輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程

1、輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【目 的】規(guī)范輸血科各級檢驗人員室內(nèi)質(zhì)控操作程序，確保檢驗結(jié)果準確、可靠?！具m用范圍】適用于輸血相容性檢測項目?！韭?責】輸血科全體員工均遵守執(zhí)行。（一）ABO 、 RhD 血型室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗原理】選擇已知型別的紅細胞和血清，根據(jù)其與在用試劑標準血清：抗A、抗 B、抗 D、ABO 血型反定型紅細胞及ABO 血型抗原檢測卡（微柱凝膠）陽性及陰性檢測結(jié)果，通過每天或每批與待檢標本相同的試劑和方法進行檢測，以監(jiān)控實驗室進行ABO 、RhD 血型檢測過程中應用的試劑、設(shè)備及實驗流程，并評估實驗結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1.質(zhì)控品：樣本1A1 型 RhD）（ +

2、）紅細胞樣本2B 型 RhD（+）紅細胞樣本3A血清樣本4B血清樣本5O 型 RhD（+）紅細胞樣本6RhD ( -)紅細胞2.血型鑒定試劑：標準血清:抗A, 抗 B,抗DABO 血型反定型紅細胞：Ac ，Bc ，OcABO 血型抗原檢測卡（微柱凝膠）【主要儀器】卡式專用離心機【檢驗方法】首先將質(zhì)控品、標準血清及ABO 血型反定型紅細胞從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗方法（平板法、試管法、微柱凝膠法）具體如下：1. 平板法：在玻片上（或紙片上）按表1 加樣各 1 滴（ 50ul ），混勻（直徑約20mm 大?。?，前后緩慢搖晃玻片， 2分鐘左右肉眼判讀結(jié)果，并記錄。2. 試管法：取 1

3、3 支（ 95mm X 12mm 或 75mm X 12mm ）試管做好標記，按表1 加樣各 1 滴（ 50ul ）, 混勻，離心（離心速度和時間可以選擇轉(zhuǎn)速1000rpm 時間 1 分鐘或轉(zhuǎn)速 3400rpm 時間 15 秒）， 判定結(jié)果，并記錄。表 1平板法、試管法ABO 及 RhD 血型室內(nèi)質(zhì)控加樣表抗 A + 樣本抗 B + 樣本抗 D + 樣本4%Ac + 樣本4%Bc + 樣本4%Oc + 樣本111333抗 A + 樣本抗 B + 樣本抗 D + 樣本4%Ac + 樣本4%Bc + 樣本4%Oc + 樣本222444-可編輯修改 -抗A+樣本抗B+樣本抗D+樣本抗D+樣本 655

4、53. 柱凝膠法：取 4 張待檢 ABO 血型抗原檢測卡（微柱凝膠）做好標記。將樣本1 分別加入第 1 張卡的1-3 孔中各 1 滴（ 50ul ），將樣本 2 分別加入第 2 張卡的 1-3 孔中各 1 滴（ 50ul ），將樣本 5 分別加入第 3 張卡的 1-3 孔中各 1 滴（ 50ul ），將樣本 6 加入第 4 張卡的第 3 孔內(nèi)。使用卡式專用離心機離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘⒖贾怠渴状问褂觅|(zhì)控品或不連續(xù)使用時，需要連續(xù)做三天試驗，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號質(zhì)控品時，需新舊質(zhì)控品同時做，連續(xù)兩天，舊批號質(zhì)控品在控，新批號質(zhì)控品質(zhì)控品結(jié)果一致，可確定參考值；

5、更換試劑時，需新舊批號試劑同時做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學均要單獨定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。【失控判定】陽性結(jié)果與預期結(jié)果比較出現(xiàn)超過1+ 凝集強度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表.SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控登記表.SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表.SXK-JL67【注意事項】1.室內(nèi)質(zhì)控品、標準血清、標準紅細胞保存在2? 8 C,嚴禁在室

