實驗一還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)、DNARNA鑒定ppt課件

1、實驗一 生物組中可溶性復原糖、脂肪、蛋白質(zhì)、DNA、RNA的鑒定教學目的：教學目的： 知識目的：闡明實驗原理知識目的：闡明實驗原理顏色反響，顏色反響，識記和區(qū)分用于可溶性復原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒識記和區(qū)分用于可溶性復原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的試劑及產(chǎn)生的特定顏色，初步掌握鑒定上述定的試劑及產(chǎn)生的特定顏色，初步掌握鑒定上述化合物的根本方法，學會描畫實驗景象，掌握化合物的根本方法，學會描畫實驗景象，掌握NaOHNaOH溶液和溶液和CuSO4CuSO4溶液的運用方法。溶液的運用方法。 才干目的：培育學生自動獲取知識，運才干目的：培育學生自動獲取知識，運用知識分析景象，歸納總結的才干，培育學生實用知識分析

2、景象，歸納總結的才干，培育學生實踐操作的才干及從景象出發(fā)探求事物本質(zhì)的才干。踐操作的才干及從景象出發(fā)探求事物本質(zhì)的才干。 情感與價值目的：經(jīng)過親手實驗體驗科情感與價值目的：經(jīng)過親手實驗體驗科學家嚴謹治學的科學態(tài)度，培育實事求是的世界學家嚴謹治學的科學態(tài)度，培育實事求是的世界觀。觀。一、實驗原理一、實驗原理1.1.可溶性復原糖可溶性復原糖 生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具復原性的半縮醛羥基，因此叫內(nèi)都含有游離的具復原性的半縮醛羥基，因此叫做復原糖；蔗糖分

3、子內(nèi)沒有，為非復原糖。實驗做復原糖；蔗糖分子內(nèi)沒有，為非復原糖。實驗中所用的本尼迪特試劑，只能鑒定生物組織中可中所用的本尼迪特試劑，只能鑒定生物組織中可溶性復原糖，而不能鑒定可溶性非復原糖及不能溶性復原糖，而不能鑒定可溶性非復原糖及不能溶解的糖。葡萄糖溶液在參與本尼迪特試劑，在溶解的糖。葡萄糖溶液在參與本尼迪特試劑，在加熱條件下被復原為紅黃色的加熱條件下被復原為紅黃色的Cu2OCu2O沉淀，而葡萄沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反響式為糖氧化成葡萄糖酸。其反響式為: :-CHO+Cu(OH)2-CHO+Cu(OH)2-COOH+Cu2O-COOH+Cu2O紅黃色紅黃色2.2.脂肪的鑒定脂肪的鑒

4、定 蘇丹蘇丹(蘇丹蘇丹)為一種脂肪染色為一種脂肪染色劑劑( (易溶解于酒精，不溶解于水易溶解于酒精，不溶解于水) )。蘇丹。蘇丹染液遇脂肪的顏色反響為橘黃色，蘇染液遇脂肪的顏色反響為橘黃色，蘇丹丹染液遇脂肪的顏色反響為紅色。其染液遇脂肪的顏色反響為紅色。其反響式為反響式為: : 脂肪脂肪蘇丹蘇丹 蘇丹蘇丹 橙黃色紅色橙黃色紅色3.3.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反響式為: 雙縮脲在堿性環(huán)境中能和硫酸銅結合成紅紫色的絡化雙縮脲在堿性環(huán)境中能和硫酸銅結合成紅紫色的絡化物。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵構造與雙縮脲構造類似，物。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵構造與雙縮

5、脲構造類似，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反響：因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反響：-CO NH -CO NH -類似雙縮尿類似雙縮尿H2NOC - NH - CONH2H2NOC - NH - CONH2構造構造堿性條件下與堿性條件下與Cu2+Cu2+作用構成紫色絡合物作用構成紫色絡合物雙縮尿反響雙縮尿反響選材：含糖量較高的白色或近于白色，蘋果、梨最好選材：含糖量較高的白色或近于白色，蘋果、梨最好 。 二、實驗步驟與景象二、實驗步驟與景象1.1.可溶性復原糖可溶性復原糖 制備組織樣液：制備組織樣液：制漿：去皮、切塊、研磨制漿：去皮、切塊、研磨過濾：用單層紗布過濾：用單層紗布取液：取液

