分子生物學(xué)試題及答案(整理版)

1、分子生物學(xué)試題及答案一、名詞解釋1 . cDNA與cccDNA: cDNA是由mRNAB過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2 .標(biāo)準(zhǔn)折疊單位：蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)單元螺旋與3 -折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準(zhǔn)折疊單位。3 . CAP環(huán)腺甘酸（cAMP受體蛋白 CRP（cAMP receptor protein ）, cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合 物稱激活蛋白 CAP（ cAMP activated pr

2、otein ）4 .回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。5 . micRNA 互補干擾 RNA稱反義 RNA與mRNA列互補，可抑制 mRNA勺翻譯。6 .核酶：具有催化活性的 RNA在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。7 模體 ：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域8 .信號肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有1536個氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。9 弱化子 ：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。10 魔斑 ：當(dāng)細(xì)菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細(xì)菌將會產(chǎn)生一個應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達(dá)。產(chǎn)生

3、這一應(yīng)急反應(yīng)的信號是鳥昔四磷酸（ppGpp）和鳥昔五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調(diào)控子或稱為魔斑。11 .上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA -35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。12 . DNA探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。13 . SD序列：是核糖體與 mRN砧合序列，對翻譯起到調(diào)控作用。14 單克隆抗體 ：只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。15 .考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DN期體，保留噬菌體兩端的C

4、OSK,與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16 .藍(lán)-白斑篩選：含LacZ基因（編碼3半乳糖甘酶）該酶能分解生色底物 X-gal（5-澳-4-氯-3- 口引味-3-D- 半乳糖甘）產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)- 白斑篩選。17 .順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。18 . Klenow酶：DNAM合酶I大片段，只是從 DNA聚合酶I全酶中去除了 5' f 3'外切酶活性19 .錨定PCR用于擴增已知一端序列的目的DNA在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚d

5、C和已知的序列作為引物進行PCRF增。20 融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時表達(dá)翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。二、填 空1 . DNA的物理圖譜是 DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解 ）片段的排列順序。2 RNA 酶的剪切分為（ 自體催化 ） 、 （ 異體催化 ）兩種類型。3 原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1 ） 、 （ IF-2 ）和（ IF-3 ） 。4 蛋白質(zhì)的跨膜需要（信號肽 ）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)） 。5 啟動子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（ 核心啟動子元件 ）和（ 上游啟動子元件） 。6 .分子生物學(xué)的研究內(nèi)

6、容主要包含（結(jié)構(gòu)分子生物學(xué) ）、（基因表達(dá)與調(diào)控 ）、（DNAM組技術(shù)）三部分。7 .證明DN蝠遺傳物質(zhì)的兩個關(guān)鍵性實驗是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌體感染大腸桿菌）這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：（生物體吸收的外源 DNA改變了其遺傳潛能）。8 . hnRNA mRNA間的差別主要有兩點：（hnRNA轉(zhuǎn)變?yōu)?mRNA勺過程中經(jīng)過剪接，）、（mRNA勺5'末端被加上一個 m7pGppp帽子，在 mRNA3末端多了一個多聚腺甘酸（polyA）尾巴）。9 .蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點是（ 亞基對DNA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影響） 、

7、（ 活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉 ） 。10蛋白質(zhì)折疊機制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核 ） 、 （ 結(jié)構(gòu)充實 ） 、 （ 最后重排 ） 。11 半乳糖對細(xì)菌有雙重作用； 一方面 （可以作為碳源供細(xì)胞生長 ） ； 另一方面 （ 它又是細(xì)胞壁的成分） 。所以需要一個不依賴于cAMP CRP 的啟動子S2 進行本底水平的永久型合成；同時需要一個依賴于cAMP-CRP勺啟動子S1對高水平合成進行調(diào)節(jié)。有G時轉(zhuǎn)錄從（S2 ）開始，無G時轉(zhuǎn)錄從（S1 ）開始。12 DNA重組技術(shù)也稱為（基因克隆）或（分子克?。?。最終目的是（把一個生物體中的遺傳信息DNA專入另一個生物體）。典型的DNA重組實

8、驗通常包含以下幾個步驟：提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一 DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNg子。將這個重組 DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。對那些吸收了重組 DNA的受體細(xì)胞進行篩選和鑒定。對含有重組DNA的細(xì)胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達(dá)。13、質(zhì)粒的復(fù)制類型有兩種：受到宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制的稱為（嚴(yán)緊型質(zhì)粒 ） ，不受宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制稱為（ 松弛型質(zhì)粒 ） 。14. PCR的反應(yīng)體系要具有以下條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物（約20個堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：

