淺談博士后基金申請PPT課件

1、淺談博士后基金申請淺談博士后基金申請邱麗娟邱麗娟（）中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所第四章第四章 申報評審申報評審 第十二條第十二條 申請資助的博士后研究人員必須具備良好的思申請資助的博士后研究人員必須具備良好的思想品德、較高的學(xué)術(shù)水平和較強(qiáng)的科研能力；申報評審的想品德、較高的學(xué)術(shù)水平和較強(qiáng)的科研能力；申報評審的項目應(yīng)具有項目應(yīng)具有基礎(chǔ)性、原創(chuàng)性和前瞻性基礎(chǔ)性、原創(chuàng)性和前瞻性，具有，具有重要科學(xué)意義重要科學(xué)意義和和應(yīng)用價值應(yīng)用價值 第十四條第十四條 博士后研究人員申請基金資助所報項目，應(yīng)為博士后研究人員申請基金資助所報項目，應(yīng)為本人承擔(dān)本人承擔(dān)。申報材料的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)真實可

2、靠，不得弄虛作假。申報材料的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)真實可靠，不得弄虛作假 第十七條第十七條 評審專家對申請者的評審專家對申請者的研究基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)、研究方法研究方法、研研究思路究思路、支出預(yù)算支出預(yù)算和和創(chuàng)新能力創(chuàng)新能力等方面做出分析判斷，評審等方面做出分析判斷，評審出具有出具有發(fā)展?jié)摿Πl(fā)展?jié)摿秃蛣?chuàng)新能力創(chuàng)新能力的博士后研究人員，予以資助。的博士后研究人員，予以資助。 中國博士后科學(xué)基金資助規(guī)定中國博士后科學(xué)基金資助規(guī)定 一、選一、選 題題 基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)研究 選準(zhǔn)選準(zhǔn)科學(xué)科學(xué)問題，結(jié)合科學(xué)發(fā)展前沿問題，結(jié)合科學(xué)發(fā)展前沿 應(yīng)用研究應(yīng)用研究 選擇國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展中迫切需要解決關(guān)鍵選擇國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展中迫切需

3、要解決關(guān)鍵科技科技問題問題 題目要具體明確，避免過寬，過大題目要具體明確，避免過寬，過大 資源篩選到種質(zhì)創(chuàng)新和育種資源篩選到種質(zhì)創(chuàng)新和育種 結(jié)合問題用最實用的方法，不是方法越新越好結(jié)合問題用最實用的方法，不是方法越新越好 如差異顯示，蛋白組學(xué)，如差異顯示，蛋白組學(xué)，miRNAmiRNA等等 題目要具有科學(xué)性，不能只具有操作性題目要具有科學(xué)性，不能只具有操作性 如轉(zhuǎn)基因研究，可針對方法進(jìn)行研究如轉(zhuǎn)基因研究，可針對方法進(jìn)行研究 符合需要性、合理性、可行性、創(chuàng)新性原則選選 題題 啟動子超表達(dá)基因?qū)ψ魑锾匦缘挠绊憜幼映磉_(dá)基因?qū)ψ魑锾匦缘挠绊?EST-SSREST-SSR標(biāo)記開發(fā)和遺傳作圖標(biāo)記開發(fā)和

4、遺傳作圖 蛋白激酶對作物耐鹽脅迫的調(diào)控機(jī)理研究蛋白激酶對作物耐鹽脅迫的調(diào)控機(jī)理研究 黑龍江作物遺傳多樣性及耐冷性研究黑龍江作物遺傳多樣性及耐冷性研究 抗性突變體的鑒定及其抗性機(jī)理研究抗性突變體的鑒定及其抗性機(jī)理研究 春化基因的分子標(biāo)記春化基因的分子標(biāo)記 抗性種質(zhì)的遺傳多樣性及優(yōu)異抗源發(fā)掘抗性種質(zhì)的遺傳多樣性及優(yōu)異抗源發(fā)掘 受體蛋白的選擇性剪接對抗性影響的研究受體蛋白的選擇性剪接對抗性影響的研究 病原菌資源與其宿主的遺傳分化研究病原菌資源與其宿主的遺傳分化研究 二、個人及申報項目基本信息二、個人及申報項目基本信息1、考慮現(xiàn)有項目與現(xiàn)在項目的關(guān)系，非越多越好2、已完成項目與申報項目之間的關(guān)系 內(nèi)容

