補(bǔ)骨脂中異補(bǔ)骨脂素的提取分離綜述

1、補(bǔ)骨脂中異補(bǔ)骨脂素的提取分離與檢識綜述【摘要】本文綜述了補(bǔ)骨脂的化學(xué)成分、提取分離方法及藥理作用的相關(guān)內(nèi)容【關(guān)鍵詞】補(bǔ)骨脂素異補(bǔ)骨脂素化學(xué)成分、提取、分離、藥理作用【正文】補(bǔ)骨脂也稱破骨子，為豆科植物補(bǔ)骨脂psoralea corylifolia l.的干燥成熟 果實。其具有溫腎助陽，納氣，止瀉的作用。用于陽痿遺精，遺尿尿頻，腰膝冷 痛，腎虛作喘，五更泄瀉;外用于治白瘢風(fēng)，斑禿等證?，F(xiàn)代臨床上還用于白瘢 風(fēng)，斑禿，腳氣，子宮出血，白細(xì)胞減少癥，外陰白色病變。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù) 的發(fā)展，人們對補(bǔ)骨脂進(jìn)行了進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂在抗腫瘤、抗衰老、抗骨 質(zhì)疏松等方而也有一定作用。故對補(bǔ)骨脂的研究具有其

2、重要意義，其中對于其有 效成分的了解是必不可少的。*補(bǔ)骨脂的化學(xué)成分補(bǔ)骨脂中含有多種活性成分，目前國內(nèi)外研究人員已從補(bǔ)骨脂中分離出香豆 素類、黃酮類、單祜酚類，以及豆笛醇、谷笛醇葡萄糖昔、十三烷、棉子糖等化 合物四十余種。香豆素類化合物主要有咲喃香豆素類和擬雌內(nèi)酯類兩種。其屮咲喃香豆素主 要含有補(bǔ)骨脂素(pso ralen) 異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen) 8甲氧補(bǔ)骨脂素 (8-methoxypsora len)和 bakuch icin 等 4 種成分。黃酮類化合物主要有異黃酮類、二氫黃酮類、查耳酮類化合物。其中異黃酮 類化合物主耍含有補(bǔ)骨脂異黃酮(co ry lin八新補(bǔ)骨脂異黃酮

3、(neobavaisoflavone) 補(bǔ)骨脂異黃酮醛(corylina l) 補(bǔ)骨脂醇(psoralenol)等;查 耳酮類化合物主要包括補(bǔ)骨脂查耳酮(bavachalcone) 異補(bǔ)骨脂查耳酮 (isobavachalcone )、新補(bǔ)骨脂查耳酮(neobavacha leone)異新補(bǔ)骨脂查耳酮 (isoneobavachalcone) o單祜酚類化合物單祜酚類化合物是植物揮發(fā)油的主要組成成分，補(bǔ)骨脂酚 (bakuchio 1)是發(fā)現(xiàn)最早的單菇酚類化合物。后來又發(fā)現(xiàn)的單菇酚類化合物主要 有2, 3環(huán)氧補(bǔ)骨脂酚(2, 3-hydroxybakuchio 1) 梵基補(bǔ)骨脂酚( k3 hydm

4、xyhakueh 記)和厶 1,2 徑基補(bǔ)骨脂酚( l,2-hydmxybakuch io 1)。其他成分有豆綃醇、谷毎醇葡萄糖莒、十三烷、棉子糖、對疑基苯甲醛、樹脂等。在這些成分中，香豆素類，黃酮類及單祜酚類化合物是補(bǔ)骨脂的主要活性成 分。如:補(bǔ)骨脂素(psoralen)分子式cnh6o3,分子量186.16。無色針狀結(jié)晶(乙醇), mp189190°c,有揮發(fā)性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙 醵和石油醵。異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen)分子式cnh6o3，分子量186.16。無色針狀結(jié)晶, mp.137138°c,溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶

5、于水、乙醛，難溶于 冷石油隴。補(bǔ)骨脂素界補(bǔ)骨脂素補(bǔ)骨脂乙素(isobavachalcone)又稱補(bǔ)骨脂酮、異補(bǔ)骨脂查耳酮。分子式 c20h20o4，分子量324.36。黃色片狀結(jié)晶(甲醇水)，mp. 166167°c。補(bǔ)骨脂甲素(coryfolin)又稱補(bǔ)骨脂黃酮，分子式c20h20o4,分子量324.36。 無色針狀結(jié)晶,mp191192°c。甲素補(bǔ)骨脂酚(bakuchiol),分子式c18h24o ,分子量256.37。淺黃色油狀液補(bǔ)骨脂酚其屮，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素是用于抗白瘢風(fēng)的主要有效成分，具有光敏性 質(zhì)。近來研究表明，補(bǔ)骨脂素對多種動物及人的腫瘤生長有明顯抑制作用

