飼料化驗員手冊[1]

1、原料化驗手冊2004年11月目 錄實驗儀器 1第一部分 飼料常規(guī)成分分析方法實驗一 飼料中干物質(zhì)的測定3實驗二 飼料中粗蛋白的測定4實驗三 飼料中粗脂肪的測定5實驗四 飼料中水溶性氯化物的測定5實驗五 飼料中粗灰分的測定8實驗六 飼料中鈣的測定8實驗七 飼料中總磷量的測定 10實驗八 飼料中粗纖維的測定 11實驗九 植物蛋白原料生熟度判定 12實驗十 氯化膽堿含量的測定 14實驗十一 油脂酸價的測定 15實驗十二 油脂過氧化值的測定 15實驗十三 魚粉摻假檢測及真蛋白質(zhì)的測定 16實驗十四 飼用玉米脂肪酸值的測定 18實驗十五 油脂碘價的測定 19實驗十六 鍋爐水測定方法 20第二部分 飼料原

2、料的摻假檢驗一偽劣玉米蛋白粉的識別21二摻假豆粕的鑒定22三磷酸鹽的鑒別23四魚粉摻假鑒定24五氯化膽堿的真?zhèn)舞b別26六肉骨粉摻假檢驗27附1：鏡檢培訓知識筆記 30附2：原料質(zhì)量的判斷與摻假識別培訓 32附3：油脂檢驗 實驗儀器一 稱量儀器1. 物理天平2. 分析天平二 加熱儀器1. 電爐和電熱板（500W.800W.1000W.1200W）2. 高溫電爐（帶溫度控制器）3. 烘箱4. 水浴鍋5. 酒精燈和酒精噴燈三 玻璃儀器1. 燒杯類1） 燒杯（體積10ml5000ml）2） 錐形瓶3） 具塞錐形瓶和碘量瓶4） 燒瓶 2.量具類1） 滴定管：酸式滴定管和堿式滴定管2） 量筒和量杯（5.1

3、0.25.50.250.1000.2000ml）3） 容量瓶（10.20.25.50.100.250.1000.2000ml）4） 移液管（2.5.10.15.25.50ml）2. 試劑瓶類1） 廣口瓶和小口瓶2） 滴瓶3. 試管類1） 普通試管（10mm×75mm41mm×225mm）2） 離心管（5.10.15.25.50ml）3） 比色管4. 其他玻璃儀器和陶瓷器皿1） 表面皿2） 干燥器3） 稱量瓶4） 漏斗5） 坩堝四 部分小型精密儀器1. 分光光度計2. 酸度計3. 離心機4. 振蕩機5. 粉碎機6. 定氮儀 說明：（1）實驗中所涉及的化學試劑沒有特別要求，均為

4、化學純，水為蒸餾水或相應(yīng)程度水。（2）實驗適用范圍無特別說明均為配合飼料和單一飼料。（3）實驗過程中提到的干燥后冷卻沒有特別說明都在冷卻器中冷卻30min，恒重過程沒有說明均為再烘干30min，再冷卻30min，再稱重，直至達到相應(yīng)要求。（4）實驗中涉及滴定終點都是滴到預期顏色變化且30s不褪色為止。（5）一般單一飼料或配合飼料（固體）樣品制備常用方法為用四分法將原始樣品縮至500g，風干粉碎過40目，再用四分法按實驗用量取。（6）對實驗結(jié)果中提到的重復行要引起足夠的重視，對于相對偏差超過要求的，決不能簡單將實驗結(jié)果取平均值，必須重新實驗。第一部分 飼料常規(guī)成分分析方法實驗一 飼料中干物質(zhì)的測

5、定1.適用范圍配合飼料和單一飼料2.原理100-105下烘去飼料中蛋白質(zhì)，淀粉及細胞膜上的吸附水，得到干物質(zhì)含量。3.試樣的制備用四分法將原始樣品縮至500克，風干后粉碎至過40目，再用四分法縮至20克，裝入密封器，放陰涼干燥處保存。4.測定洗凈稱樣皿，在100-105烘箱中烘1小時，取出，再干燥器中冷卻30分鐘后稱重，稱準至0.0002克，再烘30分鐘，同樣冷卻，稱重，直至二次稱重之差小于0.0005g為止，取最小量為稱樣皿重。用已恒重稱樣皿準確稱取5g樣品（準確至0.0002g），不蓋稱樣皿蓋，在100-105烘箱中烘3小時，取出，加蓋，同樣冷卻稱重，再同樣烘1小時，冷卻，稱重，直至二次稱

6、重之差小于0.002g即為恒重。5.結(jié)果計算（1） 計算m1- m2m1- m0 水分（%）=式中：m1105烘干前試樣及稱樣皿重（g）； m2105烘干后試樣及稱樣皿重（g）； m0已痕重的稱樣皿重（g）。（2） 重復性（3） 每個試樣取二個平行樣測定，取平均值為測定結(jié)果，兩個平行值不得超過0.2%，否則重做。實驗二 飼料中粗蛋白質(zhì)的測定（定氮儀法）1. 原理濃堿下蒸餾硼酸吸收試樣中含氮化合物濃硫酸處理 氨氣 濃硫酸吸收 硫酸銨 四硼酸銨 標準溶液滴定 含氮量2. 試劑（1） 硫酸（GB 625-77）：化學純（2） 硫酸銅（GB 665-78）：化學純（3） 硫酸鉀（HG 3-920-76

