神經(jīng)生物學(xué)-緒論P(yáng)PT課件

1、2021/7/231 1神經(jīng)生物學(xué)神經(jīng)生物學(xué)緒論緒論NEUROBIOLOGYNEUROBIOLOGYINTRODUCTIONINTRODUCTION劉劉 寧寧2021/7/232 22021/7/233 32021/7/234 42021/7/235 51.1 1.1 概念與任務(wù)概念與任務(wù) 在在分子、細(xì)胞、組織器官分子、細(xì)胞、組織器官和和整體整體等多個(gè)水平上研究等多個(gè)水平上研究神經(jīng)系神經(jīng)系統(tǒng)統(tǒng)的的形態(tài)形態(tài)和和功能功能的學(xué)科。的學(xué)科。 2021/7/236 6任務(wù)任務(wù)：研究神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)：研究神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)分子水平分子水平、細(xì)胞水平細(xì)胞水平和和系統(tǒng)系統(tǒng)水平水平的變化過(guò)程，以及這些過(guò)程的整合作用，直至的變

2、化過(guò)程，以及這些過(guò)程的整合作用，直至最復(fù)雜的高級(jí)功能，如學(xué)習(xí)、記憶等最復(fù)雜的高級(jí)功能，如學(xué)習(xí)、記憶等 v目的目的：了解人類(lèi)神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能，：了解人類(lèi)神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能，以及行為與心理活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，闡明行以及行為與心理活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，闡明行為和心理活動(dòng)的神經(jīng)機(jī)制，為改善人類(lèi)感為和心理活動(dòng)的神經(jīng)機(jī)制，為改善人類(lèi)感覺(jué)與運(yùn)動(dòng)效率，提高對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的防覺(jué)與運(yùn)動(dòng)效率，提高對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的防治水平以及增進(jìn)健康服務(wù)治水平以及增進(jìn)健康服務(wù) 2021/7/237 7內(nèi)容內(nèi)容: : 神經(jīng)解剖、生理、藥理、病理、生物化學(xué)和細(xì)神經(jīng)解剖、生理、藥理、病理、生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)等胞生物學(xué)及分子生物學(xué)

3、等跨學(xué)科的基本理論研究跨學(xué)科的基本理論研究 v特點(diǎn)：特點(diǎn)：1、包羅包羅了基礎(chǔ)神經(jīng)科學(xué)的諸多學(xué)科了基礎(chǔ)神經(jīng)科學(xué)的諸多學(xué)科2、并非若干傳統(tǒng)學(xué)科簡(jiǎn)單和機(jī)械地組合、并非若干傳統(tǒng)學(xué)科簡(jiǎn)單和機(jī)械地組合3、在傳統(tǒng)神經(jīng)科學(xué)的基礎(chǔ)之上成長(zhǎng)和發(fā)展起、在傳統(tǒng)神經(jīng)科學(xué)的基礎(chǔ)之上成長(zhǎng)和發(fā)展起來(lái)的一門(mén)來(lái)的一門(mén)新興新興的的綜合性綜合性的的邊緣學(xué)科邊緣學(xué)科2021/7/238 8主要研究領(lǐng)域主要研究領(lǐng)域 v神經(jīng)生物化學(xué)（神經(jīng)生物化學(xué)（neurobiochemistry） v神經(jīng)生理學(xué)（神經(jīng)生理學(xué)（neurophysiology） v細(xì)胞神經(jīng)生物學(xué)（細(xì)胞神經(jīng)生物學(xué)（cellular neurobiology）v分子神經(jīng)生物學(xué)（

4、分子神經(jīng)生物學(xué)（molecular neurobiology） v發(fā)育神經(jīng)生物學(xué)（發(fā)育神經(jīng)生物學(xué)（developmental neurobiology） v比較神經(jīng)生物學(xué)（比較神經(jīng)生物學(xué)（comparative neurobiology）v系統(tǒng)神經(jīng)生物學(xué)（系統(tǒng)神經(jīng)生物學(xué)（systematic neurobiology）2021/7/239 9人類(lèi)對(duì)自身學(xué)習(xí)記憶思維等能力的探索人類(lèi)對(duì)自身學(xué)習(xí)記憶思維等能力的探索了解腦是怎樣工作對(duì)整個(gè)生物科學(xué)的激勵(lì)作用了解腦是怎樣工作對(duì)整個(gè)生物科學(xué)的激勵(lì)作用對(duì)唯心主義哲學(xué)的挑戰(zhàn)對(duì)唯心主義哲學(xué)的挑戰(zhàn)更清楚的了解人類(lèi)自身，提高人的素質(zhì)，緩解人類(lèi)更清楚的了解人類(lèi)自身，提

