生物分離技術綜合實驗—植物色素提取分離及定量和初步鑒定ppt課件

1、生物分別技術綜合實驗生物分別技術綜合實驗植物色素提取、分別及定量與初步鑒定植物色素提取、分別及定量與初步鑒定實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備一、實驗目的一、實驗目的:了解有機溶劑提取目的物質植物色素的過程了解有機溶劑提取目的物質植物色素的過程與本卷須知。并了解目的物質提取過程中的主與本卷須知。并了解目的物質提取過程中的主要影響因子及其相互關系。要影響因子及其相互關系。二二 實驗原理：實驗原理：用有機溶劑法從原料中提取黃酮類成分用有機溶劑法從原料中提取黃酮類成分,利用黃酮利用黃酮類物質在熱乙醇中溶解度較高類物質在熱乙醇中溶解度較高,將其提取出來。將其提取出來。實驗一、實驗一、 植物

2、色素的制備植物色素的制備 三、三、 儀器儀器 高速干粉粉碎機、恒溫水浴鍋、燒杯試管假設干、高速干粉粉碎機、恒溫水浴鍋、燒杯試管假設干、中低速離心機、中低速離心機、250ml磨口椎形瓶磨口椎形瓶6個個/每組；每組；10ml容量瓶容量瓶4個個/組。組。 四、試劑四、試劑 配配40%80ml/組、組、70%450 ml/組的乙醇，組的乙醇，10硝酸鋁溶液硝酸鋁溶液50ml/組，組，5亞硝酸鈉亞硝酸鈉50 ml/組組, 質量分數質量分數4.3氫氧化鈉氫氧化鈉200 ml/組。組。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 五、操作五、操作 1、不同浸提劑體積分數對黃酮提取率的影響、不同浸提劑體積分

3、數對黃酮提取率的影響 1.1取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6組組2.5克每組，用克每組，用8倍體積指倍體積指料液比料液比v/m為為8：1即即20ml的的40%、70%，95%的乙醇浸提的乙醇浸提溫度溫度70，時間，時間1.5h，浸提時每隔，浸提時每隔15 min用手輕搖用手輕搖2min。浸提所得粗液進展離心浸提所得粗液進展離心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 1.2 精細汲取上清液精細汲取上清液1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL容量瓶中，加質容量瓶中，加質量分數量分數5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后，加質量分數后，加質量分數1

4、0硝硝酸鋁酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質量分數，再加質量分數4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，在，在510nm波長下測得其波長下測得其吸光度值，得出最優(yōu)的浸提劑體積分數。吸光度值，得出最優(yōu)的浸提劑體積分數。 按三個程度，每個程度做兩組操作，即每個單要素條件得六按三個程度，每個程度做兩組操作，即每個單要素條件得六個數據。個數據。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 2、不同浸提時間對黃酮提取率的影響、不同浸提時間對黃酮提取率的影響 2.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6組組2.5克每組，用按克每

5、組，用按8：1指指料液比料液比v/m的的70%乙醇浸提溫度乙醇浸提溫度70，浸提時間分別為，浸提時間分別為90min、120min，150min，浸提時每隔，浸提時每隔15分鐘用手輕搖分鐘用手輕搖2min。浸提所得粗液進展離心浸提所得粗液進展離心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 2.2 精細汲取上清液精細汲取上清液1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL容量瓶中，加質容量瓶中，加質量分數量分數5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后，加質量分數后，加質量分數10硝酸鋁硝酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質量分數，再加質量分數4.3氫氧化鈉氫

6、氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，在，在510nm波長下波長下測得其吸光度值，得出最優(yōu)的浸提時間。測得其吸光度值，得出最優(yōu)的浸提時間。 按三個程度，每個程度做兩組操作每個程度做兩組操作，按三個程度，每個程度做兩組操作每個程度做兩組操作，即每個單要素條件做六個數據。即每個單要素條件做六個數據。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 3、不同料液比對黃酮提取率的影響、不同料液比對黃酮提取率的影響 3.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6組組2.5克每組，用按克每組，用按6：1，8：1，10：1指料液比指料液比v/m，即，即ml/克