7、）或硫酸鈉（HG 3-908-76）：化學純（4） 氫氧化鈉（GB 628-78）：分析純，40g溶于100ml水中配成40%水溶液（5） 硼酸（GB 628-78）：分析純，40g溶于100ml水中配成2%溶液（6） 混合指示劑：甲基紅（HG 3-958-76）0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠（HG 3-1200-79）0.5%乙醇容易，二溶液1：1混合（7） 0.01mol/l鹽酸標準溶液（8） 硫酸銨（GB 1396-28）：分析純（9） 蔗糖（HG 3-1001-76）：分析純3. 實驗步驟（1） 樣品消化稱0.3-0.5g樣品于消化管中 加3-5g無水硫酸鈉或硫酸鉀 加10ml硫酸在420

8、消化爐上消化（約1h） 深藍色澄清液體 冷卻15min 加20ml蒸餾水，搖勻（2） 蒸餾1） 接收瓶準備：取25ml硼酸（4%）于錐形瓶，加4滴混合指示劑4. 空白實驗每次分析時，應(yīng)該做所用化學試劑及分析系統(tǒng)的空白實驗以補償他們對實驗的影響。5. 結(jié)果計算（1）計算（v2-v1）×c×0.0140×6.25 m 粗蛋白質(zhì)（%）= ×100式中：v2試樣滴定時用標準鹽酸量 v1空白滴定時用標準鹽酸量c鹽酸標準溶液的濃度m試樣質(zhì)量0.0140每ml1NHCL標準溶液相當于N 的克數(shù)6.25氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)（3） 重復性每個試樣取二個平行樣進行測定，

9、取其平均值，二次滴定用標準液之差不超過0.1ml。cp%25%時，允許相對偏差為1%；10%cp%25時，允許相對偏差為2%； cp%10%時，允許相對偏差為3% 實驗三 飼料中粗脂肪的的測定1.原理：在索氏提取器中用石油醚（HG 3-1002-76 化學純）提取試樣，計算絕干試樣的損失量。 2.測定脫脂濾紙和稱樣皿干燥（105±2）恒重至相差0.0008g，濾紙用鉛筆編號，稱取2 克樣品包入濾紙中，放入稱樣皿，105烘3h，冷卻稱重，再干燥30min，直至恒重。然后放入浸提器中，石油醚剛淹沒濾紙包為好，50下水浴加熱，提取約5小時，取出濾紙包，置于通風櫥中20min，待石油醚揮發(fā)完

10、，105烘箱烘1h，干燥器中冷卻30min，稱重，恒重至相差0.0001g。3.結(jié)果計算（1）計算W3-w4W2-w1 粗脂肪（%） = ×100 試中：w1已恒重的濾紙加稱樣皿重 w2已恒重的濾紙，稱樣皿加樣品重 w3已恒重的濾紙，稱樣皿加絕干樣品重 w4已恒重的濾紙，稱樣皿加浸提后的樣品重 （2）重復性每個試樣取二個平行樣進行測定，取其平均值；粗脂肪含量在10%以上，允許相對偏差為3%；粗脂肪含量在10%以下，允許相對偏差為5% 。實驗四 飼料中水溶性氯化物的測定法一：快速法1.原理試樣攪拌溶解氯化物 ，用鉻酸鉀作指示劑，用標準硝酸銀溶液滴定。2.試劑準備（1） 鉻酸鉀指示劑：1

11、0%鉻酸鉀水溶液（2） 氯化鈉（GB 12530-77）：于500灼燒1h，干燥器中冷卻保存，稱5.8454g，溶解于水中，轉(zhuǎn)入1000容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，為0.1N 氯化鈉標準溶液；（3） 0.1N硝酸銀標準溶液：取硝酸銀（分析純）16.989g，溶于1000ml水中。貯存于棕色瓶中，即為0.1N硝酸銀溶液。標定：準確取氯化物標準溶液25ml，于250ml錐形瓶中，加入25ml水及0.5ml鉻酸鉀指示劑，用硝酸銀標準溶液滴定，出現(xiàn)紅棕色，且30秒不褪色為終點。 M×25V×0.05845×1000硝酸銀標準溶液的當量濃度N = =M/V×0.

12、4277 式中：M為氯化鈉的重量；V為硝酸銀標準溶液的體積；0.05845為與1ml硝酸銀標準溶液（1N）相當?shù)穆然c克數(shù)。3.測定加100ml蒸餾水攪拌15min，靜置15min蒸餾水50ml鉻酸鉀指示劑1ml5g左右樣品取上層清液20ml+ 硝酸銀滴定 溶液呈磚紅色4結(jié)果處理V×N×100×58.45M×20×1000NaCl% = ×100式中：V硝酸銀溶液的體積ml N硝酸銀溶液的當量濃度 58.45與1mol硝酸銀相當?shù)穆然c的克數(shù) M試樣重g 法二：國標法1.原理Cl- + AgNO3 Agcl + 硫氰酸銨 AgCNS+

13、NH4NO32.試劑準備（1） 硝酸（2） 硫酸鐵（60g/L ）溶液：稱取硫酸鐵Fe2(so4)3XH2O60克，加水微熱溶解后，加水至1000ml。（3） 硫酸鐵指示劑 250g/l的硫酸鐵水溶液，過濾除去不溶物，與等體積的濃硝酸混合均勻。（4） 氨溶液 1+19水溶液（5） 硫氰酸銨(0.02mol/l)溶液：稱取硫氰酸銨1.52g，溶于1000ml水中。（6） 氯化鈉標準貯備溶液 ：基準級氯化鈉于500灼燒1h，干燥器中冷卻保存，稱5.8454g，溶解于水中，轉(zhuǎn)入1000容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，為0.1N 氯化鈉標準溶液（7） 氯化鈉標準工作溶液（0.02mol/l）：準確吸取氯

