中藥制劑分析皂苷揮發(fā)油

1、第三節(jié)第三節(jié) 三萜皂苷成分分析三萜皂苷成分分析三萜皂苷的結(jié)構(gòu)特征三萜皂苷是由六個異戊二烯以頭尾相接三萜皂苷是由六個異戊二烯以頭尾相接或尾尾相接而成，一般由或尾尾相接而成，一般由30個碳原子組個碳原子組成。成?？煞譃榭煞譃槲瀛h(huán)三萜與四環(huán)三萜兩類。五環(huán)三萜與四環(huán)三萜兩類。五環(huán)三萜五環(huán)三萜有齊墩果烷型（甘草次酸、柴有齊墩果烷型（甘草次酸、柴胡皂苷元、桔梗皂苷元）、胡皂苷元、桔梗皂苷元）、四環(huán)三萜四環(huán)三萜大多具有環(huán)戊烷駢多氫菲的基大多具有環(huán)戊烷駢多氫菲的基本母核本母核有達(dá)瑪烷型（人參二醇、三醇。酸棗仁有達(dá)瑪烷型（人參二醇、三醇。酸棗仁皂苷元）皂苷元）三萜皂苷大多無紫外吸收，三萜皂苷大多無紫外吸收，少數(shù)

2、例外，如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷。少數(shù)例外，如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷。 三萜皂苷分布：雙子葉植物分布較普遍，三萜皂苷分布：雙子葉植物分布較普遍，有五加科、傘形科、夾竹桃科、蘿摩科、有五加科、傘形科、夾竹桃科、蘿摩科、菊科等。菊科等。 單子葉植物較少，僅禾本科單子葉植物較少，僅禾本科 裸子植物、低等植物也較少含有裸子植物、低等植物也較少含有 常用的中藥有：人參、三七、甘常用的中藥有：人參、三七、甘草、地榆、酸棗仁、紫菀、桔梗、商陸草、地榆、酸棗仁、紫菀、桔梗、商陸等。等。皂苷的理化性質(zhì)皂苷的理化性質(zhì) 1 1、皂苷分子量較大，不易結(jié)晶，大多、皂苷分子量較大，不易結(jié)晶，大多為無色或乳白色無定型粉末，而皂苷元為無色

3、或乳白色無定型粉末，而皂苷元大多有完好的結(jié)晶，大多有完好的結(jié)晶，皂苷多數(shù)具有苦辛皂苷多數(shù)具有苦辛辣味，其粉末有強(qiáng)烈刺激性，大多具有辣味，其粉末有強(qiáng)烈刺激性，大多具有吸濕性。吸濕性。 2、大多數(shù)皂苷極性較大，易溶于水、大多數(shù)皂苷極性較大，易溶于水、熱甲醇和乙醇，難溶于丙酮、乙醚，在熱甲醇和乙醇，難溶于丙酮、乙醚，在含水丁醇中有較大溶解度，常作為皂苷含水丁醇中有較大溶解度，常作為皂苷提取溶劑。提取溶劑。皂苷類成分的定性分析皂苷類成分的定性分析 （一）泡沫反應(yīng)（一）泡沫反應(yīng) （二）顯色反應(yīng)（二）顯色反應(yīng)（1）醋酐）醋酐-濃硫酸反應(yīng)濃硫酸反應(yīng) (Libermann-Burchard反應(yīng)反應(yīng)):（2）三

4、氯醋酸反應(yīng)）三氯醋酸反應(yīng) （Rosen-Heimer反應(yīng)反應(yīng)）（3）氯仿）氯仿-濃硫酸反應(yīng)濃硫酸反應(yīng) （Salkowski反應(yīng)反應(yīng)）（4 4）冰醋酸）冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)乙酰氯反應(yīng)(Tschugaf(Tschugaf反應(yīng)反應(yīng)) )（5 5）五氯化銻反應(yīng)）五氯化銻反應(yīng) (Kahlenberg反應(yīng)反應(yīng))（6 6）香草醛）香草醛-硫酸或高氯酸反應(yīng)硫酸或高氯酸反應(yīng)（三）薄層色譜法（三）薄層色譜法 1、 吸附劑的選擇吸附劑的選擇 皂苷：一般極性較大，用分配層析較好皂苷：一般極性較大，用分配層析較好 常用吸附劑有硅膠、氧化鋁、硅藻土常用吸附劑有硅膠、氧化鋁、硅藻土皂苷元：極性較小，吸附、分配薄層均可皂苷元：