5、高人的素質(zhì)，緩解人類(lèi)矛盾矛盾 為什么要重視神經(jīng)生物學(xué)？為什么要重視神經(jīng)生物學(xué)？2021/7/2310101.2 1.2 神經(jīng)生物學(xué)發(fā)展和展望神經(jīng)生物學(xué)發(fā)展和展望 2021/7/2311112021/7/2312122021/7/2313132021/7/2314142021/7/2315152021/7/2316162021/7/2317172021/7/2318182021/7/2319192021/7/2320202021/7/2321212021/7/2322222222 神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)研究神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)研究 19世紀(jì)世紀(jì)80年代年代Cajal建立起神經(jīng)元理論建立起神經(jīng)元理論 19世紀(jì)末和世

6、紀(jì)末和20世紀(jì)初，世紀(jì)初，Sherrington關(guān)于關(guān)于 “反反射射”“”“突觸突觸” 、“神經(jīng)傳遞神經(jīng)傳遞”的概念的概念 20世紀(jì)世紀(jì)20到到50年代通過(guò)高倍電鏡對(duì)突觸結(jié)構(gòu)細(xì)年代通過(guò)高倍電鏡對(duì)突觸結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)的觀察節(jié)的觀察2021/7/2323232021/7/2324242021/7/232525Pictures of Spanish anatomist Ramon y Cajal 2021/7/232626First page of Sherringtons famous book, The Integrative Action of the Nervous System (1906); t

7、his is the 5th edition of 1947 2021/7/2327272021/7/2328282. 神經(jīng)興奮的電傳導(dǎo)神經(jīng)興奮的電傳導(dǎo) 17911791年年GalvaniGalvani就發(fā)現(xiàn)了生物電現(xiàn)象就發(fā)現(xiàn)了生物電現(xiàn)象 1919世紀(jì)電生理方法測(cè)定神經(jīng)電傳導(dǎo)的速度，發(fā)現(xiàn)世紀(jì)電生理方法測(cè)定神經(jīng)電傳導(dǎo)的速度，發(fā)現(xiàn)“全或無(wú)全或無(wú)”定律等定律等 2020世紀(jì)世紀(jì)3030年代年代YoungYoung以烏賊大神經(jīng)纖維作為研究以烏賊大神經(jīng)纖維作為研究材料，定量的測(cè)量神經(jīng)電傳導(dǎo)的電阻、電位及其材料，定量的測(cè)量神經(jīng)電傳導(dǎo)的電阻、電位及其在刺激前后的變化等在刺激前后的變化等 4040年代年代Ho

8、dgkinHodgkin、HuxleyHuxley和和KatzKatz等研究等研究NaNa+ +、K K+ +與與神經(jīng)傳導(dǎo)的關(guān)系，測(cè)定靜息電位、動(dòng)作電位等神經(jīng)傳導(dǎo)的關(guān)系，測(cè)定靜息電位、動(dòng)作電位等2021/7/232929意大利科學(xué)家伽伐尼（意大利科學(xué)家伽伐尼（Luigi Galvani, 17371798) Diagram of Galvani s frog legs (1770s) 2021/7/2330301937Young 推測(cè)可以使用巨大烏賊的軸突來(lái)了解神經(jīng)細(xì)胞推測(cè)可以使用巨大烏賊的軸突來(lái)了解神經(jīng)細(xì)胞 John Zachary Young (1907-1997)2021/7/23313

9、1A.L Hodgkin A.F. Huxley They shared the 1963 Nobel Prize in Physiology or Medicine for work on the transmission of signals from nerve cells. John Carew Eccles 2021/7/2332323. 神經(jīng)化學(xué)遞質(zhì)研究神經(jīng)化學(xué)遞質(zhì)研究 19051905年年EliotEliot發(fā)現(xiàn)電脈沖到達(dá)肌肉連結(jié)點(diǎn)時(shí)釋放了腎上腺素發(fā)現(xiàn)電脈沖到達(dá)肌肉連結(jié)點(diǎn)時(shí)釋放了腎上腺素 19211921年年LoewiLoewi的蛙心實(shí)驗(yàn)，直接證明在心肌上的交感和副的蛙心實(shí)驗(yàn)，直

