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文檔簡介
1、原核生物與真核生物復(fù)制的過程及其異同點(diǎn) 原核生物與真核生物復(fù)制的過程大體上均分為復(fù)制的起始、 DNA 鏈的延伸和復(fù)制的終止三個(gè)過程。原核生物DNA 的復(fù)制過程(以大腸桿菌為例):復(fù)制起始: OriC 起始位點(diǎn)由四個(gè)9 個(gè)核苷酸( 9-mer )的重復(fù)序列和三個(gè)13 個(gè)核苷酸(13-mer )的重復(fù)序列組成。 DnaA 蛋白結(jié)合到 9-mer 結(jié)構(gòu)上,使DNA 形成一個(gè)環(huán)。結(jié)果,雙鏈DNA 在富含 A-T 堿基的 13-mer 區(qū)域分開成為單鏈。隨后, DnaB-DnaC 復(fù)合體結(jié)合到復(fù)制起始點(diǎn)上, 形成預(yù)引發(fā)復(fù)合物。 然后, DnaB 利用其解旋酶的活性使解鏈部分延長,并激發(fā) DnaG 引發(fā)酶
2、,進(jìn)而形成一段 RNA 引物,起始 DNA 的復(fù)制( DNA 聚合酶只能從3羥基端起始復(fù)制)。DNA 鏈的延伸: DNA 鏈一般形成兩個(gè)復(fù)制叉進(jìn)行雙向復(fù)制。 DNA 鏈的復(fù)制是半不連續(xù)復(fù)制,以3-5 方向DNA 鏈為模板合成的子鏈為前導(dǎo)鏈,另一條為后隨鏈,后隨鏈的合成以合成岡崎片段的 方式進(jìn)行。延伸過程主要依靠DNA聚合酶III (核心酶由a、e、£構(gòu)成),DNA聚合酶III靠其B夾鉗牢固地結(jié)合在DNA鏈上并延 DNA 鏈移動(dòng)。岡崎片段一端的引物由 DNA 聚合酶 I 以切口平移的方式去除, 然后由 DNA 連接酶連接為一體。 復(fù)制叉前進(jìn)時(shí)由解旋酶依靠水解ATP 的能量(一個(gè)ATP
3、一個(gè)堿基)打開雙鏈,單鏈與 SSB 結(jié)合并保持穩(wěn)定。 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶去除正超螺旋。復(fù)制的終止: 復(fù)制叉前行, 當(dāng)遇到 22 個(gè)堿基組成的重復(fù)性終止子序列(Ter)時(shí),Ter-Tus復(fù)合物使DnaB停止解鏈,復(fù)制叉前移停止,等相反方向復(fù)制叉到達(dá)后,由修復(fù)方式填補(bǔ)兩個(gè)復(fù)制叉間的空缺。隨后,在DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶IV 的作用下復(fù)制叉解體,釋放子鏈 DNA 。真核生物DNA 的復(fù)制:真核生物DNA 的復(fù)制過程與原核生物DNA 的復(fù)制過程大體相同。復(fù)制的起始:真核生物 DNA 復(fù)制從成百上千個(gè)起始位點(diǎn)上開始,形成多個(gè)復(fù)制叉。真核生物DNA復(fù)制只發(fā)生在S期。真核生物復(fù)制起始位點(diǎn)難以確定,酵母中稱為自主復(fù)
4、制序列(ARS )。起點(diǎn)識(shí)別復(fù)合體( ORC ) 與 ARS 結(jié)合后又與前復(fù)制復(fù)合體( pre-RC )結(jié)合,進(jìn)而吸引 Cdc6 和 Cdt1 兩個(gè)蛋白以及解旋蛋白 Mcm2-7 形成完整的復(fù)合體。 pre-RC 只在 G1 期合成,在S 期時(shí) Cdc45 結(jié)合到復(fù)合體上,激活Mcm2-7 ,在 DNA 聚合酶作用下使pre-RC 啟動(dòng)復(fù)制。DNA聚合酶a合成由10bpRNA和20-30bpDNA構(gòu)成的 引物( iDNA )。DNA鏈的延伸:前導(dǎo)鏈由DNA聚合酶6合成,DNA聚合酶6是有高度前進(jìn)能力的酶,其前進(jìn)能力來自于 RF-C 蛋白和 PCNA 蛋 者的相互作用,兩者分別相當(dāng)于大腸桿菌中丫
5、夾鉗裝載機(jī)和B前進(jìn)亞基的作用。DNA聚合酶6的前進(jìn)能力是由PCNA維持的。后隨鏈的岡崎片段由 DNA聚合酶6或DNA聚合酶£合成。岡崎片段之間的引物由核算外切酶 MF1去除,之間的缺口由 DNA連接酶I連接。復(fù)制的終止:隨著復(fù)制,各復(fù)制叉相互接到一起。5'端的空缺由端粒酶補(bǔ)齊。端粒酶中含有一段 RNA序列,可以作為模板合成互 補(bǔ)的DNA序列以補(bǔ)齊空缺。原核生物與真核生物 DNA復(fù)制共同的特點(diǎn):1分為起始、延伸、終止三個(gè)過程;2必須有提供3'羥基末端的引物;3親代DNA分子為模板,四種脫氧三磷酸核昔(dNTP)為底物,多 種酶及蛋白質(zhì):DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶、DNA解鏈酶、單
6、鏈結(jié)合蛋白、 引物酶、 DNA聚合酶、RNA酶以及DNA連接酶等。4 一般為雙向復(fù)制、半保留復(fù)制、半不連續(xù)復(fù)制。原核生物與真核生物 DNA復(fù)制不同的特點(diǎn):1真核生物為線性DNA,具有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn),形成多個(gè)復(fù)制叉, DNA聚合酶的移動(dòng)速度較原核生物慢。原核牛物為一般為環(huán)形DNA ,具有單一復(fù)制起始位點(diǎn)。2真核生物DNA復(fù)制只發(fā)生在細(xì)胞周期的 S期,一次復(fù)制開始后 在完成前不再進(jìn)行復(fù)制,原核生物多重復(fù)制同時(shí)進(jìn)行。3真核生物復(fù)制子大小不一旦并不同步。4原核生物有9-mer和13-mer的重復(fù)序列構(gòu)成的復(fù)制起始位點(diǎn), 而真核生物的復(fù)制起始位點(diǎn)無固定形式。5 真核生物有五種 DNA 聚合酶,需要 Mg+ 。主要復(fù)制酶為 DNA 聚合酶6(£),引物由DNA聚合酶a合成。原核生物只有三種, 主要復(fù)制酶為 DNA 聚合酶 III 。6 真核生物末端靠端粒酶補(bǔ)齊,而原核生物以多聯(lián)體的形式補(bǔ)齊。7 真核生物岡崎片段間的 RNA 引物由核酸外切酶MF1 去除,而原核生物岡崎片段由 DNA 聚合酶 I 去除。8真核生物DNA聚合酶丫負(fù)責(zé)線粒體 DNA合成。9真核生物DNA聚合酶8的高前
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