3～5細(xì)胞融合技術(shù)·干細(xì)胞工程·克隆技術(shù)

1、第三五節(jié) 細(xì)胞融合技術(shù)干細(xì)胞工程克隆技術(shù) 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1.1.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 原原理理 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 過過程程植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 相相關(guān)關(guān)酶酶融融合合方方法法結(jié)結(jié)果果意意義義纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶物理法物理法: :離心、電激、振動(dòng)；離心、電激、

2、振動(dòng)；化學(xué)法化學(xué)法: :聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)除物理法和化學(xué)法外還除物理法和化學(xué)法外還可以用滅活的病毒誘導(dǎo)可以用滅活的病毒誘導(dǎo)雜種植株雜種植株雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性, ,獲得雜種植株獲得雜種植株突破了有性雜交方法的突破了有性雜交方法的局限局限, ,使遠(yuǎn)緣雜交成為可使遠(yuǎn)緣雜交成為可能能2.2.單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備(1)(1)制備過程：制備過程：注射特定抗原注射特定抗原的免疫小鼠的免疫小鼠骨髓瘤骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞專一抗體專一抗體檢驗(yàn)陽性檢驗(yàn)陽性篩選培養(yǎng)篩選培養(yǎng)克隆上述克隆上述雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞專一抗

3、體專一抗體檢驗(yàn)陽性檢驗(yàn)陽性單克隆抗體單克隆抗體將不同雜交將不同雜交細(xì)胞分開細(xì)胞分開, ,并克隆專一抗體，并克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞檢驗(yàn)陽性細(xì)胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)從培養(yǎng)液從培養(yǎng)液中提取中提取從小鼠腹水從小鼠腹水中提取中提取(2)(2)關(guān)鍵環(huán)節(jié)：關(guān)鍵環(huán)節(jié)：取相應(yīng)取相應(yīng)B B淋巴細(xì)胞前必須先注射相應(yīng)抗原，否則不能獲得單克隆淋巴細(xì)胞前必須先注射相應(yīng)抗原，否則不能獲得單克隆抗體。抗體。細(xì)胞融合后需經(jīng)二次篩選：細(xì)胞融合后需經(jīng)二次篩選：第一次：在特定的選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞第一次：在特定的選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞(B(B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞胞和骨髓瘤細(xì)胞) )和融合的

4、具有同種核的細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞(BB(BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞融合細(xì)胞) )都會(huì)死亡，只有雜交瘤細(xì)胞才能生長。其特點(diǎn)是既能迅都會(huì)死亡，只有雜交瘤細(xì)胞才能生長。其特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生單一的特異性抗體。速大量繁殖，又能產(chǎn)生單一的特異性抗體。第二次：經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)第二次：經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞胞( (很多種雜交瘤細(xì)胞很多種雜交瘤細(xì)胞) )，需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)篩選后，需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)篩選后才可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。才可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞?！靖呖季剧姼?/p>

5、考警示鐘】1.1.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合中酶的作用對象不同，纖維素植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合中酶的作用對象不同，纖維素酶和果膠酶作用于細(xì)胞壁，而胰蛋白酶等作用于細(xì)胞間質(zhì)。酶和果膠酶作用于細(xì)胞壁，而胰蛋白酶等作用于細(xì)胞間質(zhì)。2.2.滅活的病毒保持了其抗原性，但毒性消失。滅活的病毒保持了其抗原性，但毒性消失。3.3.植物雜交細(xì)胞在激素誘導(dǎo)下能表達(dá)出全能性，但動(dòng)物雜交細(xì)胞植物雜交細(xì)胞在激素誘導(dǎo)下能表達(dá)出全能性，但動(dòng)物雜交細(xì)胞的全能性不能表達(dá)。的全能性不能表達(dá)。 比較三種造血干細(xì)胞移植的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)比較三種造血干細(xì)胞移植的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)優(yōu)優(yōu) 點(diǎn)點(diǎn)缺缺 點(diǎn)點(diǎn)骨髓移植骨髓移植外周血干外周血干細(xì)胞移植細(xì)胞