9、TagDNAm合酶。c、 dNTPd、作為模板的目的 DNA序列15. PCR的基本反應(yīng)過程包括：（變性）、（退火）、（延伸）三個階段。16、轉(zhuǎn)基因動物的基本過程通常包括：將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€受精卵或胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞核中；接種后的受精卵或胚胎干細(xì)胞移植到雌性的子宮；完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因；利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動物作為種畜，培育新的純合系。17 .雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生是由（ 脾B）細(xì)胞與（骨髓瘤）細(xì)胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細(xì)胞）可以利用次黃 喋吟，（骨細(xì)胞）提供細(xì)胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。18 隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體 ） 、第二代（ 單克隆抗

10、體 ） 、第三代（ 基因工程抗體） 。19 目前對昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（外源毒蛋白基因 ） ； （ 擾亂昆蟲正常生活周期的基因 ） ； （ 對病毒基因進行修飾） 。20 .哺乳類RN咪合酶H啟動子中常見的元件TATA GC CAAT所對應(yīng)的反式作用蛋白因子分別是（TFIID ）、（ SP-1 ）和（ CTF/NF1 ） 。21 . RNA聚合酶H的基本車t錄因子有、TFH -A、TFH -B、TFII-D、TFH -E他們的結(jié)合順序是：（D、AB E ）。其中TFII-D 的功能是（與TATA盒結(jié)合）。22 .與DNA吉合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因

11、子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下幾種（螺旋- 轉(zhuǎn)角 - 螺旋 ） 、 （ 鋅指模體 ） 、 （堿性 - 亮氨酸拉鏈模體 ） 。23限制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是（在對稱軸 5' 側(cè)切割產(chǎn)生5' 粘端 ） 、 （ 在對稱軸 3' 側(cè)切割產(chǎn)生 3' 粘端 ） （ 在對稱軸處切割產(chǎn)生平段） 。24.質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（SC構(gòu)型）、（oc構(gòu)型）、（L構(gòu)型）。在電泳中最前面的是（ SC 構(gòu)型 ）。25外源基因表達(dá)系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌 ） 、 （ 酵母 ） 、 （ 昆蟲 ）和（ 哺乳類細(xì)胞表） 。26.轉(zhuǎn)基因動物常用的方法有：（逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法）

12、、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細(xì)胞法）。三、簡 答1.分別說出5種以上RNA勺功能？轉(zhuǎn)運RNA tRNA轉(zhuǎn)運氨基酸；核蛋白體 RNA rRNA核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNAg白質(zhì)合成模板 ； 不均一核 RNAhnRNA成熟 mRNA勺前體 ；小核 RNA snRNA參與hnRNA勺剪接；小胞漿 RNA scRNA/7SL-RNA 蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA對基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的 RNA2原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA - TATAAT 起始位點-35 -10真核

13、生物增強子-GC -CAAT-TATAA 5mGpp-起始位點-110 -70 -253對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個以上，易于用作選擇，通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。d、改變復(fù)制子，變嚴(yán)緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件4.舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后

14、通過雜交對比找到目的基因。例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的mRNA因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達(dá)的基因。5雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞，加聚乙二醇（PEG促進細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃喋吟、氨基蝶吟、 T）生長出來的脾 B-骨髓瘤融合細(xì)胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。細(xì)胞融合物中包含：脾-脾融合細(xì)胞：不能生長，脾細(xì)胞不能體外培養(yǎng)。骨- 骨融合細(xì)胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途 徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對葉酸還原 酶有抑制作用，因此不能生長。骨-脾融合細(xì)胞：在 HAT中能生長，脾細(xì)胞

15、可以利用次黃喋吟，骨細(xì)胞提供細(xì)胞分裂功能。6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核甘酸鏈終止劑一2, 3,-雙脫氧核甘酸終止 DNA勺延長。由于它缺少形成 3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH, 一旦參入到DNA鏈中，此DNAB1就不能進一步延長。根據(jù)堿基配對原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNM畛入到正常延長的 DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導(dǎo)致脫氧核甘酸鏈延長的終止；二是參入 dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTR根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長短不一的 DNA段。方法是分成四組分別為ddAMP

16、 ddGMP ddCMP ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。7、激活蛋白（CAB對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺甘酸（cAMB受體蛋白CRP（ cAMP receptor protein ）, cAMP與CRP吉合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋 白 CAP（ cAMPactivated protein ） 。當(dāng)大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時， CAP 合成量增加， CAP 具有激活乳糖（Lac）等啟動子的功能。 一些依賴于CRPW啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的-35區(qū)序列特征（TTGACA。因此RNA合合酶難以與其結(jié)合。CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結(jié)合常數(shù)。

17、主要表現(xiàn)以下二方面： CAP 通過改變啟動子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向 , 以便與 -10 區(qū)結(jié)合，起到取代 -35 區(qū)功能的作用。CAP還能抑制RNAm合酶與DNA中其它位點的結(jié)合，從而提高與其特定啟動子結(jié)合的概率。8、典型的DNA1組實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一 DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNg子。b、將這個重組 DN后子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。c、對那些吸收了重組 DNA的受體細(xì)胞進行篩選和鑒定。d、對含有重組 DNA勺細(xì)胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達(dá)。9、基因文庫的構(gòu)