5、、經(jīng)費的考慮3、博士后時間短、精力有限摘要摘要研究意義研究基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)研究內(nèi)容與目標(biāo)摘摘 要要 利用基因工程改良油菜耐濕性，對提高甘藍(lán)型油菜的耐濕性和研究植物耐濕機(jī)理具有重要意義。在前期的研究中發(fā)現(xiàn).，連通植物抗旱和耐濕信號傳導(dǎo)途徑，具有重要意義。 這些材料攜帶有高產(chǎn)、抗病、抗逆等眾多的優(yōu)異基因摘要敘述 簡練 嚴(yán)謹(jǐn)三、項目立論依據(jù)三、項目立論依據(jù) 1、研究意義 基礎(chǔ)研究需結(jié)合科學(xué)研究發(fā)展趨勢來論述科學(xué)意義 應(yīng)用研究需結(jié)合國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展中迫切需要解決的關(guān)鍵科技問題來論述其應(yīng)用前景 2、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀綜述 要求內(nèi)容翔實、清晰，層次分明，標(biāo)題突出3、項目創(chuàng)新之處（粗細(xì)處理） 1 1）以往對）以往

6、對NAC NAC 基因的研究主要在于模式植物如擬南芥的胚胎早期發(fā)育或基因的研究主要在于模式植物如擬南芥的胚胎早期發(fā)育或在耐逆境中的作用，還沒有系統(tǒng)研究在耐逆境中的作用，還沒有系統(tǒng)研究NAC NAC 基因?qū)Υ蠖狗N子發(fā)育的影響?；?qū)Υ蠖狗N子發(fā)育的影響。因此，本項目特色之一是闡明因此，本項目特色之一是闡明NACNAC蛋白在大豆種子發(fā)育過程中生物學(xué)功能。蛋白在大豆種子發(fā)育過程中生物學(xué)功能。2 2）本項目結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因芯片分析技術(shù)和蛋白質(zhì)組技術(shù)，同時在）本項目結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因芯片分析技術(shù)和蛋白質(zhì)組技術(shù)，同時在基因水平和蛋白水平闡明基因水平和蛋白水平闡明NAC NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中

7、的調(diào)控機(jī)理，基因在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控機(jī)理，這也是本項目的特色之一。這也是本項目的特色之一。3 3）植物的種子發(fā)育是一個非常復(fù)雜的過程，目前對種子發(fā)育的分子機(jī)制）植物的種子發(fā)育是一個非常復(fù)雜的過程，目前對種子發(fā)育的分子機(jī)制還了解較少。本研究通過大豆種子發(fā)育過程中還了解較少。本研究通過大豆種子發(fā)育過程中NAC NAC 轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)理轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)理研究，初步明確研究，初步明確NAC NAC 基因直接或間接參與的大豆種子發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這基因直接或間接參與的大豆種子發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這對于進(jìn)一步完善和豐富對植物種子發(fā)育分子機(jī)制的認(rèn)識具有重要意義。對于進(jìn)一步完善和豐富對植物種子發(fā)育分子機(jī)制的認(rèn)識

8、具有重要意義。學(xué)科交叉明顯：本項目涉及到植物生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、作物學(xué)等學(xué)科，學(xué)科間交叉明顯，容易產(chǎn)生新理論。4、參考文獻(xiàn) （新、全、高）Cao D, Hou WS, Liu W, Yao WW, Wu CX, Liu XB, and Han TF, (2011). Overexpression of TaNHX2 enhances salt tolerance of composite and whole transgenic soybean plants. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 107(3):541-552Gleason C.,

9、Chaudhuri S., Yang T., Munoz A., Poovaiah B.W., Oldroyd G.E. (2006). Nodulation independent of rhizobia induced by a calcium-activated kinase lacking autoinhibition. Nature 441(7097):1149-1152Hao Y J, Wei W, Song Q X, Chen H W, Zhang Y Q, Wang F, Zou H F, Lei G, Tian A G, Zhang W K, Ma B, Zhang J S,

10、 Chen S Y. (2011). Soybean NAC transcription factors promote abiotic stress tolerance and lateral root formation in transgenic plants. Plant Journal 68:302-313Hayashi T, Banba M, Shimoda Y, Kouchi H, Hayashi M, Imaizumi-Anraku H. (2010). A dominant function of CCaMK in intracellular accommodation of

11、 bacterial and fungal endosymbionts. The Plant Journal 63(1):141-154Kang H, Zhu H, Chu X, Yang Z, Yuan S, Yu D, Wang C, Hong Z, Zhang Z. (2011). A Novel Interaction between CCaMK and a Protein Containing the Scythe_N Ubiquitin-Like Domain in Lotus japonicus. Plant Physiology 155(3):1312-1324.細(xì)節(jié)決定勝敗

