生物科學 鄭興艷(定稿) - 副本

1、學號：2010061107 本 科 畢 業(yè) 論 文斑鱖血液生理指標的研究 學 院 : 生物與農林工程學院學 科：理 學專 業(yè)：生物科學姓 名：鄭興艷指導老師：冉 輝貴州 銅仁二一四年制生物科學專業(yè)本科畢業(yè)論文貴州 銅仁2014年6月Tongren university目 錄摘 要IABSTACT.II1. 前言11.1 斑鱖的分類地位及分布簡介11.2 目前對魚類血液的研究及對斑鱖的研究概況11.3 本課題研究的內容、目的及意義22. 材料與方法22.1 實驗材料22.2 實驗方法23. 結果53.1 外部可量性狀的結果53.3血沉63.4紅細胞脆性74討論85結論8參考文獻9特 別 致 謝1

2、1 生物科學專業(yè)2014屆本科畢業(yè)論文斑鱖血液生理指標的研究（生物與農林工程學院 生物科學 鄭興艷）摘 要2013年12月從市場上購買斑鱖標本18尾，對其外部可數性狀、血液生理指標進行測定，結果如下：體重為（31.65-148.49g）體長（11.35-18.8cm），全長為（13.6-20.6cm），軀干長為（3.8-8.2cm），體高為（3.1-4.8cm），紅細胞數為（25.00-194.00）萬個·-3，白細胞數為（1.25-4.75）萬個·-3，白細胞分類計數中淋巴細胞為8.00-90.00，嗜中性細胞為1.00-21.00,單核細胞為4.00-60.00，血栓細

3、胞為1.00-74.00。在正常情況下，斑鱖的血沉相當的穩(wěn)定，大約在11.6mmh之間。在0.35%-0.50%的Nacl溶液中紅細胞部分溶血，在0.15%-0.30%的Nacl溶液中紅細胞完全溶血。關鍵詞：斑鱖；血液；魚類；生理指標；血沉The Study on the blood physiological indexes of Siniperca scherzeri (Institute of Ecology,Agriclture and Forestry Bioscience professional Xingyan Zheng )ABSTACT: In 2013 December f

4、rom the market to buy Siniperca scherzeri 18 samples, the external characters, blood physiological indexes were determined, the results are as follows: weight （31.65g-148.49g) body length (11.35cm-18.8cm), for a total length (13.6cm-20.6cm), trunk length (3.8cm-8.2cm), body height (3.1cm-4.8cm), The

5、 number of red blood cells (25.00-194.00) for the -3 million, mm, The number of white blood cell (1.25-4.75) for the -3 million, mm, For 1.00-63.00 neutrophils, monocytes 4.00-60.00, thrombocyte is 1.00-74.00. Under normal circumstances, Siniperca scherzeri ESR quite stable, roughly between 1 1.6mm

6、/ h. In the Nacl solution of 0.35%-0.50% red blood cell hemolysis in part, the hemolysis of red blood cells in Nacl 0.15%-0.30% solution.Keywords: Siniperca scherzeri; blood; fish; physiological index; erythrocyte sedimentation - 1 - 生物科學專業(yè)2014屆本科畢業(yè)論文1. 前言1.1 斑鱖的分類地位及分布簡介斑鱖(Siniperca scherzeri Stein

7、dachner)屬于脊索動物門硬骨魚亞綱鱸形目(Perciformes)鮨科(Serranidea)鱖魚屬（Siniperca Gill）的淡水底棲兇猛魚類，主要分布于我國東部，俄羅斯遠東地區(qū)、朝鮮半島、日本和越南等亦有分布1-2。斑鱖是重要的經濟魚類，其肉質鮮嫩、味道鮮美、而被人類食用，在韓國還被譽為“貴族魚”。其適應性強、病害少，主要食物為小魚、小蝦，市場開發(fā)前景廣闊，養(yǎng)殖效益較高。自20世紀70年代以來以來斑鱖（S.scherzeri Steindachner）野生資源因水質污染、捕撈過度等原因逐步趨于衰退,斑鱖野生資源已呈下降趨勢3。 1.2 目前對魚類血液的研究及對斑鱖的研究概況 日

