應采用次最大有效濃度的 陽性對照藥說明試驗系統(tǒng)的反應性，并且應用于每項試驗。整體試驗 研究中使用陽性對照藥則是為了驗證試驗系統(tǒng)的敏感性，但不必在每 一項試驗中都使用陽性對照藥。如受試物在化學結(jié)構(gòu)/藥理分類上屬于與延長人體qt間期有關(guān)的 藥物時，在體內(nèi)外研究中使用現(xiàn)有同

8、類藥物有利于比較受試藥物與參 比物的作用強度。（五）給藥途徑整體動物試驗，首先應考慮與臨床擬用途徑一致，可以考慮充分 暴露的給藥途徑。對于在動物試驗中難以實施的特殊的臨床給藥途徑, 可根據(jù)受試物的特點選擇，并說明理由。（六）觀察時間結(jié)合受試物的藥效學和藥代動力學特性、受試動物、臨床研究方 案等因素選擇觀察時間點和觀察時間。%1. 研究內(nèi)容（一）主要研究方法1、采用離體動物或人心肌細胞、培養(yǎng)心肌細胞系或克隆的人離 子通道的異種表達體系測定離子流。2、測定清醒或麻醉動物的ecg參數(shù)。3、在離體心臟標本進行動作電位參數(shù)測定，或在麻醉動物中進 行能體現(xiàn)動作電位時程的特異性電生理參數(shù)檢測。4、在離體心臟

9、標本或動物進行致心律失常作用測定?？上冗M行1、2研究，再進行3、4研究（繼續(xù)在征求專家意見， 也請多反饋）。綜上所述，可采用體內(nèi)外方法從4個不同功能水平對藥物的qt 間期作用進行研究，并且相互之間有互補作用。（）追加的研究（follow-up studies ）當非臨床研究的結(jié)果不一致和/或臨床研究結(jié)果與非臨床研究結(jié) 果不一致時，可通過回顧性評價和追加的研究進行分析。此種情況下, 追加的研究結(jié)果可能成為綜合風險評估的重要組成部分。追加的研究是為了更深入地了解或提供更多的關(guān)于受試物潛在 的延遲人心室復極化和延長qt間期的作用。這些研究可以提供更多 有關(guān)作用強度、作用機理、劑量反應曲線的斜率或最大

10、反應幅度的信 息。追加的研究可以針對某一特殊問題設(shè)計實驗，因此各種體外或體 內(nèi)的研究設(shè)計都可應用。如藥物有蓄積、臨床長期使用，需考慮多次給藥的觀察。追加的內(nèi)容:（繼續(xù)在征求專家意見，希望網(wǎng)上征求到更多信息）。1、選用冠狀動脈灌注兔左心室肌楔形標本進行研究：本實驗的特點是分析受試物是否延緩心臟復極、是否增大跨室壁 復極異質(zhì)性、以至產(chǎn)生早期后除極（ead）和觸發(fā)激動，并直觀觀察 是否誘發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室速（tdp）。%1. 數(shù)據(jù)處理與綜合風險評估根據(jù)詳細的試驗記錄，選用合適的統(tǒng)計方法，對數(shù)據(jù)進行定性和 定量分析。綜合風險評估應該是基于科學的、對受試物個性化的考慮。這種 綜合風險性評估有益于臨床研究設(shè)計

11、和其結(jié)果的解釋。應結(jié)合藥效、 毒理、藥代以及其他研究資料進行綜合評價，為藥物應用于人體的安 全性提出建議。風險評估應考慮受試物是否在化學結(jié)構(gòu)或藥理分類上屬于可延 長人qt間期作用的藥物，如抗精神病類藥物，組胺h1受體拮抗劑、氟唾酮類等。這可能會影響參比制劑的選擇并會納入綜合風險評估中。qt研究的非臨床研究的策略如下圖v化學/藥理分類體外ikr研究整體qt分析追加的研究綜合風險性評估v相關(guān)非臨床/臨 床研究信息風險評估六、附錄試驗方法（一）體外電生理ikr研究（電壓鉗電生理試驗）體外ik試驗是采用原代或表達的ik通道蛋白（如由herg編碼 的蛋白）評價藥物對離子電流的影響。（-）整體qt研究整體

