注射用水質(zhì)量檢查

1、藥品生產(chǎn)中注射用水的質(zhì)量檢測(cè)摘要：目的 考察注射用水作為藥品生產(chǎn)特別是生物制品生產(chǎn)中的主要溶劑的質(zhì)量。方法 按 2005年版中國(guó)藥典(二部) 収載的注射用水檢測(cè)項(xiàng)目及企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相關(guān)檢查。結(jié)果 對(duì)某企業(yè)注射用水系統(tǒng) 1#用水點(diǎn)的注射用水的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，注射用水的質(zhì)量符合要求。結(jié)論 某企業(yè)生產(chǎn)的 1#用水點(diǎn)的注射用水是合格的，可以用于藥品生產(chǎn)。關(guān)鍵詞： 注射用水，藥品生產(chǎn)，質(zhì)量控制，內(nèi)毒素，微生物 英文題目Abstract: Objective To investigate the production of water for injection drugs, especially as

2、the production of biological products, the quality of the main solvent. Methods according to the 2005 version of "Chinese Pharmacopoeia (2)" collection of water for injection containing the test items and corporate internal control standards and relevant examination. The results the water

3、injection system of an enterprise # 1 water point for testing the quality of water for injection, injection of water quality to meet the requirements.Conclusion The production of a water point # 1 is qualified water for injection, can be used for pharmaceutical production.Key Word: water for injecti

4、on, pharmaceutical manufacture, quality contro，l endotoxin ,microbe1概述 藥品生產(chǎn)工藝中使用的水主要包括飲用水、純化水、注射用水、無(wú)菌注射用水。其中注射用水(Water For Injecti on,WFI)指用于溶解或稀釋注射用的藥物或制劑，或者用于制備無(wú)菌的注射用水的水。在 2005版藥典中規(guī)定為純化水經(jīng)蒸餾所得的水， 歐洲和美國(guó)藥典則要求至少由飲用水制備。 而藥典規(guī)定，純化水為經(jīng)蒸餾法、 離子交換法、反滲透法或其他適宜方法制得的供藥用水， 不含任 何附加劑， 故注射用水又被稱為重蒸餾水。 注射用水必須在防止內(nèi)毒素產(chǎn)生的設(shè)

5、計(jì)條件下生產(chǎn)、 貯 藏及分裝。其質(zhì)量應(yīng)符合藥典二部注射用水項(xiàng)下的規(guī)定。注射用水是制藥行業(yè)中一種被廣泛使用的物料，一般可作為配制注射劑的溶劑或稀釋劑及注 射用容器的精洗， 也可作為滴眼劑配制的溶劑。 因此，注射用水的質(zhì)量是決定最終藥物成品的重要 因素。要保證各用水點(diǎn)的注射用水質(zhì)量符合規(guī)定，就必須保證整個(gè)注射用水系統(tǒng)符合質(zhì)量要求。中 國(guó)藥典 2000年版規(guī)定只能用蒸餾法制備注射用水， 且一般要求至少采用三效以上的蒸餾水機(jī)， 2005 版藥典中也規(guī)定采用蒸餾法為注射用水制備的法定方法。某企業(yè)采用的多效蒸餾水機(jī)制備注射用 水，整個(gè)注射用水系統(tǒng)符合我國(guó) GMP 驗(yàn)證要求。該系統(tǒng)會(huì)定期或根據(jù)滅菌周期及具體

6、情況進(jìn)行嚴(yán) 格的消毒滅菌工作，以保證系統(tǒng)隨時(shí)處于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制范圍內(nèi)。隨著國(guó)內(nèi)眾多制藥企業(yè)對(duì)藥品生產(chǎn)驗(yàn)證的認(rèn)識(shí)不斷加深，注射用水系統(tǒng)的驗(yàn)證也逐漸受到重 視，藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范實(shí)施指南 （2001）也對(duì)注射用水質(zhì)量控制的相關(guān)問(wèn)題做出了明確的驗(yàn) 證指導(dǎo)。本文通過(guò)對(duì)某制藥廠注射用水系統(tǒng)的一個(gè)用水點(diǎn)取樣進(jìn)行相關(guān)質(zhì)量檢查， 并對(duì)注射用水的 質(zhì)量控制的幾個(gè)重要因素進(jìn)行討論。2試驗(yàn)部分2.1 樣品來(lái)源 本制藥廠多效蒸餾水機(jī)制備的注射用水 1#用水點(diǎn)2.2 檢驗(yàn)依據(jù) 中國(guó)藥典 2005 年版及企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)2.3 試驗(yàn)材料儀器與器材 PH計(jì)（PE20）,電子天平（AB204-S）,電熱干燥箱（DL-101-1）