12、好中求好需要注意的問題 每段最好有標(biāo)題，段落要清晰，主題要突出，以事實（文獻(xiàn)）為依據(jù) 后面的研究內(nèi)容，前面必須有該領(lǐng)域的進(jìn)展，前后呼應(yīng) 體現(xiàn)出本研究的重要性和地位，讓外行也能明白附主要參考文獻(xiàn)： 規(guī)范，前后一致 文獻(xiàn)期刊要具有影響 新、全 礦物質(zhì)對作物生長的題目申請者的研究前期工作進(jìn)展及進(jìn)一步的研究方向申請者的研究前期工作進(jìn)展及進(jìn)一步的研究方向 我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，兩個NAC 同源基因可能參與了大豆種子發(fā)育的進(jìn)程（Meng et al, in press）。本項目組應(yīng)用生物信息學(xué)結(jié)合分子克隆技術(shù)從大豆中分離了6 個NAC 同源基因(GmNAC1 -GmNAC6)。組織表達(dá)分析表明，GmNAC

13、1 主要表達(dá)于根和花芽， GmNAC2 主要表達(dá)于葉片、莖和發(fā)育中的種子，GmNAC3 在花芽中強(qiáng)烈表達(dá)，在種子中表達(dá)較弱。GmNAC4 和GmNAC6 則表現(xiàn)為組成型表達(dá)。GmNAC5 主要表達(dá)于發(fā)育中的大豆種子，在花芽和莢皮中也有微弱的表達(dá)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)：GmNAC2和GmNAC5 都在大豆種子代謝旺盛時期即30-35DAF 的表達(dá)量最高，表明這兩個基因的表達(dá)可能與種子發(fā)育狀態(tài) 密切有關(guān)，但它們是如何參與調(diào)節(jié)大豆種子發(fā)育進(jìn)程的？有哪些基因參與調(diào)節(jié)？目前還不清楚，需要進(jìn)一步深入研究。這部分與后面的工作基礎(chǔ)不要重復(fù)這部分與后面的工作基礎(chǔ)不要重復(fù)四、項目研究方案四、項目研究方案1. 研究目標(biāo)（

14、明確）2. 研究內(nèi)容（適當(dāng)）3. 擬解決的關(guān)鍵問題（本研究科學(xué)和科技問題）4. 擬采取的研究方法（技術(shù)方法）5. 技術(shù)路線（畫圖）6. 實驗方案（內(nèi)容的實施）7. 可行性分析8. 研究計劃及預(yù)期進(jìn)展（詳細(xì)） 1、研究目標(biāo) 1）明確GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子發(fā)育中的生物學(xué)功能； 2）初步闡明GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并探討GmNAC2和GmNAC5 的潛在育種利用價值。 該項目完成后，可望篩選到一批轉(zhuǎn)基因植株，發(fā)表SCI科研論文1-2篇，申請專利1項，培養(yǎng)研究生1-2名。 在現(xiàn)已克隆的GmNAC2 和GmNAC5 基因的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開展：4)

15、GmNAC2 和GmNAC5 基因與其他基因的關(guān)系研究 一是在基因表達(dá)水平上，應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時期(開花后5 天,15 天,25 天,35 天,45 天)的基因表達(dá)差異,鑒定差異表達(dá)的基因； 二是在蛋白質(zhì)水平上，應(yīng)用蛋白質(zhì)組技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時期(開花后5 天,15 天,25 天,35 天,45 天)的蛋白表達(dá)差異,鑒定差異表達(dá)的蛋白。進(jìn)一步分析差異表達(dá)基因與差異表達(dá)蛋白的關(guān)系。2、研究內(nèi)容3、擬解決的關(guān)鍵問題 1）目前對于NAC 基因家族的研究報道多集中在模式植物的胚胎發(fā)育以及耐逆方面作用。對于大豆而言，由于其種子含有高蛋

16、白和高油份（其種子組成與擬南芥明顯不同），NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中具體作用還不清楚，因此，本項目擬解決的關(guān)鍵問題之一是闡明本項目擬解決的關(guān)鍵問題之一是闡明NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中基因在大豆種子發(fā)育過程中的生物學(xué)功能。的生物學(xué)功能。 2）我們的前期研究表明，GmNAC2 和GmNAC5 在種子中表達(dá)量較高，而在其他組織中表達(dá)量相對較少，且在種子不同發(fā)育時期的表達(dá)量也不同。但對這兩個基因之間及它們與其他基因間的關(guān)系還一無所知。因此，本項目擬解本項目擬解決的關(guān)鍵問題之二是在轉(zhuǎn)基因研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合基因芯片和蛋白質(zhì)組技術(shù)，決的關(guān)鍵問題之二是在轉(zhuǎn)基因研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合基因芯片和蛋白質(zhì)組技

