魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容魚類生理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一反射中樞活動(dòng)的某些基本特征及反射弧的分析實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)：3*實(shí)驗(yàn)要求：必修 選修一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙螅和ㄟ^對(duì)某些脊髓反射（如脊蛙的屈肌反射）的分析，了解反射弧完整性與反射活動(dòng)的關(guān)系。掌握反射時(shí)的測定方法，通過用不同濃度的硫酸溶液刺激蛙趾引起屈肌反射。以脊蛙的屈肌反射為指標(biāo)，觀察反射中樞活動(dòng)的某些基本特征，并分析它們產(chǎn)生的機(jī)制。二、實(shí)驗(yàn)基本原理：在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的參與下，機(jī)體對(duì)刺激所產(chǎn)生的具有適應(yīng)意義的規(guī)性律性反應(yīng)過程稱為反射。將動(dòng)物的高位中樞切除僅保留脊髓的動(dòng)物成為脊髓動(dòng)物（如脊蛙），它們產(chǎn)生的反射活動(dòng)為單純的脊髓反射，由于失去高位中樞的控制反射活動(dòng)較為簡單

2、，便與觀察與分析反射過程的某些特征。反射活動(dòng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是反射弧。典型的反射弧由感受器、傳入神經(jīng)、神經(jīng)中樞、傳出神經(jīng)和效應(yīng)器五個(gè)部分組成。反射弧必須保持完整性，才能引起反射， 其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)受到破壞，反射活動(dòng)就無法實(shí)現(xiàn)。在反射活動(dòng)中， 由于神經(jīng)元特別是中間神經(jīng)元聯(lián)系方式的不同，使反射活動(dòng)表現(xiàn)出種種特征。如：反射時(shí)（從刺激作用于感受器至效應(yīng)器出現(xiàn)反應(yīng)所經(jīng)歷的時(shí)間）的長短、反射活動(dòng)空間范圍的大小、反射活動(dòng)持續(xù)時(shí)間的久暫以及引起反射活動(dòng)的刺激條件等等。三、主要儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)耗材：蟾蜍、硫酸溶液（0.1%,0.3%,0.5%,1% ）、紗布。蛙類手術(shù)器械、鐵架臺(tái)、血管鉗一把、秒表、玻璃平皿、肌夾、搪瓷

3、杯、小濾紙（約1cm× 1cm）、燒杯。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容或步驟：1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備取蟾蜍一只， 用粗剪刀由兩側(cè)口裂剪去上方頭顱，制成脊蟾蜍。 將動(dòng)物俯臥位固定在蛙板上， 于右側(cè)大腿背側(cè)縱行剪開皮膚，在股二頭肌和半膜肌之間的溝內(nèi)找到坐骨神經(jīng)干，在神經(jīng)干下穿一條細(xì)線備用。手術(shù)完后，用肌夾夾住動(dòng)物下頜，懸掛在鐵架臺(tái)上。2、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（ l）反射中樞活動(dòng)的某些基本特征反射時(shí)的測定：在平皿內(nèi)盛適量0.1% 硫酸溶液，將蟾蜍一側(cè)后肢的一個(gè)腳趾尖浸入硫酸溶液中， 同時(shí)按動(dòng)秒表記錄從浸入時(shí)起至后肢發(fā)生屈曲所需要的時(shí)間，并立即將該足趾浸入搪瓷杯水中浸洗數(shù)次，然后用紗布拭干。用上述方法重復(fù)三次，注意每次浸入趾尖的深

4、度要一致。三次所測時(shí)間的平均值，即為此反射的反射時(shí)（兩次實(shí)驗(yàn)間隔至少2 3min）。然后平皿中分別換以0.3%、0.5% 、1%的硫酸溶液再重復(fù)上述測定，比較四種濃度硫酸所測之反射時(shí)是否相同。1/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（ 2）反射弧的分析用浸有 1%硫酸溶液的小濾紙片貼在下腹部。觀察雙后肢有何反應(yīng)？待反應(yīng)出現(xiàn)后，將動(dòng)物浸于搪瓷杯的清水內(nèi)洗掉濾紙片和硫酸， 用紗布擦干皮膚。 提起穿在右側(cè)坐骨神經(jīng)下的細(xì)線，剪斷坐骨神經(jīng)，再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，比較兩次結(jié)果有何不同？分別將左右后肢趾尖浸入盛有 1%硫酸的小平皿內(nèi)（兩側(cè)浸沒的范圍相等且僅限于趾尖），雙側(cè)后肢是否都發(fā)生反應(yīng)？沿左后肢趾關(guān)節(jié)上做一環(huán)形皮膚切口

5、，將切口以下的皮膚全部剝脫（趾尖皮膚一定要?jiǎng)兏蓛簦?，再?1%硫酸溶液浸泡該趾尖（切不可將其他趾尖浸入），觀察該側(cè)后肢的反應(yīng)。將一 1%硫酸紙片貼于左后肢皮膚，觀察引起的反應(yīng)，用搪瓷杯中清水洗掉紙片及硫酸，擦干皮膚后，將探針插入脊髓腔內(nèi)反復(fù)搗毀脊髓，再重復(fù)剛才的實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如何？ 方法評(píng)估 操作簡單、易于掌握，為常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法。 應(yīng)用意義 為了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)某些特征及活動(dòng)規(guī)律的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)， 主要用于觀察分析中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)反射中樞的活動(dòng)規(guī)律及反射弧的完整與反射活動(dòng)的關(guān)系。 注意事項(xiàng) 1、離斷顱腦部位要適當(dāng)，太高可能保留部分腦組織而出現(xiàn)自主活動(dòng)，太低也會(huì)影響反射的引出。2、每次用硫酸溶液或紙片處理后，

