動物細胞培養(yǎng)和核移植技術

1、動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞培養(yǎng)技術、 動物細胞核移植技術、動物細胞核移植技術、動物細胞融合技術、動物細胞融合技術、 生產單克隆抗體技術生產單克隆抗體技術提問：提問：v植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術、植物組織培養(yǎng)技術、 植物體細胞雜交技術植物體細胞雜交技術動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。是其他動物細胞工程技術的基礎。2.2.1 動物細胞培養(yǎng)和核移植技術動物細胞培養(yǎng)和核移植技術一、動物細胞培養(yǎng) 1.概念：就是從動物機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞，然后

2、,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖。植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 在無菌和人工控制的條件下在無菌和人工控制的條件下, ,將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工控制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形控制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。成完整的植株。一、動物細胞培養(yǎng)2.選材：選材： 動物胚胎或幼齡動物的組織、動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。分化程度低，容易培養(yǎng)。v在進行動物細胞培養(yǎng)時，用在進

3、行動物細胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶或膠原蛋白酶分散細胞，說明細胞間的分散細胞，說明細胞間的物質主要是物質主要是蛋白質蛋白質。動物細胞培養(yǎng)適宜。動物細胞培養(yǎng)適宜的的pH為為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。3.分散成單個細胞分散成單個細胞 細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。 要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。 細胞的接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制(即細胞在培養(yǎng)中只能形

4、成單層細胞)。 3.動物細胞生長特性：動物細胞生長特性：一、動物細胞培養(yǎng)動物機體組織動物機體組織單個細胞單個細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白胰蛋白酶酶膠原蛋白酶膠原蛋白酶稀釋稀釋分裝分裝傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)4.培養(yǎng)過程：培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液細胞懸浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代細胞代細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細胞代細胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞株無限傳代無限傳代細胞系細胞系單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液遺傳物質遺傳物質未改變未改變遺傳物質遺傳物質已改變已改變動物組織細胞間隙中動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖含有一定量的彈性纖維等

5、蛋白質，將細胞維等蛋白質，將細胞網絡起來形成具有一網絡起來形成具有一定彈性和韌性的組織定彈性和韌性的組織和器官。和器官。（分解彈性纖維）（分解彈性纖維）動物細胞培養(yǎng)不能動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體最終培養(yǎng)成生物體細胞懸浮細胞懸浮液液1010代細胞代細胞5050代細代細胞胞無限傳代無限傳代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞株細胞系細胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？多數組織細胞固定在表面多數組織細胞固定在表面生長和分裂。生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質改變遺傳物質改變1、植物

6、組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？、動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？、動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？沒有沒有是是 成塊的組織細胞靠在一起成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖彼此限制了細胞的生長和增殖先用剪刀剪碎先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理。后用蛋白酶處理。思考題思考題、細胞膜的主要成份是什么？、細胞膜的主要成份是什么？、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？

7、、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？題呢？蛋白質和磷脂蛋白質和磷脂能能注意時間的控制注意時間的控制思考題思考題、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白質胰蛋白酶水解蛋白質細胞間的成份是蛋白質細胞間的成份是蛋白質、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？10、動物細胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋、動物細

8、胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？原因？不能，因為兩者的最適不能，因為兩者的最適pH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適的最適pH較接近較接近胚胎組織或幼齡動物的組織或器官分裂、增殖旺盛胚胎組織或幼齡動物的組織或器官分裂、增殖旺盛思考題思考題11、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？13、如此時細胞數量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？、如此時細胞數量并未達到人們的需求，應該

9、怎樣辦？易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現象叫接觸抑制。這種現象叫接觸抑制。將貼滿細胞壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。將貼滿細胞壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去？、有些為何能一直傳下去？17、動物細胞培養(yǎng)就是為了得