18、建對重組子的篩選舉出3 種方法并簡述過程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭 -白斑篩選或PCRW選、差式篩選、DN琳針多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素） 。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得 抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。如pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼 3半乳糖甘酶）該酶能分解生色底物X-gal（5-澳-4-氯-3- 口引味-3-D-半乳糖甘）產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNAffi入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈

19、白色，以此來篩選重組細(xì)菌。10、說明通過胚胎干細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因動物的基本過程？胚胎干細(xì)胞( embryonic stem cell,ES ) ：是胚胎發(fā)育期的胚細(xì)胞，可以人工培養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細(xì)胞的功能。ES細(xì)胞的培養(yǎng)：分離胚泡的內(nèi)層細(xì)胞團進行培養(yǎng)。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時會分化為肌細(xì)胞、N細(xì)胞等多種功能細(xì)胞，在含有成纖維細(xì)胞中培養(yǎng)時ES將保持分化功能?？梢詫?ES 進行基因操作，不影響它的分化功能可以定點整合，解決了隨機整合的問題。向胚胎干細(xì)胞導(dǎo)入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。蛋白質(zhì)的生物合成(一)名詞解釋1 .翻譯(translation):以mRN的

20、模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質(zhì)因子和酶的參與下，在核糖體上將 mRN粉子上的核甘酸順序表達(dá)為有特定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。2 .密碼子(codon) : mRN的堿基順序與蛋白質(zhì)中氨基酸順序的對應(yīng)關(guān)系是通過密碼實現(xiàn)的，mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。3 密碼的簡并性(degeneracy) ：個氨基酸具有兩個以上密碼子的現(xiàn)象。4 同義密碼子(synonym codon) ：為同種氨基酸編碼的各個密碼子，稱為同義密碼了。5 變偶假說 (wobble hypothesis) ：指反密碼子的前兩個堿基(3 -端) 按照標(biāo)準(zhǔn)與密碼子的前兩個

21、堿基(5 - 端)配對，而反密碼子中的第三個堿墓則有某種程度的變動，使其有可能與幾種不同的堿基配對。6 .移碼突變(frame-shift mutation) :在mRNA中，若插入或刪去一個核甘酸，就會使讀碼發(fā)錯誤，稱 為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。7,同功受體(isoacceptor):轉(zhuǎn)運同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。8 反密碼子 (anticodon) ：指 tRNA 反密碼子環(huán)中的三個核苷酸的序列，在蛋白質(zhì)合成過程中通過堿基配對，識別并結(jié)合到mRNA勺特殊密碼上。9 .多核糖體(polysome) : mRN洞時與若干個核糖體結(jié)合形成的念珠狀結(jié)構(gòu)，稱為多核糖體。

22、(二) 問答題1 參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些? 它們具有什么功能?mRNA蛋白質(zhì)合成的模板；tRNA:蛋白質(zhì)合成的氨基酸運載工具；核糖體：蛋白質(zhì)合成的場所；輔助因子： (a) 起始因子 - 參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成； (b) 延長因子 - 肽鏈的延伸作用； (c) 釋放因子一 - 終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2 遺傳密碼是如何破譯的?提示：三個突破性工作(1) 體外翻譯系統(tǒng)的建立； (2) 核糖體結(jié)合技術(shù)； (3) 核酸的人工合成。3 遺傳密碼有什么特點?(1) 密碼無標(biāo)點：從起始密碼始到終止密碼止，需連續(xù)閱讀，不可中斷。增加或刪除某個核苷酸會發(fā)生移碼突變。(2) 密碼不重疊

23、：組成一個密碼的三個核苷酸只代表一個氨基酸，只使用一次，不重疊使用。(3) 密碼的簡并性： 在密碼子表中， 除 Met 、 Trp 各對應(yīng)一個密碼外， 其余氨基酸均有兩個以上的密碼， 對保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。(4) 變偶假說：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要性不大，因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性。(5) 通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動物線粒體中的UGM是終止密碼而是色氨酸密碼子。(6) 起始密碼子 AUG同時也代表 Met,終止密碼子 UAA UAG UG砸用頻率不同。4.簡述三種RNM

24、蛋白質(zhì)生物合成中的作用。(1)mRNA DNA的遺傳信息通過轉(zhuǎn)錄作用傳遞給mRNA mRNA乍為蛋白質(zhì)合成模板，傳遞遺傳信息，指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。(2)tRNA :蛋白質(zhì)合成中氨基酸運載工具，tRNA的反密碼子與 mRNAb的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信息的轉(zhuǎn)換器。(3)rRNA 核糖體的組分，在形成核糖體的結(jié)構(gòu)和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。5簡述核糖體的活性中心的二位點模型及三位點模型的內(nèi)容。(1) 二位點模型A 位： 氨酰 -tRNA 進入并結(jié)合的部位； P 位： 起始氨酰 -tRNA 或正在延伸