8、本、前蘇聯(lián)等國學者在魚類血液方面的研究較多,我國林光華等進行了以下研究：二齡鰱和鳙血液的比較研究4、團頭魴和日本白鯽血液的比較研究5、尼羅羅非魚血液研究6、革胡子鯰血液常數值的周年變化7、鯽魚血液的研究8做了大量工作。趙明薊，蘇澤古，黃文郁等作了池養(yǎng)鯉和草魚血液學指標的研究9。 朱心玲,賈麗珠,張明瑛等作了草魚血液學的研究10。趙海濤，張其中，趙海鵬，劉強平等作了南方鲇幼魚和成魚血液指標的比較11。這些研究都表明了兩種或兩種以上的魚血液中，白細胞、紅細胞的數量、大小都存在差異，從而各種魚所表現(xiàn)出的生理性狀都不同。徐未宇作了泥鰍幾項正常血液指標及其與性別的關系12，說明雌雄不同的同種魚的血液指標

9、也有差別。周玉，郭文場，楊振國等歐洲鰻鱺血液指標的研究13，張海發(fā)，王云新，王宏東等斜帶石斑魚血液性狀及生化指標的研究14，都顯示出魚類血液的指標都與魚類的健康狀況、營養(yǎng)狀況有很大關系。為了保護斑鱖的野生資源及滿足人們的食用需求，國內已有很多關于斑鱖的研究。例如斑鱖的形態(tài)學特征15、消化道組織結構16、肌肉營養(yǎng)成分17、肌肉中的脂肪酸18等。但是對斑鱖血液指標的研究幾乎沒有，之所以選擇對其血液的生理指標進行研究是為了更全面的對斑鱖生物學、生理狀況的評價以及為斑鱖疾病的血液學診斷提供資料。1.3 本課題研究的內容、目的及意義1.3.1 研究內容對購買的斑鱖首先進行外部特征觀察。然后測量體長、體高

10、、體重、軀干長、全長等外部可測性狀，再從尾靜脈抽取血液進行以下各種生理指標的測量:紅細胞計數、白細胞計數、紅細胞脆性的測定、白細胞分類計數、血沉等。1.3.2 目的及意義魚類的血液學指標,被廣泛運用于評價魚類的健康狀況、營養(yǎng)狀況及對環(huán)境的適應狀況，是主要的生理、病理和毒理學指標。但是還沒有出現(xiàn)對斑鱖血液的研究，對其血液的生理指標進行研究是為了更全面的對斑鱖生物學、生理狀況的評價以及為斑鱖疾病的血液學診斷提供資料。2. 材料與方法2.1 實驗材料2.1.1實驗魚的選擇2013年12月在市場購買獲得實驗魚，并將活體帶到銅仁學院動物實驗室，共計18尾，規(guī)格為體長(11.35-18.8)cm，體重（3

11、1.65-148.49）g。2.1.2 實驗器材及藥品器材：蓋玻片、毛巾、解剖盤、解剖刀、剪刀、解剖針、鑷子、標簽紙、載玻片、一次性2.5ml注射器、一次性試管及試管架、血沉管、血沉架、血細胞計數板、增氧設備、移液管、移液槍、膠頭滴管、洗耳球、棉花、量筒、玻璃棒、燒杯、烘箱、漁網、塑料桶、天平（電子）、刻度尺、數顯游標卡尺、松柏油、擦鏡紙、計時器、吸水紙、記錄本等。藥品：檸檬酸鈉、魚用緩沖液、瑞氏染液、瑞氏緩沖液、香柏油、乙醇、NaCl、中性紅、結晶紫、甲醛2.2 實驗方法2.2.1 外部特征的觀察在斑鱖的外部特征的觀察中，采用肉眼觀察，觀察其體色。2.2.2 外部可量性狀的測量在斑鱖的外部形