6、，異補(bǔ) 骨脂素具有與雌激素類似的促細(xì)胞增殖作用，可調(diào)節(jié)機(jī)體的內(nèi)分泌失調(diào)狀態(tài)從 而達(dá)到緩解更年期綜合癥的效果。因此，研究補(bǔ)骨脂素和界補(bǔ)骨脂素的提取、分 離方法具有重要意義。二補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取分離方法1補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取及萃取補(bǔ)骨脂因含有大量油脂和糖類成分，易發(fā)牛皂化反應(yīng)和形成膠狀物，難以過 濾。因此一般不用堿提酸沉法提取。補(bǔ)骨脂素大多采用乙醇來提取。乙醇的純度 越高提取出的補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素應(yīng)越多，但所用乙醇濃度太大，補(bǔ)骨脂中大 量脂溶性物質(zhì)也會被溶解出來，使得提取液濃縮后過于粘稠，過濾較困難，增加 實驗難度，而且所得產(chǎn)物雜質(zhì)多，沉淀外觀差。采用50%乙醇提取則較優(yōu)，雖然 產(chǎn)

7、率略低，但溶出的脂溶性雜質(zhì)會減少，實驗難度降低，在牛產(chǎn)上有較大優(yōu)勢。關(guān)于補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取工藝，目前主要有浸提法、回流法、超聲 法、索氏法、微波輔助提取、滲漉法、超臨界co2流體法等。超臨界co2萃取 法雖然簡單，可以獲得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素混合晶體，但其運(yùn)行成本高，且難 以大規(guī)模生產(chǎn)，也不適合實驗室采用。有關(guān)文獻(xiàn)應(yīng)用高效液相色譜含量測定法， 對浸提法、回流法、超聲法、索氏法四種方法的提取效率進(jìn)行了實驗比較，以補(bǔ) 骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總含量以及出膏率為考察指標(biāo)，索 氏提取法與浸提法、回流法提取效果是相當(dāng)?shù)模鼈兌季哂刑崛⊥耆?，損失少等 優(yōu)點，但由于其提取藥量有限，且

8、提取吋間長，使其應(yīng)用受限。浸提法溶劑用量 大，提取時間長。超聲提取法雖然操作簡便，提取時間短，但提取效果較差?；?流法操作簡便，提取效率高，綜合考慮實驗的經(jīng)濟(jì)性、方便性、實用性，回流法應(yīng) 該是補(bǔ)骨脂的最適提取方法。除此以外，影響補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取的因素還有提取時間和提取液 濃度等。通過實驗，可進(jìn)一步合理優(yōu)化這些條件，使提取效果更好。在用溶劑法提取時，為減少雜質(zhì)，得到更純的粗品，通常要進(jìn)行萃取。常用 的萃取溶劑為乙酸乙酯，如95%乙醇滲漉法或90%乙醇冷浸法提取均采用乙酸乙 酯萃取，由于補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素幾乎不溶于水，所需成分幾乎都留在了酯層。 75%乙醇滲漉法提取液則減壓濃縮至無醇味

9、，依次用石油醞、乙酸乙酯、正丁醇 萃??；95%乙醇冋流提取液是減壓濃縮得濃縮液后加適量水混溶，依次用石油 醯、乙酸乙酯、正丁醇萃??；工業(yè)乙醇冷浸浸出液則是減壓濃縮后，以甲醇：水 （9： 1）溶解，然后以石油醯和氯仿依次萃取。有的方法如50%乙醇滲漉法提取則 可不萃取，直接回收溶劑析出沉淀。2補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分離常用的方法有硅膠柱色譜法，氧化鋁干柱色譜法，聚酰胺柱色譜法， sephadexlh-20柱層析法，d101大孔樹脂法等。隨著儀器設(shè)備的發(fā)展，高速逆 流色譜法（high-speed countercurrent chromatography,簡稱hsccc）作為一種 新型的分離方法為