10、接證明在心肌上的交感和副交感神經(jīng)末梢分別釋放出兩種不同的化學(xué)物質(zhì)交感神經(jīng)末梢分別釋放出兩種不同的化學(xué)物質(zhì) 19321932年前后，年前后，DaleDale的系列的實(shí)驗(yàn)，取得了乙酰膽堿存在于的系列的實(shí)驗(yàn)，取得了乙酰膽堿存在于內(nèi)臟器官神經(jīng)末梢的直接證據(jù)內(nèi)臟器官神經(jīng)末梢的直接證據(jù) 1934193419351935年年CannonCannon等提取交感神經(jīng)末梢遞質(zhì)，等提取交感神經(jīng)末梢遞質(zhì)，19461946年年EuleEule闡明其為去甲腎上腺素闡明其為去甲腎上腺素 19601960年以來(lái)，對(duì)腦內(nèi)遞質(zhì)開(kāi)展了不少研究，發(fā)現(xiàn)了約年以來(lái)，對(duì)腦內(nèi)遞質(zhì)開(kāi)展了不少研究，發(fā)現(xiàn)了約3030種種不同的遞質(zhì)不同的遞質(zhì) 20

11、20世紀(jì)世紀(jì)7070年代發(fā)現(xiàn)腦啡肽等年代發(fā)現(xiàn)腦啡肽等2021/7/2333334. 腦功能研究腦功能研究 1893年年起起Sherrington研究反射弧，提出抑制的概研究反射弧，提出抑制的概念，并認(rèn)為抑制過(guò)程同興奮過(guò)程同等重要念，并認(rèn)為抑制過(guò)程同興奮過(guò)程同等重要 Pavlov在在20世紀(jì)初建立起世紀(jì)初建立起“條件反射條件反射”的概念，的概念，證明條件反射是大腦活動(dòng)的結(jié)果證明條件反射是大腦活動(dòng)的結(jié)果19世紀(jì)有學(xué)者提出關(guān)于腦功能區(qū)的定位，部分切世紀(jì)有學(xué)者提出關(guān)于腦功能區(qū)的定位，部分切除狗腦皮層手術(shù)成功，并通過(guò)對(duì)尸體解剖的觀察開(kāi)除狗腦皮層手術(shù)成功，并通過(guò)對(duì)尸體解剖的觀察開(kāi)始研究人大腦皮層功能區(qū)始研

12、究人大腦皮層功能區(qū)2021/7/233434 20世紀(jì)世紀(jì)30年代年代Foerster和和Penfield在利用外科手術(shù)在利用外科手術(shù)在清醒的病人身上，用電刺激大腦的不同部位引在清醒的病人身上，用電刺激大腦的不同部位引起不同反應(yīng)起不同反應(yīng) 20世紀(jì)世紀(jì)40年代年代Sperry開(kāi)始用貓和猴子做實(shí)驗(yàn)，切開(kāi)始用貓和猴子做實(shí)驗(yàn)，切斷大腦兩半球間的連接，進(jìn)行觀察。斷大腦兩半球間的連接，進(jìn)行觀察。 60年代，對(duì)癲癇病人作兩半球割裂治療的觀察年代，對(duì)癲癇病人作兩半球割裂治療的觀察2021/7/2335352021/7/23363680年代，Sperry闡明人腦的左半球除具有抽象思維、數(shù)學(xué)運(yùn)算及邏輯語(yǔ)言等各項(xiàng)

13、重要機(jī)能外，還可以在關(guān)系很遠(yuǎn)的資料間建立想象聯(lián)系，在控制神經(jīng)系統(tǒng)方面人腦的左半球也很積極，起著主要作用。還發(fā)現(xiàn)人腦右半球也同樣具有許多高級(jí)功能，如對(duì)復(fù)雜關(guān)系的理解能力、整體的綜合能力、直覺(jué)能力、想象能力等；此外，它還被證實(shí)是音樂(lè)、美術(shù)及空間知覺(jué)的辨識(shí)系統(tǒng)，因此人的右腦蘊(yùn)藏著很大的潛力。2021/7/2337372021/7/233838 19世紀(jì)世紀(jì)70年代年代Caton對(duì)兔、貓以及猴的實(shí)驗(yàn)表明大對(duì)兔、貓以及猴的實(shí)驗(yàn)表明大腦普遍存在著電的變化腦普遍存在著電的變化 20世紀(jì)開(kāi)始作腦電記錄，世紀(jì)開(kāi)始作腦電記錄，Berger發(fā)現(xiàn)有心理活動(dòng)發(fā)現(xiàn)有心理活動(dòng)時(shí)（如注意等）腦電波發(fā)生變化時(shí)（如注意等）腦電波