17、術(shù)，探明探明GmNAC2 和和GmNAC5 以及它們與其他基因間的關(guān)系。以及它們與其他基因間的關(guān)系。項目內(nèi)；項目外（抗除草劑）研究目標(biāo) 本課題以誘變產(chǎn)生的低植酸種質(zhì)為材料，采用生物技術(shù)、生物信息學(xué)、現(xiàn)代儀器分析技術(shù)和傳統(tǒng)的育種手段相結(jié)合的方法，對其進(jìn)行了系列研究，預(yù)期目標(biāo)如下： 1、精細(xì)定位兩個突變基因，獲得與其連鎖的分子標(biāo)記，遺傳距離1.0 cM，為標(biāo)記輔助選擇、圖位克隆或通過比較基因組分析確定候選基因打下基礎(chǔ)。 2、明確兩個低植酸突變單獨使用和組合使用的育種價值。（三）擬解決的關(guān)鍵問題（三）擬解決的關(guān)鍵問題 通過本項目的實施，獲得可以用于提高大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)、對農(nóng)藝和其它品質(zhì)性狀又沒有負(fù)面效應(yīng)

18、的低植酸突變基因，找到與其緊密連鎖的分子標(biāo)記。 研究內(nèi)容 本項目主要開展TW lpa1-2 和 ZC lpa2-1 兩個低植酸突變基因的定位和育種價值的研究。包括 1、 微衛(wèi)星標(biāo)記初步定位突變基因。（太粗） 2、 突變基因目標(biāo)區(qū)段多態(tài)性標(biāo)記的挖掘，并用于該區(qū)段分離單株的HAPLOTYPE 分析，從而完成突變基因的精細(xì)定位。 3、 通過突變種質(zhì)和常規(guī)品種雜交后代群體中，低植酸和野生型株系的產(chǎn)量、種子田間出苗率和品質(zhì)性狀（低聚糖、脂肪酸含量和組分）的比較分析，研究兩個獨立的低植酸突變是否對上述性狀具有負(fù)面影響；確定兩個突變基因在大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)改良中的價值。 4、 利用分子標(biāo)記輔助選擇，獲得攜帶兩個突

19、變基因的純合株系，通過分析其植酸含量、農(nóng)藝和品質(zhì)性狀表現(xiàn)，確定兩個突變基因組合使用時的效果。標(biāo)題標(biāo)題4、擬采取的研究方法詳細(xì)敘述或引用文獻(xiàn)5. 技術(shù)路線（標(biāo)出基礎(chǔ)，不能太復(fù)雜）例一例一6、研究方案 1） 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位：蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位：GmNAC2 與與GFP 基因融合后的基因融合后的Gateway 載體載體pMDC44 系列系列(Curtis& Grossniklaus,2003,Plant Physi, 133:462-469), 用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時表達(dá)，結(jié)合激光共聚焦顯微鏡分析，研究瞬時表達(dá)，結(jié)合激光共聚焦顯微鏡分析，

20、研究GmNAC2 編碼產(chǎn)編碼產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。物的亞細(xì)胞定位。 2）蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性分析）蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性分析 3）基因表達(dá)分析（原位雜交）基因表達(dá)分析（原位雜交） 4）轉(zhuǎn)基因大豆的獲得與分析）轉(zhuǎn)基因大豆的獲得與分析 5）基因芯片分析）基因芯片分析 6）GmNAC2 和和GmNAC5 下游基因的鑒定下游基因的鑒定 7）蛋白質(zhì)組分析）蛋白質(zhì)組分析從研究內(nèi)容的角度進(jìn)行闡述，不要與研究方法重復(fù)目前有關(guān)目前有關(guān)NAC NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請者已克隆了基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請者已克隆了兩個可能與種子發(fā)育相關(guān)的兩個可能與種子發(fā)育相關(guān)的NAC NAC 基因，為進(jìn)

