痛風(fēng)飲對試驗性急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠抗炎鎮(zhèn)痛作用機制的研究

1、痛風(fēng)飲對實驗性急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠抗炎 鎮(zhèn)痛作用機制的研究楊洪霞楊麗蕓張靈敏靳紅微【摘要】目的研究民間驗方痛風(fēng)飲1付對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的抗 炎鎮(zhèn)痛作用機制。方式通過對痛風(fēng)模型大鼠應(yīng)用痛風(fēng)飲觀看急性痛風(fēng) 性關(guān)節(jié)炎大鼠患肢壓力及步態(tài)積分；踝周徑轉(zhuǎn)變值；檢測白細胞，中 性粒細胞，血清IL-1 (3、IL-6水平；和右踝關(guān)節(jié)組織HE染色。結(jié)果 痛風(fēng)飲能明顯減輕實驗性大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程度，和患肢站立及行走時 壓力積分，能降低白細胞、中性粒細胞及IL-1 (3、IL-6水平，具有改 善致炎關(guān)節(jié)滑膜細胞增生和減輕炎細胞浸潤的作用。結(jié)論痛風(fēng)飲具有 抗炎鎮(zhèn)痛作用?！娟P(guān)鍵詞】痛風(fēng)飲急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎微晶鈉白細胞中性粒

2、細 胞 白細胞介素-1 B白細胞介素-6急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是痛風(fēng)的首發(fā)病癥，常夜間發(fā)作，疼痛猛烈。 西藥秋水仙堿為醫(yī)治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎首選的一種特效藥物，但有致 使骨髓抑制、肝細胞損害、禿發(fā)、精神抑郁、上行性麻痹、呼吸抑制 等副作用1。目前未見有1付中藥醫(yī)治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的報導(dǎo)， 咱們采納民間驗方1付中藥“痛風(fēng)飲”醫(yī)治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎取得了 良好的臨床療效。為進一步探討其作用機理，咱們進行了痛風(fēng)飲對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究。1材料動物健康Wistar大鼠48只，全雄，體重(245±20) g,清潔 級，河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。藥物痛風(fēng)飲由伸筋草、草解、木瓜、五加

3、皮、粉防己、羌活、 獨活、威靈仙、千年健、追地風(fēng)、川牛膝、川茸、乳香、沒藥等組成， 每毫升藥液含生藥約g ;秋水仙堿溶液配成 mg/ml。試劑尿酸(uric acid ),德國Aha Aesar公司；氫氧化鈉(NaOH, 北京市盛達化工技術(shù)；大鼠白細胞介素-1 (3 (IL-1 B)放免試劑盒， 解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所；大鼠白細胞介素 -6 (IL-6 )放免 試劑盒，北京普爾偉業(yè)生物科技。2方式尿酸鈉結(jié)晶及尿酸鈉溶液的制備取1g尿酸加入200 ml滾水中，用1 mol/L的NaOHt液調(diào)pH值至，再加熱至95 C,室溫冷卻并 輕輕攪拌，4c冰箱放置24 h,過濾，用濾紙將沉淀物水分吸

4、干，放 入70c干燥箱烘干，掏出，刮下粉末，放入研缽內(nèi)研成細末，得微晶型尿酸鈉，高溫滅菌。用前以無菌生理鹽水配成100 mg/ml的混懸液模型制備及給藥模型制作參照Coderre介紹的經(jīng)典造模方式 略做改良2。將48只大鼠隨機分為4組，每組12只，即空白對照 組（N）、陽性藥秋水仙堿組（C）、中藥痛風(fēng)飲組（T）和模型組（M, 除空白對照組外，余三組造模。造模后24 h對各組灌服醫(yī)治藥物進行 觀看。依照人用藥量與實驗動物用藥的換算公式，計算出大鼠的用藥 量，T組按g kg-1 - d-1 , C組參照許延文痹清膠囊抗痛風(fēng)作用的 實驗研究3中的給藥量，按mg - kg-1 d-1劑量灌胃，所有藥物

5、 分兩次灌胃，共灌胃醫(yī)治1 do M組和N組均與T組、C組同一時刻灌 服等量生理鹽水作為對照。實驗觀看在造模成功后及醫(yī)治1 d后觀看各指標(biāo)并記錄2。造模后24 h及灌胃醫(yī)治后24 h測量站立時及行走時患肢壓力積分、步態(tài)積分。大鼠站立及行走時患肢壓力積分 （A）:后肢正常壓力，兩后肢一 樣重量或平等負重為0分；模型側(cè)后肢負重輕度減少，完全在地板上， 可是趾不分為1分；后肢壓力中度減少，腿屈曲僅有部份肢體負重， 接觸地板為2分；后肢負重嚴峻減少，乃至患肢完全提起不負重為3分。大鼠步行時患足步態(tài)積分（B）:正常步態(tài)為0分；輕度跛行，注 射尿酸鈉的下肢屈曲為1分；中度跛行，注射尿酸鈉的下肢接觸地板 為