6、移植是經(jīng)典的移植方法，效是經(jīng)典的移植方法，效果可靠果可靠尋找配型相同的骨髓難，尋找配型相同的骨髓難，捐獻(xiàn)者和患者都要遭受很捐獻(xiàn)者和患者都要遭受很大的痛苦大的痛苦方法比較簡單，對供者方法比較簡單，對供者安全，影響小，幾乎無安全，影響小，幾乎無不適反應(yīng)不適反應(yīng)外周血干細(xì)胞數(shù)量采集困外周血干細(xì)胞數(shù)量采集困難，不能滿足移植所需數(shù)難，不能滿足移植所需數(shù)量；收集的外周血干細(xì)胞量；收集的外周血干細(xì)胞可能混雜有腫瘤細(xì)胞；費(fèi)可能混雜有腫瘤細(xì)胞；費(fèi)用較高用較高優(yōu)優(yōu) 點(diǎn)點(diǎn)缺缺 點(diǎn)點(diǎn)臍帶血干臍帶血干細(xì)胞移植細(xì)胞移植臍帶血資源豐富、采臍帶血資源豐富、采集簡單；異體間排斥集簡單；異體間排斥反應(yīng)小，再生能力強(qiáng)；反應(yīng)小，再生

7、能力強(qiáng)；純度高；配型相合的純度高；配型相合的要求相對較低，可擴(kuò)要求相對較低，可擴(kuò)大供者范圍；成功率大供者范圍；成功率高高目前不適用于高體重成目前不適用于高體重成人，另外，血小板恢復(fù)人，另外，血小板恢復(fù)較慢較慢 動(dòng)物體細(xì)胞核移植與克隆動(dòng)物動(dòng)物體細(xì)胞核移植與克隆動(dòng)物1.1.原理：動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性原理：動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性2.2.過程過程【高考警示鐘高考警示鐘】1.1.供體細(xì)胞：取優(yōu)良動(dòng)物的體細(xì)胞培養(yǎng)，一般選用傳代供體細(xì)胞：取優(yōu)良動(dòng)物的體細(xì)胞培養(yǎng)，一般選用傳代1010代以內(nèi)代以內(nèi)的細(xì)胞，這樣可以保證正常的二倍體核型。的細(xì)胞，這樣可以保證正常的二倍體核型。2.2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一種無性繁殖

8、技術(shù)，用核移植的方法得到動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。 動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體制備動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體制備【典例訓(xùn)練典例訓(xùn)練1 1】有性生殖的生物產(chǎn)生后代需進(jìn)行受精作用，植物有性生殖的生物產(chǎn)生后代需進(jìn)行受精作用，植物體細(xì)胞雜交要進(jìn)行原生質(zhì)體的融合，單克隆抗體的制備需進(jìn)行動(dòng)體細(xì)胞雜交要進(jìn)行原生質(zhì)體的融合，單克隆抗體的制備需進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞融合，可見細(xì)胞的融合技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。下列為細(xì)胞物細(xì)胞融合，可見細(xì)胞的融合技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。下列為細(xì)胞融合的簡略過程，據(jù)圖回答相關(guān)問題：融合的簡略過程，據(jù)圖回答相關(guān)問題：(1)(1)若若a a

9、、b b分別是基因型為分別是基因型為HhrrHhrr、hhRrhhRr兩個(gè)煙草品種的花粉，且這兩個(gè)煙草品種的花粉，且這兩對基因分別位于兩對同源染色體上。由于受一對隱性純合基因兩對基因分別位于兩對同源染色體上。由于受一對隱性純合基因( (rrrr或或hhhh) )的作用，在光照強(qiáng)度大于的作用，在光照強(qiáng)度大于800lx800lx時(shí)都不能生長。要想從融時(shí)都不能生長。要想從融合細(xì)胞的培養(yǎng)液中分離出基因型為合細(xì)胞的培養(yǎng)液中分離出基因型為HhRrHhRr的雜種細(xì)胞，較為簡便的的雜種細(xì)胞，較為簡便的篩選方法是篩選方法是_。(2)(2)若若a a、b b表示兩種植物體細(xì)胞，則由表示兩種植物體細(xì)胞，則由d d細(xì)