10、到這些細胞嗎？、動物細胞培養(yǎng)就是為了得到這些細胞嗎？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉移到其它培上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能不都能發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展不全是不全是思考題思考題18、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？保存保存10代以內的細胞，因為代以內的細胞，因為1050部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化，有部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細胞方向發(fā)展少部分還發(fā)生突變向癌細胞方向發(fā)展思考題思考題19、動物細

11、胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數目增多，不能發(fā)育成新的動物個體不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數目增多，不能發(fā)育成新的動物個體 多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的內環(huán)境的知識，多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的內環(huán)境的知識，思考并討論以下問題：思考并討論以下問題：討論討論1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的充足的營養(yǎng)供給、

12、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境和氣體環(huán)境 無菌、無毒的環(huán)境。無菌、無毒的環(huán)境。 1、無菌、無毒的環(huán)境培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理（措施：添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。合成培養(yǎng)基）保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖5.培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿血清、血漿等。等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1 1）液體培養(yǎng)基）液體

13、培養(yǎng)基（2 2）含有血清、血漿）含有血清、血漿動物體細胞大都生活在動物體細胞大都生活在液體液體的環(huán)的環(huán)境境思考：動物細胞培養(yǎng)液的成分是什么？與植物培養(yǎng)基相比有什么獨特之處？保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖3、溫度和pH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）5.培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理（措施：添加一定量的抗生（措施：添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微

14、量元葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。素、維生素、血清、血漿等。合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基）細胞的全能性細胞的全能性細胞株、細胞系細胞株、細胞系植物體植物體培養(yǎng)結果培養(yǎng)結果獲得細胞獲得細胞或或細胞產物細胞產物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、血清、葡萄糖、血清、血漿血漿蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質培養(yǎng)基性質細胞增殖細胞增殖原理原理動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較

15、 （1）大規(guī)模培養(yǎng)生產生物制品（如：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體） （2）作為基因工程中的受體細胞 （3）培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性 （4）培養(yǎng)健康細胞用于燒傷病人皮膚移植 （5）細胞的生理、藥理、病理研究, ,為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據6.動物細胞培養(yǎng)的應用：動物細胞培養(yǎng)的應用： 1概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。 用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物2.核移植核移植的類型的類型（難度高）（難度高）受體細胞：受體細胞：M期的卵母細胞期的卵母細胞二、動物體細

16、胞核移植技術和克隆動物二、動物體細胞核移植技術和克隆動物胚胎細胞核移植：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復全能性容易細胞分化程度低，恢復全能性容易卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質細胞質細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠3多莉羊的培育多莉羊的培育過程過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞、動物的克隆與植物克隆一樣嗎？、用動物體細胞進行克隆的過程、用動物體細胞進行克隆的過程,其實其實際操作過程是什么？際操作過程是什么？動物克隆過程的實際是細胞核移植不不思考題思考

17、題卵母卵母細胞細胞去核去核體細體細胞取胞取核核電刺激電刺激使兩細使兩細胞融合胞融合重組細胞重組細胞重組胚胎重組胚胎新個體新個體、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？的核？為使核移植動物的遺傳物質全部來自有利用價值的動物提供的細胞。為使核移植動物的遺傳物質全部來自有利用價值的動物提供的細胞。、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代1010代以內的細胞，為什么？代以內的細胞，為什么？1010代以內的細胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變代以內的細胞一般保持正

18、常二倍體的核型，未發(fā)生突變思考題思考題3 3、體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細胞供體動物進行了、體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？的復制嗎？為什么？為什么？不是，克隆動物絕大部分不是，克隆動物絕大部分DNADNA來自供體細胞核，但核外還有少部分來自供體細胞核，但核外還有少部分DNADNA（如線粒體（如線粒體DNADNA）來自受體卵母細胞）來自受體卵母細胞思考題思考題4.4.動物克隆實例很多，為何多莉就舉世聞名呢？在在19971997年年2 2月英國羅斯林研究所維爾穆特博士科研組公布體細胞克隆羊月英國羅斯林研究所維爾穆特博士科研組公布體細胞克隆羊“多莉