25、的肽基-tRNA 結(jié)合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位。(2)三位點模型 大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P 位外，還存在第三個結(jié)合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結(jié)合無負(fù)載的tRNA及無負(fù)載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。6 氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA 合成酶，形成氨酰-tRNA ，反應(yīng)分兩步進行：(1)活化 需Mg2?？?Mn2+,由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP期復(fù)合物。，(2)轉(zhuǎn)移 在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸一AMP酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA上，形成氨酰-tRNA。7簡述蛋白質(zhì)生物合成過程。蛋白質(zhì)

26、在成可分四個步驟，以大腸桿菌為例：(1) 氨基酸的活化： 游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)在成， 由氨酰 -tRNA 在成酶 催化，消耗1分子ATP,形成氨酰-tRNA。(2) 肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復(fù)合物，整個過程需GTPK解提供能量。(3) 肽鏈的延長：起始復(fù)在物形成后肽鏈即開始延長。首先氨酰-tRNA 結(jié)在到核糖體的 A 位，然后，由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P 位的起始氨基酸或肽酰基形成肽鍵， tRNAf 或空載 tRNA 仍留在 P 位最后核糖體沿mRNA5-3

27、9;方向移動一個密碼子距離，A位上的延長一個氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，全部過程需延伸因子 EF-Tu、EF-Ts,能量由GTP提供。(4) 肽鏈合成終止，當(dāng)核糖體移至終止密碼UAA UAG或UGAM,終止因子 RF-1、RF-2識別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P 位肽酰 -tRNA 水解，釋放肽鏈，在成終止。8 蛋白質(zhì)在成中如何保證其翻譯的正確性?提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對mRNA勺識別，mRNAh的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識別，保證了遺傳信息準(zhǔn)確無誤地轉(zhuǎn)譯；(3)起始因子及延長因子

28、的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA 能進入核糖體 P 位與起始密碼子結(jié)在，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進入肽鏈內(nèi)部；(4)核糖體三位點模型的 E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA 進入 A 位，從而提高翻譯的正確性； (5) 校正作用：氨酰-tRNA 在成酶和tRNA的校正作用；對占據(jù)核糖體 A位的氨酰-tRNA的校對；變異校對即基因內(nèi)校對與基因間校對等多 種校正作用可以保證翻譯的正確。 9原核細(xì)胞和真核細(xì)胞在在成蛋白質(zhì)的起始過程有什么區(qū)別。(1) 起始因子不同：原核為 IF-1 ， IF-2 ， IF-2 ，真核起始因子達(dá)十幾種。(2)

29、起始氨酰 -tRNA 不同：原核為fMet-tRNAf ，真核 Met-tRNAi(3)核糖體不同：原核為 70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為 80S核糖體，分40S和60S 兩種亞基10蛋白質(zhì)在成后的加工修飾有哪些內(nèi)容?提示： (1) 水解修飾； (2) 肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾； (3) 二硫鍵的形成； (4) 輔基的連接及亞基的聚在。11蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)是怎樣形成的 ?提示：蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)。折疊是在自然條件下自發(fā)進行的，在生理條件下，它是熱力學(xué)上最穩(wěn)定的形式，同時離不開環(huán)

30、境因素對它的影響。對于具有四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，其亞基可以由一個基因編碼的相同肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個不同單順反子mRN腐譯，或由多順反子mRN葡譯合成。12真核細(xì)胞與原核細(xì)胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的在成場所?原核細(xì)胞： 70S 核糖體由 30S 和 50S 兩個亞基組成；真核細(xì)胞： 80S 核糖體由 40S 和 60S 兩個亞基組成。 利用放射性同位素標(biāo)記法，通過核糖體的分離證明之。13 . 已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后，進行指紋圖分析。結(jié)果發(fā)

31、現(xiàn)只有一個肽段的差異，測得其基酸順序如下：正常肽段Met-Val-Cys-Val-Arg突變體肽段Met-Ala-Met-Arg( 1 )什么核苷酸插入到什么地方導(dǎo)致了氨基酸順序的改變？( 2 )推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列.提示：有關(guān)氨基酸的簡并密碼分別為Val: GUU GUC GUA GUGArg: CGU CGC CGA CG AGA AGGCys: UGU UGCAla: GCU GCC GCA CGC提示：（1）在正常肽段的第一個 Val的密碼GUA勺G后插入了一個 C ; （2） 正常肽段的核甘酸序列為：AUGGUA UGC GU CG；突變體肽段的核甘酸序列為：A