7、 , STV6開放式無(wú) 菌檢查薄膜濾器（KDCB330），漩渦混合器（XW-90A），恒溫儀（TAL-40D），小燒杯，50ml納氏比色 管，蒸發(fā)皿，試管，電爐， 1ml 移液管， 10ml 移液管，具塞量筒，紫外燈2.3.2 試劑 苯二甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，硝酸，硝酸銀試液，氯化鋇試液，草 酸銨試液， 10%氯化鉀溶液， 0.1%二苯胺硫酸溶液，固體硝酸鉀，固體亞硝酸鈉，堿性碘化汞鉀試 液，稀硫酸，高錳酸鉀滴定液（0.02mol/L）標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，鱟試劑（批號(hào)：0804260,規(guī)格：0.25EU/ml, 湛江博康海洋生物有限公司），細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：080102,規(guī)格：

8、15EU/支，湛江博 康海洋生物有限公司），BET水（批號(hào)：0903180,規(guī)格：50ml/瓶，湛江安度斯生物有限公司），無(wú) 菌氯化鈉 -蛋白胨緩沖液，膽鹽乳糖培養(yǎng)基，2.4 一般試驗(yàn)記錄及結(jié)果2.4.1 性狀檢查 取樣品 20ml 于小燒杯中， 置于白色背景下觀察。 本品為無(wú)色澄清液體； 無(wú)臭， 無(wú)味。結(jié)論：符合規(guī)定。2.4.2 PH值測(cè)定 儀器：PH計(jì)（編號(hào)JY-039）;檢測(cè)溫度：25C ；定位緩沖液：苯二甲酸鹽便準(zhǔn)緩沖液PH=4.01;核對(duì)緩沖液：磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 PH=6.86測(cè)定份數(shù)12平均酸度（PH）6.286.266.3結(jié)論：符合規(guī)定氨 取樣品50ml，加堿性碘化汞鉀試液2ml

9、，放置15分鐘，觀察無(wú)色。【如顯色，與氯化 銨溶液（取氯化銨31.5mg，加無(wú)氨水適量使溶解并稀釋成 1000ml）1.0ml，加無(wú)氨水48ml與堿性 碘化汞鉀試液2ml制成的對(duì)照液比較，不得更深（0.000 02%）?！拷Y(jié)論：符合規(guī)定氯化物取樣品50ml,加硝酸5滴與硝酸銀試液1ml,觀察，溶液未見渾濁。結(jié)論：符合規(guī)定硫酸鹽 取樣品50ml,加氯化鋇試液2ml,觀察，溶液未見渾濁。結(jié)論：符合規(guī)定鈣鹽 取樣品50ml,加草酸銨試液2ml,觀察，溶液未見渾濁。結(jié)論：符合規(guī)定硝酸鹽 取樣品5ml置于試管中，于冰浴中冷卻，加 10%氯化鉀溶液0.4ml與0.1%二苯胺 硫酸溶液0.1ml，搖勻，緩緩

10、滴加硫酸5ml，搖勻，將試管置于50E水浴中放置15分鐘，溶液產(chǎn) 生的藍(lán)色與標(biāo)準(zhǔn)硝酸鹽溶液（取硝酸鉀0.163g，加水溶解并稀釋至100ml,搖勻，精密量取1ml,加 水稀釋成100ml,在精密量取10ml,加水稀釋成100ml,搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于1卩g NO3 0.3ml, 加無(wú)硝酸鹽的水4.7ml，用同一方法處理后的顏色比較，觀察樣品管的顏色，淺于標(biāo)準(zhǔn)管顏色。結(jié)論：符合規(guī)定亞硝酸鹽 取樣品10ml，置納氏比色管中，加對(duì)氨基本磺酰胺的稀鹽酸溶液（1 100） 1ml 與鹽酸萘乙二胺溶液（0.1 100 ml,產(chǎn)生的粉紅色，與標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸鹽溶液取亞硝酸鈉0.750g （按 干燥品計(jì)算）加