5、極性較小，吸附、分配薄層均可 常用硅膠常用硅膠 在應(yīng)用硅膠和氧化鋁時，有時為了分離在應(yīng)用硅膠和氧化鋁時，有時為了分離的需要加入一定的硝酸銀。這樣可以將相的需要加入一定的硝酸銀。這樣可以將相似極性但在分子中帶有不同數(shù)目雙鍵或雙似極性但在分子中帶有不同數(shù)目雙鍵或雙鍵位置不同的化合物分開。鍵位置不同的化合物分開。2、展開劑的選擇、展開劑的選擇 （1） 化合物的分子結(jié)構(gòu)與展開劑的極性化合物的分子結(jié)構(gòu)與展開劑的極性選擇展開劑要考慮到分子中羥基、羧基或選擇展開劑要考慮到分子中羥基、羧基或其它極性基團(tuán)的數(shù)目多少和有無，極性基其它極性基團(tuán)的數(shù)目多少和有無，極性基團(tuán)數(shù)目越少越不易被吸附劑吸附，團(tuán)數(shù)目越少越不易被

6、吸附劑吸附，Rf值越值越大，因此在分離極性小的混合物時就不能大，因此在分離極性小的混合物時就不能用極性大的展開劑。用極性大的展開劑。 （2） 化合物的酸堿性化合物的酸堿性當(dāng)化合物具有酸性或堿性時，使用中性當(dāng)化合物具有酸性或堿性時，使用中性的溶劑系統(tǒng)往往產(chǎn)生拖尾或分離不好，的溶劑系統(tǒng)往往產(chǎn)生拖尾或分離不好，當(dāng)化合物具有酸性時，在展開系統(tǒng)中加當(dāng)化合物具有酸性時，在展開系統(tǒng)中加入少量酸就能得到很好的分離。入少量酸就能得到很好的分離。 （3） 展開劑中極性溶劑的量對展開劑中極性溶劑的量對Rf值的值的影響影響皂苷常用溶劑系統(tǒng)有皂苷常用溶劑系統(tǒng)有：氯仿：氯仿-甲醇甲醇-水（水（13：7：2下層）、水飽和的

7、正丁醇、正丁醇下層）、水飽和的正丁醇、正丁醇-乙酸乙酯乙酸乙酯-水（水（4：1：5）、氯仿）、氯仿-甲醇（甲醇（7：3）、正丁醇）、正丁醇-乙酸乙酸-水（水（4：1：5上層）上層）皂苷元常用溶劑系統(tǒng)有：皂苷元常用溶劑系統(tǒng)有： 環(huán)已烷環(huán)已烷-乙酸乙乙酸乙酯（酯（1：1）、苯）、苯-乙酸乙酯（乙酸乙酯（1：1）、氯）、氯仿仿-乙酸乙酯（乙酸乙酯（1：1）、氯仿）、氯仿-丙酮（丙酮（19：1）、氯仿）、氯仿-乙醚（乙醚（1：1）3、 顯色劑的選擇顯色劑的選擇(1)25磷鉬酸乙醇溶液磷鉬酸乙醇溶液：(2)三氯化銻的濃鹽酸或氯仿溶液三氯化銻的濃鹽酸或氯仿溶液： (3)硫酸硫酸-甲醇甲醇(1 1)：(4)

