人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討課件

1、L/O/G/O人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討Antitumor effects of a novel benzonaphthofurandione derivative (8e) on the human colon cancer cells in vitro and in vivo through cell cycle arrest accompanied with the modulation of EGFR and mTOR signaling一種新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物（8e）調(diào)節(jié)表皮生長因子受體(EGFR)雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號發(fā)送細(xì)胞周期停滯進(jìn)而對體外

2、和體內(nèi)的人結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生抗癌作用細(xì)胞生物學(xué)20th人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討論文信息論文信息1.文章所刊登的學(xué)術(shù)雜志：Chemico-Biological Interactions (化學(xué)與生物相互作用)發(fā)表時間：2011年5月3日2.文章作者：韓國首爾國立大學(xué)藥學(xué)院 Hwa-Jin Chung， Sang Kook Lee韓國首爾梨花女子大學(xué)藥學(xué)院 Hee-Kyung Rhee，Hea-Young Park Choo3.關(guān)鍵詞：苯并呋喃并萘二酮衍生物 (Benzonaphthofurandione derivative)癌細(xì)胞 HCL116抗癌活性 (Antitumor

3、 activity)G0/G1期的細(xì)胞周期停滯 (G0/G1 cell cycle arrest)表皮生長因子受體/雷帕霉素靶蛋白信號發(fā)送 (EGFR/mTOR signaling)人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討ppt結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)1.Introduction2.Methods and results3.Discussions人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討主要實(shí)驗(yàn)流程主要實(shí)驗(yàn)流程1.測定對比8e和阿霉素對癌細(xì)胞的增殖抑制效力（以半抑制濃度表示），并用倒置相差顯微鏡觀察癌細(xì)胞前后形態(tài)2.用不同濃度的8e處理癌細(xì)胞24h和48h，并用流式細(xì)胞術(shù)分析癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布

4、4.提取第2步得到的癌細(xì)胞中與細(xì)胞周期和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的蛋白，并用Western blot技術(shù)分析這些蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，以推測8e的抑癌機(jī)理3.將癌細(xì)胞移植到無胸腺小鼠身上使其長成腫瘤，分析8e和阿霉素對腫瘤生長的抑制效果，并對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討1.Introduction背景：結(jié)腸癌是世界范圍內(nèi)的頭號癌癥殺手之一，每年有大約一百萬的新增病例。盡管全球結(jié)腸癌的發(fā)病率在逐步下降，但近年來由于飲食習(xí)慣的西化，亞洲國家結(jié)腸癌患者數(shù)目顯著上升。因此仍有必要開發(fā)新型的抗結(jié)腸癌藥物。阿霉素(Doxorubicin) ，一種蒽環(huán)類化合物，是臨床上用來作為治

5、療癌癥的藥物。 下面我們來看看8e和阿霉素(Doxorubicin)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。 人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討8e8e的結(jié)構(gòu)式的結(jié)構(gòu)式人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討阿霉素阿霉素(Doxorubicin)(Doxorubicin)【作用與用途】阿霉素是一種廣譜抗腫瘤抗生素，可抑制RNA 和DNA的合成，對RNA的抑制作用最強(qiáng)，對多種腫瘤均有作用，屬非周期特異性藥物，對各種生長周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。但有一定的毒副作用?！径拘苑磻?yīng)】白細(xì)胞和血小板減少，約60%80%的病人可發(fā)生；100%的病人有不同程度的毛發(fā)脫落，停藥后可以恢復(fù)生長；心臟毒性，表現(xiàn)為心律

6、失常， ST-T改變(ST和T 分別指兩種心電波)、惡心、食欲減退；藥物溢出血管外可引起組織潰瘍及壞死。另外，用藥后尿液可出現(xiàn)紅色。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討2.Methods and results 2.1化學(xué)試劑（Chemicals）（略） 2.2合成8e （Synthesis of compound 8e）：按已發(fā)表的文獻(xiàn)提供的化學(xué)合成方法人工合成。 2.3癌細(xì)胞的培養(yǎng)（Cell culture）：人結(jié)腸癌細(xì)胞HCL116由美國模式培養(yǎng)物保藏所（ATCC）提供，用加富的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，該培養(yǎng)基另外加入了10%熱滅活的胎牛血清（FBS），100單位/mL青