12、態(tài)學測量中，我們采用傳統(tǒng)形態(tài)學測定，測定的項目有全長、體長、體高、體重、軀干長等。測量工具為數顯游標卡尺（精確到0.01mm）和電子天平（精確到0.01g）。測量的依據如下：全長自吻端到尾鰭末端的最小長度；體長自吻端到尾鰭基部的最小長度；體高自魚體背緣到腹緣間的最大垂直距離；軀干長自鰓蓋骨后緣（或最后一個鰓孔）到肛門（或生殖腔）后緣的垂直距離；2.2.3 斑鱖血液的采取在測量斑鱖的外部可測性狀以后，馬上采取魚血進行生理指標的測定，并一一做好記錄。實驗時用經109molL檸檬酸鈉潤濕的一次性2.5ml注射器于斑鱖尾靜脈采血共計2ml以上，大部分注入一次性真空采血管內，反復顛倒3、4次，以防凝血。

13、最后，滴一滴魚血在載玻片上，立即制作血涂片,每尾魚制作2張。2.2.3.1血細胞計數魚用血細胞稀釋液的配制： 0.7g Nacl、3mg中性紅、1.5mg結晶紫、0.4ml甲醛、加蒸餾水至100ml。白細胞核被染成藍色，紅細胞核被染成非常淺的淺灰色或基本不染色，紅細胞形態(tài)基本不變，在顯微鏡下容易區(qū)分。此稀釋液長期有效。在采取血之前，先用5ml移液管取紅細胞稀釋液2ml加入一小試管中，備用。用1ml移液管取白細胞稀釋液0.19ml加入另一小試管中，備用。稀釋：用移液槍于采血管內吸兩次10l血液，分別加至有紅細胞稀釋液和白細胞稀釋液試管的底部，并用上清液洗管內殘留血液。分別搖動小試管，使稀釋液與血

14、液混勻。此時，紅細胞稀釋了200倍，白細胞稀釋了20倍。再用膠頭滴管吸取稀釋液，滴在血細胞計數板上，于顯微鏡下計數。2.2.3.2血細胞計算紅細胞數L=(N*200*10*106*25)5=N*1010其中：N5個中方格內數得的紅細胞數 255將5個中方格紅細胞數換算為一個大方格內紅細胞數 10將一個大方格內紅細胞數換算為1l血液內紅細胞數 1061L=106l 200血液稀釋倍數白細胞數L=(N*20*10*106)4=N*5*107其中：N4個大方格內數得的白細胞數 N4換算為每個大方格內白細胞數 10將一個大方格內白細胞數換算為1l血液內白細胞數 1061L=106l 20血液稀釋倍數2

15、.2.3.3紅細胞脆性的測定Nacl溶液的配制：取10支試管，配制出10種不同質量濃度的Nacl低滲溶液（0.15%、0.20%、0.25%、0.30%、0.35%、0.40%、0.45%、0.50%、0.55%、 0.60%） 加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各試管中各加一滴，輕輕搖勻，靜置1-2h。觀察現(xiàn)象：根據各管中液體顏色和渾濁度的不同，判斷紅細胞脆性。未發(fā)生溶血的試管：液體下層有大量紅細胞下沉，上層為無色透明，表明無紅細胞破裂。部分紅細胞溶血的試管：液體下層有紅細胞下沉，上層出現(xiàn)透明淡紅色或淡棕色，表明部分紅細胞已經破裂，稱為不完全溶血。紅細胞全部溶血的試管：液體完全變成透明紅色，管底

16、無紅細胞下沉，表明紅細胞完全破裂，稱為完全溶血。2.2.3.4 白細胞分類計數每尾魚制作的2張血涂片，經Wrights染液和Giemsa染液染色后，在100倍油鏡下沿著一個方向觀察100個細胞，分辨出各種白細胞并計算出所占比例。根據白細胞的大小、胞核的形態(tài)特征、胞質特殊顆粒的著色及細胞核胞質的多少比例，將白細胞分為為淋巴細胞、單核細胞、嗜中性細胞、嗜酸性細胞和嗜堿性細胞。2.2.3.5血沉的測定將抗凝血注入血沉管中垂直靜置，紅細胞由于密度較大而下沉。通常以紅細胞在第一小時末下沉的距離表示紅細胞的沉降速度，稱為紅細胞沉降率，即血沉（ESR）。在其他生理指標測定完以后，將剩余在采血管中的血液，用一

