觀察消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素對(duì)舒縮活動(dòng)的影響

1、此報(bào)告純屬個(gè)人娛樂(lè)行為，讀者請(qǐng)勿留言一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)哺乳動(dòng)物離體腸標(biāo)本制備及灌流方法。2. 觀察消化道平滑肌 ;L 的一般生理特性及某些 因素對(duì)舒縮活動(dòng)的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理消 化道平滑肌和骨骼肌、心肌一樣，也具有興奮性、 傳導(dǎo)性和收縮性，有些也具有自律性。相比之下消化 道平滑肌的興奮性低，收縮慢，伸展性大，具有緊張 性收縮， 對(duì)化學(xué)物質(zhì)、溫度變化及牽張刺激較敏感 等特性。小腸離體后，置于適宜的溶液中，觀察其收 縮活動(dòng)及環(huán)境變化的影響，觀察分析上述生理特性。三、實(shí)驗(yàn)材料1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：家兔2、 器械、藥品：電熱恒溫水浴鍋、浴槽、張力換能 器（量程為25g以下）、BL-410生物記錄系統(tǒng)、L型

2、通 氣管、道氏袋、注射器、培養(yǎng)皿、溫度計(jì)、燒杯、螺 絲夾、三維調(diào)節(jié)器、臺(tái)氏液、 0.01%去甲腎上腺素、 0.01%乙酰膽堿、 1mol/L NaOH 溶液、 lmol/L HCl 溶 液、2%CaCI箔液。四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟1、標(biāo)本制備流程： 擊昏家兔： 用木槌猛擊兔頭枕部，使其昏迷。 剖開(kāi)腹腔快速取出腸管： 立即剖開(kāi)腹腔，找出胃幽門與十二指腸交界處，快速 取長(zhǎng)2030cm的腸管，先將與該腸管相連的腸系膜沿 腸緣剪去，置于供氧臺(tái)氏液中輕輕漂洗，把腸內(nèi)容物 基本洗凈。 制作離體腸標(biāo)本：將腸管分成數(shù)段，每段長(zhǎng)2-3c m,兩端各系一條線， 保存于供氧的38C左右的臺(tái)氏液中2、儀器安裝與調(diào)試實(shí)驗(yàn)安

3、裝（如圖）：恒溫水浴鍋控制加熱，恒溫工作點(diǎn)定在38C。將充滿 氧氣的道氏袋與通氣鉤相連接，將腸段一端系在通氣 管鉤上，另一端與張力換能器相連。控制通氣量，使 氧氣從通氣管前端呈單個(gè)而不是成串逸出。儀 器調(diào)試： BL-410 系統(tǒng)的使用，選擇“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目” 中的“消化實(shí)驗(yàn)”選中“消化道平滑肌生理特性”。 相關(guān)參數(shù)設(shè)置的參考值：時(shí)間常數(shù) t - DC高頻濾波 F 30Hz,顯速4.00s/div，增益100g。用鼠標(biāo)左 鍵單擊工具條上的“開(kāi)始”按鈕，調(diào)節(jié)參數(shù)至波形幅 度、密度適當(dāng)，待收縮曲線穩(wěn)定后，單 擊記錄按鈕。 觀察項(xiàng)目現(xiàn)象及解釋 1待標(biāo)本穩(wěn)定后，記錄小腸平滑肌收縮的對(duì)照曲線。 2乙酰膽堿的作用

4、 用滴管吸入 0.01%乙酰膽堿向灌 流浴槽內(nèi)滴 12 滴。觀察到明顯效應(yīng)后，立即從排水 管放出浴槽內(nèi)含乙酰膽堿的臺(tái)氏液，加入新鮮溫臺(tái)氏 液，由此反復(fù) 3 次，以洗滌或稀釋殘留的乙酰膽堿， 使之達(dá)到無(wú)效濃度，待小腸運(yùn)動(dòng)恢復(fù)后進(jìn)行下一項(xiàng)。 3腎上腺素的作用 按上述方法將 0.01%腎上腺素加 入浴槽內(nèi) 12 滴，觀察小腸運(yùn)動(dòng)的反應(yīng)。當(dāng)效果明顯 后，立即更換臺(tái)氏液。4. 氯化鈣的作用 加2%CaC1溶液23滴入灌流浴槽 內(nèi)，觀察其反應(yīng)，效果明顯后迅速?zèng)_洗。5. 鹽酸的作用 加 12滴 1mol/L HCl 溶液入浴槽內(nèi)， 觀察其反應(yīng)。6. 氫氧化鈉的作用 在(5) 基礎(chǔ)上加等容量的 1mol/L