32、UG GCU AUG CGU14 .試列表比較核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。核酸(Nucleic acids )蛋白質(zhì)(Proteins )DNARNA一級結(jié)構(gòu)Primary structure核甘酸序列AGTTCT或AGUUCU的排歹U順序3, 5,-磷酸二酯鍵氨基酸排列順序 肽鍵二級結(jié)構(gòu)Secondarystructure雙螺旋主要是氫鍵，堿基堆積力配對（莖-環(huán)結(jié)構(gòu)） （同左）有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象(a -helix , 3 一 sheet , 3 -turn ) 氫鍵三級結(jié)構(gòu)Tertiary structure超螺旋RNA空間構(gòu)象一條肽鏈的空間構(gòu)象范德華力氫鍵 疏水作用鹽橋二 硫鍵等四 級 結(jié) 構(gòu)Qua

33、ternarystructure多條肽鏈（或小同蛋白）15 .試比較原核生物與真核生物的翻譯。原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。（1）.起始Met不需甲?；唬?）.無SD序歹U,但需要一個掃描過程；（3） .tRNA先于mRNAf核糖體小亞基結(jié)合；（4）.起始因子比較多；（5）.只一個終止釋放因子。（三）填空題1 .蛋白質(zhì)的生物合成是以mRNA為模板,以 氨酰-tRNA為原料直接供體,以 核糖體 為合成楊所。2 .生物界共有64個密碼子,其中 出個為氨基酸編碼,起始密碼子為 AUG;終止密碼子為UAA 、 UAG、 UGA 。3 .原核生物的起始 tRNA以

34、 tRNAf 表示,真核生物的起始 tRNA以 tRNAi 表示,延伸中 的甲硫氨酰tRNA以tRNAm 表示。4 .植物細(xì)胞中蛋白質(zhì)生物合成可在核糖體 、 .線粒體 和 葉綠體 三種細(xì)胞器內(nèi)進行。5 .延長因子T由Tu和Ts兩個亞基組成，Tu為對熱 不穩(wěn)定蛋白質(zhì)，Ts為對熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)。6 .原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識別終止密碼子UAA、 UAG; RF-2識別 UAA 、 UGA ;真核中的釋放因子只有RF 一種。7 .氨酰-tRNA合成酶對氨基酸 和相應(yīng)的 tRNA有高度的選擇性。8 .原核細(xì)胞的起始氨基酸是 _甲酰甲硫氨酸 ,起始氨酰-tRNA是 甲酰甲硫氨酰-tRNA

35、。9 .原核細(xì)胞核糖體的小亞基上的16SrRNA協(xié)助辨認(rèn)起始密碼子。10 .每形成一個肽鍵要消耗4個高能磷酸鍵,但在合成起始時還需多消耗1個高能磷酸鍵。11 .肽基轉(zhuǎn)移酶在蛋白質(zhì)生物合成中的作用是催化肽鍵 形成和 肽酰-tRNA的水解。12 .肽鏈合成終止時，終止因子進入“ A”位，識別出終止密碼子，同時終止因子使肽基轉(zhuǎn)移酶的催化作用轉(zhuǎn)變?yōu)樗庾饔谩?3 .原核生物的核糖體由30S小亞基和50S 大亞基組成，真核生物核糖體由40S小亞基和 60S 大亞基組成。14 . 蛋白質(zhì)中可進行磷酸化修飾的氨基酸殘基主要為Ser、 Thr、 Tyr。(四)選擇題1 蛋白質(zhì)生物合成的方向是( ) 。從C-

36、N端 定點雙向進行從N端、C端同時進行從N- C端2 不能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器是( ) 。線粒體葉綠體高爾基體核糖體3 真核生物的延伸因子是( ) 。 ETu EF - 2 EF-G EF 一 14 真核生物的釋放因子是( ) 。 RF RF 1 RF 2 RF 35 .能與tRNA反密碼子中的I堿基配對的是()。 A、 G C、 U U U、 C、 A6 蛋白質(zhì)合成所需能量來自 ( ) 。 ATP GTP ATR GTP GTP7 . tRNA的作用是()。將一個氨基酸連接到另一個氨基酸上把氨基酸帶到 mRN前置上將mRN眼到核糖體上增加氨基酸的有效濃度8關(guān)于核糖體的移位，敘述正確的是( )

37、?？蛰dtRNA的脫落發(fā)生在“ A”位上 核糖體沿 mRNA勺3' -5'方向相對移動核糖體沿 mRNA勺5' -3'方向相對移動核糖體在mRNAb一次移動的距離相當(dāng)于二個核甘酸的長度9在蛋白質(zhì)合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵( ) 。肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵 氨酰一tRNA 與核糖體的“A， 位點結(jié)合核糖體沿mRN般動fMettRNAf與mRNA勺起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合10在真核細(xì)胞中肽鏈合成的終止原因是( ) 。已達(dá)到mRNA的盡頭具有特異的tRNA識別終止密碼子終止密碼子本身具有酯酶作用，可水解肽酰與tRNA之是的酯鍵終止密碼子被終止因子(RF