14、發(fā)生變化 20世紀(jì)世紀(jì)50年代開(kāi)始，腦電的研究向探索與特定知年代開(kāi)始，腦電的研究向探索與特定知覺(jué)有關(guān)的信號(hào)方向發(fā)展，開(kāi)始了誘發(fā)電位的研究覺(jué)有關(guān)的信號(hào)方向發(fā)展，開(kāi)始了誘發(fā)電位的研究工作工作 60年代，引入傅里葉分析儀年代，引入傅里葉分析儀 70年代對(duì)人的視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)、甚至嬰兒的感覺(jué)，都年代對(duì)人的視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)、甚至嬰兒的感覺(jué)，都有了靈敏的檢查指標(biāo)有了靈敏的檢查指標(biāo)2021/7/2339395. 5. 神經(jīng)系統(tǒng)感知研究神經(jīng)系統(tǒng)感知研究 2020世紀(jì)發(fā)展最快的是中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)外界感覺(jué)的加工世紀(jì)發(fā)展最快的是中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)外界感覺(jué)的加工、識(shí)別識(shí)別信號(hào)、形成感知信號(hào)、形成感知測(cè)謊儀測(cè)謊儀2021/7/23404

15、0百年來(lái)與神經(jīng)科學(xué)有關(guān)的諾貝爾獎(jiǎng)獲得者選介(I)C.S.Sherrington (英英)18571850190019502000C.Golgi (意意)19261934神經(jīng)元染色方法神經(jīng)元染色方法18431852R.Cajal (西班牙西班牙)“神經(jīng)元學(xué)說(shuō)神經(jīng)元學(xué)說(shuō)”形形態(tài)態(tài)190619521932“突觸”定名“反射”概念“交互”抑制反射學(xué)說(shuō)反射學(xué)說(shuō)生生理理電電生生理理18891977感覺(jué)神經(jīng)纖維電活動(dòng)傳入沖動(dòng)大腦誘發(fā)電位神經(jīng)控制骨骼肌運(yùn)動(dòng)機(jī)制E.D.Adrian (英英)電生理電生理O.Loewi (德德 英英)196118731936（乙酰膽堿）（乙酰膽堿）神經(jīng)化學(xué)神經(jīng)化學(xué)蛙心灌流實(shí)驗(yàn)“迷

16、走物質(zhì)”19681875H.Dale (英英)神經(jīng)末梢分泌乙酰膽堿ACh神經(jīng)化學(xué)神經(jīng)化學(xué)18741965194419631888J.Erlanger (美美)H.S.Gasser (美美)陰極射線(xiàn)示波器神經(jīng)纖維的分類(lèi)ABC19731881W.R.Hess (瑞士瑞士)腦立體定位儀 hypothalamus方法學(xué)創(chuàng)新方法學(xué)創(chuàng)新1949電生理電生理OxfCambridge徒手切腦片銀染神經(jīng)元染出神經(jīng)末梢，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元之間無(wú)原生質(zhì)聯(lián)系生理科學(xué)進(jìn)展2001，32：1872021/7/234141神經(jīng)藥理學(xué)神經(jīng)藥理學(xué)分子藥理學(xué)分子藥理學(xué)百年來(lái)與神經(jīng)科學(xué)有關(guān)的諾貝爾獎(jiǎng)獲得者選介(II/p>

17、02000J.C. Eccles (澳大利亞澳大利亞) 191419031963A.L.Hodgkin (英英)B.Katz (德德 英英)1917A.F.Huxley (英英)細(xì)胞內(nèi)微電極突觸后電位抑制性遞質(zhì)突觸突觸電壓鉗技術(shù)動(dòng)作電位的離子學(xué)說(shuō)數(shù)學(xué)方程表述 NM終板電位遞質(zhì)“量子釋放”1911動(dòng)作電位機(jī)制動(dòng)作電位機(jī)制19051983U.Von Euler (瑞典瑞典)交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素1970兒茶酚胺代謝影響CAs的藥物電生理電生理1912J.Axelrod (美美)（兒茶酚胺）（兒茶酚胺）神經(jīng)化學(xué)神經(jīng)化學(xué)1913(左右腦左右腦)R.W.Sperry (美美)1981“腦功能側(cè)化腦功能

18、側(cè)化”D.Hubel (加加 美美)19261924T.Wiesel (瑞典瑞典 美美)信信息息加加工工視視皮皮層層E.Neher (德德)1991B.Sakmann (德德)大腦視覺(jué)信息加工視覺(jué)系統(tǒng)發(fā)育的可塑性膜膜片片鉗鉗單單通通道道方方法法學(xué)學(xué)膜片鉗技術(shù)單個(gè)離子通道電流記錄1999英，澳CambridgeCambridgeLevi Montalcini 1986 Nerve growth Factor (NGF) (Italy)2021/7/234242百年來(lái)與神經(jīng)科學(xué)有關(guān)的諾貝爾獎(jiǎng)獲得者選介(3)1850190019502000192619232000P.Greengard (美美)19