11、水溶解，稀釋至100ml,搖勻，精密量取1ml,加水稀釋成100ml，搖勻，再精密量取 1ml,加水稀釋成50ml,搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于1卩g） 0.2ml，加無(wú)亞硝酸鹽的水9.8mI,用同 一方法處理后的顏色比較，觀察樣品管顏色，淺于標(biāo)準(zhǔn)管顏色。結(jié)論：符合規(guī)定二氧化碳 取樣品25ml,置50ml具塞量筒中，加氫氧化鈣試液25ml,密塞振搖，放置，1小 時(shí)內(nèi)未見渾濁。易氧化物 取樣品100ml,加稀硫酸10ml,煮沸后，加高錳酸鉀滴定液（0.02mol/L） 0.10ml， 再煮沸10min，觀察，粉紅色未完全消失。結(jié)論：符合規(guī)定2. 4.11不揮發(fā)物 取樣品100ml，置105C恒重的

12、蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，并在105C干燥至恒重。記錄：恒重蒸發(fā)皿重（ml） :97.6327g 蒸發(fā)后恒重（m2） :97.6329g計(jì)算：遺留殘?jiān)?m2-m1=0.2mg結(jié)論：符合規(guī)定重金屬 取樣品50ml于納氏比色管中，加水18.5ml,蒸發(fā)至20ml,放冷，加醋酸鹽緩沖液（PH3,5） 2ml與水適量使成25ml,加硫代乙酰胺試液2ml,搖勻，放置2min，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液1.5ml 加水18.5ml用同一方法處理后的顏色比較，樣品管顏色淺于標(biāo)準(zhǔn)管顏色。結(jié)論：符合規(guī)定2.5微生物限度檢查細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)2.5.1- 1實(shí)驗(yàn)方法：薄膜過(guò)濾法；使用儀器：STV6開放式無(wú)菌檢查薄膜濾器。2.

13、5.1- 2供試液的制備：取樣品200ml，作為供試溶液。2.5.1- 3培養(yǎng)條件：細(xì)菌在30-35E培養(yǎng)，霉菌、酵母菌在23-28E培養(yǎng)，分別在24h、48h、72h 計(jì)數(shù)，細(xì)菌依48h為準(zhǔn)，霉菌、酵母菌依72h為準(zhǔn)。培養(yǎng)時(shí)間與計(jì)數(shù)24h48h72h細(xì)菌霉菌酵母菌細(xì)菌霉菌酵母菌細(xì)菌霉菌酵母菌000000000陰性對(duì)照細(xì)菌一一霉菌一一酵母菌一一結(jié)果：細(xì)菌、霉菌、酵母菌總數(shù)為 0。大腸埃希菌檢測(cè)2.5.2- 1供試液的制備 取樣品10ml,加90mlPH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，搖勻，作為供 試溶液。2.5.2- 2增菌實(shí)驗(yàn) 取膽鹽乳糖培養(yǎng)基3份，每份100ml,2份分別加入10ml供試

14、品溶液，其中一份加入50-100個(gè)對(duì)照菌作陽(yáng)性對(duì)照，第3份加入稀釋劑作陰性對(duì)照，36±C培養(yǎng)18-24小時(shí)，必 要時(shí)可延長(zhǎng)至48小時(shí)。2.5.2- 3 MUG試驗(yàn) 取上述3份培養(yǎng)物各0.2ml,分別接種至5mlMUG培養(yǎng)基中，36±C培養(yǎng)， 在5h和24h時(shí)取出未接種的MUG作本底對(duì)照，在366nm紫外光下觀察。結(jié)果記錄如下：時(shí)間樣品陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照本底對(duì)照5h-+-24h-+-在上述培養(yǎng)基中加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液觀察樣品-陰性對(duì)照-陽(yáng)性對(duì)照+本底對(duì)照-女口 MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，判斷出檢出大腸桿菌；女口MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陰性，或者M(jìn)UG陰性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)物