10、胞形成雜種植株的原理細(xì)胞形成雜種植株的原理是是_，這種育種方法的優(yōu)點(diǎn)是，這種育種方法的優(yōu)點(diǎn)是_。(3)(3)若若a a、b b分別為骨髓瘤細(xì)胞和分別為骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞，則淋巴細(xì)胞，則d d細(xì)胞特點(diǎn)是細(xì)胞特點(diǎn)是_。由由d d細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較，具有細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較，具有_的的特點(diǎn)。特點(diǎn)。生產(chǎn)上一般不能通過直接培養(yǎng)生產(chǎn)上一般不能通過直接培養(yǎng)B B淋巴細(xì)胞的方法生產(chǎn)單克隆抗體的淋巴細(xì)胞的方法生產(chǎn)單克隆抗體的主要原因是主要原因是_。(4)(4)下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解，請用箭頭把下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解，請用箭頭把代表各圖

11、解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來：代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來：_?！窘忸}指南解題指南】1.1.考查實(shí)質(zhì)：植物體細(xì)胞雜交與單克隆抗體的制備?？疾閷?shí)質(zhì)：植物體細(xì)胞雜交與單克隆抗體的制備。2.2.解題關(guān)鍵：解題關(guān)鍵：(1)hr(1)hr是是a a、b b產(chǎn)生配子中相同的配子，另外兩種配子分別是產(chǎn)生配子中相同的配子，另外兩種配子分別是HrHr、hRhR。(2)(2)兩個(gè)不同的細(xì)胞形成的雜種細(xì)胞發(fā)育成植株。兩個(gè)不同的細(xì)胞形成的雜種細(xì)胞發(fā)育成植株。(3)(3)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)、骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)、B B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)與融合后的細(xì)胞具備的特點(diǎn)之淋巴細(xì)胞特點(diǎn)與融合后的細(xì)胞具備的特點(diǎn)之

12、間的關(guān)系。間的關(guān)系。(4)(4)單克隆抗體產(chǎn)生的過程由細(xì)胞融合和雜交細(xì)胞的培養(yǎng)兩部分組單克隆抗體產(chǎn)生的過程由細(xì)胞融合和雜交細(xì)胞的培養(yǎng)兩部分組成。成。【解析解析】(1)a(1)a的花粉基因型為的花粉基因型為HrHr和和hrhr，b b的花粉基因型為的花粉基因型為hRhR和和hrhr，只有只有HhRrHhRr的基因組合方式?jīng)]有隱性純合基因，所以雜種細(xì)胞的基因組合方式?jīng)]有隱性純合基因，所以雜種細(xì)胞HhRrHhRr能在光照強(qiáng)度大于能在光照強(qiáng)度大于800lx800lx時(shí)生長。時(shí)生長。(2)(2)植物體細(xì)胞雜交形成植株，是植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)，克服了植物體細(xì)胞雜交形成植株，是植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)，克服了自

13、然條件下物種之間的生殖隔離。自然條件下物種之間的生殖隔離。(3)(3)在單克隆抗體產(chǎn)生過程中細(xì)胞在單克隆抗體產(chǎn)生過程中細(xì)胞d d是雜交瘤細(xì)胞，具備了融合前是雜交瘤細(xì)胞，具備了融合前兩種細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)，能無限增殖且產(chǎn)生特定抗體。而且反復(fù)篩選的兩種細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)，能無限增殖且產(chǎn)生特定抗體。而且反復(fù)篩選的細(xì)胞細(xì)胞d d產(chǎn)生的抗體品質(zhì)優(yōu)良。產(chǎn)生的抗體品質(zhì)優(yōu)良。B B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特定抗體，但不能淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特定抗體，但不能無限增殖，無法得到大量的抗體。無限增殖，無法得到大量的抗體。(4)(4)只能注射特定抗原后才能得到特定的只能注射特定抗原后才能得到特定的B B淋巴細(xì)胞，再與骨髓瘤淋巴細(xì)胞，再與骨髓瘤細(xì)胞融

14、合，經(jīng)篩選后可體內(nèi)培養(yǎng)也可體外培養(yǎng)以得到大量單克隆細(xì)胞融合，經(jīng)篩選后可體內(nèi)培養(yǎng)也可體外培養(yǎng)以得到大量單克隆抗體?？贵w。答案答案: :(1)(1)給予大于給予大于800lx800lx的光照的光照(2)(2)植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙(3)(3)既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高、化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng)、靈敏度高、化學(xué)性質(zhì)單一B B淋巴細(xì)胞不能無限增殖淋巴細(xì)胞不能無限增殖(4)(4) 【互動(dòng)探究互動(dòng)探究】(1)(1)若若a a、b b表示兩種植物體細(xì)胞，則融合前需進(jìn)行什表示兩種植物體細(xì)胞，則融合前需