6、應(yīng)迅速用搪瓷杯中的清水洗去皮膚上殘存的硫酸，并用紗布擦干，以保護(hù)皮膚并防止沖淡硫酸溶液。測定反射時(shí)的硫酸濃度應(yīng)由低到高。3、浸入硫酸溶液的趾尖應(yīng)僅限于一個(gè)，而且每次浸泡的范圍也應(yīng)恒定，切勿浸入太多。五、思考題1、何謂反射時(shí)，反射時(shí)與刺激強(qiáng)度之間有何關(guān)系？2、反射弧包括哪幾部分？剝?nèi)ブ宏P(guān)節(jié)以下的皮膚后不再出現(xiàn)原有的反射活動(dòng)，為什么？2/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)二魚類血液紅細(xì)胞和白細(xì)胞的計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)：3*實(shí)驗(yàn)要求：必修 選修附件一魚類紅細(xì)胞與白細(xì)胞的計(jì)數(shù)（必修） 目的與原理 掌握魚類采血技術(shù)和魚類紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法，并測定不同魚類的紅、白細(xì)胞含量及其差異。采用稀釋法計(jì)數(shù)魚類單位容

7、積血液內(nèi)的紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)。由于血液中紅、 白血細(xì)胞數(shù)很多無法直接計(jì)數(shù)，故需用適當(dāng)?shù)娜芤簩⒀合♂?。然后將稀釋血滴入血?xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定容積的紅、白細(xì)胞數(shù)。再將所得的結(jié)果換算為每立方mm 血液中紅、白細(xì)胞個(gè)數(shù)。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 鯉、鯽或草魚。 試劑與器材 顯微鏡，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)器，魚用注射器（1ml 或 5ml），吸血管，凹瓷盤，消毒棉球，紗布，擦鏡紙，小試管及試管架，移液管（1ml 及 2ml），紅、白細(xì)胞稀釋液（或0.850.9% 的 NaCl 溶液）， 75%的酒精，蒸餾水，抗凝劑（1%肝素鈉溶液或10%草酸鉀溶液） 。 實(shí)驗(yàn)步驟 1、熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板為一

8、長方形厚玻璃板。其中計(jì)數(shù)室方格大小的劃分， 各種產(chǎn)品略有不同，但基本原理相同。其中央橫溝的兩邊各有一計(jì)數(shù)室，兩計(jì)數(shù)室的劃分完全相同 （圖 1-5-1）。在顯微鏡低倍下觀察， 可見每個(gè)計(jì)數(shù)室用雙線劃分成9 個(gè)大方格（圖 1-5-2 ）。大方格每邊長 1.0mm。四角的大方格每個(gè)又分為16 個(gè)中方格，這是用以計(jì)數(shù)白細(xì)胞的。 中央的一個(gè)大方格用雙線分成25 個(gè)中方格， 每個(gè)中方格又等分成16 個(gè)小方格（用單線），中方格每邊長為 0.2mm，計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)，數(shù)中央大方格的5 個(gè)中方格（即四角和中央的中方格）內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)目（圖1-5-2）。計(jì)數(shù)室較兩邊的蓋玻片支柱低0.1mm，因此，放上蓋玻片后，計(jì)數(shù)板與

9、蓋玻片之間的距離為0.1mm，此為計(jì)數(shù)室的高度。2、采血及稀釋：以 2ml 移液管在干凈的小試管內(nèi)準(zhǔn)確加入紅細(xì)胞稀釋液或0.850.9%的 NaCl 溶液 2ml ，另用 1ml 移液管在另一干凈的小試管內(nèi)加入白細(xì)胞稀釋液0.38ml ，備用。魚類血液可從心臟或尾動(dòng)脈中采取。方法是將魚腹部向上固定在魚解剖臺(tái)上，或用紗布包好握在手里， 用浸潤過抗凝劑的注射器沿魚體中線與兩腹鰭根部之間相交部位刺入，依據(jù)解剖部位確認(rèn)已刺入心臟，可稍后拔針管，如有血液吸入即可，否則重新拔出再刺。3/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容圖 1-5-1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)室結(jié)構(gòu)圖 1-5-2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)尾動(dòng)脈取血方法 是用注射器從魚體臀

10、鰭后部插入至椎體腹側(cè)， 尾靜脈血液順勢流入針管，每尾魚可用此方法數(shù)次采血， 但每次針頭插入部位應(yīng)在前次插入之前。將抽出的血液放入經(jīng)抗凝劑處理的凹瓷盤內(nèi)，用微量（血紅蛋白） 吸血管吸取 10 l 血液至紅細(xì)胞稀釋液試管內(nèi)， 再吸取 20 l 血液至白細(xì)胞稀釋液試管內(nèi)，輕輕擠出血液并反復(fù)吸洗 23 次。然后將血液與稀釋液混和均勻，但不可用力振蕩，以免細(xì)胞破碎。3、充液：將蓋玻片先蓋在計(jì)數(shù)板上，用潔凈的吸血管吸取搖勻的稀釋血液，然后將吸管口輕輕斜置蓋玻片的邊緣， 滴出少量稀釋血液， 使溶液借毛細(xì)管現(xiàn)象而流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。但必須注意，如滴入過多時(shí)，流出室外凹溝中，易造成蓋玻片浮起，體積不準(zhǔn)；過少時(shí)，經(jīng)多次

11、充液，易造成氣泡，所以都應(yīng)洗去重新充液。4、計(jì)數(shù) ：稀釋血液滴入計(jì)數(shù)室后，須靜置23 分鐘，然后低倍鏡下計(jì)數(shù)（顯微鏡焦距準(zhǔn)確，縮小光圈并降低聚光器。使視野較暗）。計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，數(shù)四角四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)數(shù)中央大方格四角的四個(gè)中方格和中央的一個(gè)中方格（共 5 個(gè)中方格）內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)循一定的路徑以免遺漏或重復(fù)。對(duì)于分布在劃線上的血細(xì)胞，依照“ 數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右 ”的原則進(jìn)行計(jì)數(shù) （圖 1-5-3 ）。計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，如發(fā)現(xiàn)每個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù)相差10個(gè)以上； 計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)， 如發(fā)現(xiàn)各個(gè)中格之間的紅細(xì)胞數(shù)相差超過 15 個(gè)，表示血細(xì)胞分布不均勻。應(yīng)將計(jì)數(shù)板洗凈，重新?lián)u