7、的克的70%乙醇浸提溫度乙醇浸提溫度70，時間，時間1.5h，浸提時每隔，浸提時每隔15分鐘用手輕搖分鐘用手輕搖2min。浸提所。浸提所得粗液進展離心得粗液進展離心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 3.2 精細汲取上清液精細汲取上清液1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL容量瓶中，加質容量瓶中，加質量分數量分數5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后，加質量分數后，加質量分數10硝硝酸鋁酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質量分數，再加質量分數4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，

8、在，在510nm波長下測得其波長下測得其吸光度值，按吸光度值，按V*A值的大小比較得出最優(yōu)的料液比。值的大小比較得出最優(yōu)的料液比。 選做部分：假設出現從選做部分：假設出現從6：18：110：1的的V*A繼續(xù)平繼續(xù)平穩(wěn)添加，那么可以繼續(xù)加大料液比可以為穩(wěn)添加，那么可以繼續(xù)加大料液比可以為12：1，14：1,直到找到拐點位置的最正確料液比。直到找到拐點位置的最正確料液比。 實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備4 4、柱層析樣品的制備、柱層析樣品的制備1 1將本實驗中一切的乙醇提取的浸提液集中起來一定要記將本實驗中一切的乙醇提取的浸提液集中起來一定要記下這些浸提液所對應的原料質量下這些浸提

9、液所對應的原料質量M M，量取其總體積，量取其總體積V V，將提取液，將提取液分出分出50ml50ml，將這，將這50mL50mL提取液倒入枯燥并已稱重記為提取液倒入枯燥并已稱重記為m2m2的的50mL50mL小燒杯中，先用水浴枯燥至無醇味，再放入烘箱中中枯燥至恒重，小燒杯中，先用水浴枯燥至無醇味，再放入烘箱中中枯燥至恒重，稱重記為稱重記為m1m1 。2 2其他提取液旋轉蒸發(fā)濃縮至其他提取液旋轉蒸發(fā)濃縮至20mL20mL左右后，放置于分液漏斗左右后，放置于分液漏斗中，按等量體積參與石油醚后塞上塞子并充分搖勻，棄石油醚層，中，按等量體積參與石油醚后塞上塞子并充分搖勻，棄石油醚層，得下層黃酮液，將

10、所得黃酮液放在得下層黃酮液，將所得黃酮液放在9090水浴中濃縮，濃縮成稀浸水浴中濃縮，濃縮成稀浸膏狀，參與膏狀，參與3-43-4克克60-10060-100目的硅膠，在燒杯里進展拌膠，并將其目的硅膠，在燒杯里進展拌膠，并將其放在放在7070烘箱中烘到成分散的顆粒即可，備用。烘箱中烘到成分散的顆粒即可，備用。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 六、實驗本卷須知六、實驗本卷須知 1 1、在色素提取過程中，每隔一段時間要進、在色素提取過程中，每隔一段時間要進展輕搖，搖擺時幅度要小，以免使提取原料展輕搖，搖擺時幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，呵斥原料損失。粘在壁上，呵斥原料損失。 2 2

11、、在做不同料液比對色素提取影響實驗時，、在做不同料液比對色素提取影響實驗時，比較結果優(yōu)劣要用比較結果優(yōu)劣要用V V* *A,A,即：體積即：體積* *吸光度值。吸光度值。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 六、實驗本卷須知六、實驗本卷須知 3 3、離心前一定要仔細平衡好，兩管質量、離心前一定要仔細平衡好，兩管質量平衡誤差應在平衡誤差應在0.10.1克以內。同時，在離心克以內。同時，在離心過程中，一定要有專人看護以免發(fā)惹事過程中，一定要有專人看護以免發(fā)惹事故。故。 4 4、實驗當中的提取液一定要全部從磨口、實驗當中的提取液一定要全部從磨口錐形瓶和離心管中倒出，在將離心好的錐形瓶和離心