15、進(jìn)行什么操作？么操作？提示：提示：利用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。利用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。分析：分析：細(xì)胞融合是利用細(xì)胞膜的流動(dòng)性，細(xì)胞壁如果存在無法進(jìn)細(xì)胞融合是利用細(xì)胞膜的流動(dòng)性，細(xì)胞壁如果存在無法進(jìn)行融合。行融合。(2)(2)植物體細(xì)胞雜交與單克隆抗體產(chǎn)生過程中，植物體細(xì)胞雜交與單克隆抗體產(chǎn)生過程中，a a、b b融合的方法相融合的方法相同嗎？同嗎？提示：提示：植物細(xì)胞可用物理法如電激等，化學(xué)法如用植物細(xì)胞可用物理法如電激等，化學(xué)法如用PEGPEG誘導(dǎo)；動(dòng)物誘導(dǎo)；動(dòng)物細(xì)胞除物理法和化學(xué)法外還可以用滅活的病毒誘導(dǎo)。細(xì)胞除物理法和化學(xué)法外還可以用滅活的病毒誘導(dǎo)。 植物體細(xì)胞融合植物體細(xì)

16、胞融合【典例訓(xùn)練典例訓(xùn)練2 2】通過細(xì)胞工程技術(shù)，利用甲、乙兩種植物的各自優(yōu)通過細(xì)胞工程技術(shù)，利用甲、乙兩種植物的各自優(yōu)勢勢( (甲耐鹽、乙高產(chǎn)甲耐鹽、乙高產(chǎn)) )，培育高產(chǎn)耐鹽的雜種植株。請完善下列實(shí)，培育高產(chǎn)耐鹽的雜種植株。請完善下列實(shí)驗(yàn)流程并回答問題：驗(yàn)流程并回答問題：(1)A(1)A是是_酶，酶，B B是是_，D D是具有是具有_優(yōu)良性狀的幼芽。優(yōu)良性狀的幼芽。D D長長成的幼苗需要選擇的原因是成的幼苗需要選擇的原因是_。(2)(2)由由C C形成植株的過程利用了形成植株的過程利用了_技術(shù)，形成愈傷組織需要經(jīng)過技術(shù)，形成愈傷組織需要經(jīng)過_過程，愈傷組織形成過程，愈傷組織形成D D需要經(jīng)

17、過需要經(jīng)過_過程。整個(gè)培養(yǎng)過程要過程。整個(gè)培養(yǎng)過程要在在_條件下進(jìn)行。條件下進(jìn)行。(3)(3)植物體細(xì)胞融合成功的標(biāo)志是植物體細(xì)胞融合成功的標(biāo)志是_。目前植物體細(xì)胞雜交還。目前植物體細(xì)胞雜交還存在許多問題沒有解決，如存在許多問題沒有解決，如_，盡管如此，這項(xiàng)新技術(shù)在，盡管如此，這項(xiàng)新技術(shù)在_等方面取得的重大突破還是震撼人心的。等方面取得的重大突破還是震撼人心的。【解題指南解題指南】1.1.知識(shí)儲(chǔ)備：植物體細(xì)胞雜交過程和植物組織培養(yǎng)過程。知識(shí)儲(chǔ)備：植物體細(xì)胞雜交過程和植物組織培養(yǎng)過程。2.2.解題關(guān)鍵：解題關(guān)鍵：(1)(1)明確誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合后產(chǎn)生的雜種細(xì)胞有多種，明確誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合后產(chǎn)生的