10、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分離提供了新的途徑。柱色譜法最常用的為硅膠柱色譜，為使分離效果好，常采用濕法裝柱，干法 上樣，梯度洗脫，并可結(jié)合其它幾種柱色譜，使達(dá)到良好的分離效果。根據(jù)文獻(xiàn), 己經(jīng)實驗驗證，分離效果較好的具體方法有：法1用石油醞、乙酸乙酯、正丁醇依此萃取，取石油瞇萃取部位浸膏，經(jīng)反 復(fù)硅膠柱層析，用石油醛乙酸乙酯梯度洗脫，分離即可得異補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂 素和補(bǔ)骨脂定。若繼續(xù)取乙酸乙酯萃取部位浸膏，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，用石油瞇 乙酸乙酯梯度洗脫，還可分離得到化合物補(bǔ)骨脂查耳酮和補(bǔ)骨脂二氫黃酮；取 正丁醇萃取部位浸膏，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（氯仿甲醇梯度洗脫），結(jié)合sephadex lh20柱層析，

11、可分離得到化合物大豆昔和尿卩密噪。法2用乙酸乙酯萃取，再進(jìn)行常壓硅膠柱色譜。用石油醯：乙酸乙酯梯度洗 脫（100： 1,50： 1,25： 1,15： 1,10： 1,5： 1,2： 1,1： 1）,?。?0： 1）-（2： 1）部分 進(jìn)行硅膠柱色譜，經(jīng)反復(fù)分離純化，重結(jié)晶即可得補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨 脂查耳酮，補(bǔ)骨脂定。若繼續(xù)將正丁醇萃取物經(jīng)d-101大孔樹脂分離，以不同濃 度乙醇（0, 20%, 40% , 60%, 80% ）依次洗脫，取40%部分用聚酰胺柱色譜分離，用 甲醇（0,20%, 40%, 60%, 80% , 100% ）進(jìn)行梯度洗脫，取聚酰胺40%甲醇洗脫部 分經(jīng)硅膠柱

12、色譜，用氯仿：甲醇：水（7： 3： 1）洗脫，還可得大豆昔。取聚酰胺60% 甲醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜，用氯仿：甲醇：水（7： 3： 1）洗脫，得大豆昔元。法3用乙酸乙酯萃取，得總浸膏，力h400g 100200目硅膠h混勻，低溫烘 干后研細(xì)，上常壓柱（硅膠h, 100200日），先以石油瞇一丙酮（20： 1）洗脫、切 柱，尋找補(bǔ)骨脂和異補(bǔ)骨脂集屮的流份，得到粗品。然后用石油瞇一乙酸乙酯進(jìn) 行梯度洗脫，乙酸乙酯成一定比例遞增，用乙醇重結(jié)晶即可得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨 脂素的結(jié)晶。氧化鋁干柱色譜法則是用中性氧化鋁干法裝柱，干法上樣，以苯石油瞇（4： 1）并每50ml加入15滴丙酮為洗脫劑，展層至柱底，置

13、紫外燈下觀察，用刀 片切取兩段藍(lán)色熒光色帶，分別用甲醇回流提取，濾過，濾液回收溶劑至小體枳， 靜置析晶，抽濾，即可分別得到補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的結(jié)晶。柱色譜方法是常用的傳統(tǒng)的方法，但其工序是較復(fù)雜，產(chǎn)品提純較困難。比 起柱色譜，高速逆流色譜，作為一種新型高效的色譜分離技術(shù)，其具有制備量大、 分離效率高等優(yōu)點，近年來已得到廣泛應(yīng)用。其具體操作分為hsccc溶劑體系 的選擇及提取物的分離。根據(jù)文獻(xiàn)，用hplc對hsccc分離得到的各級成分進(jìn)行 跟蹤檢測，發(fā)現(xiàn)采用正己烷乙酸乙酯甲醇冰（7b3b5b5）溶劑體系，可以從190 mg粗提物中得到純度為99.4%的補(bǔ)骨脂素70.8 mg（ hsccc保留時