38、) 所識別11蛋白質(zhì)生物合成中的終止密碼是( ) 。UAA UAU UAC UAGUGA12根據(jù)擺動假說，當(dāng) tRNA 反密碼子第1 位堿基是 I 時，能夠識別哪幾種密碼子( )ACGT U13下列哪些因子是真核生物蛋白質(zhì)合成的起始因子( ) 。 IF1 IF2 eIF2 eIF4 elF4A14蛋白質(zhì)生物合成具有下列哪些特征( ) 。氨基酸必須活化需要消耗能量每延長一個氨基酸必須經(jīng)過進位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個步驟合成月t鏈由C端向N端不斷延長新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質(zhì)15下列哪些內(nèi)容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、修飾() 。切除N-端Met( ) 。氨酰tRNA 進入核糖體A 位切除內(nèi)含子，

39、連接外顯子切除信號肽形成二硫鍵 氨的側(cè)鏈修飾 16蛋白質(zhì)生物合成過程中，下列哪些步驟需要消耗能量氨基酸分子的活化70S起始復(fù)合物的形成肽鍵形成核糖體移位17原核生物的肽鏈延伸過程有下列哪些物質(zhì)參與( ) 。肽基轉(zhuǎn)移酶鳥苷三磷酸 mRNA 甲酰甲硫氨酰-tRNA EF-Tu 、 EF-Ts、 EF-G1. .Shine-Dalgarno 順序(SD-順序)是指：()在mRN粉子的起始碼上游 8-13個核甘酸處的順序在DN后子上轉(zhuǎn)錄起始點前8-13個核甘酸處的順序16srRNA3'端富含喀咤的互補順序啟動基因的順序特征以上都正確19. 在研究蛋白合成中 , 可利用嘌呤霉素, 這是因為它 :

40、 ( )使大小亞基解聚使肽鏈提前釋放抑制氨基酰-tRNA 合成酶活性防止多核糖體形成以上都正確20. 氨基酸活化酶： （ ）活化氨基酸的氨基利用GTP作為活化氨基酸的能量來源催化在 tRNA 的 5磷酸與相應(yīng)氨基酸間形成酯鍵每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應(yīng)的tRNA以上都不正確16 / 14（五）是非題1 . DNA僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。（X ）2 .密碼子在 mRNAk的閱讀方向為 5' f 3 '。（ ,）3 .每一種氨基酸都有兩種以上密碼子。（X ）(v )mRNA吉合。(X ) mRNA吉合。(V )4 . 一種tRNA只能識別一種密碼子。（X ）

41、5線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。6大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時，才能與7大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與8 .在大腸桿菌中，一種氨基酸只對應(yīng)于一種氨酰-tRNA合成酶。（V ）9 .氨基酸活化時，在氨酰 -tRNA合成酶的催化下，由 ATP供能，消耗一個高能磷酸鍵。（X ）10 .線粒體和葉綠體內(nèi)的蛋白質(zhì)生物合成起始與原核生物相同。（V ）11 .每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應(yīng)。（X ）12 . AUM可彳乍為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈內(nèi)部Met的密碼子。（,）13 .構(gòu)成密碼子和反密碼子的堿基都只

42、是A U、C G （ X ）14 .核糖體大小亞基的結(jié)合和分離與Mg2+,的濃度有關(guān)。（,）15 .核糖體的活性中心“ A”位和“ P”位都主要在大亞基上。（X ）16 . E.coli 中，DnaA與復(fù)制起始區(qū) DNA吉合，決定復(fù)制的起始。（ V ） 核酸的生物合成（1） 名詞解釋1 中心法則 （central dogma） ：生物體遺傳信息流動途徑。最初由 Crick（1958） 提出，經(jīng)后人的不斷補充 和修改，現(xiàn)包括反轉(zhuǎn)錄和RNAM制等內(nèi)容。2 .半保留復(fù)制（簡稱復(fù)制）（semiconservative replication） :親代雙鏈 DNA以每條鏈為模板，按堿基配對原則各合成一條

43、互補鏈，這樣一條親代DNAM螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA1旋，子代DN后子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復(fù)制。3 . DNA聚合酶（DNA polymerase）:指以脫氧核甘三磷酸為底物，按 5' - 3'方向合成 DNA勺一類酶，反 應(yīng)條件：4種脫氧核甘三磷酸、Mg卡模板、引物。DNAM合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。4 .解旋酶（helicase）:是一類通過水解 ATP提供能量，使 DNA螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對堿基， 水解 2 分子ATP。5 .拓?fù)洚悩?gòu)酶（topoisomera

44、se）:是一類引起 DNAM撲異構(gòu)反應(yīng)的酶，分為兩類：類型 I的酶能使DNA的 一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應(yīng)無需供給能量，類型n的酶能使DNA勺兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當(dāng)它引入超螺旋時，需要由ATP供給能量。6 .單鏈 DNA吉合蛋白（single-strand binding protein ,SSB）:是一類特異性和單鏈區(qū)DNA吉合的蛋白質(zhì)。它的功能在于穩(wěn)定 DNAB開的單鏈，阻止復(fù)性和保護單鏈部分不被核酸酶降解。7 . DNA連接酶（DNA ligase）:是專門催化雙鏈 DNA中缺口共價連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。反應(yīng)需要能量。8 .引物酶及引發(fā)體（p