14、化鈉標準貯備溶液20ml與1000容量瓶中，定容。（8） 硝酸銀標準溶液 （0.02mol/l）：稱取3.4g硝酸銀溶于1000ml水中，貯于棕色瓶中。1) 體積比 吸取硝酸銀溶液20ml，加硝酸銀4ml，指示劑2ml，在劇烈搖動下用硫硝酸銀溶液體積硫氰酸銨體積氰酸銨溶液滴定，滴至終點為淡紅色。二溶液的體積比為2) 標定 氯化鈉標準溶液10ml100ml容量瓶 硝酸4ml 震蕩使沉淀凝結(jié)，定容過濾于三角瓶中 取定 硝酸銀標準溶液25ml容液50ml+硫酸鐵指示劑2ml 硫氰酸銨溶液滴定 紅棕色m×20/1000×10/1000.05845×（v1-FV2×

15、;100/50）硝酸銀標準溶液濃度=式中：m氯化鈉質(zhì)量gv1硝酸銀標準溶液體積mlv2硫氰酸銨溶液體積mlF 硝酸銀與硫氰酸銨溶液的體積比0.05845與1ml硝酸銀標準溶液（1mol/l）相當?shù)穆然c質(zhì)量3.儀器準備（1） 實驗室用樣品粉碎機（2） 分樣篩 孔徑0.45m（40目）（3） 分析天平（4） 刻度移液管 10，2ml（5） 滴定管 酸式，25ml（6） 容量瓶 100，1000ml（7） 燒杯 250ml（8） 濾紙 快速，直徑15cm；滿速，直徑12.5cm攪拌，放置10min干快速濾紙過濾4.測定步驟 稱取3g左右樣品 + 硫酸鐵溶液50ml + 氨水溶液100ml 攪拌，放

16、置10min干過濾入150ml錐形瓶中沉化取50ml濾液濃硝酸10ml 100ml容量瓶 取50ml澄硝酸銀標準溶液25ml硫酸鐵指示劑10ml硫氰酸銨溶液滴定清液 淡橘紅色5.數(shù)據(jù)處理(V1-V2F×100/50)c×150×0.0355m×50（1）計算 氯元素百分含量= ×100式中 m樣品質(zhì)量 v1硝酸銀溶液體積ml v2滴定消耗的硫氰酸銨溶液體積 F硝酸銀與硫氰酸銨溶液體積比 C硝酸銀溶液的濃度 0.0355與1ml硝酸銀標準溶液1mol/l相當?shù)穆仍刭|(zhì)量g （2）重復性每個樣品取2個平行樣進行測定，以算術(shù)平均值為分析結(jié)果。氯含量在

17、3%以下，允許絕對差0.05，含量在3%以上，允許相對偏差3% 6.注意事項 （1）在標定硝酸銀溶液時，或滴定試樣濾液時，速度應(yīng)快，且不要過分劇烈搖動，以防下述反應(yīng)：AgCl+CNS- AgCNS+Cl- ，多消耗硫氰酸銨溶液，使結(jié)果偏底。 （2）本法測定中是根據(jù)氯離子來計算氯化鈉含量的，但由于配合飼料或單一飼料（如魚粉或合成賴氨酸等）中，都帶入氯離子，所以此估測值僅做參考值。實驗五 飼料中粗灰分的測定1. 原理：在600灼燒后所得殘渣，用重量百分比表示2. 測定（1） 將干凈的帶蓋坩堝放入茂福爐中在600下燒30min（坩堝蓋半開），等爐溫降至200，將坩堝移入干燥器中，冷卻1h后稱重，再將

18、坩堝放入茂福爐中灼燒，恒重。（2） 在坩堝中稱取風干樣2克。（3） 將試樣在電爐上炭化至無煙，再移入茂福爐中，在600下灼燒，坩堝蓋半開，約燒4h，直至樣本呈白色為止。（4） 冷卻完畢，待爐溫降至200，移入干燥器內(nèi)冷卻1h，稱重，再將坩堝放入茂福爐中燒15min，再冷卻，恒重至相差0.0001克。（坩堝重+灰分重）-坩堝重樣品重3. 數(shù)據(jù)處理 粗灰分含量（%）= ×100實驗六 飼料中鈣的測定1. 原理：高溫將試樣中有機物破壞，使鈣制備成溶液，用三乙醇銨，乙二胺，鹽酸羥銨 和淀粉溶液消除干擾離子的影響，在堿性溶液中以鈣黃綠素為指示劑，用EDTA標準溶液絡(luò)合滴定鈣。2. 試劑準備（1

19、） 鹽酸羥銨（2） 鹽酸：1+1（v1+v2）（3） 濃硝酸（4） 高氯酸（5） 氫氧化鉀溶液：200g/l（6） 三乙醇胺水溶液：1+1（v1+v2）（7） 乙二胺水溶液：1+1（v1+v2）（8） 淀粉溶液：10g/l，稱取1g可溶性淀粉放入200ml燒杯中，加5ml水潤濕，加95ml沸水攪拌，煮沸，冷卻備用（9） 孔雀石綠水溶液：1g/L（10） 鈣黃綠素-甲基百里香酚藍指示劑：0.1g鈣黃綠素與0.13g甲基百里香酚藍，5g氯化鉀研細，貯于磨口瓶中備用（11） 鈣標準溶液：0.0010g/ml（12） 乙二胺四乙酸鈉標準滴定溶液（EDTA），T=0.4mg/ml（滴定度），表示1ml標