14、間247- 308 min）和純度為99.1 %的異補(bǔ)骨脂素（hsccc保留時間325380min） 4812 mg,得 率分別為37.3%和25.4%o高速逆流色譜從粗提物中一步分離得到了高純度補(bǔ)骨 脂素和異補(bǔ)骨脂素單體，是一種高效的分離方法。三補(bǔ)骨脂藥理作用1補(bǔ)骨作用體外試驗表明，補(bǔ)骨脂對分離破骨細(xì)胞有抑制作用。它能抑制分離破骨細(xì)胞 在骨片上形成的吸收陷窩的增加與擴(kuò)張。王建華等探討了補(bǔ)骨脂素體外對大鼠成 骨細(xì)胞增殖與分化的影響，結(jié)果說明補(bǔ)骨脂素體外能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖與分 化。楊榮平等觀察了補(bǔ)骨脂乙醇提取物對體外培養(yǎng)新牛大鼠顱骨成骨細(xì)胞的影響, 結(jié)果顯示補(bǔ)骨脂乙醇提取物中分離出的化合物能提

15、高大鼠顱骨成骨細(xì)胞aij£ 性及促進(jìn)其增值，為補(bǔ)骨脂治療骨質(zhì)疏松的有效成分。2光敏作用補(bǔ)骨脂素與8甲氧補(bǔ)骨脂素能促進(jìn)皮膚黑色素的合成，并使之沉積于皮下， 95%乙醇的補(bǔ)骨脂提取物對酪氨酸酶有明顯的激活作用，而酪氨酸酶是人體內(nèi)黑 色素合成的關(guān)鍵酶，因此認(rèn)為補(bǔ)骨脂系通過提高酪氨酸酶的活性使黑色素生成 的速度和數(shù)量增加。補(bǔ)骨脂素衍生物還能增加冠狀動脈及末稍血管血流量。3治療皮膚病querfe id等隨訪了從1979至1995年經(jīng)puva治療獲得完全緩解的早期皮膚 t細(xì)胞淋巴瘤病例66例，認(rèn)為puva是治療皮膚t細(xì)胞淋巴瘤的有效治療方法， 可以使該病長期緩解甚至治愈。國內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)，黑素細(xì)

16、胞的遷移和黑素合成 在口瘢風(fēng)復(fù)色過程中有重要作用。補(bǔ)骨脂對黑素細(xì)胞可溶性總蛋口合成和ckit 基因蛋白表達(dá)有促進(jìn)作用。張?zhí)熘确謩e釆用補(bǔ)骨脂素長波紫外線（puva ）和窄 譜中波紫外線（nb-uvb）照射治療146例尋常性銀屑病患者，并以銀屑病面積 和嚴(yán)重度指數(shù)（pasi）評價療效，分析照射劑量等對療效和復(fù)發(fā)的影響，結(jié)果顯示 nb-uvb治療尋常性銀屑病與puva相比，不良反應(yīng)較少，起效較快。4抗口血病作用沈建良等發(fā)現(xiàn)預(yù)激態(tài)的補(bǔ)骨脂素（pap）對白血病原代細(xì)胞具有顯著的殺傷 作用，有可能成為一廣譜抗白血病藥物。向陽等研究發(fā)現(xiàn)在4080 mg/l補(bǔ)骨脂 素與波長為360nm的uva照射10- 1

17、5m in是puva抗nb4, k562白血病細(xì)胞的 最佳作用點。蔡宇等采用mtt比色分析法測定補(bǔ)骨脂素對食鹽白血病細(xì)胞株 hl60的毒理研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素對hl60細(xì)胞生長具有抑制作用，可促進(jìn) 細(xì)胞凋亡。陸澤華等研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)骨脂素對人紅口血病細(xì)胞株k562、人淋巴口血 病細(xì)胞株raji和人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株hl-60均有一定程度的殺傷作用，初 步顯示其廣譜抗白血病活性，且補(bǔ)骨脂素對造血細(xì)胞影響較小。5抗腫瘤作用郭江寧等人利用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法首次發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂屮的補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素兩種成分對胃癌細(xì)胞bgc-823具有較強(qiáng)的抑制作用，口補(bǔ)骨脂素的抑制作 用強(qiáng)于異補(bǔ)骨脂素。胡云等人研究發(fā)現(xiàn)