12、勻稀釋血液，再充液計(jì)數(shù)。5 計(jì)算紅細(xì)胞數(shù)目：將5 個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10， 000即得每立方mm 血液中紅細(xì)胞總數(shù)。圖 1-5-3 血細(xì)胞計(jì)數(shù)方式（實(shí)心圈表示計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞，空心圈表示不應(yīng)計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞）計(jì)算公式為：紅細(xì)胞數(shù)/mm 3 = 5 個(gè)中格紅細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù) /計(jì)數(shù)的 5 個(gè)中格容積（ 1）稀釋倍數(shù)等于稀釋液 2ml 除以加入血 10 L （ 0.01ml ），為 200 倍。（ 2）計(jì)數(shù)室 5 個(gè)中格容積為 0.2 × 0.2 ×0.1 × 5 = 0.02 mm 3。4/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容白細(xì)胞數(shù)目：將 4 個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得白

13、細(xì)胞總數(shù)乘以50，即每立方 mm血液的白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)算公式為：白細(xì)胞數(shù)3= 4 個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)/ 計(jì)數(shù)的 4 個(gè)大格容積/ mm（ 1） 稀釋倍數(shù)等于稀釋液 0.38ml+ 血 20 L （ 0.02ml ） /0.02ml ，為 20 倍。（ 2）計(jì)數(shù)室 4 個(gè)大方格容積為1×1× 0.1× 4= 0.4 mm3。 方法評(píng)估 采用顯微鏡目視計(jì)數(shù)法為血液紅、 白細(xì)胞數(shù)量測定的最常用的基本方法， 目前雖有各種自動(dòng)化分析方法，但該方法由于經(jīng)典、方便、實(shí)用，仍較廣泛用于血液檢驗(yàn)和科研實(shí)踐中。 應(yīng)用意義 紅細(xì)胞是血液中數(shù)量最多的有形成分，在正常情況下

14、幾乎占血容量的1 2，故使血液呈紅色粘稠混懸液。紅細(xì)胞數(shù)量正常情況下保持相對(duì)穩(wěn)定的。多數(shù)魚100 300 萬個(gè) /mm3 ，33高者可達(dá)400 萬個(gè) /mm 低者數(shù)十萬 / mm 。魚類紅細(xì)胞數(shù)也因性別不同而有差異， 一般雄魚的紅細(xì)胞數(shù)比雌魚多。 此外魚類紅細(xì)胞數(shù)量常因魚種、年齡、外界環(huán)境變化、機(jī)體不同生理狀況（運(yùn)動(dòng)狀況、患病、營養(yǎng)狀況等）而出現(xiàn)一定的差異。環(huán)境變化如長期缺氧紅細(xì)胞代償性增多。魚類白細(xì)胞數(shù)量隨種類、年齡、生理狀況（產(chǎn)卵） 、疾病以及一些外界環(huán)境因素影響而變化，此外，魚類白細(xì)胞還與飼養(yǎng)條件、營養(yǎng)狀況有關(guān)：飽食消化力旺盛時(shí)多，長期饑餓白細(xì)胞（特別是嗜酸性白細(xì)胞）顯著減少。 注意事項(xiàng)

15、 1、各種用具要事前清洗。清洗吸管時(shí)按照蒸餾水（兩次） 95%酒精（兩次） 乙醚（兩次）的方法清洗。計(jì)數(shù)室用蒸餾水洗后，再用軟紗布或擦鏡紙吸干。2、采血要求迅速、準(zhǔn)確，不能凝血，也不能有氣泡，否則棄去重采。3、血吸管用完后必須立即清洗干凈，以防血液凝固堵塞管口。思考題 1、綜合實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果，與紅、白細(xì)胞的正常值相對(duì)照，有何變異？為什么？2、為什么機(jī)體正常血細(xì)胞數(shù)可維持在相對(duì)穩(wěn)定的數(shù)量水平？3、試討論魚類紅細(xì)胞的正常值及其應(yīng)用意義？4、白細(xì)胞數(shù)量的變化有何生理意義？5、血細(xì)胞計(jì)數(shù)室中央的大方各中每一種方格的容積是多少？附血細(xì)胞稀釋液1、白細(xì)胞稀釋液冰醋酸（破壞紅細(xì)胞）1.5 毫升1%龍膽紫（染白

16、細(xì)胞核便于計(jì)數(shù)）1 毫升蒸餾水加至 100 毫升2、紅細(xì)胞稀釋液NaCl(維持滲透壓 )0.5 克Na2SO4 ( 使溶液比重增加，紅細(xì)胞分布不易下沉)2.5 克HgCl（固定紅細(xì)胞形狀）0.25 克蒸餾水加至 100 毫升5/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容附件二魚類血涂片的制作和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（必修） 目的與原理 了解各種類型白細(xì)胞的形態(tài)特征，掌握血涂片制作方法和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法，進(jìn)行不同魚類白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)和血細(xì)胞形態(tài)特征、變形率等的觀察。白細(xì)胞依據(jù)其形狀、染色顆粒、 細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的形狀大小可以進(jìn)行分類。通常的分類方法是根據(jù)細(xì)胞漿中有無特殊的嗜色顆粒，將其分成顆粒細(xì)胞和無顆粒細(xì)胞。顆粒細(xì)胞又