20、準溶液相當于0。4mg鈣。3. 測定（1） 試樣分解干法：測定灰分后的試樣+鹽酸溶液10ml+濃硝酸數(shù)滴 ，小心煮沸，冷卻，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，冷卻，定容，搖勻。濕法（無機物或液體飼料）：稱取0.2g樣品于凱氏燒瓶中，加入濃硝酸30ml，加熱煮沸5min，取下冷卻后加入高氯酸10ml，小心煮沸驅(qū)逐黃煙至白煙（嚴禁蒸干），冷卻后加水20ml，煮沸驅(qū)逐二氧化氮，冷卻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，定容，搖勻。（2） 測定淀粉溶液10ml水50ml乙二胺1ml三乙醇胺2ml1滴孔雀石綠 5-10ml試樣分解液+ +氫氧化鉀溶液 無色5ml氫氧化鉀溶液0.1g鹽酸羥胺鈣黃素少許 黑色背景下EDTA滴定 綠

21、色熒光消失4.數(shù)據(jù)處理（1） 計算EDTA標液對鈣的滴定度×消耗EDTA體積試樣質(zhì)量×移取分解液體積/分解液總體積Ca% = ×100（2） 重復性 做二個平行樣，對鈣量在5%以上，允許相對偏差在3%，鈣量5-1%，允許相對偏差5%，鈣量1%以下，允許相對偏差10%。5.標準溶液的配置和標定（1） 0010g/ml鈣標準溶液的配置：準確稱取2.497g于105-110干燥至恒重的基準碳酸鈣，溶于40ml鹽酸中，加熱趕除二氧化碳，冷卻，用水轉(zhuǎn)移至1000ml容量瓶中，稀釋至刻度。（2） T=0.0004g/mlEDTA標準滴定溶液的配置：稱取3.8EDTA二鈉放入2

22、00ml燒杯中加200ml水，加熱溶解冷卻后用水轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，稀釋至刻度。（3） EDTA標準滴定溶液的標定：準確吸取鈣標準溶液10ml，同試樣測定進行滴定。 EDTA滴定溶液對鈣的滴定度為鈣標準溶液的濃度× 鈣標準溶液體積/EDTA標準溶液的用量實驗七 飼料中總磷量的測定1.原理游離磷 + 釩鉬酸銨 酸性溶液中 磷鉬黃（黃色），420nm波長下比色測定。 2.試劑（1） 鹽酸（2） 硝酸（3） 高氯酸（4） 釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g，加硝酸250ml，另稱取鉬酸銨25g，加水400ml加熱溶解之后，在降溫條件下將后者倒入前者，定容，避光保存。（5） 磷標

23、準溶液 ：將磷酸二氫鉀在105干燥1h，在干燥器中冷卻30min，稱取0.2195g溶于水，定量轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，定容，即為50ug/ml的磷標準液。3.測定（1） 試樣的分解：同測鈣。（2） 標準曲線的制作準確移取01.02.05.010.015.0ml磷標準溶液于50ml的容量瓶中，各加釩鉬酸銨10ml，定容，放10min，以0ml溶液為參比，用10mm比色池，420nm波長下，測吸光度。以磷為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線或做出回歸方程。（3） 試樣的測定準確移取試樣分解液ml于50ml容量瓶中，加釩鉬酸銨10ml，定容，比色測定吸光度，用標準曲線查得試樣分解液

24、的含磷量。4.結(jié)果計算磷% = 標準曲線查得含磷量/試樣質(zhì)量×移取試樣分解液體積×100重復性：取至少二個平行樣取平均值。含磷量小于0.5%，允許相對偏差小于10%，含磷量在0.5%之上，允許偏差不超過3%。 實驗八 飼料中粗纖維的測定 1.原理 用固定量的酸和堿，在特定條件下消煮樣品，再用乙醚，乙醇除去醚容物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)的量，所余為粗纖維。 2.試劑（1） 硫酸：分析純，0.255±0.005N（每100ml含硫酸1.25g，用氫氧化鉀標準溶液標定。）（2） 氫氧化鈉：分析純，0.313±0.005N（每100ml含氫氧化鈉1.25g，用莖準

25、鄰苯二甲酸氫鉀標定）（3） 酸洗石棉：將中等長度洗滌石棉薄鋪在蒸發(fā)皿中，放入600茂福爐中灼燒16h，用配置的1.25%硫酸浸沒石棉，煮沸30min，過濾，用蒸餾水洗凈酸，同樣用1.25%氫氧化鈉煮沸30min，過濾，用蒸餾水洗凈。烘干。放入600茂福爐中灼燒16h，燒去有機物。（4） 正辛醇3.測定（1） 取2g樣品用乙醚提去脂肪后，全部移入500ml錐形瓶中。（2） 在錐形瓶中加煮沸的0.255N 硫酸液200ml和1滴防泡沫劑。用蠟筆在液面處畫一刻度線，在錐形瓶口加表玻璃蓋或連接回流冷凝瓶。（3） 將錐形瓶立即放在電熱板上加熱，使瓶內(nèi)液體在2min內(nèi)煮沸，繼續(xù)煮沸30min，每隔5min

26、搖動錐形瓶一次，以充分混合瓶內(nèi)物質(zhì)，避免樣品貼雜液面以上的瓶壁上，在加熱過程中溶液若有蒸發(fā)，應(yīng)添加煮沸的蒸餾水至錐形瓶的200ml刻度處。（4） 30min后立即移開錐形瓶，隨后用鋪有濾布的抽濾漏斗抽濾。調(diào)節(jié)漏斗抽氣速度，使200ml濾液在10min內(nèi)全部濾凈，再以沸水洗滌錐形瓶與殘渣，直至濾液用藍色石蕊試紙檢查呈中性反應(yīng)為止。（5） 用200ml煮沸的0.313N氫氧化鈉溶液，將濾布上的殘全部沖入原錐形瓶中，在錐形瓶中加表玻璃皿。（6） 立即將錐形瓶放在電熱板上，在1min內(nèi)煮沸，重復（3）（4），在洗滌過程中可先用25ml煮沸的0.255N硫酸液，再用沸水洗滌，直至濾液用紅色石蕊試紙檢查誠