7、霉素（盤尼西林），100ug/mL鏈霉素，250ng/mL兩性霉素B。置于含5% CO2的控濕氛圍中培養(yǎng)。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討2.4 8e8e和阿霉素對癌細(xì)胞和阿霉素對癌細(xì)胞抑制抑制效效力的測力的測定定：癌細(xì)胞HCL116(以1104 個/mL的密度植于96孔盤)分別加入不同濃度的8e或阿霉素(Doxorubicin)后置于37含5%CO2的控濕氛圍中培養(yǎng)72h。經(jīng)其他步驟處理后用570nm波長測量吸光度以求得存活細(xì)胞的數(shù)量，并用非線性回歸分析的方法計算8e和阿霉素對癌細(xì)胞的半抑制濃度（IC50）。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討8e8e和阿霉素對癌

8、細(xì)胞的半抑制濃度和阿霉素對癌細(xì)胞的半抑制濃度，人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討結(jié)果結(jié)果計算結(jié)果表明阿霉素對癌細(xì)胞的半抑制濃度為46.2 nm /L，而8e對癌細(xì)胞的半抑制濃度為52.9nm/L，8e的抑癌效力稍遜于阿霉素。用8e處理癌細(xì)胞24h和48h后用倒置相差顯微鏡觀察癌細(xì)胞的形態(tài)。雖然癌細(xì)胞存活的數(shù)量隨8e濃度增大而遞減，但實(shí)驗(yàn)組的癌細(xì)胞與對照組相比并沒有明顯的形態(tài)學(xué)變化。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討倒置相差顯微鏡對倒置相差顯微鏡對8e處理后癌細(xì)胞的觀察結(jié)果處理后癌細(xì)胞的觀察結(jié)果8e處理后癌細(xì)胞變得稀疏，但沒有明顯的形態(tài)學(xué)變化。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活

9、性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討2.5 8e 8e對癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響對癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響 用磷酸鹽緩沖液配制25、50、75nm/L的8e溶液為實(shí)驗(yàn)組，并以磷酸緩沖液為空白對照，分別處理癌細(xì)胞，在24h和48h后用流式細(xì)胞儀分析癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布的結(jié)果分布的結(jié)果人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討結(jié)果表明細(xì)胞周期停滯在G0/G1時期與8e的濃度有關(guān)人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討 2.6蛋白質(zhì)印跡分析蛋白質(zhì)印跡分析將經(jīng)過25、50、75nm/L的8e處理24和4

10、8小時后的癌細(xì)胞的總蛋白質(zhì)提取出來后，用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）分離并電轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯薄膜上，薄膜用特制的緩沖液在室溫下處理1h，接著用以磷酸鹽緩沖液稀釋的特異性抗體進(jìn)一步在4下過夜處理。然后用特制的緩沖液洗滌后，薄膜在室溫下用二抗標(biāo)記的辣根過氧化物酶繼續(xù)處理2h，然后用熒光影像分析儀配合辣根過氧化物酶熒光檢測試劑盒來顯像。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討 蛋白質(zhì)免疫印跡分析蛋白質(zhì)免疫印跡分析圖譜圖譜人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討蛋白質(zhì)免疫印跡分析蛋白質(zhì)免疫印跡分析圖譜圖譜人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討 2.7小鼠小鼠體內(nèi)體內(nèi)

11、腫瘤生長抑制實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤生長抑制實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)采用6星期大的雄性無胸腺小鼠(athymic mice)。 在第0天將HCL116癌細(xì)胞懸液皮下注射到每只小鼠的右側(cè)腹部，當(dāng)腫瘤體積長到9095mm3時（約在接種后第7天）開始用8e或阿霉素對小鼠進(jìn)行治療。實(shí)驗(yàn)之前小鼠被隨機(jī)分為6組（5個實(shí)驗(yàn)組和1個對照組），每組6只。5個實(shí)驗(yàn)組： 阿霉素3mg/kg/day, 8e 2mg/kg/day , 8e 5mg/kg/day , 8e 10mg/kg/day , 8e (5mg/kg/day)阿霉素(3mg/kg/day) 8e和阿霉素分別溶于磷酸鹽緩沖液并設(shè)置1個只有溶劑的空白對照。5組藥物都是以腹膜內(nèi)注射的方