17、依據(jù)所含顆粒對(duì)染色劑反應(yīng)特性， 被區(qū)分為中性粒細(xì)胞、 嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞； 無顆粒細(xì)胞則分成單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。 中性粒細(xì)胞有較強(qiáng)的吞噬能力， 能將侵入機(jī)體的微生物消滅掉， 并可參與免疫復(fù)合物和壞死組織的清除工作。嗜酸性粒細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)含有過氧化物酶和酸性磷酸酶，吞噬能力與中性粒細(xì)胞相當(dāng)或稍弱，能吞噬抗原- 抗體復(fù)合物，此外，嗜酸性粒細(xì)胞具有抗炎作用。嗜堿性粒細(xì)胞含有多種化學(xué)物質(zhì)，如組織胺、肝素和5- 羥色胺等，當(dāng)抗原 - 抗體發(fā)生反應(yīng)時(shí)，或機(jī)體在寒冷環(huán)境中時(shí)，都能引起嗜堿性粒細(xì)胞釋放組織胺和肝素。血液中的單核細(xì)胞穿出血管壁進(jìn)入組織，變成巨噬細(xì)胞，可對(duì)抗組織內(nèi)的致病物，各種細(xì)菌和病毒。淋

18、巴細(xì)胞有免疫功能，對(duì)異己構(gòu)型的物質(zhì)具有殺滅和消除作用。各種白細(xì)胞必須經(jīng)過染色，才易于區(qū)分其類別。常用者為瑞氏（Wright s）染色法和姬姆薩 (Giemsa) 染色法。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 魚（淡水魚和海水魚均可）。 試劑與器材 試劑：染色液的配制：1、姬姆薩（ Giemsa）染液的配制（ 1）原液配制： Giemsa 粉劑（ 0.8 g）；甘油（醫(yī)用） 50 ml；甲醇 50 ml 。將 Giemsa 粉劑溶于甲醇中， 在乳缽中充分研磨， 溶解后再加甘油， 混合均勻， 置于 3740溫箱內(nèi)812h，過濾，裝入棕色試劑瓶內(nèi)，密封保存?zhèn)溆谩＃?2）稀釋液臨用時(shí)取 Giemsa 原液 5ml，加磷酸鹽緩沖

19、液（pH6.4 6.8） 50 ml ，即為 Giemsa 稀釋液。（ 3）pH6.46.8 磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g，加少量蒸餾水溶解，調(diào)整pH 至 6.46.8 ，加水至 1000ml。2、 瑞氏（ Wright s）染液的配制（ 1）原液配制：瑞氏染料粉劑0.1g；純甲醇 60 ml 。(2) 配制步驟： 將瑞氏染料粉放人乳缽內(nèi)，加少量甲醇研磨。將已溶解的染料倒入潔凈的玻璃瓶內(nèi)，剩下未溶解的染料再加入少量甲醇進(jìn)行研磨，如此反復(fù)操作，直至全部染料溶解為止。 裝入玻璃瓶內(nèi)密封，在室溫下保存一周即可使用。 新鮮配制的染料偏堿性，放置后呈酸性，染液儲(chǔ)

20、存時(shí)間越久，染色愈好。器材 ：顯微鏡，香柏油，載玻片，蓋玻片，玻片水平支架，采血針或注射器，計(jì)數(shù)器，小滴管，蠟筆，消毒棉球，瑞氏染液，pH6.46.8 磷酸鹽緩沖液，姬姆薩染液，蒸餾水。 實(shí)驗(yàn)步驟 1、血涂片的制作：取一滴血（采血方法見實(shí)驗(yàn)49），滴于潔凈無油脂的玻片一端。左手持玻片， 右手再取邊緣光滑的另一玻片作為推片。將推片邊緣置于血滴前方，然后向后拉，當(dāng)與血滴接觸后，血即均勻附在二玻片之間。此后以二玻片約呈30 45 度的角度平穩(wěn)地向前推至玻片另一端（圖1-5-4）。推時(shí)角度要一致，用力應(yīng)均勻，即推出均勻的血膜（血膜不6/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容可過厚、過?。?。將制好的血涂片晾干，不

21、可加熱。2、血涂片的染色步驟：（ 1）用蠟筆在血膜兩端各劃一道線，以免染料外溢，置涂片于水平的支架上。（ 2）用小滴管將瑞氏染液滴于涂片上，并蓋滿劃出的涂片部分固定約半分鐘。（ 3）用小滴管再加 1.5 倍緩沖液或姬姆薩（ Glemsa）染液，輕輕搖動(dòng)，并輕吹液體使染色液與緩沖液混合均勻，靜置5 10 分鐘。（ 4）用蒸餾水沖洗（如自來水的 pH 值穩(wěn)定于 7.2 左右時(shí)亦可代用） 。沖洗血膜時(shí)應(yīng)將玻璃片持平，沖洗后斜置血涂片于空氣中干燥?；蛳扔脼V紙吸取水分迅速干燥，即可鏡檢。3、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：先用低倍鏡檢查涂片及染色是否均勻。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均勻處（一般在體尾交界處），在油鏡下由

22、此處開始按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)移動(dòng)時(shí)避免重復(fù)。根據(jù)所見到的100 個(gè)白細(xì)胞，記錄各種白細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)。例如：嗜中性白細(xì)胞分?jǐn)?shù)（%） =計(jì)數(shù)嗜中性白細(xì)胞個(gè)數(shù)/計(jì)數(shù)總白細(xì)胞個(gè)數(shù)×100% 。圖 1-5-4血涂片制備示意圖紅細(xì)胞呈桔紅色； 中性粒細(xì)胞核為藍(lán)紫色， 顆粒呈藍(lán)紫至紫紅色； 嗜酸性粒細(xì)胞顆粒呈鮮紅至桔紅色； 嗜堿性粒細(xì)胞顆粒呈深藍(lán)紫色；淋巴細(xì)胞核呈深藍(lán)紫色，胞質(zhì)呈天藍(lán)色；單核細(xì)胞核呈淺紫色，胞質(zhì)呈灰藍(lán)色。 方法評(píng)估 顯微鏡法白細(xì)胞分類是經(jīng)典、傳統(tǒng)的血細(xì)胞分類法，目前還無任何儀器可以完全取代。它能夠準(zhǔn)確地根據(jù)細(xì)胞形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù)， 并可及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。 血液分析儀進(jìn)