8、氯磺酸氯磺酸-乙酸乙酸(1 2)溶液溶液： (5)碘蒸氣碘蒸氣：其它常用顯色劑有其它常用顯色劑有三氯醋酸、濃硫酸、三氯醋酸、濃硫酸、50%及及20%硫酸乙醇、濃硫酸硫酸乙醇、濃硫酸-醋酸酐、香醋酸酐、香草醛草醛- -濃硫酸等濃硫酸等 四、皂苷類成分的定量分析皂苷類成分的定量分析薄層色譜法、比色法、高效液相色譜法薄層色譜法、比色法、高效液相色譜法 皂苷類成分的定量分析可分為皂苷類成分的定量分析可分為總皂苷測定、皂苷元測定和單體皂苷測定總皂苷測定、皂苷元測定和單體皂苷測定總皂苷測定總皂苷測定：提取可用各種濃度的甲醇、乙：提取可用各種濃度的甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇、戊醇。分離可用水飽和醇、異丙醇、丁

9、醇、戊醇。分離可用水飽和的正丁醇萃取、大孔樹脂洗脫。測定最常用的正丁醇萃取、大孔樹脂洗脫。測定最常用的有比色法、重量法。的有比色法、重量法。皂苷元的測定皂苷元的測定：可用總皂苷加酸水解或：可用總皂苷加酸水解或?qū)悠废人庠儆糜袡C(jī)溶劑提取皂苷元。將樣品先水解再用有機(jī)溶劑提取皂苷元。測定有薄層色譜法、高效液相色譜法、測定有薄層色譜法、高效液相色譜法、比色法。比色法。單體皂苷的測定單體皂苷的測定：有薄層色譜法、高效：有薄層色譜法、高效液相色譜法（需要有單體皂苷對照品比液相色譜法（需要有單體皂苷對照品比較）。較）。比色法比色法皂苷類成分加入適當(dāng)顯色劑，如濃硫酸、皂苷類成分加入適當(dāng)顯色劑，如濃硫酸、高氯

10、酸、香草醛高氯酸、香草醛- -冰醋酸等，使其呈色，冰醋酸等，使其呈色，于可見光區(qū)進(jìn)行比色測定或用紫外分光于可見光區(qū)進(jìn)行比色測定或用紫外分光光度法測定樣品中總皂苷或總皂苷元的光度法測定樣品中總皂苷或總皂苷元的含量含量 濃硫酸濃硫酸硫酸硫酸-醋酐、硫酸醋酐、硫酸-冰醋酸試劑冰醋酸試劑芳香醛芳香醛-硫酸或芳香醛硫酸或芳香醛-高氯酸高氯酸 對對-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛 常用顯色劑常用顯色劑薄層色譜法薄層色譜法可排除其他組分的干擾，常用于測定中藥制劑中的皂苷元或單體皂苷，定量方法有斑點(diǎn)面積法、薄層洗脫-比色法、薄層掃描法。 高高 效效 液液 相相 色色 譜譜 法法 第五節(jié)第五節(jié) 含揮發(fā)性成分制劑的

11、分析含揮發(fā)性成分制劑的分析揮發(fā)性成分：中藥中一類具有芳香氣并揮發(fā)性成分：中藥中一類具有芳香氣并易揮發(fā)的成分易揮發(fā)的成分包括揮發(fā)油類成分及其它分子量較小、包括揮發(fā)油類成分及其它分子量較小、易揮發(fā)的化合物。易揮發(fā)的化合物。揮發(fā)油的概念、分布揮發(fā)油的概念、分布 概念：是指存在于植物體中一類可隨水蒸氣概念：是指存在于植物體中一類可隨水蒸氣蒸餾得到的與水不相混溶的油狀液體。它們蒸餾得到的與水不相混溶的油狀液體。它們在常溫下能揮發(fā)，大部分具有香氣。在常溫下能揮發(fā)，大部分具有香氣。分布：分布：主要存在于植物的花蕾、莖、葉主要存在于植物的花蕾、莖、葉及根莖中。及根莖中。含揮發(fā)油較豐富的有含揮發(fā)油較豐富的有木蘭