15、劃線接種于曙紅亞 甲監(jiān)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18-24h菌落形態(tài)是否符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定'若平板上生長(zhǎng)的菌落符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，應(yīng)進(jìn)行分離、純化、染色鏡檢和生化實(shí)驗(yàn)， 確定是否為大腸埃希菌。結(jié)果：未檢出大腸埃希菌。結(jié)論：本品按中國(guó)藥典2005年版二部檢驗(yàn)，結(jié)果符合規(guī)定2.6細(xì)菌內(nèi)毒素檢查試劑名稱批號(hào)規(guī)格來(lái)源鱟試劑08042600.25EU/ml湛江博康海洋生物有限公司細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品08010215EU/支湛江博康海洋生物有限公司檢杳用水（BET水）090318050ml/瓶湛江安度斯生物有限公司細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的制備 取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，加 BET水1.5ml,于漩

16、渦混合 器上混合15min,再加BET水稀釋如下：10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml每稀釋一步均在漩渦混合器上混合 30s，取0.5EU/ml作細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品陽(yáng)性對(duì)照溶液。供試品溶液的制備 取樣品直接試驗(yàn)。每稀釋一步均在漩渦混合器上混合30s。264供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備取細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)原液10EU/ml,再加供試品溶液稀釋如下：10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml每稀釋一步均在漩渦混合器上混合 30s，取0.5 （EU/ml）作供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。檢查方法 取裝有0.1ml的鱟試劑8支，其中2支分別加入供試品溶液0.1ml作為供試品管；2支加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為

17、陰性對(duì)照；2支加入細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照；2支加入供試品陽(yáng)性對(duì)照液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照管，搖勻，37±C的水浴中，（或者其它適宜的恒溫儀器中）保溫602分鐘，依法觀察，記錄如下：實(shí)驗(yàn)條件：保溫：37r ；保溫時(shí)間：1小時(shí)陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照供試品陽(yáng)性對(duì)照供試品結(jié)論+ +- -+ +- -符合規(guī)定如果供試品中一管為（+）, 管為（-）,則按上述方法另取4支供試品管加倍復(fù) 試。結(jié)論：本品按企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果符合規(guī)定2.7試驗(yàn)結(jié)果記錄品名注射用水取樣點(diǎn)1#檢驗(yàn)依據(jù)中國(guó)藥典2005年版及企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)檢杳項(xiàng)目檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果性狀應(yīng)為無(wú)色澄清液體，無(wú) 臭，無(wú)味無(wú)色澄清液體，無(wú)臭，無(wú) 味P

18、H值PH 應(yīng)為 5.0-7.06.3氨< 0.00002%符合規(guī)定氯化物不得渾濁符合規(guī)定硫酸鹽不得渾濁符合規(guī)定鈣鹽不得渾濁符合規(guī)定硝酸鹽< 0.000006%符合規(guī)定亞硝酸鹽< 0.000002%符合規(guī)定二氧化碳不得出現(xiàn)渾濁符合規(guī)定易氧化物粉紅色不得完全消失符合規(guī)定不揮發(fā)物遺留殘?jiān)坏眠^(guò)1mg0.2mg重金屬< 0.00003%符合規(guī)定微生物限度細(xì)菌、霉菌、酵母菌總數(shù)不得過(guò)10/100ml符合規(guī)定大腸埃布困不得檢出未檢出細(xì)菌內(nèi)毒素每1ml注射用水中內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.25EU符合規(guī)定3 .結(jié)論 某企業(yè)的注射用水按中國(guó)藥典2005年版及企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果符合規(guī)定4.

19、討論4.1在實(shí)際生產(chǎn)中微生物的檢測(cè)必不可少， 其標(biāo)準(zhǔn)并不能說(shuō)明注射用水允許微生物的存在，只是考 慮取樣過(guò)程可能存在的污染，實(shí)際上注射用水應(yīng)是完全無(wú)菌的。4.2注射用水在實(shí)際使用中通常是冷卻后使用，對(duì)冷卻后的注射用水的保留時(shí)間要做驗(yàn)證。驗(yàn)證 重點(diǎn)在于微生物和內(nèi)毒素。注射用水系統(tǒng)改建或純化水系統(tǒng)改建后， 應(yīng)重新對(duì)注射用水進(jìn)行質(zhì)量檢 測(cè)。4.3對(duì)注射用水進(jìn)行熱力滅菌時(shí)，要求注射用水系統(tǒng)的各個(gè)角落均要達(dá)到蒸汽的設(shè)定溫度并保持一 段時(shí)間，若疏水器選用不當(dāng)，冷凝水不能排出，管網(wǎng)中出現(xiàn)多處冷點(diǎn)，該處不能有效滅菌，系統(tǒng)運(yùn) 轉(zhuǎn)后，可能污染整個(gè)系統(tǒng)或使滅菌周期縮短，從而使注射用水的質(zhì)量檢測(cè)不合格，。4.4多效蒸餾

