污水微生物指標檢查法

1、邯鄲礦業(yè)集團總醫(yī)院污水排放微生物指標檢測方法污水總大腸菌群的檢驗方法一、采樣方法用采水器或其他滅菌容器采取污水樣1000毫升，放入滅菌瓶內(nèi)，如果是經(jīng)加氯處理的污水，需加1.5%硫代硫酸鈉5毫升中和余氯。二、檢驗方法總大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌在37恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時，能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣?？偞竽c菌群數(shù)系指每升污水中，所含的總大腸菌群的數(shù)目。（一）初發(fā)酵試驗：以無菌操作將各盛有3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5毫升的5支發(fā)酵管內(nèi)，各接種污水樣10毫升，將各盛有單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液約10毫升5支的發(fā)酵管內(nèi)，各接種污水樣1毫升，再將各盛有單料乳糖蛋白臟培養(yǎng)液約10毫升的5支發(fā)酵

2、管內(nèi)，各接種110稀釋的污水樣1毫升（相當于原污水樣0.1毫升）。將此15支管已接種的發(fā)酵管置于37恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時。（二）平板分離：經(jīng)培養(yǎng)24小時后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，置37恒溫箱培養(yǎng)1824小時，挑選符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分，進行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。1 伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤：（1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；（2）紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；（3）淡紫紅色、中心色較深的菌落。2 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤：（1）紫紅色，具有金屬光澤的菌落；（2）深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；（3）淡

3、紅色，中心色較深的菌落。（三）復(fù)發(fā)酵試驗：涂片、鏡檢的菌落，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落13個接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內(nèi)，然后置于37恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者（包括小量產(chǎn)氣）即證實有大腸菌群存在。根據(jù)證實有大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查對總大腸菌群近似數(shù)（MpN）檢索表（附表1.1）即是每升污水中的大腸菌群數(shù)。此MPN表中所列數(shù)值系指100毫升水樣中的細菌數(shù)，因此需將表中的數(shù)值再乘10、為每1000毫升水中的細菌數(shù)。舉例：某一污水樣接種10毫升的5支管中有5管為陽性；接種1毫升的5支管中有2管為陽性；接種110稀釋水樣1毫升（即原污水樣0.1毫升）的5支管皆為陰性，即結(jié)果

4、為5、2、0，查附表1.1得知100毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49個，即1000毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49×10490個?？偞竽c菌群近似數(shù)（MPN）檢索表附表接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.1000000 000000 012345 024579 000000444444 012345 8911131517 000000111111 012345 2467911 000000555555 012345 91113151719 000000222222 012345 46791113 111111 0

5、00000012345 24681012 000000333333012345 679111315 111111 111111 012345 468101214 （總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）續(xù)表1 接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.1111111222222 012345 6810121517 222222 000000 012345 579121416 111111333333 012345 81012151719 222222 111111 012345

6、 7912141719 111111444444 012345 111315171922 222222 222222 012345 91214171922 111111555555 012345 131517192224 222222 333333 012345 121217202225 （總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）續(xù)表2 接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.1222222 444444 012345 151720232528 333333 222222 01

7、2345 141720242731 222222 555555 012345 172023262932 333333 333333 012345 172124283236 333333 000000 012345 81113162023 333333 444444 012345 212428323640 333333 111111 012345 111417202327 333333 555555 012345 252932374145 （總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）續(xù)表3 接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每10

8、0毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.1444444 000000 012345 131721253036 444444 444444 012345 344047546269 444444 111111 012345 172126313642 444444 555555 012345 414856647281 44444 4 222222 012345 222632384450 555555 000000 012345 233143587695 444444333333012345273339455259 55555511111101234533466384110130 （總接種量

9、55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）續(xù)表4 接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.1555555222222012345497094120150180 555555444444012345130170220280350430 555555333333012345791101401802102505555555555550123452403505409201600>1600 （總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）污水沙門氏菌屬和志賀

10、氏菌屬的檢驗方法一、樣品處理水樣500毫升，加入滅菌的10%無水碳酸鈉溶液2毫升，混合后，再加入滅菌的10%硫酸鐵溶液1.75毫升，混合均勻。靜置1小時，傾去上清液（沉淀物約為40毫升左右）。進行沙門氏菌屬和志賀氏菌屬培養(yǎng)。二、增菌培養(yǎng)1 沙門氏菌屬：吸取樣品處理后的沉淀物20毫升，加于20毫升雙料亞硒酸鹽（SF）增菌液內(nèi)，也可加于亞硒酸鹽甘露醇（SFM）或氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液內(nèi)。置于37或41恒溫箱；培養(yǎng)24小時。2 志賀氏菌屬：吸取樣品處理后的沉淀物20毫升，加于20毫升雙料革蘭氏陰性（GN）增菌液內(nèi)，置于37恒溫箱，培養(yǎng)6小時。三、平板分離1 沙門氏菌屬：取上述經(jīng)培養(yǎng)的沙門氏菌用增

11、菌培養(yǎng)液，接種沙門氏菌屬志賀氏菌屬（SS）平板或?？送幸颍℉ektoen簡稱HE）平板，置于37恒溫箱培養(yǎng)24小時。也可接種亞硫酸鉍（BS）平板，置于37恒溫箱，培養(yǎng)48小時。2 志賀氏菌屬：取上述經(jīng)培養(yǎng)的志賀氏菌用增菌培養(yǎng)液，接種SS平板或HE平板，置于37恒溫箱，培養(yǎng)24小時。四、挑選菌落1 沙門氏菌屬：挑取在SS平板上，呈無色透明或中間有黑心，直徑12毫米的菌落；挑取在HE平板上，呈藍綠色，有或無黑心，直徑12毫米的菌落；挑取在BS平板上，呈黑色，培養(yǎng)基周圍具有金屬光澤的菌落。2 志賀氏菌屬：挑取在SS平板上，呈無色透明，直徑11.5毫米的菌落，挑取在HE平板上，呈綠色的菌落。3 每個平

12、板最少挑取5個以上可疑腸道病原菌菌落，轉(zhuǎn)種三糖鐵或其他鑒別培養(yǎng)基中，置于37恒溫箱；培養(yǎng)1824小時。五、生化試驗及血清學檢驗1 沙門氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫。有動力者，先與沙門氏菌AF群O多價血清作玻璃片凝集，凡與多價O血清凝集者，再與O因子血清凝集，以確定其所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙相菌應(yīng)證實兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應(yīng)用Vi因子血清檢查?；囼灒簯?yīng)進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌產(chǎn)氣外，通常發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖（但豬傷寒沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫代氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無動力外，通常均有動力。如遇多價O血清不凝集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗，沙門氏菌均為陰性。2 志賀氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基上，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解。生化試驗：應(yīng)進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖，蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型有時產(chǎn)生少量氣體），一般不能分解乳糖及蔗糖，宋內(nèi)氏志賀氏菌對乳糖及蔗糖