5、NaOH溶液入浴槽內(nèi)，觀察其反應(yīng)。按上述方法更換臺(tái) 氏液，反復(fù)沖洗。7溫度的影響 將浴槽內(nèi)臺(tái)氏液放出，注入25C臺(tái)氏 液，觀察平滑肌收縮有何改變，當(dāng)效應(yīng)明顯后再換入 38C臺(tái)氏液，持續(xù)一段時(shí)間后，再換入 42C臺(tái)氏液， 觀察收縮活動(dòng)的變化(亦可根據(jù)室溫的具體情況選做 其中的一項(xiàng))。五、注意事項(xiàng)1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須保證標(biāo)本的供氧 ( 通氣 ) 及浴槽內(nèi) 臺(tái)氏液的恒溫(38 C )，以維持標(biāo)本活性。2. 灌流浴槽內(nèi)的液面高度應(yīng)保持恒定。3. 放大器零點(diǎn)調(diào)好后不要再移動(dòng)旋鈕，以免影響基 線。4. 上述各藥液加入的量系參考數(shù)據(jù)，效果不明顯者 可以添加。5. 每次實(shí)驗(yàn)效果明顯后立即放掉含藥液的臺(tái)氏液，

6、并沖洗多次，以免平滑肌出現(xiàn)不可逆反應(yīng)。 6各項(xiàng)處理必須有處理標(biāo)記。六、相關(guān)知識(shí) 家兔小腸平滑肌以胃幽門與十二指腸交界處的腸管 活動(dòng)最好，對(duì)生物化學(xué)因素也較敏感，所以選取用此 處腸管作標(biāo)本。七、作業(yè)1從記錄曲線中觀察比較小腸平滑肌與心肌、骨骼 肌的收縮特性有何不同 ?說(shuō)明其原理。2通過(guò)觀察分析記錄曲線變化，闡明各項(xiàng)處理引起 的收縮頻率、收縮強(qiáng)度和張力變化的機(jī)理。3結(jié)合本章的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，談?wù)動(dòng)^察與思維在實(shí)驗(yàn)研 究中作用與體會(huì)。八、實(shí)驗(yàn)討論：1、 正常情況下，我們觀察到離體小腸平滑肌在臺(tái)氏 液中可以自動(dòng)地、 緩慢地收縮， 但其節(jié)律性很不規(guī)則。 小腸平滑肌自律性產(chǎn)生的離子基礎(chǔ)尚未完全清楚，目 前認(rèn)為，

7、它的產(chǎn)生可能與細(xì)胞膜上生電性鈉泵的活 動(dòng)具有波動(dòng)性有關(guān)，當(dāng)鈉泵的活動(dòng)暫時(shí)受抑制時(shí)，膜 便發(fā)生去極化；當(dāng)鈉泵活動(dòng)恢復(fù)時(shí)，膜的極化加強(qiáng)， 膜電位便又回到原 來(lái)的水平。2、在浴槽中加入 0.01%乙酰膽堿 （Ach ）2 滴（約 0.2ml ）后，可見(jiàn)離體腸管活動(dòng)增強(qiáng)，描記曲線出現(xiàn) 收縮頻率變快，幅度增加。出現(xiàn)上述現(xiàn)象的機(jī)理，目 前認(rèn)為與消化道平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生動(dòng)作電位的 離子基 礎(chǔ)是Ca2啲內(nèi)流有關(guān)。乙酰膽堿可與肌膜上的M受體 結(jié)合，使得兩類通道開(kāi)放：一類為電位敏感性 Ca2+ 專用通道，另一類為特異性受體活化 Ca2+ 專用通道。 前一類通道對(duì)Ach敏感，小劑量Ach即引起開(kāi)放；后 一類通道對(duì)Ach