17、次性注射器吸取并緩慢的注入到血沉管中，注入時要保證管內干凈干燥，沒有氣泡，直到血液到刻度“0”位置處。然后將血沉管垂直固定在血沉架上，靜置，開始計時，每隔30分鐘或60分鐘記錄一次紅細胞的下沉距離，并同時記錄數據。2.2.4數據分析將實驗所得的所有數據經過SPSS16.0處理。3. 結果 3.1 外部可量性狀的結果對18尾斑鱖進行形態(tài)測量，測量數據結果見表1。表1 斑鱖外部形態(tài)測量數據Table 1 Sniperca scherzeri exterior morphology measurement data性狀（Character） 范圍（Range） 平均值±標準差 (Mean

18、± standard deviation) 體長(cm) 11.35-18.80 13.92±2.07 體高(cm) 3.10-4.80 3.72±0.50 全長(cm) 13.60-20.60 16.22±2.05 軀干長(cm) 3.80-8.20 5.23±1.34 體重（g） 31.65-148.49 58.14±29.623.2斑鱖血液血細胞測定結果 表2斑鱖血細胞測定結果Table 2 the determination results of sinipercascherzeristeindachner blood cel

19、ls測 定 項 目 變 化 范 圍 平均值±標準差 (Determination of the project) ( Variable range) (Mean ± standard deviation)紅細胞數量萬個·-3 25.00-194.00 89.5000±44.2642白細胞數量萬個·-3 2.83-9.50 3.2025±1.1284淋巴細胞 8.00-90.00 47.2222±18.3417嗜中性細胞 1.00-21.00 8.7222±6.4242嗜酸性細胞 嗜堿性細胞單核細胞 4.00-60.

20、00 21.8333±14.6979血栓細胞 1.00-74.00 22.2222±18.6722紅細胞：光鏡下呈橢圓形，胞漿含有血紅蛋白，胞核一個，大多數為橢圓形，少數為不規(guī)則形，偶見分裂期的紅細胞。白細胞：數量較紅細胞少，個體較紅細胞小，多為球形，根據細胞質有無染色顆粒分為有粒白細胞和無粒白細胞，在有粒白細胞中，根據染色反應不同及大小不等的各種顆粒，分為嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞，無顆粒細胞分為單核細胞核和淋巴細胞。嗜中性粒細胞：數量較多，細胞為圓形，顆粒較細且分布均勻，具分葉的核。嗜堿性粒細胞：核分葉，細胞質中顆粒大小不等，稀疏，分布不均勻，被染成深藍紫

21、色，數量最少。嗜酸性粒細胞：核分葉，細胞質內分布紅色粗大嗜酸性顆粒，數量少。單核細胞：數量較嗜中性粒細胞多，體積大，核不分葉，細胞質染色很淺。淋巴細胞：數量最多，大小不一，細胞質極少，核大圓形，染色深。血栓細胞：呈紡錘形，腎形，常常數個聚集成堆分布在血液中。3.3血沉實驗中，由于受到實驗魚大小的限制，只有6尾魚做了血沉實驗，結果見表3。在正常情況下，斑鱖的血沉相當的穩(wěn)定，大約在11.6mmh之間。血沉表示紅細胞懸浮穩(wěn)定性的大小，受很多因素的影響，如營養(yǎng)情況、化學物質、季節(jié)變化、疾病等。它是一項非特異的反應，可反應疾病的存在及嚴重程度，有炎癥時，血沉會明顯加快。因此，血沉可作為一項有效的疾病預警

22、指標。表3斑鱖血沉結果Table 3 Siniperca scherzeri ESR results標 本 編 號 紅細胞下降距離mm( Red blood cell drop distance)(Sample number) 0.5h 1h 1.5h 2.0h 2.5h 1 1 2 2.5 3.52 1 2 2.5 43 1 2 3 44 1 2 3 45 1 2 2 46 1 2 3.53.4紅細胞脆性由表4可得出以下結論:在0.35%-0.50%的Nacl溶液中紅細胞部分溶血，在0.15%-0.30%的Nacl溶液中紅細胞完全溶血，在0.55%和0.60%的Nacl溶液中紅細胞未溶血。1

