亞硝酸根重氮化-偶聯(lián)反應(yīng)共振散射光譜測定(一).

1、亞硝酸根重氮化-偶聯(lián)反應(yīng)共振散射光譜測定（一）【關(guān)鍵詞】重氮化摘要：目的研究重氮化偶聯(lián)反應(yīng)的共振散射光譜并應(yīng)用于亞硝酸根的測定。方法 利用磺胺 N, N 二甲基苯胺亞硝酸根間發(fā)生的重氮化偶聯(lián)反應(yīng)，通過 共振散射光譜法測定痕量亞硝酸根。結(jié)果方法的線性范圍為 012X10-3g/L，檢出限為 80X10-5g/L。結(jié)論該方法簡單、靈敏度高、選擇性好，用于 蔬菜中亞硝酸根含量的測定，回收率為928%985%。關(guān)鍵詞：重氮化偶聯(lián)反應(yīng)；共振散射光譜；亞硝酸根；磺胺;基苯胺Applicati on and study on res onance scatteri ng spectra of diazoti

2、zati on-coupling reacti onAbstract : Objective To study resonance light scattering(RLS) spectra ofdiazotizatio n-coupli ng react ion and establish a new method for the determ in ati on oftrace n itrite.Methods RLS spectra was used to determ ine trace nitrite by thediazotizati on-coupli ng react ion

3、betwee n sulfa nilic amideN,Ndimethyl an ili nenitrite.Results The lin ear range of this method was on 12X10-3g/L and the detect ionlimit was 80X10-5g/L.Conclusion The method were simple，with high sensitivity andgood selectivity.It was used to determ ine trace nitrite in vegetable samples.Therecover

4、y was 92.8%98.5 %.Key words : diazotizationcoupling reaction； resonance scatteringspectra ； nitrite;sulfanilic amide;N,Ndimethyl aniline亞硝酸根廣泛存在于環(huán)境、水體、食品和土壤中，它與脂肪族和芳香族的 胺類化合物反應(yīng)生成的 N-亞硝胺化合物一直是公認(rèn)的強(qiáng)致癌物，因此，亞硝酸 根是環(huán)境、水質(zhì)、食品等檢測的重要指標(biāo)之一。檢測亞硝酸根的方法有光度法 1、熒光法2、電化學(xué)法3、色譜法4等。共振光散射是一種新 分析技術(shù)，多用于蛋白質(zhì)、核酸等大分子的分析測定5。目前，基于

5、重氮化 偶聯(lián)反應(yīng)共振散射光譜法測定亞硝酸根的報(bào)道較少。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，亞硝酸根磺胺 N, N 二甲基苯胺重氮化-偶聯(lián)反應(yīng)體系的反應(yīng)產(chǎn)物可產(chǎn)生強(qiáng)烈的共振光散射現(xiàn) 象。我們對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行研究，建立了測定痕量亞硝酸根的新方法。1 材料與方法11 儀器和試劑 970CRT 熒光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；紫外可見分光光 度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；NanoZS9（納米粒度與 Zeta 電位分析 儀（英國 Malvern 公司）。亞硝酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液：用干燥的 NaNO2 粉末配制含亞硝 酸根為1mg/ml 貯備液，臨用時(shí)稀釋為 10 卩 g/ml ;磺胺溶液：58X10-N, N 二甲3mol/L （用

6、乙醇溶解后再用水定容）;N, N 二甲基苯胺溶液：0.015mol/L （稱取 09063gN,N 二甲基苯胺，加 10mol/L 鹽酸溶液 250ml，待其溶解后用水稀釋至 500ml）;乙酸鈉溶液：40mol/L ,水為 16MQ 的高純水。所用試劑均為分析純。12 實(shí)驗(yàn)方法 在 2 支 25ml 比色管中，依次加入磺胺溶液 30ml，其中 1 支 加入10 卩 g/ml 的亞硝酸根溶液 10ml 或適量樣品，另 1 支為試劑空白，稀釋到 10ml，搖勻，靜置 15min，加入 0015mo/L 的 N,N 二甲基苯胺溶液 30ml，4mol /L 的乙酸鈉溶液 14ml，定容至 25ml