21、一步研究準(zhǔn)備了基礎(chǔ)材料和信息。基因，為進(jìn)一步研究準(zhǔn)備了基礎(chǔ)材料和信息。轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項目實施的重要環(huán)節(jié)，本實驗室經(jīng)過轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項目實施的重要環(huán)節(jié)，本實驗室經(jīng)過10 10 多年的摸索，多年的摸索，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern Southern 雜交驗證，可以獲得雜交驗證，可以獲得1%1%左右的轉(zhuǎn)化效率（左右的轉(zhuǎn)化效率（Yi & Yu, 2006Yi & Yu, 2006）。此外）。此外, , 我們也在大豆上建立了基因過我們也在大豆上建立了基因過量表達(dá)和量表達(dá)和RNAiRNAi技術(shù)轉(zhuǎn)基因體系（技術(shù)轉(zhuǎn)基因體系

22、（易新萍，南農(nóng)博士論文易新萍，南農(nóng)博士論文, 2006, 2006）；）；通過基因芯片技術(shù)大規(guī)模研究差異表達(dá)基因，由于商品化大豆基因芯片產(chǎn)品通過基因芯片技術(shù)大規(guī)模研究差異表達(dá)基因，由于商品化大豆基因芯片產(chǎn)品（AffymetrixAffymetrix）的問世和推廣而更加容易）的問世和推廣而更加容易, , 應(yīng)用基因芯片，本實驗室也開展應(yīng)用基因芯片，本實驗室也開展了大豆不同器官間的差異表達(dá)基因的研究了大豆不同器官間的差異表達(dá)基因的研究( (黃方等黃方等, , 未發(fā)表資料未發(fā)表資料) )；本實驗室已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)本實驗室已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過

23、程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的變化規(guī)律（鄭蕊，的變化規(guī)律（鄭蕊，20052005），還研究了種子萌發(fā)過程中蛋白質(zhì)組成的變化），還研究了種子萌發(fā)過程中蛋白質(zhì)組成的變化（徐曉燕等，（徐曉燕等，20062006）。）。 上述分析表明，本項目具有較好的基礎(chǔ)和技術(shù)貯備，研究內(nèi)容和方案是上述分析表明，本項目具有較好的基礎(chǔ)和技術(shù)貯備，研究內(nèi)容和方案是切實可行的。切實可行的。7、可行性分析研究方案及可行性分析（一）突變基因的精細(xì)定位（一）突變基因的精細(xì)定位 （1）基于微衛(wèi)星標(biāo)記的初步定位。對ZC lpa2-1 基因，我們利用突變種質(zhì)與親緣較遠(yuǎn)的非低植酸常規(guī)品種的雜交后代群體，將其定位在B2 連鎖群與Satt416 相距

24、4.6cM 的位置上。進(jìn)一步將通過擴(kuò)大分離群體單株數(shù)目，利用新的在Satt416 區(qū)段有更多多態(tài)性標(biāo)記的定位群體，提高定位精度，獲得更加緊密的微衛(wèi)星標(biāo)記。對TW lpa1-2 基因，將采用與ZC lpa2-1 基因定位相似的辦法完成初步定位。 （2）新的分子標(biāo)記的開發(fā)與基因精細(xì)定位。開發(fā)新的SNP和CAPS 標(biāo)記,利用分離群體分析單株的基因型，從而找到連鎖更加緊密的分子標(biāo)記。 （3 3）定位群體與種子表現(xiàn)型鑒定。本研究將利用以下雜交組合的分離群體進(jìn)行基因定位。TWlpa1-2浙春3 號（已有組合）、 TW lpa1-2中豆27（已有組合）、TW lpa1-2浙鮮豆2 號（計劃使用）。種子的低植

25、酸性狀，采用高無機(jī)磷（HIP）篩選技術(shù)進(jìn)行間接確定（袁鳳杰等，2005）。（二）低植酸突變對農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。（二）低植酸突變對農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。 利用用于定位的TW lpa1-2 和ZC lpa2-1 遺傳群體，每個組合培育HIP 純合型和野生純合型F5 家系各60 個，隨機(jī)取15 個家系混為一組，這樣每個組合各有三組HIP 純合型和野生純合型材料，每個突變基因各有六組HIP 純合型和野生純合型材料。將這六組材料按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計分別在杭州春、秋兩季，海南冬春季節(jié)種植。按標(biāo)準(zhǔn)方法考察如下，特性，通過統(tǒng)計分析，確定兩個突變基因?qū)@些性狀在不同環(huán)境條件下的影響。 考察的農(nóng)藝性狀包括小區(qū)產(chǎn)量和