6、：mLmL顯色反響顯色反響 景象：景象： 2.2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 取材：花生種子浸泡取材：花生種子浸泡 h h，去皮，將子葉削成薄片，去皮，將子葉削成薄片 制片：制片：選取最薄的薄片移至載玻片中央選取最薄的薄片移至載玻片中央在薄片上滴加蘇丹在薄片上滴加蘇丹 染液染液2323滴，染色滴，染色 minmin滴加體積分數(shù)為滴加體積分數(shù)為50%50%的酒精溶液的酒精溶液1212滴，洗去浮色滴，洗去浮色吸去余液，滴吸去余液，滴1-21-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片滴蒸餾水，蓋上蓋玻片察看：察看：先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡察看先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡察看結果：結果：有被染成橙

7、黃色的脂肪微粒有被染成橙黃色的脂肪微粒3.3.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 選材與制備選材與制備組織樣液：組織樣液：黃豆組織樣液或雞蛋白稀釋液黃豆組織樣液或雞蛋白稀釋液黃豆浸泡黃豆浸泡 去皮去皮切片切片研磨研磨過濾過濾濾液濾液 顯色反響顯色反響景象：景象：無色無色紫色或紫紅紫色或紫紅色色4.4.察看察看DNADNA和和RNARNA在細胞中的分布在細胞中的分布 實驗原理實驗原理 DNADNA主要分布在細胞核內(nèi)，主要分布在細胞核內(nèi)，RNARNA大部大部分存在于細胞質(zhì)中。核酸均為酸性，對堿性染料分存在于細胞質(zhì)中。核酸均為酸性，對堿性染料甲基綠和吡羅紅具有親和力，這兩種染料對甲基綠和吡羅紅具有親和力，這兩

8、種染料對DNADNA和和RNARNA的親和力不同。用這兩種染料混合液處置細胞的親和力不同。用這兩種染料混合液處置細胞時，由于時，由于DNADNA和和RNARNA聚合程度不同，甲基綠分子有聚合程度不同，甲基綠分子有兩個相對的正電荷，與聚合程度較高的兩個相對的正電荷，與聚合程度較高的DNADNA分子有分子有較強的親和力，可使較強的親和力，可使DNADNA分子染成綠色，而吡羅紅分子染成綠色，而吡羅紅分子中僅一個正電荷，可與聚合程度較低分子中僅一個正電荷，可與聚合程度較低RNARNA結合結合使其染成紅色。即使其染成紅色。即RNARNA對吡羅紅親和力大，被染成對吡羅紅親和力大，被染成紅色，而紅色，而DN

9、ADNA對甲基綠親和力大，被染成藍綠色。對甲基綠親和力大，被染成藍綠色。吡羅紅甲基綠染液可顯示細胞中吡羅紅甲基綠染液可顯示細胞中DNADNA、RNARNA的分布。的分布。三、實驗勝利的關鍵與本卷須知：三、實驗勝利的關鍵與本卷須知：1.1.實驗勝利的關鍵在于實驗資料的選擇：實驗勝利的關鍵在于實驗資料的選擇： 在做可溶性復原糖的鑒定實驗中，最理想的實驗在做可溶性復原糖的鑒定實驗中，最理想的實驗資料是含糖量較高的生物組織資料是含糖量較高的生物組織( (或器官或器官) )，而且組織的顏色，而且組織的顏色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以防止較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以防止

10、資料本身顏色對實驗變化顏色的掩蓋。經(jīng)實驗比較，顏色資料本身顏色對實驗變化顏色的掩蓋。經(jīng)實驗比較，顏色反響的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜。反響的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜。 在做脂肪的鑒定實驗中，實驗資料最好選用富含在做脂肪的鑒定實驗中，實驗資料最好選用富含脂肪的種子，且徒手切片要勝利，要務虛驗技藝較高，無脂肪的種子，且徒手切片要勝利，要務虛驗技藝較高，無妨改成刮取花生子葉泥制造暫時裝片，易做，效果又好。妨改成刮取花生子葉泥制造暫時裝片，易做，效果又好。 在做蛋白質(zhì)的實驗時，最好選用富含蛋白質(zhì)的生在做蛋白質(zhì)的實驗時，最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織，植物資料常用的是大豆