6、2分；嚴峻跛行，乃至顯現(xiàn)3肢行走步態(tài)，注射肢不負重為3分。右后足踝周徑轉(zhuǎn)變值測量別離于造模時、造模后24h及灌胃后24h測量右后足踝周徑，在第一次測量時于測量處做一標(biāo)記，讀取 數(shù)值，多次測量取平均值，并記錄，計算造模前后踝周徑差及造模后 與醫(yī)治后踝周徑差，作為踝周徑轉(zhuǎn)變值。標(biāo)本搜集與指標(biāo)檢測 于給藥后24 h斷頭取血，待血液自動流 出后，用微量吸管采血，放入已加好稀釋液的小試管內(nèi)，用計數(shù)盤法 進行白細胞計數(shù)；取血 4 ml注入干燥試管，4c離心3 500 r/min , 15 min,分離血漿，置-20 C,測定相關(guān)指標(biāo)。IL-1 （3 , IL-6含量采 納放射免疫法測定。將大鼠右踝關(guān)節(jié)在1

7、0獅醛中固定48h, mol/L的硝酸溶液脫鈣，包埋，切片4W編 常規(guī)HE染色，采納HPIAS-1000 高清楚度彩色病理圖像分析系統(tǒng)進行圖像搜集。統(tǒng)計學(xué)方式采納SPSS for Windows統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料用One-Way ANOVA方差分析，數(shù)據(jù)用土 s表示；方差不齊的計量資料和品級資料采納秩 和查驗。3實驗結(jié)果一樣觀看 整個實驗期間，N組大鼠雙眼靈活有神，行動敏捷， 對周圍轉(zhuǎn)變反映靈敏；C組、T組、M組大鼠在給予致炎后顯現(xiàn)致炎足 踝腫脹，走路不穩(wěn)，患足不能著地，蜷臥患足朝上。C組、T組經(jīng)醫(yī)治后上述病癥明顯好轉(zhuǎn)。造模后實驗觀看見表12。造模后，患肢壓力及步態(tài)積分、右 踝周徑轉(zhuǎn)變

8、值，C組，T組，M組明顯高于N組（P）,且C, T, M 3 組無顯著性不同（P）。表1造模后積分A、B表2造模后踝周徑轉(zhuǎn) 變值痛風(fēng)飲醫(yī)治后各指標(biāo)的轉(zhuǎn)變見表35。醫(yī)治后，患肢壓力及步態(tài)積分、周徑轉(zhuǎn)變值，T組較M組轉(zhuǎn)變明顯（P）;血中白細胞計 數(shù)（WBC,中性粒細胞水平（N）, IL-1 B、IL-6水平，C組、T組明 顯低于M組（P）。說明痛風(fēng)飲能明顯減輕實驗性大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程 度，和患肢站立及行走時壓力步態(tài)積分，能降低白細胞、中性粒細胞 及IL-1 B、IL-6水平。表3醫(yī)治后積分A、B表4醫(yī)治后踝周徑轉(zhuǎn) 變值與模型組比較，* P痛風(fēng)飲對大鼠病理形態(tài)的阻礙HEfe色見到M組滑膜襯里層細胞明顯

9、增厚，呈“柵欄”狀排列，或不規(guī)那么排列，滑膜組織呈絨毛狀或指狀肥大，大量炎細胞浸潤，C組、T組均較模型組有所改善。見圖1圖2圖1滑膜（HEX 400）圖2炎細胞（HEX 400）4討論從西醫(yī)角度來分析，目前公認急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)作是由于尿 酸鈉濃度太高，并超過了尿酸的溶解度而呈過飽和狀態(tài)， 正常情形下， 當(dāng)血pH ,溫度37c時，尿酸鹽的最高溶解度為 380區(qū)mol/L。痛風(fēng)病 人典型的足部關(guān)節(jié)炎常在夜間發(fā)作，因此提出了 “溫度相關(guān)學(xué)說”，即 人體內(nèi)中心體溫與人肢體遠端及外周關(guān)節(jié)腔內(nèi)溫度之間，有必然梯度，如足趾、耳緣等溫度明顯低于中心體溫，有人測得膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)溫度約 為32C,較中心體溫低5C

