放線菌的形態(tài)觀察

1、【實(shí)驗(yàn)題目】放線菌的形態(tài)觀察【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握放線菌觀察方法一插片法2、了解放線菌的基本形態(tài)【實(shí)驗(yàn)器材】1菌種：青色鏈霉菌、弗氏鏈霉菌o嚴(yán)并甘?2、 培養(yǎng)基.滅菌的高氏I號(hào)瓊脂培養(yǎng)基3、 儀器和用具：顯微鏡、酒精燈、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鐐子、培養(yǎng)皿等【實(shí)驗(yàn)原理】1 .高氏I號(hào)培養(yǎng)基高氏I號(hào)培養(yǎng)基是用來培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。此合成培養(yǎng)基的主要特點(diǎn)是含有多種化學(xué)成分已知的無機(jī)鹽，這些無機(jī)鹽可能相互作用而產(chǎn)生沉淀。因此，在混合培養(yǎng)基成分時(shí)，一般是按配方的順序依次溶解各成分，甚至有時(shí)還需要將二種或多種成分分別滅菌，使用時(shí)再按比例混合。此外，合成培養(yǎng)基有的還要補(bǔ)加微M元素，如高氏I號(hào)

2、培養(yǎng)基中，需要加入FeS042 .放線菌放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生抱子絲及抱子。有的放線菌只產(chǎn)生基內(nèi)菌絲而無氣生菌絲。在顯微鏡下宜接觀察時(shí)，氣生菌絲在上層、基內(nèi)菌絲在下層，且氣生菌絲較暗，基內(nèi)菌絲較透明。抱子絲依種類的不同，有宜、波曲、各種螺旋形或輪生。在油鏡下觀察，放線菌的抱子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。固體基質(zhì)分生施子1-宜形，交叉分枝2-叢生，波曲3-頂

3、端形成大螺旋4-松螺旋5,6-緊螺旋7-短而宜，輪生3.插片法將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上宜接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。圖3【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟】1、高氏I號(hào)培養(yǎng)基的制備(100ml 粉、及其他成分溶解2)的總體積，進(jìn)行1-蓋玻片1)根據(jù)配方按照一定比例稱取可溶性溶待將所有藥品溶解后，補(bǔ)充水分到所需pH調(diào)節(jié)到7.2 ? 7,43) 材料滅菌：將所配溶液裝在三角燒瓶中并加棉塞，棉塞外包一層牛皮紙，并用麻繩捆好,用記號(hào)筆標(biāo)記組號(hào)。取

4、 4個(gè)平皿，包好并標(biāo)記。同理蓋玻片也用牛皮紙包好,10片一包，準(zhǔn)備4包。將上述物品放入密封的加壓滅菌鍋中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌121、C 20分鐘。2、插片法進(jìn)行鏈霉菌的觀察1） ） 倒平板：取融化并冷至大約 50C的高氏I號(hào)培養(yǎng)基分裝到4個(gè)培養(yǎng)皿中，倒平板時(shí)盡M使培養(yǎng)基厚一些，凝固待用。（可用記號(hào)筆在培養(yǎng)基底部畫好方向）2） 接種：待培養(yǎng)基冷卻凝固后，無菌操作，用接種環(huán)挑取菌種在平板上密集劃線接種。（沿著之前用記號(hào)筆標(biāo)注的方向進(jìn)行劃線接種）3） 插片：以無菌操作用鐐子將滅菌的蓋玻片以大約與培養(yǎng)基成45。角插入平板內(nèi)，并與劃線垂宜（即與記號(hào)筆標(biāo)注的方向垂宜），每個(gè)平板至少插入3個(gè)蓋玻片。4） 培養(yǎng)：

5、將平板倒置，28C下培養(yǎng)7天。5） 鏡檢：用鐐子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，將無菌面朝上放在載玻片上，宜接鏡檢。觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，再換高倍鏡觀察，必要時(shí)可用油鏡觀察?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】一、鏈霉菌形態(tài)觀察記錄表、鏡檢結(jié)果基內(nèi)菌絲（叫）氣生菌絲（暗）圖4:弗氏鏈霉菌（10*40 ）圖5:弗氏鏈霉菌局部放大圖圖6:弗氏鏈霉菌抱子絲菌種基內(nèi)菌絲氣生菌絲抱子絲青色鏈霉菌菌絲較長(zhǎng)，較魂松，多 分枝毛狀螺旋狀，末端有弗氏鏈霉菌困絲直或折曲，較密，多 分枝厚絮狀直鏈狀，末端有圓形抱子一基內(nèi)菌絲（明）/氣生菌等暗圖7:青色鏈霉菌（10*40 ）圖&青色鏈霉菌局部放大圖 圖9:青

6、色鏈霉菌抱子絲【實(shí)驗(yàn)小結(jié)】1、 鏈霉菌的菌落特征：經(jīng)過鏡檢，可觀察到放線菌菌絲呈分枝絲狀，且多交錯(cuò)在一起，由基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和抱子絲三部分組成，基內(nèi)菌絲透明，有較多的分枝，而氣生菌絲較暗。兩種菌絲在不同的焦平面上，可通過調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋分別進(jìn)行觀察。放線菌有與細(xì)菌不同的菌落特征：干燥、不透明，表面呈緊密的絲絨狀，菌落和培養(yǎng)基的連接緊密，難以挑取菌落。2、 為何采用插片觀察法：放線菌菌落小，與培養(yǎng)基結(jié)合較緊密，不易用接種鉤挑取，因而難以宜接觀察。而采用插片法，在接種放線菌的培養(yǎng)基一側(cè)，以45 °角插入無菌蓋玻片，使放線菌沿培養(yǎng)基與蓋玻片交界處生長(zhǎng)，并附著于蓋玻片上，待菌絲生長(zhǎng)一段時(shí)間后

7、，可宜接取下蓋玻片進(jìn)行染色觀察。該方法可以進(jìn)行放線菌營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和抱子絲的比較觀察。3、為何采用高氏一號(hào)培養(yǎng)基：這是一種半合成培養(yǎng)基，采用可溶性淀粉為碳源、KNO3為氮源。因?yàn)槿狈λ傩У奶荚春偷?，該培養(yǎng)基的營養(yǎng)較為匱乏，有利于放線菌產(chǎn)生抱子。同時(shí)，由于鏈霉菌生長(zhǎng)較慢，因此用來培養(yǎng)鏈霉菌的培養(yǎng)基平板要比培養(yǎng)細(xì)菌的要厚一些。4、 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)注意哪些：倒平板要稍厚一些，接種時(shí)劃線要密，最好用記號(hào)筆標(biāo)好劃線方向，插片時(shí)與劃線方向相垂宜，這樣可防止插到劃線的空隙上，較容易使菌絲長(zhǎng)在蓋玻片上。鏡檢時(shí)，宜用略暗光線，先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，再換高倍鏡觀察。低倍鏡觀察時(shí)，菌面應(yīng)該朝上，不然菌體會(huì)被壓扁，不好觀察。換用油鏡觀察，要把菌面朝下，否則滴加香柏油后，菌體會(huì)滑動(dòng)影響觀察且會(huì)污染鏡頭?！舅伎寂c討論】1 .鏡檢時(shí)如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲、氣生菌絲及抱子絲？絲較基內(nèi)菌絲答：在光學(xué)顯微鏡下觀察，氣生菌絲在上層、較明亮，基內(nèi)菌絲在下層、顏色較暗，氣生菌 粗。有些氣生菌