11、，動物資料常用的是雞蛋，物組織，植物資料常用的是大豆，動物資料常用的是雞蛋，鑒定之前需求留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏鑒定之前需求留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色做比較，這樣可加強壓服力。色做比較，這樣可加強壓服力。 (1) (1)斐林試劑很不穩(wěn)定，故應將組成斐林試劑的甲液斐林試劑很不穩(wěn)定，故應將組成斐林試劑的甲液(0.1g/mL(0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液溶液) )和乙液和乙液(0.05g/mL(0.05g/mL的的CuSOCuSO溶液溶液) )分別配制、儲存，運用時，再暫時配制，將分別配制、儲存，運用時，再暫時配制，將4 45 5滴乙液滴滴乙液滴入入2mL2mL

12、甲液中，配完后立刻便用。切勿將甲液和乙液分別甲液中，配完后立刻便用。切勿將甲液和乙液分別參與組織樣液中。參與組織樣液中。 (2) (2) 鑒定可溶性復原糖，加熱試管時，應該用試管夾鑒定可溶性復原糖，加熱試管時，應該用試管夾夾住試管上部，放入怒放水的大燒杯加熱；留意試管底部夾住試管上部，放入怒放水的大燒杯加熱；留意試管底部不接觸燒杯底部，同時試管口不要朝向?qū)嶒炚?，以免試管不接觸燒杯底部，同時試管口不要朝向?qū)嶒炚?，以免試管?nèi)溶液沸騰時沖出試管，呵斥燙傷。假設試管內(nèi)溶液過于內(nèi)溶液沸騰時沖出試管，呵斥燙傷。假設試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免沸騰，可以提起試管夾，使試管

13、與沸水接觸面減少，以免溶液溢出。溶液溢出。 A.A.可溶性復原糖可溶性復原糖 2.2.本卷須知：本卷須知： (3) (3) 在鑒定脂肪的實驗中，假設用花生在鑒定脂肪的實驗中，假設用花生種子作實驗資料，必需提早浸泡種子作實驗資料，必需提早浸泡3 34 4小時，小時，浸泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，浸泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，那么組織太軟，切下的薄片不易成形，切片那么組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡能夠的薄。要盡能夠的薄。 (4) (4) 染色后一定要用染色后一定要用50%50%的酒精溶液洗的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色時間不宜過長否那去浮色，染色和洗浮色時間不宜過長否

14、那么酒精將脂肪溶解影響實驗效果，察看時么酒精將脂肪溶解影響實驗效果，察看時找最薄處最好只需找最薄處最好只需1212層細胞。層細胞。B.B.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 (5) (5)在蛋白質(zhì)的鑒定實驗中，假設用在蛋白質(zhì)的鑒定實驗中，假設用蛋白質(zhì)作實驗資料，必需稀釋，假設稀釋蛋白質(zhì)作實驗資料，必需稀釋，假設稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反響后會粘固在不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反響后會粘固在試管內(nèi)壁上，使反響不徹底，且試管不易試管內(nèi)壁上，使反響不徹底，且試管不易洗刷干凈。洗刷干凈。 (6) (6)雙縮脲試劑的運用，應先雙縮脲雙縮脲試劑的運用，應先雙縮脲加試劑加試劑A(0.1g/mLA(0.1g/mL的的NaOHN

15、aOH溶液溶液) )，呵斥堿性，呵斥堿性的反響環(huán)境，再加試劑的反響環(huán)境，再加試劑B(0.01g/mLB(0.01g/mL的的CuSOCuSO溶液溶液) )。C.C.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 1 1結論：上述實驗證明蘋果果肉中、花生種子結論：上述實驗證明蘋果果肉中、花生種子中、黃豆組織中各存在什么樣物質(zhì)中、黃豆組織中各存在什么樣物質(zhì)? ? 答：答： 。 2 2討論：為什么根據(jù)某些化學反響可以使生物討論：為什么根據(jù)某些化學反響可以使生物組織中的有關有機物產(chǎn)生固定的顏色反響可以鑒定生組織中的有關有機物產(chǎn)生固定的顏色反響可以鑒定生物組織有糖、脂肪、蛋白質(zhì)的存在物組織有糖、脂肪、蛋白質(zhì)的存在? ? 四、