12、科木蘭科（如（如辛夷、厚樸、八辛夷、厚樸、八角茴香、五味子）角茴香、五味子）樟科（肉桂樟科（肉桂、樟、烏藥）、樟、烏藥）蕓香科（如橙、桔、枳實(shí)、吳茱萸、蕓香科（如橙、桔、枳實(shí)、吳茱萸、降香、花椒）降香、花椒）傘形科（防風(fēng)、白芷、川芎、當(dāng)歸、傘形科（防風(fēng)、白芷、川芎、當(dāng)歸、）唇形科（薄荷、藿香唇形科（薄荷、藿香、紫蘇、荊芥、香糯）、紫蘇、荊芥、香糯）含含 量量 特特 點(diǎn)：點(diǎn)： 1、同一品種不同生長環(huán)境或采收季節(jié)其含、同一品種不同生長環(huán)境或采收季節(jié)其含量和品質(zhì)（包括成分、香氣等）有顯著差異量和品質(zhì)（包括成分、香氣等）有顯著差異 全草類藥材一般以開花前期或含苞待放之時全草類藥材一般以開花前期或含苞待

13、放之時含量最高如薄荷、紫蘇、荊芥、藿香等。而含量最高如薄荷、紫蘇、荊芥、藿香等。而根、根莖類以秋天成熟后，含量高。根、根莖類以秋天成熟后，含量高。2、同一植物不同部位含量也不同、同一植物不同部位含量也不同3 3、同一植物的藥用部位不同其含量也、同一植物的藥用部位不同其含量也有差異有差異其它揮發(fā)性成分：其它揮發(fā)性成分： 一些小分子化合物如一些小分子化合物如冰片、樟腦冰片、樟腦。多為結(jié)晶性固體多為結(jié)晶性固體 揮發(fā)油的性質(zhì)揮發(fā)油的性質(zhì) （3） 在常溫下可以揮發(fā)，與脂肪油區(qū)在常溫下可以揮發(fā)，與脂肪油區(qū)別別：當(dāng)把揮發(fā)油涂在紙片上經(jīng)揮散后不當(dāng)把揮發(fā)油涂在紙片上經(jīng)揮散后不留下持久性的油斑。而且揮發(fā)油能隨水留

14、下持久性的油斑。而且揮發(fā)油能隨水蒸氣揮發(fā)而不分解蒸氣揮發(fā)而不分解（4） 可溶于濃乙醇及多數(shù)有機(jī)溶媒可溶于濃乙醇及多數(shù)有機(jī)溶媒（如（如乙醚、氯仿及脂肪油中），能完全溶于無乙醚、氯仿及脂肪油中），能完全溶于無水乙醇中，極難溶于水水乙醇中，極難溶于水（5 5） 各種揮發(fā)油的折光率各不相同，各種揮發(fā)油的折光率各不相同，折光折光率通常在率通常在1.43-1.611.43-1.61之間。之間。 在一定情況下?lián)]發(fā)油中如有雜質(zhì)存在，折光在一定情況下?lián)]發(fā)油中如有雜質(zhì)存在，折光率就會有所改變率就會有所改變 （6 6） 不同的揮發(fā)油具有各自的旋光度不同的揮發(fā)油具有各自的旋光度 （7） 揮發(fā)油暴露于空氣和日光下逐漸氧

15、揮發(fā)油暴露于空氣和日光下逐漸氧化變質(zhì)而分解，致使其比重增加，顏色變化變質(zhì)而分解，致使其比重增加，顏色變深，甚至樹脂化深，甚至樹脂化（萜類的聚合、氧化等）（萜類的聚合、氧化等）生成具有不愉快臭味的化合物，同時失去生成具有不愉快臭味的化合物，同時失去揮發(fā)性，因此揮發(fā)油應(yīng)揮發(fā)性，因此揮發(fā)油應(yīng)裝于棕色瓶內(nèi)，密裝于棕色瓶內(nèi)，密閉、低溫、避光保存閉、低溫、避光保存（9） 由于揮發(fā)油是混合物，不同的成由于揮發(fā)油是混合物，不同的成分其沸點(diǎn)不同，故可利用此性質(zhì)純化分其沸點(diǎn)不同，故可利用此性質(zhì)純化 揮發(fā)油的提取方法揮發(fā)油的提取方法 水蒸氣蒸餾法、浸取法水蒸氣蒸餾法、浸取法水蒸氣蒸餾：揮發(fā)油通?？捎盟魵馑魵庹麴s