26、產(chǎn)量組成因素，如單株莢數(shù)、單株粒數(shù)、單株重和百粒重等。種子收獲后按標(biāo)準(zhǔn)方法對蛋白含量、油份含量和脂肪酸組成、異黃酮和低聚糖含量進(jìn)行分析。（三）突變基因的聚合和分析 從提高種子中營養(yǎng)元素的有效性和保護(hù)環(huán)境環(huán)境的角度，植酸含量下降越多效果越明顯；然而植酸在植物的生長發(fā)育中有著重要的生理功能，因此，研究植酸下降的幅度與植株是否能夠正常生長的關(guān)系，十分重要。本試驗將利用分子標(biāo)記（其中TW lpa1-2 采用根據(jù)2-bp 缺失設(shè)計的特異性標(biāo)記，Yuan 等2007），在TW lpa1-2 和ZC lpa2-1 兩個突變種質(zhì)的雜交后代（F3 或F4）中選擇兩個突變基因均為純合的株系。通過對此類材料植酸含量

27、的分析，探明兩個突變組合在一起對植酸合成的影響程度。在此基礎(chǔ)上，通過分析雙突變純合株系材料的農(nóng)藝和品質(zhì)性性狀，確定兩個突變基因組合使用的育種價值（方法同2：低植酸突變對農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響）本試驗涉及的研究項目，除精細(xì)定位外，我們已開展了前期研究，完成了材料、方法和技術(shù)平臺的構(gòu)建，因此，完成實驗計劃應(yīng)該不存在技術(shù)上的困難。基因精細(xì)定位部分，如前所述，大豆分子遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究日新月異，在未來的幾年中會有更多的信息可以幫助建立起更有效的方法、技術(shù)，采用更加有效的策略完成預(yù)定任務(wù)。我們根據(jù)現(xiàn)有的基因組信息，提出新標(biāo)記開發(fā)和精細(xì)定位的策略，在執(zhí)行過程中應(yīng)該也不會遇到無法克服的困難，但有可能工作量會

28、比較大，無法達(dá)到非常精細(xì)的地步。但我們制定的目標(biāo)是獲得遺傳距離小于1cM的標(biāo)記，這是完全可能的，其他研究者也已經(jīng)有類似的報道。申請者研究小組已有幾十年大豆育種和相關(guān)基礎(chǔ)研究的歷史，擁有一支經(jīng)驗豐富，實力較強(qiáng)的研究隊伍，浙江大學(xué)作為合作單位，增強(qiáng)了基礎(chǔ)理論研究的力量；建設(shè)于我院的國家大豆改良分中心實驗室已經(jīng)建成并投入使用，其品質(zhì)分析和分子生物學(xué)研究所需儀器較齊全；同時大棚、曬場和試驗基地等基礎(chǔ)設(shè)施良好，這些都為本項目的開展和實施提供了保障?？尚行苑治觯?. 研究計劃及預(yù)期研究進(jìn)展受理項目11） 2008.1-2008.12 GmNAC2 和GmNAC5 蛋白的轉(zhuǎn)錄活性研究；GmNAC2 的亞細(xì)胞

29、定位研究；基因過量表達(dá)載體和RNAi 載體的構(gòu)建與驗證；開展大豆遺傳轉(zhuǎn)化及分子驗證，獲得GmNAC2 和GmNAC5 單基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株（T0 代）或單基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株（T0 代）。2）2009.1-2009.12GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子不同發(fā)育時期的原位雜交分析；獲得GmNAC2 和GmNAC5 單基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株T1 代；獲得單基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株T1代；通過雜交獲得雙基因過量表達(dá)或雙基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株F1 代；利用光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡等對轉(zhuǎn)基因植株種子的發(fā)育過程進(jìn)行分析。規(guī)劃要具體五、項目研究基礎(chǔ)與條件五、項目研究基礎(chǔ)與條件1、已取得的研

30、究成績（判斷可行性,課題與個人關(guān)系：博士后的特殊性）近期已發(fā)表與本項目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎勵情況及在本項目中承擔(dān)的任務(wù) 論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁碼等 與本課題無關(guān)不要列（實事求是） 獎勵情況須詳細(xì)列出全部受獎人員、獎勵名稱等級、授獎年等）近期已發(fā)表與本項目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎勵情況及在本項目中承擔(dān)的任務(wù) 論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁碼等 與本課題無關(guān)不要列（實事求是） 獎勵情況須詳細(xì)列出全部受獎人員、獎勵名稱等級、授獎年等）受理項目1工作基礎(chǔ)工作基礎(chǔ)基因克隆與表達(dá)：基因克