18、雜種細(xì)胞有多種，需經(jīng)篩選。需經(jīng)篩選。(2)(2)注意流程圖中關(guān)鍵字眼：注意流程圖中關(guān)鍵字眼：“用鈉鹽濃度為用鈉鹽濃度為0.6%0.6%的固體培養(yǎng)基培的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)養(yǎng)”，即篩選掉了不耐鹽的愈傷組織。，即篩選掉了不耐鹽的愈傷組織?！窘馕鼋馕觥恐参锛?xì)胞經(jīng)纖維素酶和果膠酶處理后，去除細(xì)胞壁，得植物細(xì)胞經(jīng)纖維素酶和果膠酶處理后，去除細(xì)胞壁，得到原生質(zhì)體。兩個(gè)原生質(zhì)體經(jīng)到原生質(zhì)體。兩個(gè)原生質(zhì)體經(jīng)PEGPEG誘導(dǎo)后融合，再生出細(xì)胞壁后變誘導(dǎo)后融合，再生出細(xì)胞壁后變成雜種細(xì)胞，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可得到愈傷組織、叢芽結(jié)構(gòu)成雜種細(xì)胞，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可得到愈傷組織、叢芽結(jié)構(gòu)和試管苗，并非每個(gè)細(xì)胞都能表達(dá)出

19、耐鹽性狀，需要利用含鹽培和試管苗，并非每個(gè)細(xì)胞都能表達(dá)出耐鹽性狀，需要利用含鹽培養(yǎng)基進(jìn)行選擇。養(yǎng)基進(jìn)行選擇。(2)C(2)C細(xì)胞是雜種細(xì)胞，形成植株需要植物組織培養(yǎng)過程，經(jīng)歷了細(xì)胞是雜種細(xì)胞，形成植株需要植物組織培養(yǎng)過程，經(jīng)歷了細(xì)胞的脫分化和再分化過程。該過程涉及到培養(yǎng)基培養(yǎng)過程，所細(xì)胞的脫分化和再分化過程。該過程涉及到培養(yǎng)基培養(yǎng)過程，所以無菌操作非常重要。以無菌操作非常重要。(3)(3)植物細(xì)胞融合時(shí)，核質(zhì)都應(yīng)該進(jìn)行融合，當(dāng)細(xì)胞壁再生時(shí)，植物細(xì)胞融合時(shí)，核質(zhì)都應(yīng)該進(jìn)行融合，當(dāng)細(xì)胞壁再生時(shí)，說明融合后的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行正常的新陳代謝了，即融合說明融合后的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行正常的新陳代謝了，即

20、融合成功。植物體細(xì)胞雜交雖然克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，但成功。植物體細(xì)胞雜交雖然克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，但讓雜合體表達(dá)出兩種植物的優(yōu)良性狀有時(shí)還比較困難。讓雜合體表達(dá)出兩種植物的優(yōu)良性狀有時(shí)還比較困難。答案：答案：(1)(1)纖維素酶和果膠纖維素酶和果膠 融合的原生質(zhì)體融合的原生質(zhì)體 耐鹽耐鹽有耐鹽高產(chǎn)和耐鹽不高產(chǎn)兩種有耐鹽高產(chǎn)和耐鹽不高產(chǎn)兩種(2)(2)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 脫分化脫分化 再分化再分化 無菌無菌(3)(3)再生出新的細(xì)胞壁再生出新的細(xì)胞壁 不能按照人的意愿表達(dá)兩個(gè)親本的性狀不能按照人的意愿表達(dá)兩個(gè)親本的性狀克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙1.1.如圖

21、表示高等動(dòng)、植物細(xì)胞融合的部分過程，請據(jù)圖回答：如圖表示高等動(dòng)、植物細(xì)胞融合的部分過程，請據(jù)圖回答：(1)(1)若上圖表示植物體細(xì)胞雜交的部分過程，欲將丁細(xì)胞培育成若上圖表示植物體細(xì)胞雜交的部分過程，欲將丁細(xì)胞培育成植株，可選用植株，可選用_技術(shù)，這一技術(shù)的兩個(gè)關(guān)鍵步驟是技術(shù)，這一技術(shù)的兩個(gè)關(guān)鍵步驟是_和和_。(2)(2)若上圖表示制備單克隆抗體的部分過程，甲細(xì)胞為小鼠的骨若上圖表示制備單克隆抗體的部分過程，甲細(xì)胞為小鼠的骨髓瘤細(xì)胞，則乙細(xì)胞為髓瘤細(xì)胞，則乙細(xì)胞為_。在分離乙細(xì)胞之前，應(yīng)對小鼠進(jìn)。在分離乙細(xì)胞之前，應(yīng)對小鼠進(jìn)行的處理是行的處理是_。過程區(qū)別于植物細(xì)胞常用的誘導(dǎo)方法是。過程區(qū)別于