19、30E.Kandel (美美)A.Carlsson (瑞典瑞典)神經(jīng)系統(tǒng)中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白磷酸化蛋白磷酸化慢突觸傳遞慢突觸傳遞多巴胺多巴胺2021/7/2343432021/7/234444中中 國(guó)國(guó) 神神 經(jīng)經(jīng) 科科 學(xué)學(xué) 的的 發(fā)發(fā) 展展 開(kāi)開(kāi) 創(chuàng)創(chuàng) 者者: 張錫鈞(協(xié)和), 馮德培(協(xié)和,上海生理所),張香桐(上海生 理所,腦所).兩大事件兩大事件: 1950: 巴甫洛夫“條件反射”學(xué)說(shuō) 1966-1976: “文化革命”期間主要做“針刺麻醉”研究方向研究方向: 痛與鎮(zhèn)痛: 北京: 北醫(yī),中醫(yī)研究院 上海: 上醫(yī)大,中科院生理所, 腦所，神科所 視 覺(jué): 上海: 生理所 北京: 生物物理所

20、 神經(jīng)內(nèi)分泌: 西安: 四軍大 (垂體前葉) 上海: 二軍大 (甾體受體), 北醫(yī)大(神經(jīng)免疫) 其它（發(fā)育，再生，）2021/7/234545雜雜 志志:生理學(xué)報(bào)70%論文屬神經(jīng)生理 1927年創(chuàng)刊 (上海生理所) 中國(guó)神經(jīng)科學(xué)雜志 1998年創(chuàng)刊 (上海二軍大) 中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志 1995年創(chuàng)刊 (北醫(yī)大) 中國(guó)神經(jīng)解剖雜志 1985年創(chuàng)刊 (四軍大解剖系）大型專(zhuān)著大型專(zhuān)著: 神經(jīng)科學(xué)綱要 1993年 北醫(yī)大韓濟(jì)生主編 (156萬(wàn)字) 神經(jīng)科學(xué)原理 1999年 北醫(yī)大韓濟(jì)生主編 (200萬(wàn)字)2021/7/2346461.3 特點(diǎn)：特點(diǎn)：（1 1）神經(jīng)生物學(xué)具有清晰的發(fā)展脈絡(luò)）神經(jīng)生物學(xué)具

21、有清晰的發(fā)展脈絡(luò)起初是對(duì)腦和神經(jīng)系統(tǒng)的形態(tài)形態(tài)和總體功能總體功能的描述和分析；之后有更多的學(xué)科從不同側(cè)面介入其中，日益迅速地把研究推向了細(xì)胞細(xì)胞和分子水平分子水平。人們已經(jīng)不再停留在現(xiàn)象的描述，而是更著眼于在不同層次上的機(jī)制的分析，從現(xiàn)象深入到機(jī)制是現(xiàn)代自然科學(xué)發(fā)展的共同特點(diǎn)，神經(jīng)生物學(xué)可以說(shuō)是其縮影。 2021/7/234747（2 2）作為一門(mén)實(shí)驗(yàn)科學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)研究）作為一門(mén)實(shí)驗(yàn)科學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)研究的進(jìn)展在很大程度上有賴(lài)于研究技術(shù)和手的進(jìn)展在很大程度上有賴(lài)于研究技術(shù)和手段的發(fā)展和完善段的發(fā)展和完善在20世紀(jì)初，Cajal對(duì)神經(jīng)元形態(tài)的清晰描述，幾乎完全仰仗于Golgi銀染法的應(yīng)用。40年

22、代末，微電極記錄和染色技術(shù)的發(fā)展使人們對(duì)神經(jīng)活動(dòng)的認(rèn)識(shí)出現(xiàn)了革命性的變化。免疫組織化學(xué)方法的應(yīng)用，使對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)的研究與形態(tài)學(xué)研究有機(jī)地結(jié)合起來(lái)。2021/7/234848膜片鉗位技術(shù)在20世紀(jì)70年代末的發(fā)明和發(fā)展，大大促進(jìn)了對(duì)離子通道的研究，從而使人們對(duì)神經(jīng)活動(dòng)基本過(guò)程信號(hào)發(fā)生、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、突觸傳遞等的了解奠定在更堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)上。分子遺傳學(xué)方法的不斷更新，不僅使不少遺傳性神經(jīng)、精神疾患的缺損基因的定位得以成功，對(duì)了解特定基因在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能也起了重要的推動(dòng)作用。無(wú)創(chuàng)傷腦成象技術(shù)的建立和完善，為認(rèn)識(shí)活體腦的活動(dòng)及分析其機(jī)制，提供了前所未有的有力工具。2021/7/234949（3 3）從神經(jīng)生物