45、rimase & primosome）:以DNA為模板，以核糖核甘酸為底物，在DNA合成中，催化形成RNA引物的酶稱為引物酶及引物體。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合在一 起，形成一個復(fù)合體，即引發(fā)體才有生物活性。9 .復(fù)制叉（replication fork） :復(fù)制中的DNA分子，末復(fù)制的部分是親代雙螺旋，而復(fù)制好的部分是分 開的，由兩個子代雙螺旋組成，復(fù)制正在進行的部分呈丫狀叫做復(fù)制叉。10 .復(fù)制眼0結(jié)構(gòu)：在一段DNA±,正在復(fù)制的部分形成眼斗結(jié)構(gòu)。復(fù)制眼在環(huán)狀DNA±形成的結(jié)構(gòu)與希臘字母0相象，所以叫0結(jié)構(gòu)。11 .前導(dǎo)鏈（1eading

46、 strand）:在DNAM制過程中，以親代鏈（3' - 5'為模板時，子代鏈的合成 （5'f3 ) 是連續(xù)的這條能連續(xù)合成的鏈稱前導(dǎo)鏈。12 .岡崎片段(Okazaki fragment)、后隨鏈(lagging strand):在 DNAM制過程中，以親代鏈(5' - 3') 為模板時，子代鏈的合成不能以3' - 5'方向進行，而是按5' - 3'方向合成出許多小片段，因為是岡崎等人研究發(fā)現(xiàn)，因此稱岡崎片段。由許多岡崎片段連接而成的子代鏈稱為后隨鏈。13 .半不連續(xù)復(fù)制(Semidiscontinuous replic

47、ation) :在 DNA復(fù)制過程中，一條鏈的合成是連續(xù)的，另 一條鏈的合成是不連續(xù)的，所以叫做半不連續(xù)復(fù)制。14 .逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription) :以RNW模板合成 DNA勺過程。15 .逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transeriptase) :催化以 RNA為模板合成 DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程的酶。 Temin(1960) 首次從勞氏肉瘤病毒中發(fā)現(xiàn)。逆轉(zhuǎn)錄酶具有多種酶活性：依賴RNA的DNA聚合酶活性；依賴DNA的DNAM合酶活性，RNA水解酶活性，DN蛤成方向5' - 3'。合成時需要引物與模板。16 .突變(mutation):基因組DNAM序上的任何

48、一種改變都叫做突變。分點突變和結(jié)構(gòu)畸變。17 點突變 (Point mutation) ：是指一個或幾個堿基對被置換(replacement) ，這種置換又分兩種形式：轉(zhuǎn)換 (transition) 一- 指用一個嘌呤堿置換另一個嘌呤堿，一個嘧啶堿置換另一個嘧啶堿；顛換(transversion) 一- 指用嘌呤堿置換嘧啶堿或用嘧啶堿置換嘌呤堿。18 結(jié)構(gòu)畸變 ：基因中的缺口、或插入 (insertion) 或缺失 (deletion) 某些堿基造成移碼突變使DNA 的模板鏈?zhǔn)スδ堋?9 誘變劑 (mutagen) ：使基因組發(fā)生突變的物理、化學(xué)、生物因素叫誘變劑。20 .修復(fù)(repair

49、):除去DNA上的損傷，恢復(fù) DNA的正常結(jié)構(gòu)和功能是生物機體的一種保護功能。21 光裂合酶修復(fù)( 又稱光復(fù)活)(photoreactivation) ：可見光將光裂合酶激活，它分解DNA 上由紫外線照射而形成的嘧啶二聚體，使它們恢復(fù)成兩個單獨的嘧啶堿。22 .切除修復(fù)(excision repair) :在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷部分切除，以互補鏈為模板，合成出空缺的部分，使DNA恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)的過程。23 .重組修復(fù)(recombination repair) : DNA在有損傷的情況下也可以復(fù)制，復(fù)制時子代鏈躍過損傷部位 并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應(yīng)

50、的核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核苷酸的序列補上母鏈的空缺，此過程稱重組修復(fù)。24 .誘導(dǎo)修復(fù)和應(yīng)急反應(yīng) (induction repair and SOS response)(SOS修復(fù))：由于 DNA受到損傷或復(fù)制系統(tǒng)受到抑制所誘導(dǎo)引起的一系列復(fù)雜的應(yīng)急效應(yīng)，稱為應(yīng)急反應(yīng)。SOS反應(yīng)主要包括兩個方面：DNA損傷修復(fù)(SOS修復(fù)或稱誘導(dǎo)修復(fù))和誘變效應(yīng)。SOS修復(fù)是一種易出差錯的修復(fù)過程，雖能修復(fù)DNA的損傷而避免死亡。但卻帶來高的變異率。25 . DNAM組(recombination): DNA重組是指在真核生物減數(shù)分裂過程中，細(xì)菌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化中、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)中等發(fā)生的DNA片

