大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化第1頁(yè)/共20頁(yè)第2頁(yè)/共20頁(yè)細(xì)菌產(chǎn)生感受態(tài)的類型細(xì)菌產(chǎn)生感受態(tài)的類型第3頁(yè)/共20頁(yè)第4頁(yè)/共20頁(yè)第5頁(yè)/共20頁(yè)u +質(zhì)粒DNA420C熱擊復(fù)蘇Amp+細(xì)菌處于00C,CaCl2低滲溶液中,菌細(xì)胞膨脹成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸鹽混合物黏附于細(xì)胞表面,經(jīng)短時(shí)間420C熱擊處理,促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。將細(xì)菌放在非選擇性培養(yǎng)基上保溫一段時(shí)間，使抗氨芐青霉素的表型表達(dá)后再轉(zhuǎn)到含氨芐青霉素的選擇性培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出來(lái)的菌即為轉(zhuǎn)入了外源基因的菌株。第6頁(yè)/共20頁(yè)X10 x1000第7頁(yè)/共20頁(yè)第8頁(yè)/共20頁(yè)

2、制備好的感受態(tài)細(xì)胞每制備好的感受態(tài)細(xì)胞每100uL分裝一支分裝一支EP管管 輕輕混勻輕輕混勻-可以用可以用tip頭輕輕攪勻頭輕輕攪勻. 4保存（不加甘油）保存（不加甘油），可保存一周；，可保存一周； 加加30%甘油，甘油，-20 保存，可保存一月；保存，可保存一月； 加加30%甘油，甘油， 80 保存，可保存六月；保存，可保存六月；第9頁(yè)/共20頁(yè)第10頁(yè)/共20頁(yè)第11頁(yè)/共20頁(yè)1、接單菌落到接單菌落到5ml LB5ml LB液體培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基中，37370 0C C、190rpm190rpm振蕩培養(yǎng)過(guò)夜振蕩培養(yǎng)過(guò)夜2 2、5%5%（250 ul) 250 ul) 菌液接種到含菌液接

3、種到含5 ml LB5 ml LB的試管中，的試管中， 37 370 0C C振蕩培養(yǎng)振蕩培養(yǎng)1-21-2小時(shí)，至小時(shí)，至ODOD600 600 0.4-0.5 0.4-0.5 （已完成）（已完成）3 3、將菌液轉(zhuǎn)移到離心管中將菌液轉(zhuǎn)移到離心管中4 4、離心離心 5000rpm 5000rpm ，4 40 0C C，5min5min5 5、倒出培養(yǎng)液倒出培養(yǎng)液第12頁(yè)/共20頁(yè)大腸桿菌大腸桿菌DH5感感受態(tài)的制備受態(tài)的制備第13頁(yè)/共20頁(yè)大腸桿菌DH5受態(tài)的制備-1 ml-20 min第14頁(yè)/共20頁(yè)第15頁(yè)/共20頁(yè)第16頁(yè)/共20頁(yè)第17頁(yè)/共20頁(yè)第18頁(yè)/共20頁(yè)p 如陰性對(duì)照中長(zhǎng)出菌，可能原因是什么？如陰性對(duì)照中長(zhǎng)出菌，可能原因是什么？p 菌的密度過(guò)高或培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)菌的密度過(guò)高或培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí) 會(huì)在陽(yáng)會(huì)在陽(yáng)性菌的周圍長(zhǎng)出一些小的衛(wèi)星菌落，它們是性菌的周