23、學(xué)的發(fā)展史中，找到合適）從神經(jīng)生物學(xué)的發(fā)展史中，找到合適的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本很重要的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本很重要早期對(duì)神經(jīng)興奮和動(dòng)作電位傳導(dǎo)規(guī)律的闡明，槍烏賊大神經(jīng)標(biāo)本功不可沒(méi)；對(duì)突觸傳遞過(guò)程的了解，神經(jīng)-肌肉接頭標(biāo)本所提供的信息，則甚于其他任何標(biāo)本。近年來(lái)，對(duì)腦的高級(jí)功能學(xué)習(xí)和記憶的基本機(jī)制的了解，在許多方面，依賴(lài)對(duì)一種低等的無(wú)脊椎動(dòng)物海兔的簡(jiǎn)單的神經(jīng)系統(tǒng)的研究。2021/7/235050(一一) 形態(tài)學(xué)方法形態(tài)學(xué)方法辣根過(guò)氧化物酶法（辣根過(guò)氧化物酶法（horseradish peroxdase, HRP）：）： HRP注射于神經(jīng)末梢所在部位，通過(guò)非特異性胞注射于神經(jīng)末梢所在部位，通過(guò)非特異性胞飲方式攝入，逆向運(yùn)至

24、胞體，然后用組織化學(xué)方飲方式攝入，逆向運(yùn)至胞體，然后用組織化學(xué)方法顯示?；蚪?jīng)胞體攝入，順向運(yùn)送至末梢部位。法顯示?；蚪?jīng)胞體攝入，順向運(yùn)送至末梢部位。1.1.束路追蹤法束路追蹤法1.4 研究方法：研究方法：2021/7/235151熒光染料法：熒光染料法： 主要用作逆向追蹤，其優(yōu)點(diǎn)是可作雙標(biāo)或多標(biāo)。如核主要用作逆向追蹤，其優(yōu)點(diǎn)是可作雙標(biāo)或多標(biāo)。如核黃標(biāo)記胞核，固藍(lán)或熒光金標(biāo)記胞質(zhì)黃標(biāo)記胞核，固藍(lán)或熒光金標(biāo)記胞質(zhì)。生物素追蹤法：生物素追蹤法： 一般使用生物素的衍生物作追蹤劑，如生物胞素（一般使用生物素的衍生物作追蹤劑，如生物胞素（biocytinbiocytin）電泳導(dǎo)入腦內(nèi)被神經(jīng)元攝取，主要用于

25、順向）電泳導(dǎo)入腦內(nèi)被神經(jīng)元攝取，主要用于順向追蹤。該法有效范圍明確，無(wú)過(guò)路纖維吸收問(wèn)題。神追蹤。該法有效范圍明確，無(wú)過(guò)路纖維吸收問(wèn)題。神經(jīng)生物素（經(jīng)生物素（neurobiotinneurobiotin）用于順行、逆行追蹤，運(yùn)送）用于順行、逆行追蹤，運(yùn)送速度較快，靈敏度高。速度較快，靈敏度高。2021/7/2352522. 2. 免疫組化法免疫組化法(immunohistochemistry)(immunohistochemistry) 用特異性抗體顯示組織化學(xué)成分的一種用特異性抗體顯示組織化學(xué)成分的一種方法。免疫組化法的基本步驟有固定、制片方法。免疫組化法的基本步驟有固定、制片、反應(yīng)三步。常用

26、于顯示各種神經(jīng)肽。、反應(yīng)三步。常用于顯示各種神經(jīng)肽。3. 3. 原位雜交法原位雜交法 ( in situ hybridization) ( in situ hybridization) 用于顯示細(xì)胞內(nèi)的用于顯示細(xì)胞內(nèi)的mRNAmRNA，標(biāo)記物分為同，標(biāo)記物分為同位素和非同位素，同位素有位素和非同位素，同位素有3232P P，3535S S，3 3HH。非。非同位素有生物素同位素有生物素(biotin)(biotin)，地高辛等。，地高辛等。2021/7/2353534. 4. 激光共聚焦顯微鏡激光共聚焦顯微鏡 (laser scanning confocal (laser scanning c

27、onfocal microscopy )microscopy ) 用用0.2 0.2 mm的光束可透射厚的光束可透射厚0.51mm0.51mm的細(xì)的細(xì)胞組織，用于神經(jīng)遞質(zhì)、受體和轉(zhuǎn)運(yùn)體的定位胞組織，用于神經(jīng)遞質(zhì)、受體和轉(zhuǎn)運(yùn)體的定位；神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的三維重建；活的神經(jīng)細(xì)胞的動(dòng)；神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的三維重建；活的神經(jīng)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化；也可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)掃描，顯示細(xì)態(tài)變化；也可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)掃描，顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分（如胞內(nèi)某種成分（如Ca Ca 2+2+ ）的變化過(guò)程，線(xiàn)粒體）的變化過(guò)程，線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、染色體等的探測(cè)和分析、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、染色體等的探測(cè)和分析，DNADNA、RNARNA、酶的含