16、討論與練習：四、討論與練習：可溶性復原糖、脂肪、蛋白質(zhì)可溶性復原糖、脂肪、蛋白質(zhì) 由于某些化學試劑與生物組織中的化合物發(fā)生由于某些化學試劑與生物組織中的化合物發(fā)生一定的化學反響后，可產(chǎn)生新的化合物，而這種化合一定的化學反響后，可產(chǎn)生新的化合物，而這種化合物是有固定的顏色的。因此，根據(jù)待檢測物與某些化物是有固定的顏色的。因此，根據(jù)待檢測物與某些化學試劑反響的固有顏色，如紅黃色、橙黃色、紫色等。學試劑反響的固有顏色，如紅黃色、橙黃色、紫色等?？梢澡b定生物組織中存在有糖、脂肪、蛋白質(zhì)?？梢澡b定生物組織中存在有糖、脂肪、蛋白質(zhì)。 各種可供實驗的材料各種可供實驗的材料梨梨 黃桃黃桃 胡蘿卜胡蘿卜 黃豆黃

17、豆 花生種子花生種子 小麥種子小麥種子 其中適宜于鑒定糖的是其中適宜于鑒定糖的是 ，理由是梨的組織，理由是梨的組織細胞細胞 ，他計劃，他計劃用什么試劑鑒定用什么試劑鑒定? 。 小麥種子不如花生種子更適宜用來鑒定脂肪，這小麥種子不如花生種子更適宜用來鑒定脂肪，這是由于是由于 ，他計劃用什么試劑鑒定他計劃用什么試劑鑒定? . 適宜于鑒定蛋白質(zhì)的是適宜于鑒定蛋白質(zhì)的是 ，理由，理由是是 ，鑒定所用的試劑是，鑒定所用的試劑是 。 3. 3. 討論討論: : 做生物組織中可溶性復原糖、脂肪、蛋做生物組織中可溶性復原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實驗時，需求根據(jù)實驗需求選擇不同的白質(zhì)的鑒定實驗時，需求根據(jù)實驗需求

18、選擇不同的實驗資料。清根據(jù)下表所列各種資料回答以下問題實驗資料。清根據(jù)下表所列各種資料回答以下問題：梨梨 顏色為白色，并且糖含量較高顏色為白色，并且糖含量較高 本尼迪特、斐林試劑或班氏試劑本尼迪特、斐林試劑或班氏試劑脂肪含量不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用蘇丹用蘇丹或蘇丹或蘇丹試劑試劑黃豆和花生黃豆和花生 蛋白質(zhì)含量高蛋白質(zhì)含量高 雙縮脲試劑雙縮脲試劑1 1、某些單子葉植物，如韭菜、鳶尾的葉子內(nèi)含有大、某些單子葉植物，如韭菜、鳶尾的葉子內(nèi)含有大量的可溶性復原糖，但這些單子葉植物的葉子不宜作實量的可溶性復原糖，但這些單子葉植物的葉子不宜作實驗資料，緣由是：驗資料，

19、緣由是：這些葉子的顏色較深，對復原性這些葉子的顏色較深，對復原性糖與斐林試劑的顏色反響起遮蓋作用糖與斐林試劑的顏色反響起遮蓋作用 、以下哪組試劑在運用過程中，必需加熱：、以下哪組試劑在運用過程中，必需加熱：A.A.本尼迪特試劑鑒定可溶性復原糖的過程中本尼迪特試劑鑒定可溶性復原糖的過程中B.B.蘇丹蘇丹染液在鑒定動物組織中的脂肪時染液在鑒定動物組織中的脂肪時C.C.雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時D.D.碘化鉀溶液鑒定淀粉時碘化鉀溶液鑒定淀粉時 課堂練習課堂練習: :、某學生在鑒定脂肪的實驗中，在顯微鏡下、某學生在鑒定脂肪的實驗中，在顯微鏡下察看花生子葉切片，當轉(zhuǎn)動細調(diào)理器時，有一察看花生子葉切片，當轉(zhuǎn)動細調(diào)理器時，有一部分細胞看的清楚，另一部分較模糊，這是由部分細胞看的清楚，另一部分較模糊，這是由于于 A.A.反光鏡未調(diào)理好反光鏡未調(diào)理好 B. B.標本切的厚薄不均標本切的厚薄不均 C.C.細調(diào)理器未調(diào)理好細調(diào)理器未調(diào)理好D.D.顯微鏡物鏡損壞顯微鏡物鏡損壞 、蘇丹、蘇丹溶液的配制的方法是：溶液的配制的方法是：