51、段的交換或插入。26 基因工程 ( 又稱基因重組技術(shù))(gene/genetic engineering) ：是將外源基因經(jīng)過剪切加工，再插入到一個具有自我復(fù)制能力的載體DNA中，將新組合的DNA轉(zhuǎn)移到一個寄主細(xì)胞中，外源基因就可以隨著寄主細(xì)胞的分裂進行繁殖，寄主細(xì)胞也借此獲得外源基因所攜帶的新特性。27 .轉(zhuǎn)錄(transcription) :由依賴于 DNA的RNA聚合酶催化，以 DNA的一條鏈的一定區(qū)段為模板，按照 堿基配對原則，合成一條與DNAB1互補的RNA鏈的過程。28 模板鏈 (template strand) 又稱負(fù) (-) 鏈，反意義鏈 (antisense strand)

52、：轉(zhuǎn)錄過程中用作模板的 這條DNA鏈，稱模板鏈。29 非模板鏈 (nontemplate strand) 又稱正 (+) 鏈，編碼鏈(coding strand) ，有意義鏈(sense strand) ：與模板鏈互補的那條DNA鏈，稱非模板鏈。30 .不對稱轉(zhuǎn)錄(asymmetric transcription) :因為RNA的轉(zhuǎn)錄只在 DNA的任一條鏈上進行，所以把 RNA 的合成叫做不對稱轉(zhuǎn)錄。31 .啟動子(promoter) : DNA®上能指示 RNA專錄起始的 DNA列稱啟動子。32 .轉(zhuǎn)錄單位(transcription unit) : RNA勺轉(zhuǎn)錄只在DNA的一個片

53、段上進行，這段DNA列叫轉(zhuǎn)錄單位。33 .內(nèi)含子(intron):真核生物基因中，不為蛋白質(zhì)編碼的、在mRNAm工過程中消失的DNA序列，稱內(nèi)含子。34 .外顯子(exon):真核生物基因中，在mRNAb出現(xiàn)并代表蛋白質(zhì)的DN際列，叫外顯子。35 .轉(zhuǎn)錄加工(post-transcriptional processing):細(xì)菌中很多 RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RN肪子，這個過程叫轉(zhuǎn)錄后加工。36 .核內(nèi)不均一 RNA(hnRNA)是真核生物細(xì)胞核內(nèi)的mRN廁體分子，分子量較大，并且不均一，含有許多內(nèi)含子。37 . RNA勺復(fù)制（RNA r

54、eplication） :某些病毒RN幽可以做為模板合成病毒蛋白質(zhì)又可在RNA復(fù)制酶（RNAreplicase）的催化下，以自身 RNA為模板，合成互補的 RN順鏈，合成方向5'f3',這一過程叫 RNA< 制。（2） 問答題1 .試述 Meselson和Stahl關(guān)于DNA半保留復(fù)制的證明實驗。提示：將E. coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代，使所有DNA分子標(biāo)記上15N;將15N標(biāo)記的E. coli再放入普通的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在細(xì)胞生長一代、二代 、n代的時間間 隔內(nèi)采樣；采用氯化葩密度梯度離心分離DNA并用紫外照相技術(shù)檢測 DNA所在

55、位置；結(jié)果如下：其結(jié)果確切地證明 DNA半保留方式復(fù)制。2 .描述大腸桿菌 DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。E. coli DNA聚合酶I是多功能酶，具有： DNAm合酶活性，能按模板要求，以 5' - 3'方向合成 DNA 在DNA復(fù)制中，常用以填補引物切除后留下的空隙； 5'-3'外切酶活性，DNA復(fù)制后期，用于切除 RNA引物；3'-5'外切酶活性，用以校對復(fù)制的正確性，當(dāng)出現(xiàn)錯配堿基時，切除錯配堿基直到正確配對 為止；DNAM合酶I不是DNAM制和校正中的主要聚合酶，它的功能主要是修復(fù)。3 .試述DNA復(fù)制過程，總結(jié) DNA復(fù)制的基本規(guī)律。以E. coli為例，DNA復(fù)制過程分三個階段；起始：從DNA上控制復(fù)制起始的序列即起始點開始復(fù)制，形成復(fù)制叉，復(fù)制方向多為雙向，也可以是單向，若以雙向進行復(fù)制，兩個方向的復(fù)制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復(fù)制需要有含3' -OH的引物，引物由含有引物酶的引發(fā)體合成一段含 3 10個核甘酸的RNA片段；延長：DNA復(fù)制時，分別以兩條親代 DNAg為模板， 當(dāng)復(fù)制叉沿 DNA移動時，以親代 3' -5'鏈為模板時，