HPLC法測定清熱潤通膠囊中大黃素及大黃酚的含量

1、HPLC法測定清熱潤通膠囊中大黃素及大黃酚的含量【摘要】目的：測定清熱潤通膠囊中大黃素及大黃酚的含量。方 式：采納高效液相法，色譜柱為YWG C18柱(250 mmX mm, 5 Um)； 甲醇一磷酸溶液(85： 15)為流動相；柱溫25 ,檢測波長為254 nm, 流速為mL/mino結(jié)果：大黃素的線性范圍為U g U g,大黃酚的線 性范圍為UgUg;平均加樣回收率，大黃素為%, RSD=% (n=5), 大黃酚為%, RSD=% (n=5)。結(jié)論：該方式簡便、快速、準(zhǔn)確，可用 于清熱潤通膠囊的質(zhì)量操縱?！娟P(guān)鍵詞】清熱潤通膠囊大黃素大黃酚HPLC含量測定Abstract Objective

2、 ： To establish a HPLC method for determination the contents of emodin and chrysophanol in Qingre Runtong capsule. Methods： HPLC was performed on YWG-C18 (250 mm X mm, 10 H m) column with % phosphoric acid (85 ： 15) as mobile phase at flow rate of mL/min. The column temperature was 25 C and the dete

3、ction wavelength was 254 nm. Results： The liner ranges of emodin and chrysophanol were H g U g and 口 g 口 g. The average recovery rate of emodin was % (RSD=%, n=5) and that of chrysophanol was % (RSD=%, n=5) . Conclusion： This method is simple, quick, accuratewhich can be used for the qualitycontrol

4、of Qingre Runtong capsule.Key word Qiangre Runtong capsule; emodin; chrysophanol;HPLC; quantitative determination清熱潤通膠囊是由大黃、牡丹皮、當(dāng)歸、枳實等多味中藥制成的 復(fù)方制劑，具有清熱除濕、潤腸通便的功效，臨床上用于醫(yī)治大腸濕 熱所致的便秘、牙齦腫痛、口舌生瘡等病證。該制劑在制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)程中，成立了高效液相法測定其中大黃素及大黃酚含量的方式1。 通過測定大黃素及大黃酚含量，能夠有效地操縱該制劑的內(nèi)在質(zhì)量， 從而保證臨床療效的穩(wěn)固，現(xiàn)將測定結(jié)果報導(dǎo)如下。1實驗材料實驗儀器Ag

5、ilent 1100高效液相色譜儀，包括AgilentG1311A四元泵 (Quatpump)s Agilent G1322A 真空在線脫氣機(Degrasser )> Agilent G1313A自動進(jìn)樣器(ALS)> Agilent G1315B DAD二極管陣列檢測器、 Agilent chimstation system (安捷倫化學(xué)工作站)、YWG C18 (250 mm X mm, 5 Um)；電子天平(德國賽多利斯BP211D)；超聲提取器(上 海分析儀器設(shè)備廠生產(chǎn))；Milipore -Q純水器。藥品與試劑大黃素（批號：，20 mg）、大黃酚（批號：，20 mg）由

6、中國藥品 生物制品檢定所提供；清熱潤通膠囊（批號：060308,山西省中醫(yī)藥 研究院制劑中心提供）；甲醇（HPLC級，天津四友提供），其他試劑均 為分析純。2實驗方式色譜條件色譜柱為YWG C18 （250 mmX mm, 5 Um）；流動相：甲醇一% 磷酸溶液（85 ： 15）；流速為mL/min,檢測波長為254 nm,柱溫為25對照品溶液的制備周密稱取適量大黃素對照品、大黃酚對照品，加甲醇制成每1 mL 含大黃素Ug、大黃酚Ug的混合對照品溶液。供試品溶液的制備周密稱定清熱潤通膠囊的內(nèi)容物約2 g,研細(xì)，加甲醇30 mL, 稱定重量，加熱回流提取1 h,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失