12、式給藥，每周3次，持續(xù)3周，每組共給藥9次。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討小鼠體重和腫瘤體積的變化小鼠體重和腫瘤體積的變化自接種癌細(xì)胞當(dāng)天起，于第0、9、18、24、28天對小鼠進(jìn)行體重稱量和腫瘤體積的測量。（在第28天實(shí)驗(yàn)結(jié)束可以將小鼠身上的腫瘤摘取下來通過液體推排法測量腫瘤的體積，但由于實(shí)驗(yàn)過程中在不能摘取腫瘤的情況下也要測量腫瘤的體積，因此本實(shí)驗(yàn)中腫瘤體積的測量是通過較為精準(zhǔn)地測量腫瘤的長寬高，然后用公式（體積=長 寬高 / 6）計算出來的。不同時期的小鼠體重以柱狀圖表示，腫瘤體積以折線圖表示。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討小鼠與摘取下來的腫瘤小鼠與摘

13、取下來的腫瘤人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討小鼠體重的變化小鼠體重的變化人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討腫瘤體積的變化腫瘤體積的變化與對照相比的腫瘤抑制率人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析用抗Ki-67抗體對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析以檢測癌細(xì)胞的增殖情況。Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）。 Ki-67是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門生物標(biāo)志物，可以通過對Ki-67的檢測了解惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討腫瘤的免疫組化分析

14、結(jié)果腫瘤的免疫組化分析結(jié)果分析結(jié)果表明8e抑制了增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的表達(dá)。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討小鼠治療實(shí)驗(yàn)的結(jié)論小鼠治療實(shí)驗(yàn)的結(jié)論經(jīng)過3周的藥物治療之后，10mg/kg/day的那個實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，腫瘤的抑制達(dá)到58.7%。與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠沒有觀察到明顯的體重變化和副作用。同時，免疫組織學(xué)分析表明，在異種移植的癌細(xì)胞中，8e抑制了增殖生物標(biāo)志物Ki-67的表達(dá)，表明8e的確有效地抑制了癌細(xì)胞在體內(nèi)的增殖。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討3.Discussion（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）在最初的研究中作者發(fā)現(xiàn)8e對多種人類癌細(xì)胞系都有生長抑制作

15、用，而在固態(tài)腫瘤（實(shí)體腫瘤）中人結(jié)腸癌細(xì)胞HCL116的生長對8e的抑制活性尤為敏感。因此他們設(shè)計實(shí)驗(yàn)，從細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的表達(dá)和細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑兩個方面進(jìn)一步研究8e對人結(jié)腸癌細(xì)胞的作用機(jī)理。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討cyclin與CDK的功能：一般認(rèn)為細(xì)胞周期蛋白（cyclins）和周期蛋白依賴性激酶(CDKs)是細(xì)胞周期的的調(diào)控者并通過相互結(jié)合形成cyclin-CDK復(fù)合物來起作用。在細(xì)胞周期的不同時期，不同的cyclin-CDK復(fù)合物通過使特異的轉(zhuǎn)錄因子或其他蛋白質(zhì)的磷酸化，開啟或關(guān)閉某些基因的表達(dá)，或直接調(diào)節(jié)某些蛋白質(zhì)的活性，從而推動細(xì)胞周期的更替。但是癌細(xì)胞的

16、細(xì)胞周期調(diào)控蛋白失控并導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖。Part 1人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討細(xì)胞周期的一般模式細(xì)胞周期的一般模式G1/S檢控點(diǎn)CDK4 、CDK6與cyclinD形成的復(fù)合物主要在G1期起作用，促進(jìn)G1/S轉(zhuǎn)變CDK2 與cyclinE形成的復(fù)合物作用于S期的起始階段CDK2與 cyclinA形成的復(fù)合物的作用貫穿于整個S期CDK1與cyclinA或cyclinB（主要是cyclinB )形成的復(fù)合物則在G2/M轉(zhuǎn)變中發(fā)揮作用人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討G1/S轉(zhuǎn)變的調(diào)控機(jī)理轉(zhuǎn)變的調(diào)控機(jī)理在細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)變過程中，首先由cyclinD（D1、D