7、，搖勻，靜置 25min。以試劑空白為參比,在激發(fā)波長、發(fā)射波長均為 533nm 的條件下，測定溶液的共振散射光強(qiáng)度，其 中含亞硝酸根者為 I，試劑空白為 10,計(jì)算 1（ 1=1 -I0）。13 樣品分析 取新鮮白菜、土豆樣品洗凈，晾干。稱取 30g 樣品在研缽中 研碎，加入 60ml 蒸餾水于 60E水浴鍋中浸泡 10min,濾入 100ml 容量瓶中，定 容。取白菜、土豆樣各 05ml，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測定，樣品中亞硝酸根的含量由 式（1）計(jì)算得到。X=CXV1 V2XW（1）式中：X-樣品中亞硝酸根的含量（卩 g/g） ; C-由回歸方程計(jì)算得到比色管中 亞硝酸根的總含量（卩 g）; V

8、1-浸取液的總體積；V2-取樣體積；W樣品的質(zhì)量。2 結(jié)果21 光譜 以蒸餾水為參比， 測定磺胺 N,N 二甲基苯胺亞硝酸根體系的吸收 光譜 （圖1）和共振散射光譜（圖 2）。由圖 l 可知，磺胺與亞硝酸根反應(yīng)生成的重 氮鹽在可見光區(qū)無吸收，在弱堿性介質(zhì)中重氮鹽與N,N 二甲基苯胺反應(yīng)生成的偶聯(lián)產(chǎn)物在 370 和 500nm 處有吸收，并且隨著亞硝酸根量的增加其吸收逐漸增 強(qiáng)。由圖 2 可知，磺胺、N, N 二甲基苯胺及生成的重氮鹽的共振散射光強(qiáng)度均 為 0,與基線重合，偶聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生使得共振散射光明顯增強(qiáng)，在468 和 533nm處產(chǎn)生 2 個(gè)共振散射峰，533nm 處的共振散射光強(qiáng)度大且穩(wěn)

9、定，其強(qiáng)度與亞硝 酸根濃度呈正比，因此，實(shí)驗(yàn)選擇 533nm 作為定量測定波長。利用激光納米粒 度儀測得偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)物的平均粒徑為 342nm 說明在反應(yīng)條件下偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)物 發(fā)生聚集，聚集產(chǎn)物具有較大的平均粒徑從而使得共振散射光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。1:磺胺；2: 1+NO-2 1.0ml;3:1+N,N 二甲基苯胺 + 乙酸鈉；4: 3+NO-2 1.0ml ; 5:3+NO-2 2.0ml ; 6: 3+NO-2 3.0ml圖 1 吸收光譜（略）1:磺胺；2: 1+NO2-1.0ml;3:1+N,N 二甲基苯胺 + 乙酸鈉；4: 3+NO2- 1.0ml ; 5:3+NO2-2.0ml; 6: 3+

10、NO2-3.0ml圖 2 共振散射光譜（略）22 酸度的影響按照實(shí)驗(yàn)方法改變鹽酸的加入量。結(jié)果表明，當(dāng)鹽酸的用 量為 Oml時(shí)，體系的共振散射光最強(qiáng)，且穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好。因此，實(shí)驗(yàn)過 程中不直接加入鹽酸，體系的酸性環(huán)境由 N,N 二甲基苯胺溶液中的酸提供。23 乙酸鈉用量的影響 按照實(shí)驗(yàn)方法改變乙酸鈉的加入量。結(jié)果表明，乙 酸鈉用量為 14ml 時(shí)體系的共振散射光強(qiáng)度有最大值，故選用乙酸鈉用量為 14ml。24 磺胺用量的影響 按照實(shí)驗(yàn)方法改變磺胺的加入量。結(jié)果表明，磺胺的 用量為30ml 時(shí)體系的共振散射光強(qiáng)度較大且重現(xiàn)性好。 因此， 實(shí)驗(yàn)選用磺胺的 加入量為 30ml。25 偶聯(lián)試劑 N