27、中性反應(yīng)為止。（7） 在抽濾瓶上安裝一個鋪有石棉的致密薄層古氏坩堝。（8） 將濾布上的餓殘渣全部移入古氏坩堝，進行方法同（5），但是只用蒸餾水沖洗，用抽濾瓶抽去古氏坩堝中的水。再用25ml乙醇沖洗坩堝中的水。（9） 將坩堝及內(nèi)容物放入105烘箱中烘至恒重。（10） 將坩堝及內(nèi)容物先在電爐上炭化，然后移入600茂福爐中灼燒，至恒重（約30min）。4.計算 粗纖維% = 坩堝及內(nèi)容物烘干后的重量-灰化后坩堝及內(nèi)容物重量/樣本重 × 100實驗九 植物蛋白原料生熟度判定一 植物蛋白的氫氧化鉀溶解度的測定1. 目的：判斷豆粕，棉粕等植物蛋白原料加工的生熟度，一般豆粕的溶解度在7085%。2

28、. 試劑（1） 2%氫氧化鉀試劑，0.042mol，pH為12.5。（2） 其他試劑為定氮所需試劑。（3） 制備氫氧化鉀試劑：取2.360g氫氧化鉀于容量瓶中，溶解于水，稀釋至1000ml，注意補充氫氧化鉀的純度。3. 實驗步驟2.0g樣品（過60目），加入250ml錐形瓶中，再加100ml氫氧化鉀溶解并攪拌20min。再將50ml上清液轉(zhuǎn)入離心管，以2700轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心10min，取10-20ml上清液進行消化，凱氏定氮。4. 計算蛋白質(zhì)溶解度，PS%=溶解于KOH中的蛋白質(zhì)%/原樣本中的粗蛋白質(zhì)% ×100二 大豆制品中尿素酶活性的測定方法方法一：酸度計法1. 原理:根據(jù)AOC

29、S法，測定出自于大豆及加工產(chǎn)品的尿素酶活化度。2. 儀器（1） 可調(diào)節(jié)溫度的恒溫水浴鍋（2） pH計（3） 50ml碘瓶3. 試劑（1） 磷酸二氫鉀（2） 磷酸氫二鉀（3） 尿素CO（NH2）2（4） 甲苯（5） 0.05M磷酸緩沖液：磷酸二氫鉀3.403g 100ml水中 混合1000ml，調(diào)pH為7.0磷酸氫二鉀4.335g 100ml水中（6） 尿素緩沖液：取分析純尿素15g，溶于500ml磷酸緩沖液，再加5ml甲苯防腐劑（防止霉菌發(fā)酵），調(diào)pH 值為7.04. 步驟 0.8g樣品+40ml尿素緩沖液試樣粉碎到0.35mm以下 搖勻后放入 0.8g樣品+40ml磷酸緩沖液 30 恒溫水浴

30、槽中，每5min搖勻一次，反應(yīng)30min，在5min內(nèi)測定pH值。5. 計算：尿素酶活化度（pH值上升值）=試樣的pH測定值-空白的pH值 方法二 尿素酶快速測定法酚紅法（參考法）1. 稱取0.2g經(jīng)磨細的豆粕樣品放置試管中，注入2%尿素1ml，開始計時，加入指示劑苯酚2滴，再加入8ml蒸餾水，（20-30s）開始震搖試管約10s，直至全脂豆粕浮在液體層，每搖動10s約等待3s，再觀察溶液層顏色，如果出現(xiàn)粉紅色，計下時間，與尿素酶活性表對照，如果顏色不變，則再搖10s約等待3s，然后再觀察溶液層顏色，重復操作，如一直不變，再重頭開始。（做實驗以前，要先做空白實驗，如果呈粉紅色則指示劑已經(jīng)不能用

31、，重新配置指示劑。震搖停止后觀察溶液的顏色時要等3s，不可太快或太慢，否則會看錯，晚間不能做該實驗。時間（min）豆粕尿素酶活性0-10.9以上1-20.9-0.72-30.7-0.53-3.50.5-0.43.5-40.4-0.34-4.50.3-0.254.5-50.25-0.25-60.2-0.156-70.15-0.17-90.1-0.0512無色0 方法三：尿素酶活性快速測定法酚紅法（粗略法）1. 原理：尿素酶 + 尿素 氨氣（用酚紅作指示劑） 2.試劑（1） N氫氧化鈉：稱0.4g氫氧化鈉溶于100ml水中。（2） 0.1N硫酸：將2.77ml濃硫酸加入1000ml水中稀釋。（3）

32、 尿素酚紅溶液：0.14g酚紅溶于35ml水中+7ml0.1N氫氧化鈉 混合 0.1N硫酸滴定 琥珀色 21g尿素溶于300ml水中2. 方法：將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中，將已調(diào)好的尿素酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全錦濕，停留5min，觀察豆粕的紅色反應(yīng)。少量紅點微量活躍（pH=0.05-0.10）約25%紅點中度活躍（pH=0.10-0.25）約50%紅點活躍（pH=0.30-0.50）約75%紅點非?；钴S（pH2.0）5min沒紅點出現(xiàn)，停留25min任無豆粕過熟實驗十 氯化膽堿含量的測定一 . 70%氯化膽堿水溶液中氯化膽堿含量的測定1.原理：乙酸汞 + 氯化膽堿 氯化汞