20、水機(jī)制備注射用水時(shí)，可能出現(xiàn)內(nèi)毒素污染，其原因主要有以下幾點(diǎn)：原水水質(zhì)太 差。多效蒸餾水機(jī)去除細(xì)菌內(nèi)毒素的效果是建立在去離子水中的細(xì)菌內(nèi)毒素控制在一定含量的基礎(chǔ) 上的，因而如果原水過(guò)度受到細(xì)菌內(nèi)毒素的污染， 超出了離子交換樹脂吸附細(xì)菌的能力， 將有較多 的細(xì)菌由料水帶入多效蒸餾水機(jī)，以致生產(chǎn)出的水盡管電導(dǎo)率合格，卻仍會(huì)出現(xiàn)細(xì)菌內(nèi)毒素不合格 的情況。解決方法是在多效蒸餾水機(jī)之前安裝一個(gè)超濾器（0.220.45 ym孔徑），將料水進(jìn)行除菌超濾，以減少細(xì)菌由料水帶入多效蒸餾水機(jī)，提高注射用水質(zhì)量。蒸汽壓力過(guò)大。 蒸汽壓力過(guò)大則熱量過(guò)高，產(chǎn)生過(guò)大的二次蒸汽壓力，將料水液滴擠過(guò)氣液分離裝置而進(jìn)入蒸餾水收

21、集管內(nèi)，影響注射用水質(zhì)量。在實(shí)際中，可通過(guò)觀察各級(jí)效柱上的溫度表示值，及時(shí)調(diào)節(jié)多效蒸餾水機(jī)蒸汽進(jìn) 汽壓力，以保證質(zhì)量。料水潴留。此因不僅影響注射用水的產(chǎn)率更影響其質(zhì)量?？刂坪煤线m的料水流量和蒸汽壓力可防止料水潴留的發(fā)生。 多效蒸餾水機(jī)內(nèi)部蒸餾水管道出現(xiàn)滲漏。 水機(jī)內(nèi)部為 不銹鋼管結(jié)構(gòu)， 長(zhǎng)期使用后， 由于焊接工藝或金屬老化等原因可能出現(xiàn)滲漏。 一旦出現(xiàn)這種情況必 須馬上修復(fù)或者更換。工作人員操作不當(dāng)。這種情況也是屢見不鮮。比如開機(jī)時(shí)，各效柱排污不徹底；關(guān)機(jī)時(shí)，本應(yīng)該先停止進(jìn)料水然后再停止進(jìn)蒸汽， 反之則會(huì)出現(xiàn)料水無(wú)法正常汽化而混入蒸 餾水的情況。因此應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格對(duì)操作人員的培訓(xùn)，并嚴(yán)格依照操作規(guī)程操作設(shè)備。4.5 不揮發(fā)物是水檢測(cè)中最不易控制的因素，它主要受檢測(cè)環(huán)境的影響。多次試驗(yàn)結(jié)果表明，該項(xiàng) 檢測(cè)最好在十萬(wàn)級(jí)的環(huán)境中進(jìn)行， 這樣既能排除環(huán)境因素的干擾， 又能保證結(jié)果的可靠性及真實(shí)性。4.6 在檢測(cè)硝酸鹽時(shí)出現(xiàn)過(guò)對(duì)照不顯色或所有檢測(cè)樣品及對(duì)照都顯色的情況， 主要原因是試驗(yàn)中加 入了硫酸溶液。4.7 在采樣時(shí)，用于細(xì)菌內(nèi)毒素及微生物限度的檢測(cè)樣品必須用相應(yīng)的除熱原容器及滅菌容器采 集，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性。5. 參考文獻(xiàn)1 . 中華人民共和國(guó)藥典第二部 .2005,附錄， 85-88， 93-101， 134， 303,363.