23、行細(xì)胞分類主要是從細(xì)胞的體積大小、細(xì)胞核形、細(xì)胞化學(xué)染色等方面進(jìn)行檢測，檢測速度快，分析細(xì)胞多， 適宜于大批量標(biāo)本的分析。 對(duì)其檢測出來的異常標(biāo)本， 要準(zhǔn)確識(shí)別細(xì)胞類別及確認(rèn)病理改變還必須以顯微鏡檢查為準(zhǔn)。 應(yīng)用意義 在不同的生理狀態(tài)下，不同種類白細(xì)胞數(shù)目波動(dòng)較大。如運(yùn)動(dòng)、寒冷、消化期、繁殖期等，此外，在機(jī)體失血、劇痛、急性炎癥、慢性炎癥等病理狀態(tài)下，白細(xì)胞也增多。例如，急性感染、急性中毒、嚴(yán)重組織損傷、惡性腫瘤等中性粒細(xì)胞增多；某些病毒、細(xì)菌感染、某些慢性感染時(shí)，淋巴細(xì)胞數(shù)量增多。 注意事項(xiàng) 1、所用玻片必須干凈，無油污。2、如染色太淺，可按照原來步驟重染；染色太深或有沉淀物則可用甲醇脫色后

24、重染。3、如白細(xì)胞核為天藍(lán)色則染色時(shí)間過短。如紅細(xì)胞呈紫紅色，表示染色時(shí)間過長。4、染色時(shí)切勿使染液干涸，否則發(fā)生不易去掉的沉淀。5、沖洗時(shí)不可先傾倒染色，應(yīng)先輕輕搖動(dòng)玻片，緩慢加水使沉渣泛起，然后再用水沖洗。6、水沖洗時(shí)間不宜過長，否則會(huì)脫色。 思考題 1、試述瑞氏（Wright s）染色法區(qū)分各種白細(xì)胞的依據(jù)？2、怎樣才能制備一個(gè)形態(tài)清晰的血涂片？3、實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果與正常值相對(duì)照，有何變異？為什么？7/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)三溫度對(duì)魚類呼吸代謝的影響實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)：4*實(shí)驗(yàn)要求：必修 選修一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙螅赫莆諟y定魚類等水產(chǎn)動(dòng)物耗氧率的方法， 并用此法測定水產(chǎn)動(dòng)物的耗氧率， 分析和計(jì)

25、算被測動(dòng)物的代謝率（或代謝強(qiáng)度） 。掌握影響魚類呼吸代謝的主要影響因素。二、實(shí)驗(yàn)基本原理：耗氧率經(jīng)常被直接用來表示機(jī)體的代謝強(qiáng)度，因?yàn)闄C(jī)體的代謝率與它們的耗氧率呈正相關(guān)性， 這是一種簡便的測算方法，對(duì)于養(yǎng)殖工作者來說是非常適用的。除此以外， 耗氧率也是間接測定能量代謝的重要指標(biāo)之一。溫度和pH是影響耗氧率的重要因素。本實(shí)驗(yàn)通過測定溫度和pH 對(duì)魚類耗氧量的影響，從而可以了解溫度和pH 對(duì)魚體代謝活動(dòng)的影響。 測定水生生物耗氧率的儀器裝置及測定方法有多種。常用的有兩類： 一是靜水式，二是流水式。本實(shí)驗(yàn)采用的是靜水密閉測定法。三、主要儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)耗材：試劑 ：1、硫酸錳：稱取52gMnSO4&#

26、183;5H O（或 37gMnSO4·HO），用 90 毫升蒸餾水溶解，然后稀釋22到 100ml 。靜置數(shù)日，取清液使用。2、堿性碘化鉀： 50gNaOH( 或 70 克 KOH) 及 15g 固體 KI ，分別溶于50 及 35ml 純水中。然后將兩液混合， 冷卻后稀釋到 100ml 。放入到聚乙烯瓶中蓋嚴(yán)保存，不可用磨口試劑瓶保存。3、濃 H2 SO4：市售比重1.84 的試劑。4、 HCl （1： 1）5、 0.05N NaS O ：稱取 2.5gNa2SO ·5HO ,用煮沸后冷卻的蒸餾水配制成500ml ，加入223232NaOH 0.2g 使溶液呈堿性，減慢

27、Na2S2O3 分解，貯存于棕色瓶中，濃度要標(biāo)定。6、 0.5淀粉：稱取1g 可溶性淀粉于300ml 燒杯中，用少量純水調(diào)成懸濁液。沖入剛煮沸的 200ml 純水，并再煮沸即可。材料 ：鯽、羅非魚或其它水生動(dòng)物。器材 ：水產(chǎn)動(dòng)物呼吸實(shí)驗(yàn)裝置；酸式滴定管；恒溫水浴鍋；采樣瓶（或磨口試劑瓶）30ml若干；三角錐瓶100ml 若干；微量滴定管；乳膠管；滴定架；蝴蝶夾；羅紋水止；移液管；吸耳球等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容或步驟：1、實(shí)驗(yàn)設(shè)置不同的試驗(yàn)溫度，如金魚（鯽魚），可設(shè)置 10、 20和 30三個(gè)試驗(yàn)溫度。每個(gè)試驗(yàn)溫度需要有一個(gè)水浴，將溫度預(yù)先調(diào)節(jié)好， 如需要的溫度低于室溫， 需要加冰降溫，高于室溫則需要加

