試驗二植物組織中可溶性糖的薄層層析分離與鑒定

1、實驗二植物組織中可溶性糖的薄層層析分離與鑒定實驗目的糖類是自然界存在的數(shù)量最多的有機化合物，它既是植物軀體和細胞的結構成份，又是生命活動能量的主要來源， 并且與植物體內(nèi)各類物質(zhì)的代謝密切相關，分離鑒定植物組織中可溶性糖的種類及其變化，對了解植物體內(nèi)的組織代謝和農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)，具有重要意義。本實驗采用硅膠 G薄層層析法，分離鑒定植物組織中可溶性糖的種類，要求通過本實驗，學 習提取植物材料中可溶性糖的一般方法，掌握吸附薄層層析的原理，操作及其在糖類鑒定中的作用。實驗原理植物組織中的可溶性糖可用一定濃度的乙醇提取出來，經(jīng)除去雜質(zhì)，即可獲得較純的可溶性糖混合物。薄層層析是層析法的一種， 層析法是利用被分

2、離樣品混合物中各組分的物理、化學差別，使各組分以不同程度分布在兩個相中，這兩個相通常使一個被固定在一定的支持物上的，稱為固定相；另一個是移動的，稱為流動相；當流動相流過固定相時，在移動過程中由于各組 分在兩相中的分配情況不同，或吸附性質(zhì)不同，或電荷分布不同，或離子親和力不同等，而以不同速度前進，從而達到分離的目的。薄層層析是一種快速而微量的層析方法， 它是將一種固定支持物均勻地涂在薄板上， 對 物質(zhì)進行層析的方法，本實驗只討論吸附薄層層析，即所有支持物是吸附劑（如硅膠粉），層析時，主要是根據(jù)吸附劑對樣品中各組分的吸附能力不同，因此個組分的移動速度不同，從而達到分離混合物的目的。糖為多羥基化合物

3、，具有較強的極性，在硅膠G薄板上展層時，糖與硅膠分子有一定的吸附力。硅膠分子與糖的吸附能力大小取決于糖的分子量和羥基數(shù)目，不同的糖分子由于分子量及羥基數(shù)的不同，因而它與硅膠分子間的吸附力不同。造成各種糖分子在展層過程中移動的距離不同，從而將各種糖分離出來，一般吸附力的大小為：三糖雙糖己糖戊糖。其中各種糖移動的速率可用Rf值表示。通過與標準糖的 Rf值比較。即可鑒定出植物組織提取液中糖的種類。溶質(zhì)斑點中心到樣點的距離：Rf（值）=溶劑前沿到點樣點的距離器材與試齊【J 1、材料：蘋果或其他植物材料2、儀器：離心機及離心管、天平、研缽、量筒（25ml）、移液管（10ml）、恒溫水浴、毛細管、層析缸、

4、吹風機、烘箱、噴霧器、燒杯、鉛筆，尺子，硅膠GF254薄層層析板。3、試劑展開劑（氯仿：冰醋酸：水 =30 : 35: 5）5%標準糖溶液（10mg/ml）:木糖，葡萄糖，果糖，蔗糖等。顯色劑：2mL苯胺，10mL85%磷酸，2g二苯胺，1mL濃鹽酸，100mL丙酮，溶解后混勻） 陜驗步驟1、 硅膠板活化：將硅膠板置于120 C烘干箱中，烘干 30min。2、 水果中可溶性糖提取液的制備：取洗凈的蘋果 （或其他水果）削去果皮，稱3g果肉在研缽 中研成勻漿后，倒在雙層洗凈的紗布上。 包起置于漏斗，用干凈玻璃棒將果汁壓出。 取果汁 1ml于離心管中，加無水乙醇 3ml，充分混勻后，在 3000轉/

5、分下離心20分鐘，上清夜即為 可溶性糖提取液。3、 蘋果提取液中可溶性糖的分離鑒定：取活化后的硅膠G板一塊，距底邊1.5厘米水平線上確定5個點，相互間隔1厘米，其中4個點，分別點上5%的木糖，葡萄糖，果糖，蔗糖標準溶液數(shù)滴，另一點點上蘋果提取液數(shù)滴。在用毛細管點樣時，毛細管應垂直于硅膠G板的方向點樣，而且毛細管接觸G板的時間應盡量短，不然點樣斑點直徑難以控制，點樣量約20 30 L,分次滴加，使點擴散后的直徑不超過3mmo44、展層將點樣后的薄層板置于密閉的薄層層析缸中，用新配制的展開劑，采用上行法展層，至展開劑距薄層板的上端約1 cm時取出，用吹風機吹干。硅膠G薄層邊嫁溶劑前沿 謔雄襯里薄層

6、核 展開利層析趕圖2氯仿一甲醇薄層層祈裝置5、顯色把一塊薄板放在通風櫥內(nèi)，采用苯胺一二苯胺一磷酸（2g二苯胺，加2mL苯胺，10mL85%磷酸，1mL濃鹽酸，100mL丙酮，溶解后混勻）顯色劑丙酮溶液噴霧法顯色，然后于85C烘箱中烘10-30分鐘，各種糖即顯示出不同色斑與標準糖比較，根據(jù)斑點顏色及Rf值即可鑒定出蘋果提取液中所存在的可溶性糖的種類。顯色劑處理后不同單糖顯現(xiàn)的顏色單糖顏色葡萄糖藍紫半乳糖藍紫果糖橙紅木糖藍綠鼠李糖綠實驗結果精確量出原點至溶劑前沿，以及各斑點中心的距離，計算出它們的Rf值。根據(jù)標準糖的顏色和Rf值，鑒定出樣品中糖的種類，并繪出層析圖譜。原點至斑點中心的距離R f=6原點至展開劑前沿的距離注意事項1、點樣時，要注意點樣點不能太大，操作時，應待第一次點樣風干后，再在原點樣點 上繼續(xù)點樣，為少量多次點樣。2、每個點樣點不宜距離太近，點樣點不宜靠近硅膠板邊緣，注意邊緣效應。3、放置硅膠板時，不能碰著層析缸的內(nèi)壁。4、 在用多元系統(tǒng)進行展層時，其中極性較弱的和沸點較低的溶劑（例如氯仿-甲醇系統(tǒng)中的氯仿）在薄層板的兩邊易揮發(fā)， 因此，它們在薄層兩邊的濃度比在中部的濃度