11、,N 二甲基苯胺用量的影響 按照實(shí)驗(yàn)方法改變 N,N 二甲基苯 胺的加入量。結(jié)果表明，N, N 二甲基苯胺用量在 30ml 時(shí)體系的共振散射光強(qiáng) 度最大且穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)選用 N, N 二甲基苯胺的用量為 30ml。26 重氮化反應(yīng)時(shí)間的影響 按實(shí)驗(yàn)方法改變重氮化反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行測定。結(jié) 果表明，重氮化反應(yīng)時(shí)間為 15min 時(shí)共振散射光強(qiáng)度最大。本實(shí)驗(yàn)選擇重氮化 的反應(yīng)時(shí)間為15mi n。27 偶聯(lián)產(chǎn)物的穩(wěn)定性 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，偶聯(lián)產(chǎn)物的共振散射光強(qiáng)度在10min 內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定并在 70min 之內(nèi)保持不變，在 24h 之內(nèi)基本不變，即產(chǎn)物的共振散射 光強(qiáng)度穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)選擇靜置時(shí)間為 25mi n。28 工作

12、曲線的繪制按照實(shí)驗(yàn)方法改變亞硝酸根的加入量，測其共振散射 光強(qiáng)度。結(jié)果表明，10 卩 g/ml 亞硝酸根的加入量在 03.0ml（012X10-3g/L） 時(shí)，線性關(guān)系良好。用最小二乘法進(jìn)行回歸，求得回歸方程為：A=-26007+0707C（卩 g/L）回歸系數(shù)為：R=09983 按 12 次空白實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的 3 倍除以工作曲線的斜率，得到方法的檢出限為 80X10-5g/L029 共存離子的影響 按照實(shí)驗(yàn)方法，當(dāng)亞硝酸根含量為 10 卩 g/25ml，相對(duì) 誤差w10%時(shí)，對(duì) 23 種常見離子進(jìn)行了干擾實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各種離子允許 共存的倍數(shù)為 K+，Ca2+，NO3-，Mg2+ Ba2

13、+，Br-,S042-500 倍；Sn2+, F-， PO43-200 倍；Ni2+、Se2+100 倍；Ge4+20（咅；Cu2+ Fe2+，I-，S2O32-10 倍；Zn2+,Ag+, Co2+，A13+，Hg2+, Mn2+5 咅。01mol/L 的酒石酸鈉 10ml，可掩蔽 100 倍的 Co2+ 50 倍的Hg2+和 Mn2+ 20 倍的 Cu2+ 01mol/L 的檸檬酸三鈉 10ml，可使 Zn2+允許共存的倍數(shù)提高到 100 倍。210 樣品分析結(jié)果對(duì)白菜、土豆樣品進(jìn)行測定，測得白菜、土豆樣中亞硝 酸根的含量分別為 36.7 和 7.3 卩 g/g，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)測得回收率為

14、985%和 928%o3 小結(jié)該方法簡單，靈敏度高，選擇性好，可用于蔬菜中亞硝酸根含量的測定， 回收率為 92.8%98.5%。參考文獻(xiàn)1Adnan Aydin,Ozgen Ercan,Sulin Tascioglu.A novel method for thespectrophotometric determ in ati on of nitrite in waterJ.Talanta,2005 ，66(5) : 1181-1186.2董存智，秦利鴻.蔬菜中痕量亞硝酸根催化熒光光度法測定J.中 國公共衛(wèi)生,2005,21(11) : 1400-1401.3Nikolaos Karousos ，Lok Cee Chong，Caroline Ewen,et al.eva luati on ofmultifu nctional in dicator for the electroa nalytical determ in ation of nitrite J.Electrochimica Acta,2005,50(9): 18791884.4施家威，顏金良.離子色譜法快速測定食品中的硝酸鹽、亞硝酸鹽J.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)