28、熱，并使水溫保持相對(duì)穩(wěn)定。2、實(shí)驗(yàn)設(shè)置不同的pH值，然后測定不同 pH 下的耗氧量并作分析對(duì)比。3、安裝呼吸室 （見圖 1 或 2）：呼吸室為一個(gè)巨塞大口玻璃瓶，容積根據(jù)動(dòng)物個(gè)體大小而定。要求是水生動(dòng)物在呼吸室內(nèi)活動(dòng)自如，在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)動(dòng)物保持充足的氧供應(yīng)。呼吸室入口裝二只玻璃管， 分別為入水管和出水管，另外呼吸室上面有溫度計(jì)可測量呼吸室內(nèi)的水溫。安裝時(shí)，首先將呼吸室充滿水，放入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入前需稱量），使測試動(dòng)物穩(wěn)定半小時(shí)方可開始實(shí)驗(yàn)。4、測定實(shí)驗(yàn)開始時(shí)水中溶解氧（初溶氧），及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)水中溶解氧（末溶氧）。5、溶氧測定方法：用30ml 細(xì)口瓶（具塞磨口瓶）作為水樣瓶，用虹吸法取樣一滿

29、瓶水樣后，立即加硫酸錳3 滴，堿性碘化鉀3 滴，蓋上瓶蓋（瓶中不可有氣泡），上下?lián)u動(dòng)約1 分鐘。靜置，待沉淀下降到中部后，加濃硫酸5 滴，蓋上蓋再搖勻。取酸化后水樣15ml 于錐8/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容形瓶中，用0.050N 硫代硫酸鈉滴定到溶液為淡黃色時(shí)，加0.5淀粉 5 6 滴，再繼續(xù)滴定到藍(lán)色剛剛消失。記錄滴定消耗體積V （毫升）。圖 1 靜水密閉法裝置圖 2 流水密閉法裝置6、耗氧率計(jì)算：NV溶解氧（ mg/l ） = _ ×1000V 樣(初溶氧末溶氧)耗氧率（O2g/kg/h ）= _ ×呼吸室體積（動(dòng)物體重×實(shí)驗(yàn)時(shí)間）五、思考題1、采用靜水式和

30、流水式方法進(jìn)行耗氧率測定各有何優(yōu)缺點(diǎn)？2、為何用靜水式測定耗氧率要在一晝夜采取3-4 個(gè)時(shí)間段測定，并取其平均值，為什么？3、溫度和pH如何 影響魚類呼吸代謝？9/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)四亞硝酸鹽對(duì)魚類血紅蛋白的影響實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)：3*實(shí)驗(yàn)要求：必修 選修附件一魚類血紅蛋白含量的測定（必修）方法一、酸化血紅蛋白稀釋測定法（改良沙利氏法） 目的與原理 掌握測定魚類血紅蛋白含量的原理和方法，應(yīng)用改良沙利氏法測定不同魚類血紅蛋白含量。本實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用比色法測定魚的血紅蛋白量。血紅蛋白本身的色澤，常隨所結(jié)合的氧量多少而改變，不便比色。但是加入稀鹽酸于血液中可使血紅蛋白變成不易變色的高鐵血紅蛋白，這就

31、可以與標(biāo)準(zhǔn)色相比，從而測出其含量。通常以每100ml 血液中含血紅蛋白克數(shù)來表示，正常魚血紅蛋白含量為7-8g。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 鯉、鯽或草魚。實(shí)驗(yàn)設(shè)置四個(gè)組，即空白對(duì)照組和三個(gè)低中高濃度的亞硝酸鹽實(shí)驗(yàn)組。 試劑與器材 血紅蛋白比色計(jì)，血吸管，注射器，凹瓷盤，小試管，試管架，蒸餾水，75%酒精，棉球， 0.1mol/L 鹽酸，蒸餾水，滴管，紗布，抗凝劑（1%肝素鈉溶液或10%草酸鉀溶液） 。 實(shí)驗(yàn)步驟 1、了解血紅蛋白比色計(jì)的構(gòu)成血紅蛋白計(jì)主要包括吸血管、比色計(jì)和比色管等部件。吸血管為一厚壁毛細(xì)玻璃管，其上有10 l、 20 l 的刻度，尾端連有橡皮頭，供吸血用。比色計(jì)的兩側(cè)，裝有標(biāo)準(zhǔn)濃度的高鐵血紅

32、蛋白溶液，也有用比色玻璃柱（或片）來代替的。比色管可插在比色計(jì)中，與兩側(cè)的標(biāo)準(zhǔn)比色柱進(jìn)行比色。比色管的兩側(cè)通?？逃袃尚锌潭?。一行為血紅蛋白的絕對(duì)值，以g 計(jì)數(shù)（每 100 毫升血液中所含血紅蛋白的克數(shù)）來表示，刻度范圍為2 22。另一行為血紅蛋白相對(duì)值，以%（即相當(dāng)于正常平均值的百分?jǐn)?shù)）來表示，刻度范圍為10% 160%。目前測定常用絕對(duì)值來表示。2、用蒸餾水將比色管洗凈，吸血管則依次用蒸餾水，95%酒精和乙醚洗凈干燥備用。3、用滴管加0.1mol/L 鹽酸 46 滴到刻度比色管內(nèi)，約加到管下端刻度“2”或“ 10%”處為止。4、采血：采血方法見前面的實(shí)驗(yàn)，用吸血管吸血至20 l 刻度（要準(zhǔn)確

33、） 。用綿球仔細(xì)將管尖端外面的血拭去。5、將吸血管中血液輕輕地滴到比色管中鹽酸底部，并用上層較清的鹽酸溶液反復(fù)清洗吸血管 3 次。使吸血管內(nèi)的血液完全洗凈。切勿帶入空氣，以至形成氣泡影響比色。吸血管尖端殘留的液體， 應(yīng)在比色管內(nèi)壁上瀝凈。 取出吸血管后， 輕輕搖動(dòng)比色管使血液與鹽酸充分混合，靜置 15 分鐘使管內(nèi)的鹽酸和血紅蛋白作用完全，形成棕色的高鐵血紅蛋白。6、把比色管插入標(biāo)準(zhǔn)比色架兩色柱中央的空格中，使無刻度的兩側(cè)面位于空格的前后方，便于透光和比色。7、用吸管將蒸餾水逐滴地加入比色管內(nèi)，每加一滴都應(yīng)充分混勻并觀察比色管內(nèi)的顏色，直到比色管內(nèi)溶液的色度和血紅蛋白計(jì)上標(biāo)準(zhǔn)色度相同時(shí)為準(zhǔn)，讀出