31、隆與表達(dá)：本實驗室已從大豆中克隆了6 個NAC 基因(GmNAC1-GmNAC6)(Meng et al., 2007，in press)。本研究選擇其中的兩個與種子發(fā)育相關(guān)的NAC 基因GmNAC2 和GmNAC5 進(jìn)一步分析表明GmNAC 基因的表達(dá)可能與種子發(fā)育狀態(tài)有關(guān)。為明確大豆NAC 蛋白是否定位于核中，我們構(gòu)建了GmNAC5 與GFP 基因融合的載體用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時表達(dá)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GmNAC5 是定位在細(xì)胞核（如下圖3）。轉(zhuǎn)基因大豆技術(shù)體系：轉(zhuǎn)基因大豆技術(shù)體系：轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項目實施的重要環(huán)節(jié)，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern雜交

32、驗證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率（Yi & Yu, 2006）。2、與項目有關(guān)的研究工作積累基因芯片分析技術(shù)：基因芯片分析技術(shù)：我們利用大豆寡聚核苷酸芯片（Affymetrix）研究了大豆不同組織的轉(zhuǎn)錄組，已經(jīng)鑒定了221個大豆花特異表達(dá)基因，并通過Real-time PCR技術(shù)進(jìn)行了芯片結(jié)果的驗證（黃方等，未發(fā)表資料）；蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：我們已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的變化規(guī)律（鄭蕊, 2005），累積了較好的蛋白組分析技術(shù)。上述研究工作基礎(chǔ)為本項目的順利實施提供了材料和技術(shù)保證。受理項目21、采用我國不同的大豆種質(zhì)資源，通過物理誘變的方

33、法，篩選到了2 份植酸突變種質(zhì)；經(jīng)過5-6個世代的選育，其目標(biāo)性狀穩(wěn)定遺傳，農(nóng)藝性狀趨于穩(wěn)定。2、遺傳研究表明：2 份突變均為隱性單基因所控制；等位性鑒定實驗表 明，2 個突變基因非等位。獲得獲得2 2份低植份低植酸突變體酸突變體明確低植酸突變由明確低植酸突變由隱性單基因控制隱性單基因控制提供相關(guān)的數(shù)據(jù)受理項目23、磷素含量（植酸鹽、低價肌醇磷酸鹽、總磷和無機(jī)磷）分析表明，突變種質(zhì)中植酸含量顯著下降，達(dá)50以上，無機(jī)磷大幅上升；突變種質(zhì)ZC lpa2-1 中低價肌醇磷酸鹽含量顯著上升，這在大豆低植酸突變種質(zhì)中是一個新的表現(xiàn)型。突變種質(zhì)中磷素組分發(fā)生的改變，不受環(huán)境條件的影響（以上測定在德國慕尼

34、黑大學(xué)分析測試中心進(jìn)行）。4、對突變種質(zhì)ZC lpa2-1 進(jìn)行了基因定位，發(fā)現(xiàn)其突變發(fā)生是一個新的基因位點。通過的測序和連鎖分析，發(fā)現(xiàn)TW lpa1-2 突變由肌醇-3-磷酸合成酶基因（MIPS1）第3 外顯子的1 個2-bp 缺失引起，但在大豆中MIPS 基因的4 個拷貝均沒有定位的研究報道。明確突變體種質(zhì)磷明確突變體種質(zhì)磷素組分變化特點素組分變化特點發(fā)現(xiàn)突變體發(fā)現(xiàn)突變體基因變化基因變化5、對突變種質(zhì)進(jìn)行了農(nóng)藝性狀的初步分析，發(fā)現(xiàn)與親本野生型相比，突變種質(zhì)ZC lpa2-1 性狀沒有發(fā)生明顯的改變。而突變種質(zhì)TW lpa1-2 的成苗率較低，但與親本相比下降幅度較小。6、品質(zhì)性狀分析：與親

35、本野生型相比，突變種質(zhì)TW lpa1-2 中蔗糖含量上升，棉籽糖和水蘇糖含量下降，該性狀也是大豆品質(zhì)改良的目標(biāo)之一。而兩個突變種質(zhì)中的異黃酮含量均發(fā)生了較大的改變。7、建立了植酸以及相關(guān)磷素組成成分的分析測試技術(shù)，并就此研究開展了一些國際交流。8、構(gòu)建了不同突變種質(zhì)的分離群體。不夠具體？9、針對以上的研究內(nèi)容，已完成博士論文一篇（題目？）。其中部分已整理成研究性論文（題目？），將于2007 年在TAG 上發(fā)表。五、項目研究基礎(chǔ)與條件五、項目研究基礎(chǔ)與條件3、已具備的實驗條件 認(rèn)真填寫設(shè)施和條件 并非所有的評委都了解4、尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑六、項目經(jīng)費預(yù)算六、項目經(jīng)費預(yù)算 預(yù)算要切實可

