熒光分光光度法測定維生素B2的含量

1、資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝華南師范大學(xué)實驗報告課程名稱：儀器分析實驗實驗項目：熒光分光光度法測定維生素B2的含量熒光分光光度法測定維生素B2 的含量一、實驗?zāi)康? 掌握熒光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測量含量的操作方法和原理；2 了解分子熒光光譜定量分析與定性分析的特點及區(qū)別；3 熟悉熒光光度計定量法測量軟件的數(shù)據(jù)處理。二、實驗原理含有熒光基團的化學(xué)物質(zhì)， 其分子吸收了輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，再從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時發(fā)射光的波長比吸收的入射光波長更長，分子熒光就是發(fā)光方式中較常見的光致發(fā)光。 在一定頻率和一定強度的激發(fā)光照射下，當(dāng)溶液的濃度很小同時光被吸收的分數(shù)也不太大時，稀溶液體系將符合朗伯

2、- 比爾定律，該溶液所產(chǎn)生的熒光強度與溶液中這種熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系，可用公式表示：IF=2.3K'kbcI0當(dāng)入射光強度 I0 一定時IF=Kc以上兩式中 K' 為熒光量子效率； K 為熒光分子的摩爾吸光系數(shù)； b 為液槽厚度； c 以為熒光物質(zhì)的濃度。分子熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線法是取一定已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與待分析試樣溶液經(jīng)過相同的處理后，配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液， 測定其熒光強度，并以熒光強度為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制其工作曲線，再由所測獲的試樣溶液的熒光強度對工作曲線作圖從而求出試樣溶液中該被分析檢測物質(zhì)的實際濃度含量。此法適用于痕量分析，并且標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的熒光強度

3、必須是在熒光儀已扣除空白溶液的熒光強度的讀數(shù)。精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝維生素 B2 ， 又稱 核黃素 。分子式C17H20N4O6。它是人體必需的13種維生素之一，作為維生素B 族的成員之一，微溶于水，可溶于氯化鈉溶液，易溶于稀的氫氧化鈉溶液。可以用熒光光度法測維生素 B2 的含量的原因 : 維生素 B2 溶液在 430440 nm 藍光的照射下，發(fā)出綠色熒光，熒光峰在 535 nm。維生素 B2 在 pH=67 的溶液中熒光強度最大， 在 pH=11的堿性溶液中熒光消失， 所以可以用熒光光度法測維生素 B2 的含量。該實驗的控制條件 : 維生素 B2 在堿性溶液中經(jīng)光

4、線照射會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，光黃素的熒光比核黃素的熒光強的多，故測維生素 B2 的熒光時溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且在避光條件下進行。熒光光譜法定量分析的理論依據(jù) : 常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子， 激發(fā)態(tài)分子通過無輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動能級，再以輻射躍遷的形式回到基態(tài)， 發(fā)出比吸收光波長長的光而產(chǎn)生熒光。三、儀器和試劑（ 1）儀器 熒光光度計（ FL-2500）、四面通石英比色皿一個： 1cm 、1 和 2 mL 刻度移液管各一支、吸耳球、洗瓶、鏡頭紙。（2）試劑 10.0 g/ml維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)溶液、二次蒸餾水四、實驗步驟（ 1） . 打開

5、氙燈，再打開主機，然后打開計算機啟動工作站并初始化儀器，預(yù)熱 30min（ 2） 儀器初始化完畢后，在工作界面上選擇測量項目，設(shè)置適當(dāng)?shù)膬x器參數(shù)：精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝設(shè)置發(fā)射波長為540 nm，在 200500范圍內(nèi)掃描，紀錄熒光發(fā)射強度和激發(fā)波長的關(guān)系曲線，便得到激發(fā)光譜。從激發(fā)光譜圖上可以找出其最大激發(fā)波長為440nm（ 3）標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品的熒光測定將激發(fā)波長固定在440nm，熒光發(fā)射波長為540nm。測量上述系列標(biāo)準(zhǔn)維生素 Bz 溶液的熒光發(fā)射強度。以溶液的熒光發(fā)射強度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在同樣條件下測定未知溶液的熒光強度， 并由標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線確定未知試樣中維生素 Bz 的濃度，計算藥片中的維生素 Bz 的含量。（ 4）退出主程序，關(guān)閉計算機，先關(guān)主機，最后關(guān)氙燈。五 數(shù)據(jù)記錄和結(jié)果分析（見最后一頁）1. 用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。Y=A+B*XA=7.664B=134.892、未知樣品濃度的測定根據(jù)待測液的熒光強度，從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上求得其濃度，計算出試樣中含量。C 樣品 =0.576%六、思考題 ：1. 試解釋熒光光度法較吸收光度法靈敏度高的原因。答：熒光光度法：對于以給定物質(zhì)，當(dāng)激發(fā)光波長和強度一定時，熒光強度只與溶液濃度有關(guān)：I=Kc 。由于自猝滅或者自吸效應(yīng)，此線性關(guān)系只在極稀的溶液中成立。本次實驗溶液較稀，負效應(yīng)小。熒光光度法是垂直檢測，有效避免了激發(fā)光源的干擾。吸光光度法：精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝吸光度與溶液濃度的關(guān)系符合朗伯比爾定律： I= bc, 其光強度還與吸收池的厚度有關(guān)。而且測定過程中無法避免激發(fā)光源的影響。綜上所述，熒光光度法較吸收光度法靈敏度高。2. 維生素 B2 在 pH67 熒光最強，本實驗為何在酸性溶液中測定？答：因為維生素 B2 在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比核黃素的熒光強的多。 因此，測量時溶液要控制在酸性范圍內(nèi)， 且必須在避光條件下進行。3 如何減小