16、：揮發(fā)油通?？捎盟魵庹麴s法提取，收集餾水液，放冷后，蒸餾法提取，收集餾水液，放冷后，揮發(fā)油即浮于上層，下層的水液加入揮發(fā)油即浮于上層，下層的水液加入氯化鈉飽和，原溶解于水中的少量揮氯化鈉飽和，原溶解于水中的少量揮發(fā)油又可析出。發(fā)油又可析出。 二、揮發(fā)油的定性分析二、揮發(fā)油的定性分析 （一）化學(xué)反應(yīng)法（一）化學(xué)反應(yīng)法 含雙鍵的萜類成分能與氫鹵酸起加成反應(yīng)含雙鍵的萜類成分能與氫鹵酸起加成反應(yīng)內(nèi)酯類揮發(fā)油與羥胺反應(yīng)成羥肟酸，與三氯化內(nèi)酯類揮發(fā)油與羥胺反應(yīng)成羥肟酸，與三氯化鐵呈色鐵呈色含不飽和揮發(fā)油可用高錳酸鉀氧化呈色含不飽和揮發(fā)油可用高錳酸鉀氧化呈色酚類：加三氯化鐵試劑，呈蘭色、藍(lán)紫色或綠酚類：加

17、三氯化鐵試劑，呈蘭色、藍(lán)紫色或綠色；色；羰基化合物：銀鏡反應(yīng)、苯肼及苯肼衍生物、羰基化合物：銀鏡反應(yīng)、苯肼及苯肼衍生物、氨基脲、羥胺等反應(yīng)氨基脲、羥胺等反應(yīng)（二）薄層色譜法（二）薄層色譜法揮發(fā)油中各化合物極性順序揮發(fā)油中各化合物極性順序 烴（萜）烴（萜） 醚醚 酯酯 醛、酮醛、酮 醇、酚醇、酚 酸酸 固定相：硅膠、氧化鋁、硝酸銀固定相：硅膠、氧化鋁、硝酸銀 展開系統(tǒng)選擇：最常用的有正己烷、石展開系統(tǒng)選擇：最常用的有正己烷、石油醚，另外也有苯、乙醚、四氯化碳、油醚，另外也有苯、乙醚、四氯化碳、氯仿、乙酸乙酯及混合展開劑氯仿、乙酸乙酯及混合展開劑薄層顯色劑薄層顯色劑茴香醛茴香醛- 濃硫酸試劑濃硫酸

18、試劑：噴后：噴后105加熱，加熱，揮發(fā)油中各成分顯不同顏色。揮發(fā)油中各成分顯不同顏色。異羥肟酸鐵試劑異羥肟酸鐵試劑：斑點(diǎn)顯淡紅色，可能：斑點(diǎn)顯淡紅色，可能是酯和內(nèi)酯。是酯和內(nèi)酯。2，4- 二硝基苯肼試劑二硝基苯肼試劑：如產(chǎn)生熒色斑點(diǎn)，：如產(chǎn)生熒色斑點(diǎn)，則表明含醛或酮類化合物。則表明含醛或酮類化合物。三氯化鐵試劑三氯化鐵試劑：斑點(diǎn)顯綠色或藍(lán)色，可：斑點(diǎn)顯綠色或藍(lán)色，可能是酚性化合物。能是酚性化合物。（三）、氣相色譜法（三）、氣相色譜法三、揮發(fā)油的定量分析三、揮發(fā)油的定量分析 （一）氣相色譜（一）氣相色譜 色譜柱的選擇色譜柱的選擇：可用填充柱，也可用毛細(xì)管柱（分離效可用填充柱，也可用毛細(xì)管柱（分離效果更好）果更好）擔(dān)體基本都用白色擔(dān)體，并經(jīng)硅烷化擔(dān)體基本都用白色擔(dān)體，并經(jīng)硅烷化固定相的選擇固定相的選擇： 1 1、非極性的飽和烴潤滑油類，如角鯊?fù)?、非極性的飽和烴潤滑油類，如角鯊?fù)?、阿皮松、硅酮類、甲基硅油等。阿皮松、硅酮類、甲基硅油等。利用各成分沸點(diǎn)的差異而分離，對沸點(diǎn)相利用各成分沸點(diǎn)的差異而分離，對沸點(diǎn)相近的單