17、2、D3）與CDK4和CDK6結(jié)合形成cyclinD-CDK復(fù)合物，然后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)， CDK的某些位點(diǎn)被CAK（周期蛋白依賴性激酶活性激酶）磷酸化。磷化后具有激酶活性的cyclinD-CDK復(fù)合物使pRb-E2F復(fù)合物（E2F是一種轉(zhuǎn)錄活化因子）中的pRb（視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白，一種細(xì)胞周期抑制蛋白）磷酸化為p-pRb， 但pRb上有多個可磷酸化的位點(diǎn)，僅僅靠cyclinD-CDK對其進(jìn)行磷酸化是不夠的，隨后還需要cyclinE-CDK2繼續(xù)對pRb上的其他位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化，以及cyclinA/B依賴性激酶的活化來維持p-pRb的高度磷酸化狀態(tài)。 p-pRb不具有與E2F結(jié)合的活性，因而釋放轉(zhuǎn)錄

18、因子E2F。被釋放的E2F進(jìn)入核內(nèi)結(jié)合一系列的基因啟動區(qū)（c-myc、b-myb、cdc2等）促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞通過G1/S檢控點(diǎn)，從G1期進(jìn)入到S期。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討簡意圖簡意圖促分裂信號CyclinD水平升高CDK2CDK4cyclinD-CDK2cyclinD-CDK4pRb-E2F p-pRbpRb 磷酸化E2F活化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄細(xì)胞通過G1/S檢控點(diǎn)，從G1期轉(zhuǎn)變到S期cyclinE-CDK2繼續(xù)磷酸化cyclinA/B-CDK維持高度磷酸化不再結(jié)合E2F進(jìn)入 核內(nèi)人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討增殖細(xì)胞核抗原增殖細(xì)胞核抗原 P

19、CNAPCNAPCNA是一種由三個相同亞基組成的，總相對分子質(zhì)量為29kD的環(huán)狀同源三聚體蛋白，在細(xì)胞核內(nèi)合成并分布于細(xì)胞核內(nèi)，是真核生物DNA聚合酶的輔助蛋白。 PCNA的三聚體環(huán)形結(jié)構(gòu)環(huán)繞著雙鏈DNA，起到滑動發(fā)夾的作用，相當(dāng)于原核生物DNA聚合酶的亞基，極大地增強(qiáng)了真核生物DNA聚合酶的持續(xù)合成能力，而且PCNA也參與DNA的損傷修復(fù)。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討P21P21的抑制作用的抑制作用P21：一種細(xì)胞周期抑制蛋白p21可以與cyclin-CDK復(fù)合物結(jié)合從而抑制CDK的激酶活性，進(jìn)而使pRb不能維持磷酸化狀態(tài)，而且cyclin-CDK的其他一些生物學(xué)活性也不

20、能實(shí)現(xiàn)。最終將無法轉(zhuǎn)錄一系列與細(xì)胞周期時相轉(zhuǎn)變（如從G1期轉(zhuǎn)變?yōu)镾期）相關(guān)的基因，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯。 P21與PCNA結(jié)合可以抑制PCNA與雙鏈DNA的連接，從而抑制DNA的復(fù)制過程。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討 8e 8e對細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)水平的影響對細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)水平的影響人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討如蛋白質(zhì)印跡圖譜所示，（1）表達(dá)水平上調(diào)的因子有：細(xì)胞周期抑制蛋白p21；（2）表達(dá)水平下調(diào)的因子有：cyclin D1、 cyclin A、 cyclin E 、CDK2 、CDK4、c-Myc 蛋白（原癌基因c-Myc的表達(dá)產(chǎn)物）、pR

21、b（視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白，是一種細(xì)胞周期抑制蛋白） 、p-pRb（磷酸化的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白）、PCNA（增殖細(xì)胞核抗原）結(jié)論：8e介導(dǎo)的G0/G1期的細(xì)胞周期停滯與周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白p21的上調(diào)和CDK2 、CDK4、 cyclin D1、cyclin A and cyclin E 的下調(diào)有關(guān)。 人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討Part 2 名詞解釋名詞解釋11.表皮生長因子受體（EGFR）：一種可被胞外促有絲分裂因子（包括表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子 、雙調(diào)蛋白和乙胞素）所激活的典型的酪氨酸蛋白激酶受體（RTK，245頁）。很多癌細(xì)胞，包括結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌和