22、植物細(xì)胞常用的誘導(dǎo)方法是_，過程可利用，過程可利用_培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，篩選得到的丁細(xì)培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，篩選得到的丁細(xì)胞還需進(jìn)行胞還需進(jìn)行_和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。上述制備過程涉及到的生物技術(shù)有的能分泌所需抗體的細(xì)胞。上述制備過程涉及到的生物技術(shù)有_?！窘馕鼋馕觥?1)(1)將丁細(xì)胞培育成植株利用了植物組織培養(yǎng)的方法，將丁細(xì)胞培育成植株利用了植物組織培養(yǎng)的方法，包括脫分化和再分化過程，利用了細(xì)胞全能性原理。包括脫分化和再分化過程，利用了細(xì)胞全能性原理。(2)(2)甲細(xì)胞若為骨髓瘤細(xì)胞，則乙細(xì)胞為甲細(xì)胞若為骨髓瘤細(xì)胞，則乙

23、細(xì)胞為B B淋巴細(xì)胞，兩者融合淋巴細(xì)胞，兩者融合后會(huì)形成雜交瘤細(xì)胞，需要通過選擇培養(yǎng)基將產(chǎn)生特定抗體的后會(huì)形成雜交瘤細(xì)胞，需要通過選擇培養(yǎng)基將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選出來。動(dòng)物細(xì)胞融合除植物細(xì)胞融合的物理法、雜交瘤細(xì)胞篩選出來。動(dòng)物細(xì)胞融合除植物細(xì)胞融合的物理法、化學(xué)法外，還可以用滅活的病毒來誘導(dǎo)，細(xì)胞融合后，產(chǎn)生的化學(xué)法外，還可以用滅活的病毒來誘導(dǎo)，細(xì)胞融合后，產(chǎn)生的雜種細(xì)胞有多種，需經(jīng)特定的選擇培養(yǎng)基篩選。單克隆抗體制雜種細(xì)胞有多種，需經(jīng)特定的選擇培養(yǎng)基篩選。單克隆抗體制備過程中主要利用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。備過程中主要利用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。答案：答

24、案：(1)(1)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 脫分化脫分化 再分化再分化(2)B(2)B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 將抗原注射入小鼠體內(nèi)將抗原注射入小鼠體內(nèi) 用滅活的病毒誘導(dǎo)用滅活的病毒誘導(dǎo) 特定的選擇特定的選擇 克隆化培養(yǎng)克隆化培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)2.(20122.(2012哈爾濱模擬哈爾濱模擬) )如圖是利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)治療遺傳如圖是利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)治療遺傳性糖尿病性糖尿病( (基因缺陷導(dǎo)致胰島基因缺陷導(dǎo)致胰島B B細(xì)胞不能正常合成胰島素細(xì)胞不能正常合成胰島素) )的過程的過程設(shè)計(jì)圖解，請據(jù)圖回答：設(shè)計(jì)圖解，請據(jù)圖回答：(1)(1)圖中、所示

25、的結(jié)構(gòu)分別是圖中、所示的結(jié)構(gòu)分別是_、_，過程常，過程常用的方法是用的方法是_。(2)(2)圖中、所示的生物工程技術(shù)分別是圖中、所示的生物工程技術(shù)分別是_、_，利用利用_技術(shù)快速擴(kuò)增健康胰島技術(shù)快速擴(kuò)增健康胰島B B細(xì)胞基因的過程中，目的細(xì)胞基因的過程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在酶的作用下延伸形成基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在酶的作用下延伸形成DNADNA，該酶的特點(diǎn)是該酶的特點(diǎn)是_。該技術(shù)的原理是。該技術(shù)的原理是_。(3)(3)過程通常用做受體細(xì)胞的原因是過程通常用做受體細(xì)胞的原因是_。(4)(4)圖示治病的方法叫做圖示治病的方法叫做_，與一般的異體移植相比最大，與一般的異體移