19、多莉”培育成功之前，胚胎細胞核移植技術已經有了很大的發(fā)展。實際上，培育成功之前，胚胎細胞核移植技術已經有了很大的發(fā)展。實際上，“多莉多莉”的克的克隆在核移植技術上沿襲了胚胎細胞核移植的全部過程，但這并不能減低隆在核移植技術上沿襲了胚胎細胞核移植的全部過程，但這并不能減低“多莉多莉”的的重大意義，因為它是世界上重大意義，因為它是世界上第一例第一例經體細胞核移植出生的動物，是克隆技術領域研經體細胞核移植出生的動物，是克隆技術領域研究的巨大突破。這一巨大進展意味著：究的巨大突破。這一巨大進展意味著：在理論上證明了，同植物細胞一樣，分化了在理論上證明了，同植物細胞一樣，分化了的動物的動物細胞核細胞核也

20、具有全能性也具有全能性 思考題思考題5、對比對比多莉羊和課本高產奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點？多莉羊和課本高產奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點？多莉克隆過程的受體細胞是多莉克隆過程的受體細胞是去核去核卵卵細胞細胞，而高產奶牛的克隆過程的受體細胞是，而高產奶牛的克隆過程的受體細胞是去核去核卵卵母母細胞細胞；多莉克隆過程是將供體；多莉克隆過程是將供體細胞核細胞核注入受體細胞，而高產奶牛的克隆過程是將供注入受體細胞，而高產奶牛的克隆過程是將供體體細胞細胞注入受體細胞。注入受體細胞。6 6、討論分析上述哪一種措施更科學？并說明理由？、討論分析上述哪一種措施更科學？并說明理由？ 卵母細胞當中

21、的細胞周期蛋白含量、活性比卵細胞高，用它作受體更容卵母細胞當中的細胞周期蛋白含量、活性比卵細胞高，用它作受體更容易成功易成功將供體細胞注入受體細胞，使克隆動物更像供體動物，操作也方便將供體細胞注入受體細胞，使克隆動物更像供體動物，操作也方便思考題思考題補充補充:胚胎移植技術胚胎移植技術試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細胞卵細胞精子精子體外受精體外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新個體新個體母體子宮內母體子宮內孕育、產出孕育、產出5.體細胞核移植技術的應用前景體細胞核移植技術的應用前景畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領域有著廣泛應用前景畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領域有著廣泛應用前景1加速加速家畜

22、遺傳改良家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育進程，促進優(yōu)良畜群繁育2保護瀕危物種，增加動物保護瀕危物種，增加動物 的存活數量的存活數量3可作為生物反應器，生產醫(yī)用蛋白可作為生物反應器，生產醫(yī)用蛋白4克隆動物細胞、組織、器官可作為移植的供體克隆動物細胞、組織、器官可作為移植的供體5了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等6.體細胞核移植技術存在的問題核移植動物幼體產出 概率10克隆動物存在著健康問題，許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調等。克隆動物的食品安全性問題存在爭議v1細胞的衰老與動物機體的衰老有著密細胞的衰老與

23、動物機體的衰老有著密切的關系，細胞的增殖能力與供體的年切的關系，細胞的增殖能力與供體的年齡有關，幼齡動物細胞增殖能力強，有齡有關，幼齡動物細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織細胞比老年動一般來說幼年動物的組織細胞比老年動物的組織細胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細物的組織細胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細胞的分化程度越低，則增殖能力越強，胞的分化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易培養(yǎng)。所以更容易培養(yǎng)。2脫分化又稱去分化，是指分化細胞失脫分化又稱去分化，是指分化細胞失去特有的結構和功能變?yōu)榫哂形捶只毴ヌ赜械慕Y構和功能變?yōu)榫哂形捶只毎匦?/p>