22、頭頸部鱗癌等癌細(xì)胞都有EGFR過分表達(dá)的現(xiàn)象。2.雷帕霉素靶蛋白（mTOR）：廣泛存在與各種細(xì)胞中，在細(xì)胞增殖、遷移、分化和生存中發(fā)揮重要作用，而且也是Akt（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶）促進(jìn)細(xì)胞生存和抑制細(xì)胞凋亡的下游靶標(biāo)。同時mTOR也通過激活激酶P70S6K和抑制翻譯起始因子eIF4E的抑制物4E-BP1來參與許多生存蛋白的起始翻譯。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討名詞解釋名詞解釋2PIK3：磷脂酰肌醇3激酶（254頁），也就是磷脂酶C（PLC，237頁），可以將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2，238頁）水解為二脂酰甘油（DAG）和1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）。Ak

23、t：又稱PKB（蛋白激酶B），是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細(xì)胞存活和凋亡中起重要作用。 PI3K-Akt信號途徑是一條經(jīng)典的信號途徑。ERK：細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶，是絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族中的三大亞族之一，是哺乳類動物中了解的最為清楚的MAPK亞族，其信號傳遞通路為典型的MAPKKK/MAPKK/MAPK三級酶促級聯(lián)反應(yīng)，是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、發(fā)育以及分化的信號網(wǎng)絡(luò)的核心。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討名詞解釋名詞解釋3c-Src ：是一種非受體酪氨酸蛋白激酶（即胞質(zhì)酪氨酸蛋白激酶），其活化機(jī)制與受體酪氨酸蛋白激酶（RTKs）相似，同樣需要自身磷酸化和受體二聚化。mT

24、OR： 雷帕霉素靶蛋白， 通過與多種蛋 白結(jié)合成2種復(fù)合物 mTORC1和mTORC2 發(fā)揮其生理功能。STAT ：信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子，可被特定的酪氨酸激酶（如c-Src ）磷酸化為p-STAT，p-STAT發(fā)生聚合形成同源或異源二聚體活化態(tài)，進(jìn)入核內(nèi)與靶基因啟動子序列的特定位點(diǎn)結(jié)合,促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄。已成功克隆4種JAK(JAK13和Tyk2)與7種STAT(STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6)。 人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討EGFR激活后有3條胞質(zhì)信號通路： MAPK通路 PIK3通路 c-Src通路真核細(xì)胞內(nèi)已發(fā)現(xiàn)的激

25、活mTOR的信號通路： PI3K / AKT / mTOR Ras /MAPK /mTOR AMPK /mTOR （ AMPK 是腺苷酸活化蛋白激酶）氧氣 / mTOR氨基酸 / mTOR構(gòu)成EGFR/mTOR信號通路人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討123人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討TSC1 /2和Rheb是連接Akt和復(fù)合物mTOR1 的兩個因子PI3K / AKT / mTOR信號通路人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討 mTOR通過與多種蛋白結(jié)合形成兩種復(fù)合物mTORC1和mTORC2發(fā)揮生理功能mTOR很重要的一條下游通路就是調(diào)控蛋白質(zhì)的

26、合成： 在mTORC1的靶蛋白中， 4E-BP1（真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白 ）和p70S6K （ 核糖體蛋白S6激酶，254頁）在控制蛋白質(zhì)的合成方面起到重要作用。 而mTORC1磷酸化4E-BP1和p70S6K 。4E-BP1發(fā)生磷酸化后使elF4E（真核翻譯起始因子4E ）釋放并活化，活化的elF4E啟動mRNA 翻譯，翻譯產(chǎn)物含有與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白，細(xì)胞周期蛋白就在其中。 p70S6K是真核生物核糖體 40S 小亞基S6蛋白（254頁）的激酶，活化的p70S6K使細(xì)胞內(nèi)40S核糖體蛋白S6磷酸化，p- p70S6K 可促進(jìn)mRNA的翻譯。翻譯產(chǎn)物主要是核糖體蛋白、翻譯起始因子和翻譯延伸因子等翻譯裝置的必需組分。人類結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機(jī)理的探討mTOR在細(xì)胞生長、增殖過程中起重要作用，但是持續(xù)激活的PI3K/AKT/mTOR 信號與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，它能加速細(xì)胞周期、減少