28、量測(cè)定。、酶的含量測(cè)定。 2021/7/2354541. 行為學(xué)方法行為學(xué)方法 行為學(xué)方法是建立在條件反射基礎(chǔ)之上。行為學(xué)方法是建立在條件反射基礎(chǔ)之上。條件反射是著名的俄國(guó)生理學(xué)家巴甫洛夫于條件反射是著名的俄國(guó)生理學(xué)家巴甫洛夫于20世紀(jì)初提出的。條件反射是動(dòng)物個(gè)體生活世紀(jì)初提出的。條件反射是動(dòng)物個(gè)體生活過(guò)程中適應(yīng)環(huán)境的變化，在非條件反射基礎(chǔ)過(guò)程中適應(yīng)環(huán)境的變化，在非條件反射基礎(chǔ)上逐漸形成的。上逐漸形成的。2021/7/2355552021/7/2356562021/7/2357572021/7/235858 2. 2. 神經(jīng)遞質(zhì)釋放量的測(cè)定神經(jīng)遞質(zhì)釋放量的測(cè)定腦透析法：腦透析法： 可測(cè)定不同腦

29、區(qū)的多巴胺及其代謝產(chǎn)物，可測(cè)定不同腦區(qū)的多巴胺及其代謝產(chǎn)物，氨基酸，乙酰膽堿，去甲腎上腺素，氨基酸，乙酰膽堿，去甲腎上腺素，5HT等。神經(jīng)肽的測(cè)定較難，主要由于探頭半透等。神經(jīng)肽的測(cè)定較難，主要由于探頭半透膜要求較高。膜要求較高。2021/7/2359591. 電壓鉗電壓鉗 (voltage clamp)(voltage clamp)HodgkinHodgkin等，等，2020世紀(jì)世紀(jì)5050年代年代電壓電極、電流電極電壓電極、電流電極反饋放大器反饋放大器 (feedback amplifer)(feedback amplifer)結(jié)合藥理學(xué)方法結(jié)合藥理學(xué)方法 2021/7/2360602.

30、2. 膜片鉗膜片鉗 (patch clamp)(patch clamp)NeherNeher和和SakmannSakmann，19761976（nAchRnAchR單離子通單離子通道電流，道電流，19911991，Noble Noble ）可測(cè)量單通道離子電流可測(cè)量單通道離子電流現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)：通道的開(kāi)放和關(guān)閉都是突然發(fā)生并現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)：通道的開(kāi)放和關(guān)閉都是突然發(fā)生并似乎是全或無(wú)式的，開(kāi)放的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短不一似乎是全或無(wú)式的，開(kāi)放的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短不一，但都有恒定的電導(dǎo)值。，但都有恒定的電導(dǎo)值。2021/7/2361612021/7/236262( (四四) )生物化學(xué)方法生物化學(xué)方法1. 1. 放射免疫法放

31、射免疫法(radioimmunoassay, RIA) 用抗原抗體反應(yīng)原理，將抗原標(biāo)記用抗原抗體反應(yīng)原理，將抗原標(biāo)記上放射性同位素，用來(lái)測(cè)定與此抗原性質(zhì)相上放射性同位素，用來(lái)測(cè)定與此抗原性質(zhì)相同的物質(zhì)。同的物質(zhì)。RIARIA包括以下基本步驟：樣品采包括以下基本步驟：樣品采集、加樣、反應(yīng)、分離、測(cè)定抗原抗體復(fù)集、加樣、反應(yīng)、分離、測(cè)定抗原抗體復(fù)合物的放射性（合物的放射性（cpmcpm）, , 與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照計(jì)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照計(jì)算待測(cè)物質(zhì)含量。算待測(cè)物質(zhì)含量。 2021/7/2363632.2.高效液相層析高效液相層析 ( high performance liquid chromatography