6、溫長期存放-可編輯修改 -2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號質(zhì)控品不得混用3. 紅細胞質(zhì)控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，出血菌落或嚴重溶血，不得使用；若出現(xiàn)輕微溶血可用生理鹽水對其進行洗滌，重新懸浮后使用。4. 質(zhì)控血清： 出現(xiàn)渾濁或沉淀時， 應進行適當離心， 去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用【參考資料】1. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司 ABO 、RhD 血型檢測質(zhì)控品（微柱凝膠法）說明書2. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司 ABO 、RhD 血型檢測卡（微柱凝膠法）說明書3.上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司抗A 抗 B 血型定型試劑（單克隆抗體）說明書4.密理博（上

7、海）貿(mào)易有限公司康D （IgM+IgG ）血型定型試劑（單克隆抗體）說明書（二）不規(guī)則抗體篩檢室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗原理】選擇已知血清，標本其與在用試劑抗人球蛋白檢測卡（微柱凝膠）中的陽性及陰性結(jié)果，通過每天或每批與待檢標本相同的試劑和方法進行檢測，以監(jiān)控實驗室進行不規(guī)則抗體篩檢過程中應用的試劑、設(shè)備及實驗流程，并評估實驗結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1. 質(zhì)控品：樣本 1 O 型血清樣本 2 IgG 型抗 D （+） AB 血清2. 不規(guī)則抗體篩檢試劑：抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡（微柱凝膠）I、川抗體篩檢紅細胞【主要儀器】卡式專用離心機【檢驗方法】微柱凝膠法，具體操作步驟如下：1. 將質(zhì)控品

8、、抗體篩檢紅細胞從冰箱取出后平衡至室溫。2. 取 1 張抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡做好標記。- 可編輯修改-3. 將 I、口、川抗體篩檢細胞用低離子強度鹽溶液稀釋至0.8% ，對應加入上述檢測卡 1? 6 管中， 50ul/ 管。4. 分別在前 3 管加入樣本 1，后 3 管加入樣本 2 , 50ul/ 管。5. 將檢測卡置 37 C 孵育器中 15 分鐘。6. 即刻使用卡式專用離心機離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘⒖贾怠渴状问褂觅|(zhì)控品或不連續(xù)使用時，需要連續(xù)做三天試驗，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號質(zhì)控品時，需新舊質(zhì)控品同時做，連續(xù)兩天，舊批號質(zhì)控品在控，新批號質(zhì)控品質(zhì)控品

9、結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時，需新舊批號試劑同時做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學均要單獨定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。【失控判定】陽性結(jié)果與預期結(jié)果比較出現(xiàn)超過1+ 凝集強度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表.SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控登記表.SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表.SXK-JL67注意事項1. 室內(nèi)質(zhì)控品、抗篩細胞、保存在 2? 8

10、 C,嚴禁在室溫長期存放。2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號質(zhì)控品不得混用。3. 質(zhì)控血清： 出現(xiàn)渾濁或沉淀時， 應進行適當離心， 去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用參考資料- 可編輯修改-1. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司不規(guī)則抗體篩檢質(zhì)控品說明書2. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司抗人球蛋白檢測卡不規(guī)則抗體篩檢操作說明書3. 長春愽徳生物技術(shù)有限責任公司不規(guī)則抗體檢測試劑（人紅細胞）使用說明書（三）交叉配血室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程檢驗原理】凝聚胺介質(zhì)法：紅細胞表面帶有大量的負電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，其懸浮在電解質(zhì)中形成 Zeta 電位，Zeta 電位決定紅細胞之間的排斥作用。

11、而凝聚胺介質(zhì)法則是首先利用低離子溶液降低介質(zhì)的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，以促進紅細胞和血清（血漿）中的抗體結(jié)合，其后加入凝聚胺溶液（Polybrene，為高價陽離子多聚物、肝素中和劑），以中和紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞Zeta 電位降低，縮短紅細胞 之間的距離，使紅細胞產(chǎn)生非特異性的凝聚，最后加入懸浮液（Resuspending）， 中和凝聚胺（ Polybrene）陽離子作用，使正常的紅細胞非特異性凝聚散開，試驗結(jié)果為陰性，但如果紅細胞被相應的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結(jié)，試驗結(jié)果為陽性。微柱凝膠法：選擇已知的血清和相應的細胞，標本其與在用試劑抗人球蛋