26、植相比最大的優(yōu)點(diǎn)是的優(yōu)點(diǎn)是_。【解析解析】(1)(1)是細(xì)胞核，是細(xì)胞核移植技術(shù)得到的胚胎干細(xì)是細(xì)胞核，是細(xì)胞核移植技術(shù)得到的胚胎干細(xì)胞，是重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞。胞，是重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞。(2)(2)是細(xì)胞核移植，是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)得到早期胚胎。是細(xì)胞核移植，是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)得到早期胚胎。PCRPCR技技術(shù)可快速擴(kuò)增術(shù)可快速擴(kuò)增DNADNA，該技術(shù)需要耐高溫的，該技術(shù)需要耐高溫的DNADNA聚合酶催化。聚合酶催化。(3)(3)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培養(yǎng)常用受精卵或早期全能胚胎干細(xì)胞作受體細(xì)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培養(yǎng)常用受精卵或早期全能胚胎干細(xì)胞作受體細(xì)胞。胞。(4)(4)該圖為治療性克隆，自身細(xì)胞細(xì)胞核移植后得到的克隆器

27、官該圖為治療性克隆，自身細(xì)胞細(xì)胞核移植后得到的克隆器官不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。答案：答案：(1)(1)細(xì)胞核細(xì)胞核 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)( (或胚胎干細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞) )顯微注射法顯微注射法(2)(2)核移植技術(shù)核移植技術(shù) 早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)早期胚胎培養(yǎng)技術(shù) PCR PCR 耐高溫耐高溫DNADNA雙鏈復(fù)制雙鏈復(fù)制(3)(3)這些細(xì)胞還未分化，具有全能性，可以定向誘導(dǎo)分化成各類這些細(xì)胞還未分化，具有全能性，可以定向誘導(dǎo)分化成各類細(xì)胞、組織、器官細(xì)胞、組織、器官(4)(4)體外基因治療體外基因治療 沒有免疫排斥反應(yīng)沒有免疫排斥反應(yīng)3.(20123.(2012深圳模擬深圳模擬) )

28、以下為植物體細(xì)胞雜交技術(shù)流程圖，其中甲以下為植物體細(xì)胞雜交技術(shù)流程圖，其中甲和乙分別表示兩種二倍體植物細(xì)胞，所含有的染色體組分別是和乙分別表示兩種二倍體植物細(xì)胞，所含有的染色體組分別是AAAA和和BBBB。據(jù)圖分析回答：。據(jù)圖分析回答：(1)(1)過程發(fā)生的化學(xué)變化是過程發(fā)生的化學(xué)變化是_。(2)(2)將若干將若干a a和和b b 等量混合后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再經(jīng)過和，等量混合后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再經(jīng)過和，c c的細(xì)胞類型有的細(xì)胞類型有_。(3)(3)在采用化學(xué)法進(jìn)行過程時(shí)，一般是用在采用化學(xué)法進(jìn)行過程時(shí)，一般是用_作為誘導(dǎo)劑。作為誘導(dǎo)劑。(4)(4)植物體細(xì)胞雜交與自然狀況下的生殖細(xì)胞雜

29、交相比，前者的主植物體細(xì)胞雜交與自然狀況下的生殖細(xì)胞雜交相比，前者的主要意義是要意義是_?！窘馕鼋馕觥繙?zhǔn)確理解植物體細(xì)胞雜交的過程是解題的關(guān)鍵。準(zhǔn)確理解植物體細(xì)胞雜交的過程是解題的關(guān)鍵。(1)(1)植物體細(xì)胞雜交亦稱為原生質(zhì)體融合，是以植物的體細(xì)胞為材植物體細(xì)胞雜交亦稱為原生質(zhì)體融合，是以植物的體細(xì)胞為材料，經(jīng)特殊的酶處理后，用去掉了細(xì)胞壁的裸細(xì)胞料，經(jīng)特殊的酶處理后，用去掉了細(xì)胞壁的裸細(xì)胞原生質(zhì)體原生質(zhì)體為親本進(jìn)行融合的一種新型的生物技術(shù)。為親本進(jìn)行融合的一種新型的生物技術(shù)。(2)(2)將若干將若干a a和和b b 等量混合后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)過細(xì)胞融合，等量混合后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)