24、的過程。植物的任何一部分，甚胞特性的過程。植物的任何一部分，甚至單個細胞都具有長成完整植株的能力。至單個細胞都具有長成完整植株的能力。但要發(fā)育成完整植株，必須先脫分化，但要發(fā)育成完整植株，必須先脫分化，脫分化的細胞具有發(fā)育成任何組織的能脫分化的細胞具有發(fā)育成任何組織的能力，然后進行再分化，形成完整植株。力，然后進行再分化，形成完整植株。植物細胞培養(yǎng)主要用于農林生產中的作植物細胞培養(yǎng)主要用于農林生產中的作物、苗木育種，快速繁育種苗、培育無物、苗木育種，快速繁育種苗、培育無病毒植株等，這就要求植物的組織或細病毒植株等，這就要求植物的組織或細胞先進行脫分化。胞先進行脫分化。動物細胞的培養(yǎng)有各種用途，

25、一般而言，動物細胞的培養(yǎng)有各種用途，一般而言，動物細胞培養(yǎng)不需經過脫分化過程。因動物細胞培養(yǎng)不需經過脫分化過程。因高度分化的動物細胞發(fā)育潛能變窄，失高度分化的動物細胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細胞也就沒有類似植物組織或細胞培物細胞也就沒有類似植物組織或細胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細胞定向分化，通常采用定向誘導動物細胞定向分化，通常采用定向誘導動物干細胞，使其分化成所需要的組織或物干細胞，使其分化成所需要的組織或器官。器官。v3（1）可以用體細胞核移植技術克隆）可以用體細胞核移植技術克隆高

26、產奶牛盧辛達。盧辛達的產奶量很高，高產奶牛盧辛達。盧辛達的產奶量很高，說明它有高產奶的遺傳基礎，利用盧辛說明它有高產奶的遺傳基礎，利用盧辛達的體細胞克隆的奶牛其遺傳物質基本達的體細胞克隆的奶牛其遺傳物質基本上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產的遺傳基礎，如果精心培育和飼養(yǎng)，有的遺傳基礎，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內推廣，克隆牛再與高可能在世界范圍內推廣，克隆牛再與高產的公牛自然繁殖，可得到很多高產的產的公牛自然繁殖，可得到很多高產的后代，從而加快奶牛改良進程。后代，從而加快奶牛改良進程。v但同時需注意，該克隆牛不能無限制但同時需注意，該克隆牛不能無限制

27、地推廣，其數量不宜過多，尤其是在小地推廣，其數量不宜過多，尤其是在小范圍內不能無限的繁殖，以避免奶牛群范圍內不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現近親繁殖而引起種質衰退。出現近親繁殖而引起種質衰退。v3（2）首先從盧辛達耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易取）上）首先從盧辛達耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細胞。從屠宰場取廢剪取一小塊組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細胞的核，再將耳棄的牛卵巢，抽取卵母細胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細胞的核

28、，再將耳細胞注入卵母細胞，用電刺激方法使卵母細胞與體細胞融合，這時供體核就進入細胞注入卵母細胞，用電刺激方法使卵母細胞與體細胞融合，這時供體核就進入了受體卵母細胞，再用電刺激或化學物質激活注入了體細胞核的卵母細胞，使其了受體卵母細胞，再用電刺激或化學物質激活注入了體細胞核的卵母細胞，使其完成減數分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚完成減數分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經同期發(fā)情處理的受體母牛體內。胎植入經同期發(fā)情處理的受體母牛體內。v4在研究方面，克隆動物基因組重新編在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術效率低

29、，程的機制尚不清楚，克隆技術效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現早衰等問題。這些問題尚在研究中。早衰等問題。這些問題尚在研究中。v在應用上，生產克隆動物費用昂貴，在應用上，生產克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模應用還有一定距離。距大規(guī)模應用還有一定距離。一、動物細胞培養(yǎng) 1.概念：就是從動物機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖。植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 在無菌和人工控制的條件下在無菌和人工控制的條件下, ,將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工控制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形控制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。成完整的植株。一、動物細胞培養(yǎng)2.選材：選材： 動物胚胎或幼齡動物的組織、動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度