33、+ 乙酸鹽 高氯酸 滴定2.試劑（1） 冰乙酸：優(yōu)級純（2） 乙酸汞試液：50g/L，取5g乙酸汞研細，加100ml溫熱的冰乙酸溶解（3） 結(jié)晶紫指示劑：2g/L，取0.2g結(jié)晶紫，加100ml冰乙酸（4） 高氯酸標準溶液（0.1mol/L）3.測定0.3g樣品 + 20ml冰乙酸 +2ml乙酸酐 +10ml乙酸汞試液 + 2滴結(jié)晶紫指示液搖勻，用高氯酸標準溶液滴定至溶液呈純藍色，同時進行空白測定。4.計算CO（V-V0）×139.63m×1000氯化膽堿% = ×100式中：c0高氯酸標準溶液的濃度V滴定試樣時消耗的高氯酸溶液體積V0滴定空白時消耗的高氯酸溶液體

34、積M試樣的質(zhì)量二次平行測定結(jié)果絕對差值不大于0.2%，取其平均值二 . 50%氯化膽堿粉劑中氯化膽堿含量的測定：原理，試樣制備不同，其余與一同1. 原理：將樣品中的氯化膽堿用甲醇萃取出來，蒸發(fā)掉溶劑后，再用非水滴定法測定其中的氯化膽堿含量。2. 試樣的制備稱取在105下干燥3h的樣品0.7g，置于250ml錐形瓶中，加40ml甲醇，充分搖動30min后過濾，再用約20ml甲醇洗滌沉淀4次，將濾液和洗液合并，在水浴上蒸發(fā)至干，備用。3. 測定：試樣加微熱冰乙酸20ml后，按一.3 程序操作測定。 允許平行差值不大于0.5%，取其平均值。三 . 50%氯化膽堿粉劑中氯化膽堿含量的快速測定105下干

35、燥3h的樣品0.7g置于250ml的錐形瓶中，+40ml冰乙酸 ，在電爐上加熱保持微沸10min，+ 2ml乙酸酐+2滴結(jié)晶紫指示劑，在用高氯酸標準溶液滴定至溶液呈純藍色。實驗十一 油脂酸價的測定1. 原理：用中性乙醚-乙醇混合溶液溶解油脂及其脂肪酸，再用堿標準溶液滴定。2. 試劑準備（1） 中性乙醚-乙醇混合溶液：乙醚與乙醇2：1混合，臨用前以酚酞為指示劑，用0.1N氫氧化鈉標準溶液滴定至中性。（2） 0.1N的氫氧化鉀標準溶液3. 測定3-5g樣品 + 中性乙醚-乙醇混合液50ml + 3滴酚酞指示劑 0.1N氫氧化鉀滴定 淡紅色4. 數(shù)據(jù)處理氫氧化鉀溶液濃度×消耗氫氧化鉀體積&

36、#215;56.1試樣的質(zhì)量酸價 = 56.1氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量實驗十二 油脂過氧化值的測定1.原理：油脂中的過氧化物 + 碘化鉀 碘用硫代硫酸鈉滴定2.試劑（1） 氯仿-冰乙酸混合溶液：氯仿40ml加冰乙酸60ml，混勻（2） 飽和碘化鉀溶液：取碘化鉀5g，加水10ml（3） 0.02mol/l硫代硫酸鈉標準溶液（4） 0.5%淀粉指示劑3.測定2-3g試樣，注入250ml碘量瓶中，加入30ml氯仿-冰乙酸混合溶液，振搖使試樣溶解，加1ml飽和碘化鉀溶液，加塞后搖勻，在暗處放置3min，取出加水100ml，搖勻后立即用0.02ml/l的硫代硫酸鈉標準溶液滴定至淡黃色，加0.5%淀粉指示劑1m

37、l，滴定至藍色消失為止，再做空白實驗。4.計算（耗硫代硫酸鈉體積-空白耗其體積）×其濃度×0.1269試樣的質(zhì)量過氧化值%（以碘%表示） = 0.1269與1mlmol/l硫代硫酸鈉標準溶液相當?shù)牡獾目藬?shù) 實驗十三 魚粉摻假檢測及真蛋白質(zhì)的測定一.魚粉中摻尿素的測定1. 原理尿素 尿素酶 氨態(tài)氮 甲酚紅 紅色與尿素含量成正比2. 定性測定試劑：0.1%甲酚紅指示劑，0.1g甲酚紅溶于100ml95%乙醇中方法一：5g魚粉加入二支試管中，其中1支加入少許黃豆粉，各加蒸餾水5ml，振搖后置60-70水浴中放30min，取出后滴加6滴0.1%甲酚紅指示劑，如果加黃豆粉的試管出現(xiàn)深

38、紫紅色，說明摻有尿素，無尿素呈黃色或棕黃色方法二 ： 取魚粉2g于燒杯中，加水20ml，攪拌后放置幾分鐘后過濾，取樣品濾液2ml于白色蒸發(fā)皿中，加3滴0.1%甲酚紅指示劑，再加6滴黃豆液（5g黃豆粉加水100ml浸泡1h，取其濾液），靜置5min，若有尿素存在即呈深紫色且散開象蜘蛛網(wǎng)樣。無尿素呈黃色。3. 定量測定（1）試劑1) 對二甲氨基甲醛（DMAB）溶液：溶解4.0gDMAB于100ml無水乙醇中加10ml濃鹽酸搖勻。2) 尿素標準溶液：儲備液，稱取5.00g尿素，用水稀釋至100ml1.0mg/ml標準工作溶液：量取10ml儲備溶液稀釋至100ml0.2mg/ml標準工作液：量取10m

39、l儲備液稀釋至50ml，再取此稀釋液10ml稀釋至100ml3) 乙酸鋅溶液：溶解22.0gZn（AC）22H2O于水中，加入3ml冰乙酸，并稀釋到100ml4) 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6gK4Fe（CN）6.3H2O用水稀釋到100ml5) 磷酸鹽緩沖液（pH=7）：將3.403g無水磷酸二氫鉀和4.355g無水磷酸氫二鉀分別溶于100ml水中，合并次二溶液，并稀釋至1000ml6) 活性炭（2）測定方法a) 樣品制備：樣品粉碎到20目以下，稱取1.00g樣品于150ml燒杯中，加入1g活性炭并準確移取90ml水，搖勻，放置10min，再分別加入5ml乙酸鋅溶液和5ml亞鐵氰化鉀溶液，攪