32、, ( high performance liquid chromatography, HPLC) HPLC) 利用分子間特異性及可逆性的結(jié)合，將其一利用分子間特異性及可逆性的結(jié)合，將其一方固定于層析的固定相中，使流動(dòng)相中能特異性結(jié)方固定于層析的固定相中，使流動(dòng)相中能特異性結(jié)合于該分子的物質(zhì)與其結(jié)合，然后再改變條件，使合于該分子的物質(zhì)與其結(jié)合，然后再改變條件，使被分離物質(zhì)洗脫，用一定波長(zhǎng)紫外光檢測(cè)。被分離物質(zhì)洗脫，用一定波長(zhǎng)紫外光檢測(cè)。 HPLCHPLC是分離分析生物活性物質(zhì)和受體的重要手段是分離分析生物活性物質(zhì)和受體的重要手段。2021/7/236464( (五五) )分子生物學(xué)方法分子生物

33、學(xué)方法1. 基因分子克隆及表達(dá)基因分子克隆及表達(dá) 人類(lèi)染色體大約有人類(lèi)染色體大約有3109堿基和堿基和5-10萬(wàn)個(gè)基因。基因克隆是萬(wàn)個(gè)基因?；蚩寺∈翘囟ɑ驈幕蚪M中分離出來(lái)在細(xì)菌中擴(kuò)增的過(guò)程?？寺』囟ɑ驈幕蚪M中分離出來(lái)在細(xì)菌中擴(kuò)增的過(guò)程?？寺』蚰康氖谦@得大量的純因目的是獲得大量的純DNA分子。分子。 2. PCR PCR是一種酶促化學(xué)反應(yīng)是一種酶促化學(xué)反應(yīng),可在含有多種核酸分子的混合液可在含有多種核酸分子的混合液中選擇性地大量擴(kuò)增某一種核酸分子的特定序列。該方法具中選擇性地大量擴(kuò)增某一種核酸分子的特定序列。該方法具有極高的靈敏度和特異性，在含有多種雜質(zhì)的條件下，可選有極高的靈敏度和

34、特異性，在含有多種雜質(zhì)的條件下，可選擇性擴(kuò)增細(xì)胞基因組中一個(gè)特定的擇性擴(kuò)增細(xì)胞基因組中一個(gè)特定的DNA片段達(dá)數(shù)百萬(wàn)至數(shù)千片段達(dá)數(shù)百萬(wàn)至數(shù)千萬(wàn)倍。萬(wàn)倍。2021/7/2365653. 轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因(Transfers gene) 根據(jù)遺傳學(xué)原理根據(jù)遺傳學(xué)原理,在體外合成含有突變序列的在體外合成含有突變序列的DNA片段片段,植入細(xì)胞染色體，通過(guò)制造定位定向轉(zhuǎn)基因改變哺乳動(dòng)物植入細(xì)胞染色體，通過(guò)制造定位定向轉(zhuǎn)基因改變哺乳動(dòng)物的基因型以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物。的基因型以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物。4. 基因敲除基因敲除(gene knockout) 基因敲除是基因敲除是80年代初出現(xiàn)的一項(xiàng)新的基因工程技術(shù)。年代初出現(xiàn)

35、的一項(xiàng)新的基因工程技術(shù)。 采用同源重組的方法采用同源重組的方法,用體外合成的無(wú)效基因或突變基因取用體外合成的無(wú)效基因或突變基因取代相應(yīng)正?；虼鄳?yīng)正?；?再應(yīng)用轉(zhuǎn)基因方法孵育出轉(zhuǎn)基因動(dòng)物再應(yīng)用轉(zhuǎn)基因方法孵育出轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,即即為基因敲除動(dòng)物。通過(guò)分析基因敲除動(dòng)物單基因缺陷來(lái)研為基因敲除動(dòng)物。通過(guò)分析基因敲除動(dòng)物單基因缺陷來(lái)研究基因調(diào)控、基因功能、建立疾病模型、藥物作用及基因究基因調(diào)控、基因功能、建立疾病模型、藥物作用及基因治療。治療。 2021/7/2366665. 生物芯片技術(shù)（生物芯片技術(shù)（biochip） 生物芯片技術(shù)是在生物芯片技術(shù)是在1個(gè)平方厘米大小的薄型載體上，個(gè)平方厘米大小的薄型載體上，通過(guò)微加工技術(shù)獲得微米級(jí)結(jié)構(gòu)，并與生物化學(xué)處理通過(guò)微加工技術(shù)獲得微米級(jí)結(jié)構(gòu)，并與生物化學(xué)處理等技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一種新型技術(shù)。它可以把等技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一種新型技術(shù)。它可以把多至幾十萬(wàn)個(gè)的生命信息集成在一塊芯片上，進(jìn)行各多至幾十萬(wàn)個(gè)的生命信息集成在一塊芯片上，進(jìn)行各種與生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)相關(guān)的生物化學(xué)反應(yīng)，對(duì)基因、種與生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)相關(guān)的生物化學(xué)反應(yīng)，對(duì)基