8、相對(duì)不敏感，只有大劑量 Ach才會(huì)引 起開(kāi)放。這兩類通道開(kāi)放都使得肌漿中 Ca2+增高， 進(jìn)而激活肌纖蛋白一肌凝蛋白一 ATP系統(tǒng)，使平滑肌 收縮，肌張力增加。3、 在浴槽中加入 0.01%腎上腺素 2 滴（約 0.2ml） 后，可見(jiàn)離體腸管活動(dòng)減弱，描記曲線出現(xiàn)收縮頻率 變慢，幅度減小以及基線下移。 出現(xiàn)上述現(xiàn)象的機(jī)理， 目前認(rèn)為與腸肌細(xì)胞膜上存在 a和B兩中受體，a 受體又分為a抑制型受體和a興奮型受體有關(guān)。腎 上腺素作用于 a 抑制型受體，引起腸肌膜上一種特 異性受體活 化，使K+外流增多，細(xì)胞膜發(fā)生超極化， 腸肌興奮性降低，肌張力下降。同時(shí)，腎上腺素還作 用于3受體，它的激活引起腸肌細(xì)

9、胞膜中的 CAMP 合成增 多，CAMP激活腸肌膜及肌漿網(wǎng)上 Ca2+泵活動(dòng)， 使肌漿中Ca2+濃度降低，亦使肌張力降低；3受 體激活后還促使K+及 Ca2+#流增加，加速膜的超極 化，促進(jìn)了腸肌肌張力的減低。4、在浴槽中加入 2%氯化鈣溶液 2 滴后，離體腸管活 動(dòng)增強(qiáng)，描記曲線出現(xiàn)收縮幅度增加。這是因?yàn)榧尤?氯化鈣后，細(xì)胞外液Ca2+濃度升高，貝U Ca2+內(nèi)流增 加，使得細(xì)胞內(nèi)液中Ca2+濃度升高，Ca2+與鈣調(diào)蛋白 結(jié)合增加，促進(jìn)了橫橋的激活。因而收縮力增加。5、在浴槽中加入 1mol/L 鹽酸溶液 2 滴后，離體腸 管活動(dòng)減弱， 描記曲線出現(xiàn)收縮幅度降低， 頻率變慢。 出現(xiàn)這一現(xiàn)象，

10、目前認(rèn)為其原因在于：細(xì)胞外 H+ 升高時(shí)，Ca2+通道的活性受到抑制，使得Ca2+內(nèi)流 減少。H+升高能干擾肌肉的代謝和肌絲滑行的生 化過(guò)程：H+能與Ca2+競(jìng)爭(zhēng)鈣調(diào)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)而使 肌球蛋白ATP酶活性降低（近期有理論認(rèn)為是直接抑 制作用而非競(jìng)爭(zhēng)作用）；使肌原纖維對(duì)Ca2+的敏感性 和Ca2+從肌質(zhì)網(wǎng)的釋放量減少。6、 在加鹽酸使平滑肌收縮減弱的基礎(chǔ)上，再加2滴 NaOHf浴槽中，則腸管活動(dòng)出現(xiàn)相反的情況，即腸管 活動(dòng)增強(qiáng)。原因在于 NaOH可以中和H+,改變了細(xì)胞 外液的PH值，PH過(guò)高、過(guò)低，收縮幅度及張力都會(huì) 降低，最適PH時(shí)收縮效果最好。7、浸浴小腸腸管的臺(tái)氏液溫度以 38C 40C為宜， 低于或高于這個(gè)溫度，都會(huì)影響結(jié)果。因?yàn)槟c管平滑 肌對(duì)溫度改變極為敏感，當(dāng)溫度降到30C以下時(shí)，由 于代 謝水平的降低，興奮性減弱，可出現(xiàn)收縮曲線 基線下移，頻率變慢，收縮幅度變小。有時(shí)可能會(huì)見(jiàn) 到基線先上移后下降的現(xiàn)象。這是因?yàn)榻禍乇旧韺?duì)腸 管是一種刺 激，也可短暫地加強(qiáng)代謝活動(dòng)，所以肌張力升高。當(dāng)溫度高于