40、勻并放置30min，用濾紙過濾，濾液待用。同時做空白實驗。b) 標準曲線繪制測1%以上尿素含量的樣品，用1.0mg/ml濃度的標準液，用1cm比色池；含量在1%以下的樣品，用0.2mg/ml濃度標準液，用2cm比色池。分別取尿素標準液0.1.2.3.4.5.7.10ml和磷酸鹽緩沖液5ml于9個25ml具塞比色管中，加水約18ml，分別加入DMAB液5ml，用水稀釋到刻度，搖勻，放置10min。然后以0ml標準管為參比，在420nm波長下，測定吸光度。以吸光度為縱坐標，尿素濃度為橫坐標作圖，圖形應(yīng)該為一條直線，否則重做。C） 樣品測定準確移取一定量樣品濾液（樣品尿素含量在1%以下取15ml，1

41、%以上取5ml）于25ml比色管中，以下操作同b）。由所測吸光度查標準曲線。樣品尿素含量在1%以下時：尿素（%）=2/3 × （ C C0）/m樣品尿素含量在1%以上時：尿素（%）=2（C C0）/m式中：C.C0分別是測定樣品和試劑空白所查得的尿素含量，mg m 測定樣品重，g二 .魚粉中摻入植物質(zhì)、胺鹽和鞣革粉的化學檢驗（） 適用范圍：適用于生產(chǎn)、加工、經(jīng)銷、調(diào)撥的飼料級魚粉中摻入植物質(zhì)、胺鹽和鞣革粉的直接化學鑒別檢驗（） 試劑1) 碘2) 碘化鉀3) 間苯三酚4) 二苯基卡巴腙5) 碘化汞化學純6) 氫氧化鈉7) 乙醇8) 硫酸9) mol/l氫氧化鈉溶液10) mol/l硫酸

42、溶液11) 碘碘化鉀溶液：取碘化鉀g溶于ml水中，再加入g碘溶解搖勻12) 間苯三酚溶液：取間苯三酚g加乙醇到ml使溶解，搖勻13) 二苯基卡巴腙溶液：取二苯基卡巴腙.g，加乙醇ml使溶解，搖勻14) 奈斯勒試劑：取碘化汞g，碘化鉀.g于ml的mll氫氧化鈉溶液中，混合均勻傾取上清液放置到棕色瓶中保存15) 生豆粉：取新鮮干燥的大豆粉或刀豆粉碎后，過目，加蓋保存16) 尿素酶溶液：稱取尿素酶.g溶于50ml水中,冰箱保存.17) 甲酚紅指示劑:稱取0.1g甲酚紅溶于10ml乙醇中,溶解后再加乙醇到100ml.( 3 ) 魚粉中摻入植物質(zhì)的檢驗1) 原理:植物質(zhì)中含有木質(zhì)素和淀粉.木質(zhì)素+間苯三

43、酚在強酸條件下反應(yīng),產(chǎn)生紅色的化合物,淀粉與碘化鉀反應(yīng)可產(chǎn)生藍色化合物.2) 方法: 1-2g魚粉于50ml燒杯中,加入10ml水加熱5min,冷卻,滴入2滴碘-碘化鉀溶液,觀察顏色變化,如果溶液顏色立即變?yōu)樗{色表明試樣中有淀粉存在。 另取魚粉1g置于表面皿中，用間苯三酚溶液浸濕，放置5-10min，滴加濃鹽酸2-3滴，觀察顏色，如果試樣呈深紅色，則表明試樣中含有木質(zhì)素。（4）魚粉中摻入銨鹽的檢驗1) 原理：銨鹽一般都含有氨態(tài)氮，奈斯勒試劑能與含氨態(tài)氮物質(zhì)產(chǎn)生黃褐色沉淀，尿素在堿性條件下，由于尿素酶的催化作用，可生成氨態(tài)氮。2) 檢驗方法：取魚粉試樣1-2g于試管中，加10ml水振搖2min，

44、靜置20min，取上清液2ml到蒸發(fā)皿中，加入1mol/l氫氧化鈉溶液1ml置水浴上蒸干，再加水數(shù)滴和生豆粉約10mg，靜置2-3min，加奈斯勒試劑2滴。如試樣有黃褐色沉淀產(chǎn)生則表明有尿素存在。 魚粉中摻有銨態(tài)氮物質(zhì)的檢驗方法：取魚粉1-2g，加水10ml，振搖2min，靜置20min，取上清液2ml加1mol/l氫氧化鈉1ml，加奈斯勒試劑2滴。如試樣有黃褐色沉淀表明有NH4+存在。（5） 魚粉中摻入 鞣革粉的檢驗1） 原理：用鉻鞣制的皮革中 均含有鉻，將魚粉灰化，鞣鉻中有一部分鉻轉(zhuǎn)化為6價鉻，在強酸性條件下，6價鉻可與二苯基卡巴腙反應(yīng)生成鉻-二硫代卡巴腙的紫紅色水溶性化合物。2） 方法：

45、取魚粉試樣1-3g于坩堝中置于電爐上炭化到煙散盡，于550-660高溫爐中灰化30min，直到卻變?yōu)榛野咨尤?mol/l硫酸溶液10ml攪拌，加二苯基卡巴腙溶液數(shù)滴，觀察顏色變化，如紫紅色表明魚粉中摻有鞣革粉。（6） 真蛋白的測定 方法一：鹽析法1) 試劑：I. 硫酸銅溶液：10%，稱取50.00g硫酸銅加水溶解，并稀釋到500ml。II. 氫氧化鈉溶液：2.5%，稱取12.50g氫氧化鈉，加水溶解，并稀釋到500ml。III. 鹽酸標準溶液：0.05mol/l。2） 測定1g樣品 + 50ml蒸餾水于250ml燒杯中，于電爐上加熱煮沸，加入20ml10%硫酸銅溶液，再在攪拌下緩緩加入20