7、的重量，搖勻，濾過。周密量取續(xù)濾液10mL,置燒瓶中，揮去溶劑, 加8%鹽酸溶液10 mL,超聲處置（功率250 W,頻率33 kHz） 2 min, 再加三氯甲烷15mL,于水浴上加熱回流lh,當(dāng)即冷卻，置分液漏斗 中，用三氯甲烷提取3次，每次15 mL,歸并三氯甲烷提取液，減壓 回收溶劑至干，殘渣加適量甲醇溶解，并定容于10mL量瓶中，濾過, 取續(xù)濾液，作為供試品溶液2。3結(jié)果陰性空白實驗按處方比例和工藝制備缺大黃的陰性空白樣品，按供試品溶液的 制備方式制備陰性空白樣品溶液，測定。結(jié)果說明，空白對照品色譜 圖在與標(biāo)準(zhǔn)品及樣品色譜圖相同位置上無大黃素及大黃酚的色譜峰， 說明處方中其他藥味無干

8、擾（結(jié)果見圖1）。線性考察周密吸取大黃素（lig/mL）及大黃酚（Ug/mL）對照品混合溶 液，別離進(jìn)樣UL、5 UL. 10 uL. 15 uL> 20 u L,對所測得的峰 面積（Y）和各對照品進(jìn)樣量（X）作回歸處置，得大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線， 并計算取得大黃素回歸方程為：Y=4 +,相關(guān)系數(shù)r= 92,說明大黃素在9 ug2 ug范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積值有良好的線性關(guān)系。 大黃素線性關(guān)系考察峰而積數(shù)值見表lo另外還得大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算取得大黃酚回歸方程為：Y= 449 一,相關(guān)系數(shù)1= 00,說明大黃酚在1 Ug 8 Ug范圍內(nèi)進(jìn)樣 量與峰面積值有良好的線性關(guān)系。大黃酚線性關(guān)系考察峰面積

9、數(shù)值見 表2。周密度實驗周密吸取大黃素(U g/mL)及大黃酚(U g/mL)對照品混合溶 液，別離按上述含量測定色譜條件進(jìn)樣5次，測得大黃素周密度為： RSD=% (n=5),大黃酚周密度為：RSD=% (n=5),結(jié)果見表3。說明 本方式周密度良好。穩(wěn)固性實驗取同一供試品溶液，別離于0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h進(jìn)樣測定，記錄大黃素峰面積，RSD=%,結(jié)果說明供試品溶液在6 個小時內(nèi)維持穩(wěn)固。重復(fù)性考察取同一批清熱潤通膠囊（批號：060308）,按上述含量測定色譜 條件，測定大黃素及大黃酚含量，方式重復(fù)性結(jié)果，大黃素：RSD （n=5）,大黃酚：RSD=% （n=5

10、）為，說明該方式重現(xiàn)性良好?；厥章蕦嶒炄∫阎壳鍩釢櫷z囊內(nèi)容物5份，每份約2 g,周密稱定， 別離加入大黃素對照品溶液（mg/mL）及大黃酚對照品溶液（mg/mL） 各1mL,按正文成品含量測定項下方式制備供試品溶液，于含量測定 色譜條件下測定、計算，大黃素的平均回收率為 （RSD=%）,見表4。 大黃酚的平均回收率為% （RSD=%）,見表5。樣品測定別離周密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 uLo按上述色譜 條件測定，計算樣品中大黃素及大黃酚含量，測定結(jié)果見表6。4討論參照中國藥典（2005年版）大黃的含量測定方式及其他文獻(xiàn)報 導(dǎo)的色譜條件，采納了高效液相色譜法測定本制劑中大黃素及大黃酚 的含量。實驗研究說明，柱溫操縱在20 28 ,大黃酚能與臨近 的色譜峰專門好地分離，假設(shè)柱溫高于30 ,那么大黃酚峰與臨近 的色譜峰部份粘合在一路，阻礙含量測定結(jié)果。本測定方式同時測定