12、管中倒出，在將離心好的色素倒出時，一定要小心，不要將底部色素倒出時，一定要小心，不要將底部的沉降物倒出來。的沉降物倒出來。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 5 5、色素提取過程中一定要在錐形瓶上加、色素提取過程中一定要在錐形瓶上加上塞子，假設乙醇蒸發(fā)較快時如：上塞子，假設乙醇蒸發(fā)較快時如：80%80%以上的高濃度乙醇提取時，可以思索以上的高濃度乙醇提取時，可以思索在磨口錐形瓶上加一蛇形管，但低濃度在磨口錐形瓶上加一蛇形管，但低濃度乙醇提取時沒有必要加蛇形管。乙醇提取時沒有必要加蛇形管。 6 6、丈量吸光度時，一定要設空白對照、丈量吸光度時，一定要設空白對照即用即用1mL70%1m

13、L70%的乙醇替代樣液以外，的其的乙醇替代樣液以外，的其他試液按他試液按3.23.2中所述正常參與中所述正常參與實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備附錄附錄 1 1、實驗前面預備、實驗前面預備 1 1、原料的制備同窗們不需求做、原料的制備同窗們不需求做 用高速干粉粉碎機將銀杏葉粉碎，過用高速干粉粉碎機將銀杏葉粉碎，過4040目以上，目以上，40-6040-60目，目，60-7060-70目，目，70-8070-80目，目，80-9080-90目，目，90-10090-100目，目，100100目以上，篩后目以上，篩后備用。備用。 2 2、規(guī)范曲線的繪制：、規(guī)范曲線的繪制： 精細稱取蘆

14、丁或槲皮素對照品精細稱取蘆丁或槲皮素對照品200 mg200 mg，用體積分數，用體積分數( (下下同同)70)70乙醇溶解，定容至乙醇溶解，定容至100 mL100 mL容量瓶中搖勻。精細移取容量瓶中搖勻。精細移取10 10 mLmL蘆丁乙醇液于蘆丁乙醇液于25 mL25 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，得到容量瓶中，用蒸餾水定容，得到0.8 mg0.8 mgmLmL規(guī)范溶液。精細汲取規(guī)范溶液規(guī)范溶液。精細汲取規(guī)范溶液0.00.0、0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8、1.0 mL1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL10 mL容量瓶中，加質量分數容量瓶中，加質量分數5 5

15、亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min后，加質量分數后，加質量分數1010硝酸鋁硝酸鋁0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min，再加質量分數，再加質量分數4.34.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL4 mL，加蒸餾水至刻度，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置搖勻，放置15 min15 min，進展丈量，在，進展丈量，在510nm510nm處有最大吸收波長。處有最大吸收波長。以測定結果得蘆丁或槲皮素濃度與吸光度的規(guī)范曲線方以測定結果得蘆丁或槲皮素濃度與吸光度的規(guī)范曲線方程和相關系數。程和相關系數。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 一、目的一、

16、目的 學習掌握柱層析法分別純化目的物質植物色素的方法學習掌握柱層析法分別純化目的物質植物色素的方法和操作。和操作。 二、原理二、原理 柱層析是比較理想的分別黃酮類色素的方法柱層析是比較理想的分別黃酮類色素的方法,其原理是經其原理是經過基質分子與黃酮類化合物分子上的酚羥基構成氫鍵締合過基質分子與黃酮類化合物分子上的酚羥基構成氫鍵締合物而產生作用物而產生作用,其作用力強弱取決于黃酮類化合物分子上其作用力強弱取決于黃酮類化合物分子上羥基的數目與位置以及洗脫劑與黃酮類化合物和基質之間羥基的數目與位置以及洗脫劑與黃酮類化合物和基質之間構成氫鍵締合才干的大小。常用不同比例的水和醇混合溶構成氫鍵締合才干的大

17、小。常用不同比例的水和醇混合溶劑作為洗脫劑，能勝利分別各種類型的黃酮。劑作為洗脫劑，能勝利分別各種類型的黃酮。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 三、器材與試劑三、器材與試劑 1、 實驗儀器實驗儀器 層析柱、試管、燒杯、量筒、烘箱。層析柱、試管、燒杯、量筒、烘箱。 2、 實驗試劑實驗試劑 石油醚、石油醚、40%乙醇乙醇200ml/組、組、70%乙醇乙醇300ml/組、組、95%乙醇乙醇200ml/組、基質。組、基質。 3 、實驗資料、實驗資料 銀杏葉提取液銀杏葉提取液實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 四、操作四、操作 1、基質的的預處置：、基質的的預處置：