34、管內(nèi)液面所在的刻度數(shù)，（讀數(shù)應(yīng)以溶液凹面最低點(diǎn)相一致的刻度為佳）。即為每100ml 血液中所含血紅蛋白的克數(shù)（用g/100ml 表示）。8、實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)將吸血管和比色管洗凈，放回盒內(nèi)。10/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 方法評(píng)估 采用目視比色法測定血紅蛋白含量是比較常用及簡便的方法，但此法誤差較大， 而且同儀器的準(zhǔn)確度有關(guān)。 應(yīng)用意義 血紅蛋白含量與年齡、性別、性周期、營養(yǎng)狀況、活動(dòng)情況、季節(jié)變化等有關(guān)，營養(yǎng)不良或長期饑餓可引起血紅蛋白量顯著降低。 注意事項(xiàng) 1、用吸血管吸血過程應(yīng)仔細(xì)、認(rèn)真，準(zhǔn)確把握住吸入的血液量是初學(xué)者的一個(gè)難點(diǎn)，也是實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確與否的一個(gè)關(guān)鍵。2、血紅蛋白吸管很容易被損壞，應(yīng)

35、妥善愛護(hù)。管內(nèi)有凝血塊時(shí)不可用金屬絲疏通，可浸泡入氨水或45% 尿素溶液中，待血塊去除后再用水洗凈，并按蒸餾水 95%酒精 乙醚的順序清洗，最后吹干吸管。3、鹽酸濃度不可過稀。血液與鹽酸作用時(shí)間不可過短，必須在 10 分鐘以上方可稀釋比色，否則血紅蛋白不能充分轉(zhuǎn)變成高鐵血紅蛋白。最好在30 分鐘內(nèi)比色完畢。4、滴加蒸餾水時(shí)，宜少量多次，逐滴加入后混勻比色，以免稀釋過度，得不到準(zhǔn)確結(jié)果。5、比色應(yīng)在自然光線下進(jìn)行，避免在陰暗處或有色燈光下比色，并將比色管刻度轉(zhuǎn)向兩側(cè)，以免影響比色效果。11/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)五設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)水體污染對(duì)魚類血液和腦組織膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)：8*

36、實(shí)驗(yàn)要求：必修 選修（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙螅赫莆漳憠A酯酶活力測定的原理和方法，并用羥胺三氯化鐵顯色法測定魚類血液和腦組織中膽堿酯酶活力。多種神經(jīng)毒物， 如有機(jī)磷農(nóng)藥、 氨基甲酸酯農(nóng)藥、 毒扁豆堿及煙堿等對(duì)膽堿酯酶都具有強(qiáng)烈的抑制作用， 從而破壞神經(jīng)沖動(dòng)的正常傳遞。 因此， 可以通過測定魚類血液和腦組織中膽堿酯酶活力的抑制程度， 了解水體受有機(jī)磷農(nóng)藥及其它污染的程度， 同時(shí)掌握水體污染對(duì)魚類的影響。（二）主要儀器設(shè)備分光光度計(jì)，恒溫水浴，勻漿器，冰盤，解剖器械。附件魚腦組織（或血液）膽堿酯酶活力的測定 目的與原理 掌握膽堿酯酶活力測定的原理和方法，并用羥胺三氯化鐵顯色法測定魚腦膽堿酯酶活力。在神經(jīng)

37、沖動(dòng)的傳遞過程中， 乙酰膽堿是重要的化學(xué)因素。 在神經(jīng)系統(tǒng)中， 存在著催化合成乙酰膽堿的膽堿乙?；负痛呋阴Ｄ憠A水解的膽堿酯酶。在一定溫度、 pH 條件下，酶的反應(yīng)速率與酶的量、反應(yīng)速率，以及作用時(shí)間成近似的線性關(guān)系。通過測定所加入乙酰膽堿在膽堿酯酶作用下減少的量， 就可得知膽堿酯酶活力的水平。未經(jīng)膽堿酯酶水解的乙酰膽堿與羥氨作用生成乙酰羥氨，乙酰羥氨酸性條件下與三氯化鐵(FeCl3)作用生成深褐色的絡(luò)合物，其顏色與乙酰膽堿的濃度成正比，因而可以進(jìn)行比色測定。試劑 ：1、磷酸鹽緩沖液（pH7.2 ）（ 1）稱取 23.752 克磷酸氫二鈉（ Na 2HPO 4·2H 2O） 溶于蒸

38、餾水并稀釋至 1000ml 。（ 2）稱取 18.156g 磷酸二氫鉀 (KH 2PO4)溶于蒸餾水稀釋至 1000ml。取（ 1）液 72ml 和(2) 液 28ml，混合即成。2、乙酰膽堿底物稱取乙酰膽堿0.0905g，加 0.001M 醋酸緩沖液 （ pH 為 4.5）至 10ml ，即成 0.04mol 貯備液，置冰箱內(nèi)保存（不超過2 星期）。臨用時(shí)取0.04M 貯備液 1 份，加 9份磷酸鹽緩沖液配制成0.004mol 使用液。3、1M 鹽酸羥氨溶液稱取 13.9 克鹽酸羥氨， 溶于蒸餾水后稀釋200ml 。室溫高于300C時(shí)，應(yīng)置于冰箱內(nèi)。4、 14 NaOH稱取 14gNaOH

39、，加蒸餾水溶解至100ml 。5、 10三氯乙酸溶液稱取 10g 三氯乙酸，溶于10N 鹽酸溶液，再稀釋到100ml 。6、10三氯化鐵溶液稱取三氯化鐵10.0g，加 0.83ml 濃鹽酸和10ml 蒸餾水，待全部溶解后加蒸餾水到100ml 。7、 0.001mol 醋酸緩沖液（pH4.5 ）稱取醋酸鈉（NaAC·3H 2O） 13.6g，加蒸餾水溶解后再稀釋至100ml 即成 0.1mol 。量取冰醋酸0.58ml 加水至 100ml 即配成 0.1mol。取前液 57ml 、后液 43ml 混合后再以蒸餾水稀釋100 倍即成。8、堿性羥胺溶液臨用前 20 分鐘配制，將1mol 鹽