46、ml2.5%氫氧化鈉溶液，搖勻，從電爐上取下，室溫下放置2h。沉淀物用中速定性濾紙傾瀉法過濾。并用少量70以上熱水多次洗滌燒杯和沉淀物，直至濾液無硫酸根離子（用5%BaCl2溶液檢驗無沉淀），連沉淀物一起放入80烘箱中烘到略潮，放入凱氏定氮燒瓶中，消化，測定其中的蛋白質(zhì)含量，同時進行空白測定。方法二：測非蛋白氮法1）NP的測定稱取15g 左右樣品，準確加入100ml5%三氯乙酸溶液，浸泡震蕩2h，靜置過濾，精確量取10-20ml濾液定氮，同時做空白實驗。2）一般進口魚粉cp在80%以上，國產(chǎn)魚粉cp在75%以上。實驗十四 飼用玉米脂肪酸值的測定1.試劑1） 01mol/lKOH乙醇標準溶液：取

47、0.5mol/lKOH溶液100ml，用乙醇（95%）稀釋到1L，然后安GB601標定。2） 酚酞指示劑：2g/l乙醇溶液3） 無水乙醇2.步驟 將平均樣品按四分法制得約80g樣品粉碎，過0.45mm（40目）孔徑篩，立即稱取10g樣品，于150ml具塞三角瓶中，加50ml無水乙醇，加塞振動10min，過濾，并用無水乙醇洗3次，每次15ml，然后加酚酞3滴，用0.01mol/lKOH乙醇標準溶液滴定到溶液呈微紅色，同時取90ml乙醇做空白。3.數(shù)據(jù)處理脂肪酸值 = （V - V0） × C × 56.1 / m × 100式中： V樣品消耗堿標準溶液的體積，ml

48、C KOH標準溶液的濃度，mol/lVO空白消耗堿標準溶液的體積，ml M樣品的質(zhì)量，g 實驗十五 油脂碘價的測定1.原理：將試樣溶于惰性有機溶劑中，加入過量的氯化碘的冰醋酸溶液（韋氏碘液）與油脂中的不飽和脂肪酸起加成反應(yīng)，生成飽和的鹵素衍生物，再加入過量的碘化鉀與剩余的氯化鉀作用而生成游離碘，再用硫代硫酸鈉標準溶液滴定游離的碘。2.測定 根據(jù)試樣碘值的大小，按下表稱取試樣（m，準確至試樣溶解，然后由滴定管精確放入5ml韋氏液（加入速度不可過快，應(yīng)掌握再2min左右）立即蓋緊瓶塞（塞口和瓶口先用少量15%KI溶液潤濕，以防碘揮發(fā)）搖勻后在20條件下于暗處靜置30min（碘價在130以上的靜置6

49、0min），使加成反應(yīng)完全，到時立即加入15%碘化鉀溶液20ml和水100ml，不斷振搖下用0.1N硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液有棕紅色變成淡黃色時，加入1ml淀粉指示劑（5%），繼續(xù)滴定至藍色消失為止。同時做空白實驗。碘價數(shù)值與試樣用量表碘價試樣用量范圍（g）碘價試樣用量范圍（g）200.8461-1.58651000.2538-0.3173400.6346-0.79351200.2115-0.2644600.4231-0.52881400.1813-0.2266800.3173-0.39661600.1587-0.19833.數(shù)據(jù)處理（V2-V1）×N×0.1269m碘價

50、= ×100 式中：V1滴定試樣消耗的硫代硫酸鈉的量，mlV2滴定空白消耗的硫代硫酸鈉的量，ml每個試樣做二個平行實驗，碘價在100以上不超過1，碘價在100以下，不超過0.6，取平均數(shù)。4.韋氏液的配置 稱取13g純碘于500ml燒杯中加200ml冰醋酸，在水浴上微熱使其溶解，冷卻后移入1000ml容量瓶中，以冰醋酸稀釋至刻度，從容量瓶中取150ml作韋氏液用，其余碘液按圖裝置通入經(jīng)過洗滌和干燥的氯氣，使之與碘作用，生成氯化碘，反應(yīng)：鹽酸與高錳酸鉀反應(yīng)生成氯氣，經(jīng)過水洗滌除去水溶性雜質(zhì)，經(jīng)濃硫酸洗后可脫水凈化。氯氣與碘反應(yīng)生成氯化碘，將氯氣通入碘冰乙酸溶液中，使碘冰乙酸溶液由濃褐色變?yōu)橥该鞯某燃t色為止。實驗十六 鍋爐水測定方法一總堿度水樣中有氫氧化物碳酸鹽磷酸鹽硅酸鹽腐植酸鹽等物質(zhì)時即形成堿度。堿度可用酸標準溶液滴定，以容量法測定。 1.試劑：酚酞指示劑（1%）：將1.0g酚酞溶于100ml95%乙醇中。 甲基橙指示劑（0.1%）：稱取0.10g甲基橙，溶于70的水中，冷卻，稀釋至100ml。 硫酸標準溶液（0.10N）：量取2.80ml濃硫酸，緩慢注入1000ml水中，冷卻搖勻，標定 2.測定：水樣100ml + 2滴酚酞指示劑(紅色) 0.1N硫酸標準液滴定到無色+2滴甲基橙指示劑(黃色) 0.1N硫