18、 稱取所需的大孔吸附樹脂稱取所需的大孔吸附樹脂 (濕重濕重)，以，以95乙醇浸泡乙醇浸泡24 h，充分溶脹后用乙醇濕法裝柱，充分溶脹后用乙醇濕法裝柱， 2 裝柱：裝柱： 將酒精浸泡好的基質約將酒精浸泡好的基質約40ml指混勻形狀下取樣，經過指混勻形狀下取樣，經過漏斗緩慢倒入柱中柱中曾經裝好漏斗緩慢倒入柱中柱中曾經裝好10ml95%乙醇，邊加乙醇，邊加邊用木夾子輕敲柱子，同時用竹簽悄然壓實。流速應控制邊用木夾子輕敲柱子，同時用竹簽悄然壓實。流速應控制在在20滴滴/min，待裝至，待裝至20cm柱高，再加與柱壁完全吻合的濾柱高，再加與柱壁完全吻合的濾紙片，接著參與紙片，接著參與1.0 cm高海沙或

19、石英砂。留意，在高海沙或石英砂。留意，在整個裝柱過程中，樹脂應浸泡在溶液中，否那么會出現斷整個裝柱過程中，樹脂應浸泡在溶液中，否那么會出現斷痕，氣泡等。假設柱子無砂芯，要在裝柱前加一小團大痕，氣泡等。假設柱子無砂芯，要在裝柱前加一小團大拇指指甲大小的棉花封住柱子，以防基質漏出。拇指指甲大小的棉花封住柱子，以防基質漏出。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 4、平衡：、平衡： 用用95%乙醇洗柱，不時檢查流出的乙醇液，待流出乙醇洗柱，不時檢查流出的乙醇液，待流出的乙醇液與去離子水以的乙醇液與去離子水以1：3的體積比混合，振搖不的體積比混合，振搖不顯白色渾濁時終了洗柱，用純化水將柱

20、中樹脂洗至顯白色渾濁時終了洗柱，用純化水將柱中樹脂洗至無醇味后備用。留意，一切醇洗液需回收到大的無醇味后備用。留意，一切醇洗液需回收到大的燒杯里，水洗液不用回收燒杯里，水洗液不用回收 5、上樣：、上樣： 取拌好硅膠的樣品上柱，待柱中樣品剛好到基質上取拌好硅膠的樣品上柱，待柱中樣品剛好到基質上外表時，封鎖旋鈕，用小勺子漸漸將樣品均勻地倒外表時，封鎖旋鈕，用小勺子漸漸將樣品均勻地倒在基質上面，假設樣品外表不平，可用樣品勺悄然在基質上面，假設樣品外表不平，可用樣品勺悄然撥平整。撥平整。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 6、洗脫解吸附：、洗脫解吸附： 6.1 依次用依次用3倍柱體積

21、約倍柱體積約150ml去離子水洗脫流速約去離子水洗脫流速約30滴滴/min 、40%200ml流速約流速約30滴滴/min、70%300ml流速約流速約20滴滴/min、95%200ml流速約流速約40滴滴/min乙醇乙醇分別進展洗脫，將試管放在試管架上按序接納洗脫液，每管分別進展洗脫，將試管放在試管架上按序接納洗脫液，每管搜集搜集 8ml左右洗脫液左右洗脫液 6.2 從第一管起，每接納從第一管起，每接納3管，那么精細汲取第管，那么精細汲取第1、4、7、10等管中的洗脫液等管中的洗脫液1.0 mL，置于，置于10 mL容量瓶中，加質量容量瓶中，加質量分數分數5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置

22、，放置6 min后，加質量分數后，加質量分數10硝硝酸鋁酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質量分數，再加質量分數4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，在，在510nm波長下測得波長下測得其吸光度值；其吸光度值；實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 6、洗脫解吸附：、洗脫解吸附： 6.3 確定黃酮所在的主要流分后，將吸光度值在確定黃酮所在的主要流分后，將吸光度值在0.1以上含以上含0.1的一切管中的洗脫液集中起來，混勻后，測出其總體的一切管中的洗脫液集中起來，混勻后，測出其總體積積V純化，再取純化，再取1mL測