12、qt研究主要是測定心室復極參數(shù)，如qt間期。該試驗可 在安全性藥理學研究中同時進行，這樣可減少動物和其他資源的使用。qt間期和心率是相反的、非線性的關(guān)系，且二者之間的關(guān)系在 不同的種屬和動物甚至同一種屬之間都不相同。因此心率改變會影響 qt間期，這會干擾對受試物影響心室復極化和qt間期的評價。動 物心率的變化可能來自兩種重要的情況：一種是自主神經(jīng)張力改變所 致，一種是受試物對心率的影響。因此，在解釋整體動物實驗結(jié)果時 要充分考慮同時相伴的心率的變化。理想的qt間期數(shù)據(jù)獲得應該是 在給予受試物后，與對照品和基線在相似的心率水平下進行比較。如 果心率變化不是因為受試物引起，可通過訓練動物或采用麻醉

13、動物來 減少心率因素的影響。當心率變化是因為受試物引起時，最常用的方 法是根據(jù)心率校正qt間期（qtc）,如bazett和fridericia法；心率 校正公式的選擇須根據(jù)試驗系統(tǒng)得來的數(shù)據(jù)加以判斷，如果給藥組和 對照組心率差異較大，可能校正公式對于評價qt間期延長風險是無 效的，此時可改用心臟起搏器來獲得固定的心率。對qt/rr關(guān)系進 行分析可能更合適，包括用公式對個體動物qt間期數(shù)據(jù)進行校正。（三）追加的方法和備選：追加的內(nèi)容：（繼續(xù)在征求專家意見，希望網(wǎng)上征求到更多信息）。（1）冠狀動脈灌注兔左心室肌楔形標本試驗方法：選用新西蘭 大耳兔雌雄各半，制備經(jīng)冠狀動脈灌注左心室楔形標本。選用受試

14、物 4個測試濃度，分別為游離血漿治療濃度（ftpc）的1、3、10、30 倍。并選用司帕沙星為陽性對照藥，待藥物充分灌注標本后，在刺激 頻率為0. 5hz條件下同步記錄和分析跨壁心電圖和心內(nèi)外膜側(cè)心肌 細胞跨膜動作電位。觀察指標包括：qt間期、tp-e間期及tp-e/qt 比值、ead的發(fā)生率及與ead相關(guān)的現(xiàn)象（r-on-t早搏和tdp）。并 采用tdp發(fā)生風險評分系統(tǒng)進行評估叫表1評估tdp發(fā)生危險性的評分系統(tǒng)-10123aqt間期（）<55v1010 v2020 w30>30atp-e/qt 比值<5> 5 v1010 v2020 w30>30(%)2468

15、2 相 ead±ead*ead不伴ead伴tdpw r-on-t w"r-on-t w期前興奮期前興奮bcl=2000ms； ±ead表示bcl為2000ms時不太明顯，但當bcl為4000ms是則很明顯。最大tdp評分是14分。%1. 參考文獻1. ich. ich guidance for industry ich s7a: safety pharmacologystudies for human pharmaceuticals. 2001.2、ich. ich guidance for industry ich s7b: safety pharmacolog

16、ystudies for assessing the potential for delayed ventricular repolarization(qt interval prolongation ) by human pharmaceuticals. 2005.3、liu t, brown bs, wu y, antzelevitch. c, kowey pr, yan gx. blinded validation of the isolated arterially perfused rabbit ventricular wedge in preclinical assessment

17、of drug-induced proarrhythmias. heart rhythm 2006; 3: 948-956八、起草說明(-)背景藥物qt間期延長潛在作用研究非臨床研究技術(shù)指導原則，在中 國以前沒有此指導原則。本指導原則在起草過程中主要參考了人用藥 品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會的(international conference on harmonisation of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use,簡稱ich )的指導原則，并結(jié)合我國 實際國情進行修訂，希望本指導原則在實際應用中能夠切實可行。(%1) 有