40、酸羥氨與14 NaOH 液等體積混合即成。材料 ：魚腦組織（或魚血液）12/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容器材 ：分光光度計(jì)，恒溫水浴，勻漿器，冰盤，解剖器械。 實(shí)驗(yàn)步驟 1、取新鮮或20冷凍魚，從魚頭背面剖骨，仔細(xì)取出完整的魚腦，用濾紙輕輕吸去表面體液，剪碎、稱重，在冰浴下加 1 毫升磷酸緩沖液勻漿，再用磷酸緩沖液稀釋成每 ml 含 2mg 腦組織液。2、按下表加入試劑試劑試管樣品管對(duì)照管空白管標(biāo)準(zhǔn)管乙酰膽堿（ ml ）1.01.01.0磷酸緩沖液（ ml）2.01.0魚腦組織液（ ml）1.03、準(zhǔn)確保溫（如 20、25、或 30）20 分鐘，取出試管， 立即每管加堿性羥胺溶液4.0ml 。充

41、分搖勻，并在對(duì)照管加1ml 魚腦組織液。4、加 10三氯乙酸溶液 2.0ml ，充分搖勻，然后每管再加10三氯化鐵溶液2.0 毫升，充分搖勻。5、各管試液用濾紙過濾，以除蛋白質(zhì)。6、顯色后將所得濾液置2cm 比色管， 在 525nm 波長下以空白管為 0 測量其余各管的光密度。7、計(jì)算（對(duì)照管光密度樣品管光密度）腦膽堿酯酶活力× 4÷ 2×60/20標(biāo)準(zhǔn)管光密度=（對(duì)照管光密度樣品管光密度）×6標(biāo)準(zhǔn)管光密度膽堿酯酶活力以每mg 腦組織每小時(shí)催化水解乙酰膽堿的g 分子數(shù)表示（ g/mg/min ）。 方法評(píng)估 本實(shí)驗(yàn)是采用測定酶作用后剩余基質(zhì)的方法即羥胺三

42、氯化鐵法。由于乙酰膽堿酯酶的活力受基質(zhì)濃度的影響，本法的消耗基質(zhì)，應(yīng)過量加入30 70，在此范圍外易產(chǎn)生誤差。此方法在國內(nèi)應(yīng)用較普遍。 應(yīng)用意義 多種神經(jīng)毒物，如有機(jī)磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯農(nóng)藥、毒扁豆堿及煙堿等對(duì)膽堿酯酶都具有強(qiáng)烈的抑制作用， 從而破壞神經(jīng)沖動(dòng)的正常傳遞。 因此，可以通過測定魚腦膽堿酯酶活力的抑制程度， 了解水體受有機(jī)磷農(nóng)藥及其它污染的程度， 同時(shí)掌握水體污染對(duì)魚類等水生動(dòng)物的影響。 注意事項(xiàng) 1、測定膽堿酯酶活力時(shí)溫度、反應(yīng)時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格控制。2、由于魚腦膽堿酯酶的活力除受有機(jī)污染物影響外，水體中多種因素也對(duì)該酶有一定影響，正常魚腦膽堿酯酶活力有 30%的波動(dòng)。因此測定時(shí)一定要有足夠

43、的樣品數(shù)量，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。思考題 1、試述膽堿酯酶的作用原理？2、取腦的酶組織液時(shí)為什么要用冰??？3、當(dāng)水體受有機(jī)磷污染時(shí)，魚腦膽堿酯酶活力有何變化？為什么？13/16魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)六幾種激素對(duì)魚類血糖調(diào)節(jié)的分析實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)：5*實(shí)驗(yàn)要求：必修 選修一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙螅赫莆锗徏妆桨贩y定血糖的原理和操作技術(shù)，并用此法測定魚類等水產(chǎn)動(dòng)物的血糖含量。掌握魚類血糖調(diào)節(jié)的生理機(jī)制。二、實(shí)驗(yàn)基本原理：魚類的血糖受激素的調(diào)節(jié)而處于動(dòng)態(tài)平衡之中。參與調(diào)節(jié)或影響血糖的激素很多，如胰島素、胰高血糖素、腎上腺素以及甲狀腺、垂體、腎上腺皮質(zhì)分泌的激素。測定血糖的方法很多，最精確的方法是葡萄糖氧

44、化酶法。但是限于條件，本實(shí)驗(yàn)采用鄰苯甲胺直接測定法。 其原理是：血清中的葡萄糖在熱的醋酸溶液中與鄰甲苯胺縮合成藍(lán)色（或藍(lán)綠色）西夫氏堿。通過比色并與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比較，便可計(jì)算出糖的含量。其反應(yīng)如下：三、主要儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)耗材：試劑 ：1、鄰甲苯胺試劑：稱取硫脲（A.R. ）2.5g，溶于冰醋酸（A.R. ）750ml 中。將此溶液轉(zhuǎn)入 1L 容量瓶內(nèi)，加鄰甲苯胺 150ml ， 2.4硼酸溶液 100ml, 再加冰醋酸至 1L 刻度，置棕色瓶中，至少可應(yīng)用 2 個(gè)月。2、葡萄糖貯存標(biāo)準(zhǔn)液（10mg/ml ）：將少量無水葡萄糖（A.R. 或 C.P.）置于硫酸干燥器內(nèi)一夜。精確稱取此葡萄糖 1.000g，以飽和苯甲酸溶液溶解并轉(zhuǎn)移入 100ml 容量瓶內(nèi)，再以飽和苯甲酸溶液稀釋至 100ml 刻度。置冰箱中可長期保存。3、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（1.5mg/ml ）：在 100ml 容量瓶內(nèi)，加入