30、過細(xì)胞融合，c c的細(xì)胞類型包括沒有融合的細(xì)胞、相同細(xì)胞的融合和不同細(xì)胞的的細(xì)胞類型包括沒有融合的細(xì)胞、相同細(xì)胞的融合和不同細(xì)胞的融合，即融合，即AAAA、BBBB、AAAAAAAA、BBBBBBBB、AABBAABB。(3)(3)在采用化學(xué)法進(jìn)行過程時(shí)，一般是用聚乙二醇在采用化學(xué)法進(jìn)行過程時(shí)，一般是用聚乙二醇(PEG)(PEG)作為誘作為誘導(dǎo)劑。導(dǎo)劑。(4)(4)植物體細(xì)胞雜交的主要意義是克服了不同生物間遠(yuǎn)緣雜交不親植物體細(xì)胞雜交的主要意義是克服了不同生物間遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。和的障礙。答案：答案：(1)(1)纖維素和果膠發(fā)生水解纖維素和果膠發(fā)生水解(2)AA(2)AA、BBBB、AAAA

31、AAAA、BBBBBBBB、AABBAABB(3)(3)聚乙二醇聚乙二醇(PEG)(PEG)(4)(4)克服了不同生物間遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙克服了不同生物間遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙( (或擴(kuò)大了可用于雜或擴(kuò)大了可用于雜交的親本基因組合的范圍交的親本基因組合的范圍) )4.4.如圖表示將人成纖維細(xì)胞與小鼠細(xì)胞進(jìn)行融合，獲得部分雜種如圖表示將人成纖維細(xì)胞與小鼠細(xì)胞進(jìn)行融合，獲得部分雜種細(xì)胞的過程細(xì)胞的過程( (注：雜種細(xì)胞中人類的染色體會(huì)隨機(jī)丟失，各種雜種注：雜種細(xì)胞中人類的染色體會(huì)隨機(jī)丟失，各種雜種細(xì)胞保留人類染色體的種類和數(shù)量是不同的細(xì)胞保留人類染色體的種類和數(shù)量是不同的) )。請回答下列問題：。

32、請回答下列問題：(1)(1)圖中誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素有圖中誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素有_ ( (至少寫出兩至少寫出兩種種) )，再用特定的，再用特定的_培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，得到雜種細(xì)胞。培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，得到雜種細(xì)胞。(2)(2)培養(yǎng)雜種細(xì)胞時(shí)，根據(jù)細(xì)胞所需營養(yǎng)物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配培養(yǎng)雜種細(xì)胞時(shí)，根據(jù)細(xì)胞所需營養(yǎng)物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制培養(yǎng)基，此外經(jīng)常會(huì)在培養(yǎng)基中加入制培養(yǎng)基，此外經(jīng)常會(huì)在培養(yǎng)基中加入_。培養(yǎng)過程中細(xì)胞需。培養(yǎng)過程中細(xì)胞需置于含置于含COCO2 2的混合氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，的混合氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，COCO2 2的主要作用是維持培的主要作用是維持培養(yǎng)液的養(yǎng)液的_。(3

33、)(3)若只考慮人的成纖維細(xì)胞與鼠細(xì)胞兩兩融合形成的雜種細(xì)胞，若只考慮人的成纖維細(xì)胞與鼠細(xì)胞兩兩融合形成的雜種細(xì)胞，假如每種雜種細(xì)胞只保留了人的假如每種雜種細(xì)胞只保留了人的1 1條染色體，從染色體組成的角度條染色體，從染色體組成的角度考慮，雜種細(xì)胞可能有考慮，雜種細(xì)胞可能有_種。種?！窘馕鼋馕觥?1)(1)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法包括物理方法誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法包括物理方法( (如電激如電激) )、化、化學(xué)方法學(xué)方法( (如聚乙二醇如聚乙二醇) )、生物方法、生物方法( (如滅活的病毒如滅活的病毒) )。通過選擇培養(yǎng)。通過選擇培養(yǎng)基將雜種細(xì)胞篩選出來?；鶎㈦s種細(xì)胞篩選出來。(2)(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液一般包括糖類、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液一般包括糖類、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、動(dòng)物血漿。微量元素、動(dòng)物血清、動(dòng)物血漿。(3)(3)人體細(xì)胞中含有人體細(xì)胞中含有2424種染色體，分別是種染色體，分別是2222種常染色體和種常染色體和2 2種性染種性染色體色體( (即即X X染色體和染色體和Y Y染色體染色體) )。答案：答案：(1)PEG(1)PEG、滅活的病毒、電激、滅活的病毒、電激( (寫出兩種即可寫出兩種即可) )選擇性選擇性(2)(2)動(dòng)物血清、血漿動(dòng)物血清、血漿 pHpH(3)24(3)245.5.如圖為制