12、白檢測卡（微柱凝膠）中的陽性及陰性結(jié)果，通過每天或每批與待檢標本相同的試劑和方法進行檢測，以監(jiān)控實驗室進行交叉配血過程中應用的試劑、設(shè)備及實驗流程，并評估實驗結(jié)果的有效性。主要試劑組成】1. 質(zhì)控品：樣本1AB 型 RhD （+）紅細胞樣本 2O 型 RhD （+）紅細胞樣本 3RhD （ -）紅細胞樣本 4O血清樣本 5IgG 抗 DAB 血清2. 交叉配血檢測試劑：凝聚胺介質(zhì)試劑：低離子溶液（ LIM ）、凝聚胺（Polybrene）、懸浮液（Resuspending） 抗人球蛋白交叉配血檢測卡（微柱凝膠）【主要儀器】卡式專用離心機【檢驗方法】- 可編輯修改-首先將質(zhì)控品、凝聚胺介質(zhì)從冰箱

13、取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗方法（試管法、微柱凝膠法）進行。1. 凝聚胺介質(zhì)法為試管法，操作步驟如下：1.1 取 4 支（ 95mm X12mm或 75mm X 12mm ）試管做好標記 .1.2 按照組合 1 （樣本 4+ 樣本 1）、組合 2 （樣本 4+ 樣本 2）、組合 3 （樣本 5+ 樣本 1）、組 合 4 （樣本 5+ 樣本3）分別加入各管，各1 滴（ 50ul ）。1.3 各管加入低離子溶液（ LIM ） 0.65ml ，混合均勻后，各管加入凝聚胺（Polybrene）溶液 2 滴（ 100ul ）, 并混合均勻。1.4 用離心機 3400rpm 時間 10 秒，然后把

14、上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml 液體。1.5 輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝聚，如無凝聚，則必須重做。1.6 最后加入懸浮液（ Resuspending） 2 滴（ 100ul ）, 輕輕搖動試管混合并同時觀察結(jié)果。如凝聚散開，表示由Polybrene 弓 I 起的非特異性凝集，抗體篩檢結(jié)果為陰性。如果凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結(jié)果的特異性反應，抗體篩檢結(jié)果為陽性，應進一步作抗體鑒定。2、 微柱凝膠法操作步驟如下：2.1 取 1 張待檢抗人球蛋白交叉配血檢測卡（微柱凝膠）做好標記。2.2 交叉配血實驗按照組合1 （樣本 4+ 樣本 1）、組合 2 （樣本 4+ 樣本 2）、組

15、合 3 （樣本 5+ 樣本 1）、組合 4（樣本 5+ 樣本 3）加樣，各 50ul 。2.3 將檢測卡置 37 C 孵育器中 15 分鐘。2.4 即刻使用卡式專用離心機離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄。【結(jié)果解釋】交叉配血室內(nèi)質(zhì)控根據(jù)其檢測作用可分為IgG 組和 IgM 組如表 2。表 2交叉配血室內(nèi)質(zhì)控IgG 、 IgM 分組表組合質(zhì)控品組合檢測結(jié)果檢測作用組合 1樣本 4 + 樣本 1+檢測 IgM 類抗原抗體反應-可編輯修改 -組合 2樣本 4+樣本 2-檢測 IgM 類抗原抗體反應組合 3樣本 5+樣本 1+檢測 IgG 類抗原抗體反應組合 4樣本 5+樣本 3-檢測 IgG 類抗原

16、抗體反應【建立參考值】首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時，需要連續(xù)做三天試驗，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號質(zhì)控品時，需新舊質(zhì)控品同時做，連續(xù)兩天，舊批號質(zhì)控品在控，新批號質(zhì)控品質(zhì)控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時，需新舊批號試劑同時做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學均要單獨定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā筷栃越Y(jié)果與預期結(jié)果比較出現(xiàn)超過1+ 凝集強度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。【記錄表格】輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表. .SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控登記表. .SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表.SXK-JL67【注意事項】1. 室內(nèi)質(zhì)控品保存在 2? 8 °C,嚴禁在室溫長期存放。2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號質(zhì)控品不得混用。3. 紅細胞質(zhì)控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，