23、出其吸光度值測出其吸光度值A純化。預留一個純化。預留一個50ml在一已枯燥并稱重過的小燒杯中，并將其他的純化液旋蒸至在一已枯燥并稱重過的小燒杯中，并將其他的純化液旋蒸至至至10mlL，用保鮮膜封鎖后放在，用保鮮膜封鎖后放在4中低溫避光保管亦可中低溫避光保管亦可直接進展后續(xù)的鑒定實驗，備用。直接進展后續(xù)的鑒定實驗，備用。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 五、實驗本卷須知五、實驗本卷須知 1 1、裝柱前在柱子底部加一小棉花球。、裝柱前在柱子底部加一小棉花球。 2 2、裝柱時，邊加樹脂邊用木質棒或橡膠棒輕、裝柱時，邊加樹脂邊用木質棒或橡膠棒輕敲柱子，使基質漸漸下沉敲柱子，使基質漸

24、漸下沉 。 3 3、裝柱要求延續(xù)、均勻、無紋格、無氣泡，外表、裝柱要求延續(xù)、均勻、無紋格、無氣泡，外表平整，整個層析過程中液面一定不得低于樹脂外表。平整，整個層析過程中液面一定不得低于樹脂外表。 4 4、要留意及時開啟和封鎖旋紐，即在上一種液體、要留意及時開啟和封鎖旋紐，即在上一種液體剛好沒入基質時，才開場參與下一種液體，且一定剛好沒入基質時，才開場參與下一種液體，且一定要用玻棒引流。要用玻棒引流。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 五、實驗本卷須知五、實驗本卷須知 5 5、要留意控制流速，不宜過快。、要留意控制流速，不宜過快。 6 6、在參與好樣品后在洗壁前就要接納洗、在參

25、與好樣品后在洗壁前就要接納洗脫液。脫液。 7 7、柱子預處置時的流出液用三角瓶或燒杯接、柱子預處置時的流出液用三角瓶或燒杯接納，而上樣后的色素洗脫液那么用試管接納。納，而上樣后的色素洗脫液那么用試管接納。 8 8、所預留的純化液、所預留的純化液50mL50mL，必需是在一切洗脫，必需是在一切洗脫下來的下來的A A值大于值大于0.10.1的純化液混勻后才干取液。的純化液混勻后才干取液。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 一、目的一、目的 用化學方法鑒定上面所純化的提取液中有黃酮存在，用化學方法鑒定上面所純化的提取液中有黃酮存在，同時測定黃酮的含量和最后的得率。同時測

26、定黃酮的含量和最后的得率。 二、原理二、原理 黃酮化合物分子構造中具有黃酮化合物分子構造中具有C5、C6位的酚羥基或鄰二位的酚羥基或鄰二酚羥基可與金屬鹽試劑鋁鹽生成有色絡合物，黃酮絡酚羥基可與金屬鹽試劑鋁鹽生成有色絡合物，黃酮絡合物在合物在510nm處有較大的吸收峰，可由分光光度法測處有較大的吸收峰，可由分光光度法測出黃酮含量。根據黃酮的一些特性，利用黃酮與一些出黃酮含量。根據黃酮的一些特性，利用黃酮與一些試劑發(fā)生特殊的發(fā)色反響來檢測黃酮。試劑發(fā)生特殊的發(fā)色反響來檢測黃酮。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 三、實驗器材三、實驗器材 1、實驗儀器：分光光度計，烘箱

27、，電子天平，、實驗儀器：分光光度計，烘箱，電子天平，10ml 容量容量瓶瓶1支支/組，組，100mL容量瓶容量瓶1支支/組，移液管假設干。組，移液管假設干。 2、實驗試劑：、實驗試劑： 80%的氫氧化鈉質量分數溶液，的氫氧化鈉質量分數溶液，10%的的FeCl3，10%的的FeCl2溶液，溶液，2%NaBH4溶液，甲醇。溶液，甲醇。 3、實驗資料：實驗二中所得的洗脫液的濃縮液總體積為、實驗資料：實驗二中所得的洗脫液的濃縮液總體積為10ml。 實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 四、實驗步驟四、實驗步驟 一物質初步鑒定操作樣液是實驗二中純化液濃縮一物質初步鑒定操作樣液