10、,尿酸鹽最高溶解度在 30c時為268 mol/L ,這意味著蹦趾關(guān)節(jié)腔內(nèi)尿酸濃度268mol/L即可能形成結(jié) 晶沉淀；痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)生的自行終止，亦能夠溫度說明。因為急性 發(fā)作時局部溫度升高，使尿酸鈉溶解度明顯升高，微晶體慢慢溶解吸 收，故炎癥慢慢消退。且愈來愈多的證據(jù)顯示，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的核心 是中性粒細胞（PMN介導(dǎo)的炎癥，在正常，卜#形下，組織中少見 PMN 而增強的中性粒細胞-內(nèi)皮細胞粘連是急性痛風(fēng)產(chǎn)生的本質(zhì)4, 5。 激活的PM版趨化因子作用下與血管內(nèi)皮細胞（VEC粘附并進入組織中，PMN占附，穿越VEC向炎癥部位游走是急性炎癥損傷進程的重要特點。IL-1 （3是前炎癥網(wǎng)鏈中的一級細

11、胞因子，是調(diào)劑炎癥始動因素和炎癥反映重要調(diào)劑劑6; IL-6作為發(fā)燒因子，參與損傷的急性反映7。故西醫(yī)對本病的醫(yī)治，均以消炎鎮(zhèn)痛為原那么。從中醫(yī)角度來分析，今世中醫(yī)學(xué)以為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)生的要緊緣 故在于先天分賦不足，脾腎功能失調(diào)，與遺傳、體質(zhì)、飲食、外感、 環(huán)境、勞倦等因素有關(guān)，肝腎虧虛，脾失健運為本，風(fēng)寒濕熱、痰濁、 瘀血閉阻經(jīng)脈為標(biāo)，屬本虛標(biāo)實之證。依照中醫(yī)“急那么治其標(biāo)”的 原那么，本民間驗方采納1付中藥于急性發(fā)作期服用，其中采納藥物 之性味多屬辛溫或辛苦溫之品，醫(yī)學(xué)正傳痛風(fēng)：“治以辛溫，監(jiān)以 辛涼，流散寒濕，開通郁結(jié)，使血行氣和，更能慎口節(jié)欲，無有不安 者也?！敝斓は诟裰掠嗾撏达L(fēng)病中

12、也提到：“治法以辛熱之劑， 流散寒濕，開發(fā)膜理。其血得行，與氣相和，其病自安?！鼻倚辽?，溫 通，苦燥，苦泄藥物協(xié)同作用，可使?jié)竦迷锬敲撮_，血得熱那么行， 血行氣和；配以苦味緩泄，可促使邪從大腸而出，其病自解。結(jié)合現(xiàn) 代醫(yī)藥學(xué)研究，辛溫之性的藥物能夠使血流加速，升高局部溫度，一 方面利于局部的微晶體從頭溶解吸收；另一方面通過增進血液循環(huán)， 利于局部堆積的病理產(chǎn)物散開；再配合苦味藥物的緩泄作用，使形成 的病理產(chǎn)物（包括各類炎癥介質(zhì)、致炎細胞因子）排出體內(nèi)，從而起 到加速代謝病理產(chǎn)物的作用。西藥秋水仙堿為醫(yī)治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎首選的一種特效藥物，為 比較本方的醫(yī)治作用強度，本研究選用秋水仙堿作為對照組

13、。研究結(jié) 果顯示，痛風(fēng)飲具有良好的抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用。本方所用 中藥資源廣、價錢廉、毒副作用低，故其在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā) 作期應(yīng)用前景廣漠，并為臨床選方用藥提供理論和實驗依據(jù)。但對其 有效成份析及作用機制還有待作進一步研究?！緟⒖嘉墨I】1葉任高，陸再英.內(nèi)科學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，2004: 867.2趙楔.中藥醫(yī)治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實驗研究A.廣東中 醫(yī)藥大學(xué)碩士論文，2002, 6.3許延文.痹清膠囊抗痛風(fēng)作用的實驗研究A.黑龍江中 醫(yī)藥大學(xué)碩士論文，2005, 26.4 Terkeltaub R, Baird S, Sears P. et al. The murineRheum

14、,homolog of the interleukin-8 receptor cxcr-2 isessential for the occurrence of neutrophilic inflammation in air pouch model of acute urate crystal-induced gouty synovitis J. Arthritis 1998, 41(5):900.1 Terkeltaub R. pathogenesis and treatment of crystal-induced inflammation In: Koopman WJ. Arthriti

15、s and allied condi- tions: a text book rheumatology J . Baltimore: W川iams and Wil kins, 1996, 2085.6 Derevianko A, Damico R, Simms H. Polymorphonuclear Leucocyte(PMN)-derived inflammatory cytokines-regula tion by oxygen tersion and gastric epithelial cells barrier function.Effect associated with the impairm