18、補(bǔ)骨脂素類藥物通過分化誘導(dǎo)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì) 胞的生長分化，達(dá)到使惡性宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌hela細(xì)胞向正常或良性逆轉(zhuǎn)的 目的。吳軍正等人研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素可以抑制涎腺粘液表皮樣癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞克隆 mc3惡性表型細(xì)胞的轉(zhuǎn)移力。蔡宇等的研究表明補(bǔ)骨脂素具有逆轉(zhuǎn)人乳腺癌 mcf-7 /adr多藥耐藥性的作用，可降低mcf-7 /adr耐藥細(xì)胞中凋亡抑制基 因bcl2的表達(dá)，提高化療敏感性。多藥耐藥multidrug resistance, mdr 腫 瘤化療失敗的主要原因之一。補(bǔ)骨脂是補(bǔ)益藥中少有的鈣離子通道扌吉抗劑，蔡 天革等通過體外實驗表明，補(bǔ)骨脂素在某種程度上逆轉(zhuǎn)mcf-7 /adr的多藥耐 藥性。6殺蟲

19、、抗菌、抗病毒作用秦元華等通過實驗證實補(bǔ)骨脂素與鴉膽子合劑治療卡氏肺抱子蟲肺炎大鼠， 可增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用，并抑制及殺滅卡氏肺砲子蟲。有實驗表明補(bǔ)骨脂素和& 甲氧基補(bǔ)骨脂素可抑制大腸桿菌0157h7和藤黃微球菌的生長，其中補(bǔ)骨脂素是最 有效的抗菌劑。a ltei等在黑猩猩感染實驗證實了補(bǔ)骨脂素+長波紫外光照射的 光化學(xué)法可滅活血漿中的hbv和hcv。morel等研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素聯(lián)合紫外光 輻射可滅活血漿中的病毒外，還可滅活血漿成分中的高滴度病毒體如vsv、fd噬 菌體。7平喘作用鄧時貴等研究表明補(bǔ)骨脂總香豆素可明顯提高過敏性哮喘閾，降低因吸入 過敏源致死的死亡率，對過敏性哮喘豚鼠有較好的

20、保護(hù)作用。補(bǔ)骨脂總香豆素對 豚鼠敏性哮喘和組胺性哮喘的潛伏期有顯箸的延長作用，表明補(bǔ)骨脂香豆素對 哮喘有明顯的拮抗作用。8對藥物代謝的作用肝臟在大多數(shù)藥物的代謝屮起著重要作用,p450和nadph是構(gòu)成肝臟微粒 體氧化酶系統(tǒng)的主要物質(zhì)，對藥物代謝起著垂要的作用。宓穗卿等研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨 脂水煎劑能使肝微粒體蛋白含量明顯升高，從而使p450和nadph細(xì)胞 色素c還原酶含量增加，從而加速經(jīng)肝臟微粒體代謝的藥物在體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化過 程。另外，補(bǔ)骨脂水煎劑可使血清肌酹濃度明顯降低，腎小球濾過率增加，從而 加快以腎臟排泄為主要清除途徑的藥物在體內(nèi)的清除過程。koen ig s等研究了補(bǔ) 骨脂素及其衍牛物對p

21、450 2a6的滅活作用，結(jié)果表明,8甲氧基補(bǔ)骨脂素（和補(bǔ) 骨脂素為強(qiáng)效的異構(gòu)選擇性肝微粒體p450 2a6滅活劑。9增強(qiáng)免疫功能王淑蘭等實驗研究證明了補(bǔ)骨脂能明顯地提高二倍體成纖維細(xì)胞的生長增 殖速度，并對該細(xì)胞具有抗衰老作用，提高小鼠腹腔巨嗜細(xì)胞的吞噬功能，提高 機(jī)體非特異性免疫的能力。10雌激素樣作用藥理研究表明補(bǔ)骨脂具有雌激素樣作用。趙丕文等研究了補(bǔ)骨脂等5味中藥 在整體與細(xì)胞水平的植物雌激素作用。結(jié)果顯示補(bǔ)骨脂能明顯增加大鼠的子宮系 數(shù)，增加大鼠的體重，而且對雌激素受體陽性細(xì)胞系乳腺癌mcf7增殖具有明顯 的促進(jìn)作用。趙丕文等還探討了補(bǔ)骨脂素的植物雌激素作用，利用mtt細(xì)胞增 殖試驗觀察補(bǔ)骨脂素對受體陽性t47d細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌ish ikaw a細(xì)胞增殖的 影響，結(jié)果顯示補(bǔ)骨脂素對這兩種細(xì)胞增殖均有顯著的促進(jìn)作用。說明補(bǔ)骨脂素 具有植物雌激素作用。11抗前列腺增生作用董能木等為探討補(bǔ)骨脂素對前列腺增牛的作用，進(jìn)行了抗前列腺良性增牛 的研究，結(jié)果顯示補(bǔ)骨