28、是實驗二中純化液濃縮而來的而來的10mL： 1、在所純化的提取液、在所純化的提取液2ml中參與中參與10%的氫氧化鈉質量的氫氧化鈉質量分數溶液分數溶液2ml，假設色素液馬上由黃色變?yōu)樯铧S色；那，假設色素液馬上由黃色變?yōu)樯铧S色；那么認定黃酮化合物的存在。么認定黃酮化合物的存在。 2、在所純化的提取液兩份，各為、在所純化的提取液兩份，各為2ml，分別參與，分別參與10%的的FeCl3，Fe Cl2；假設發(fā)現兩種離子都使色素溶液變?yōu)樗{；假設發(fā)現兩種離子都使色素溶液變?yōu)樗{綠色，那么可認定黃酮化合物的存在。綠色，那么可認定黃酮化合物的存在。 3、硼酸氫鈉反響：取黃酮純化液、硼酸氫鈉反響：取黃酮純化液2m

29、l，再加等量的，再加等量的2%NaBH4的甲醇溶液的甲醇溶液1min后加濃鹽酸買來即用，不后加濃鹽酸買來即用，不需調配數滴，假設有紫色或紫紅色出現，那么闡明此需調配數滴，假設有紫色或紫紅色出現，那么闡明此黃酮純化液中有二氫黃酮存在。黃酮純化液中有二氫黃酮存在。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定二目的物質得率確實定：二目的物質得率確實定：將實驗二中測出的總純化液的吸光度值將實驗二中測出的總純化液的吸光度值A純化代入規(guī)范曲線方程純化代入規(guī)范曲線方程Y=Kx+b (Y：黃酮濃度，：黃酮濃度，gL；x：吸光值：吸光值; K和和b分別是實驗一所分別是實驗一所得規(guī)范曲線方程的

30、常數得規(guī)范曲線方程的常數)，可以得到待測樣品的黃酮濃度：，可以得到待測樣品的黃酮濃度：C純化純化 單位為單位為mg/ml。C純化純化 =Y*10由于測定濃度過程中，待測液由由于測定濃度過程中，待測液由1ml稀釋到稀釋到10ml黃酮得率黃酮得率%=測得的黃酮含量測得的黃酮含量mg/原料總質量原料總質量100% = C純化純化 V純化純化mgM1000mg100% M代表代表V所對應的原料的總質量。將書本公式中的所對應的原料的總質量。將書本公式中的“V提取液提取液/200 去掉去掉 ，由于實驗二中，由于實驗二中10ml濃縮液對應的是一切提取液。濃縮液對應的是一切提取液。實驗三、植物色素的定量與初步

31、鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 三目的物質的純度測定：三目的物質的純度測定： 取實驗一中所得的提取液取實驗一中所得的提取液50ml，放置在曾經烘干，并曾，放置在曾經烘干，并曾經稱好質量為經稱好質量為m1的小燒杯中，放在真空枯燥箱中枯燥，的小燒杯中，放在真空枯燥箱中枯燥，枯燥到恒重后，稱其分量枯燥到恒重后，稱其分量m2，得色素浸膏分量為，得色素浸膏分量為m2 m1，再根據前面，再根據前面“二中的公式算出二中的公式算出50ml提取提取液對應的黃酮量，那么其純度為：液對應的黃酮量，那么其純度為： 目的物質的純化前純度目的物質的純化前純度= C純化純化 50 V純化純化 100% m2 m1 V

32、提取提取-50 其中其中 “ 50 V純化表示純化表示50ml粗提液對應的純化液的體粗提液對應的純化液的體積積 V提取提取-50實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 三目的物質的純度測定：三目的物質的純度測定： 取實驗二中所得的純化液取實驗二中所得的純化液50ml，放置在曾經烘干，并曾，放置在曾經烘干，并曾經稱好質量為經稱好質量為m3的小燒杯中，放在真空枯燥箱中枯燥，的小燒杯中，放在真空枯燥箱中枯燥，枯燥到恒重后，稱其分量枯燥到恒重后，稱其分量m4，得色素浸膏分量為，得色素浸膏分量為m4 m3，再根據前面，再根據前面“二中的公式算出二中的公式算出50ml純化純化液對應的黃酮量，那么其純度為