36、行 按批復(fù)預(yù)算進(jìn)行審計 了解政策的有關(guān)規(guī)定 價格合理七、專家推薦意見七、專家推薦意見 對申報項目內(nèi)容的真實性和知識產(chǎn)權(quán)問題等提出審核意見，并對申請者的研究方法和創(chuàng)新能力，對申報項目的科學(xué)價值和應(yīng)用價值以及預(yù)期成果提出評價意見。八、申請人承諾與單位審核八、申請人承諾與單位審核 申 請者承諾我保證填報內(nèi)容真實、準(zhǔn)確。如果獲得資助，我將嚴(yán)格遵守中國博士后科學(xué)基金資助規(guī)定，按計劃認(rèn)真開展研究工作，保證完成研究工作任務(wù)。申請者（簽章）： 年 月 日申報單位審核意見我單位已對申請人的資格和申請書內(nèi)容進(jìn)行了認(rèn)真審核，各項內(nèi)容屬實，符合申請條件。負(fù)責(zé)人（簽章）： 單位（蓋章）： 年 月 日存在的問題存在的問題

37、近年來從我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)需求中凝練基礎(chǔ)科學(xué)問題的項目申請有所增加，圍繞農(nóng)學(xué)基礎(chǔ)科學(xué)問題開展多學(xué)科交叉研究的趨勢更加明顯，依托單位的分布呈現(xiàn)出多樣化的格局，但依然存在下列主要問題： 普遍重視農(nóng)作物基因組研究，但在此基礎(chǔ)上對生理學(xué)和遺傳學(xué)的機(jī)理揭示不夠； 注重跟蹤國際研究熱點，與我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實際問題結(jié)合不夠緊密 多數(shù)研究工作的系統(tǒng)性和延續(xù)性不夠。 2012-2013申請項目應(yīng)以農(nóng)作物及其產(chǎn)品為研究對象，與其他學(xué)科的交叉不能偏離這一研究主體，否則不屬于本學(xué)科的資助范圍。本學(xué)科不受理以農(nóng)業(yè)動物、動物產(chǎn)品、林木和模式植物擬南芥等為研究對象的申請。請準(zhǔn)確填寫申請代碼至二級申請代碼（C13XX），否則將不予資助

38、。 從2012年度的項目申請看，多數(shù)申請人能較好把握國內(nèi)外研究進(jìn)展，注重從農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實際中凝練科學(xué)問題，重視選題的科學(xué)意義與應(yīng)用潛力，學(xué)術(shù)思想和研究方法的創(chuàng)新性也有所提高，前期研究基礎(chǔ)更加扎實，申請書撰寫更加規(guī)范。但依然存在下列主要問題： 不少申請跟蹤或仿效國內(nèi)外的相關(guān)研究現(xiàn)象嚴(yán)重，簡單地將其他研究方法（或材料）嫁接到另外一個材料（或方法）上，缺乏創(chuàng)新性； 有些項目申請的研究內(nèi)容，只重視實驗室模擬條件下的研究工作，特別是過分強(qiáng)調(diào)分子水平的研究，而對田間條件下的研究與驗證工作重視不夠； 部分項目申請缺乏對科學(xué)問題的凝練，研究內(nèi)容寬泛，研究深度不夠，研究工作的系統(tǒng)性和連續(xù)性不強(qiáng)。存在的問題存在的問題注意事項注意事項 形式和內(nèi)容統(tǒng)一形式和內(nèi)容統(tǒng)一 全角（，。）半角全角（，。）半角(,.) (,.) 排版排版 編號編號 充分準(zhǔn)備充分準(zhǔn)備 各項都要認(rèn)真填寫（太精煉等于沒講，太泛泛各項都要認(rèn)真填寫（太精煉等于沒講，太泛泛也等于沒有，要圖表結(jié)合，標(biāo)注文獻(xiàn)）也等于沒有，要圖表結(jié)合，標(biāo)注文獻(xiàn)） 多征求意見（多征求意見（江蘇省農(nóng)科院江蘇省農(nóng)科院） （別人有疑問，就說明闡述方面不夠清楚，申（別人有疑問，就說明闡述方面不夠清楚，申辯機(jī)會很小，集體決定）辯機(jī)會很小，集體決定） 沒有不好