23、8尾實驗魚的紅細胞脆性測定都是這種現(xiàn)象,所以以一尾魚的測定結果來做代表。表4斑鱖紅細胞脆性的測定結果Table 4 The determination results of sinipercascherzeristeindachner erythrocyte fragilityNacl濃度 1%Nacl（ml） 蒸餾水(ml) 實驗現(xiàn)象（溶血情況） 0.15% 0.3 1.7 完全溶血0.20% 0.4 1.6 完全溶血0.25% 0.5 1.5 完全溶血0.30% 0.6 1.4 完全溶血0.35% 0.7 1.3 部分溶血0.40% 0.8 1.2 部分溶血0.45% 0.9 1.1 部分

24、溶血0.50% 1.0 1.0 部分溶血0.55% 1.1 0.9 未溶血0.60% 1.2 0.8 未溶血4討論紅細胞的主要功能是攜帶和運輸氧氣，以滿足機體生理活動和運動的需要。紅細胞數量增加，攜帶氧氣的能力相應的提高，魚的運動能力也會隨之提高。從表2可知，斑鱖的紅細胞數量平均為(89.5±44.2642）萬個·-3,由于受到實驗方法的限制，斑鱖血液的一些生理指標還沒有進行深入的研究。因此，本次研究的結果只能作為參考。由于斑鱖白細胞的分類研究尚不完善，因此，本次實驗白細胞分類計數參照大多數學者分類的方法，把斑鱖血液的白細胞分為單核細胞，血栓細胞，嗜中性細胞，嗜堿性細胞，嗜

25、酸性細胞，淋巴細胞。從結果來看，斑鱖白細胞分類計數中單核細胞核淋巴細胞的數量較多，嗜堿性細胞和嗜酸性細胞幾乎沒有。將斑鱖與其他魚類血細胞進行比較，結果如表5，從表中，可以知道，斑鱖的紅細胞數量明顯少于鳙和鰱4，而白細胞數量卻明顯多于鳙和鰱。嗜中性細胞所占比例也小于鳙和鰱，但單核細胞和血栓細胞所占比例又明顯大于鳙和鰱。表5斑鱖和其他魚類血細胞的比較Table 5 Comparison of Siniperca scherzeri and other fish blood cells測定項目(Determination of the project) 平均值±標準差 (Mean 

26、7; standard deviation) 斑鱖 鰱 鳙紅細胞數量萬個·-3 89.5000±44.2642 237.69±76.39 212.32±57.77白細胞數量萬個·-3 3.2025±1.1284 1.079±0.489 0.585±0.29淋巴細胞 47.2222±18.3417 嗜中性細胞 8.7222±6.4242 20.45±4.38 26.08±1.47嗜酸性細胞 嗜堿性細胞單核細胞 21.8333±14.6979 12.43±3.

27、33 10.30±2.65血栓細胞 22.2222±18.6722 2.03±2.71 2.14±4.185結論從斑鱖的生理指標分析實驗中得出一些初步的結論：紅細胞數量相對較多為（89.5±44.2642）萬個·-3，白細胞數量為（3.2025±1.1284）萬個·-3，而在白細胞分類計數中，淋巴細胞和單核細胞所占的比例較大，其次是嗜中性細胞和血栓細胞所占比例稍大，嗜酸性細胞和嗜堿性細胞數量沒有發(fā)現(xiàn)。由于受到實驗材料的影響，斑鱖血液的血沉測定值只測得6尾魚的值，紅細胞脆性的測定中顯示出斑鱖紅細胞的沉降率比較正常。斑

28、鱖血液的生理指標是斑鱖血液的重要組成成分，在正常情況下比較穩(wěn)定。但是當魚體生長環(huán)境改變或發(fā)生病變時，許多生理指標會發(fā)生明顯的改變。因此，測定斑鱖血液的生理指標具有重要的應用價值，生理指標可以用于斑鱖疾病的診斷和環(huán)境監(jiān)測等。參考文獻1周才武,楊青,蔡德霖.鱖亞科魚類的分類整理和地理分布J.動物學研究,1988,9(2):113-1252 李思忠.鱖亞科魚類地理分布的研究J.動物學雜志,1991,26(4):40-443 梁旭方.國內外鱖類研究及養(yǎng)殖概況J.水產科技情報,1996,23(1):13-174 林光華,張豐旺,洪一江,等.二齡鰱和鳙血液的比較研究J.水生生物學報, 1998,22(1):9-16.5 林光華,張豐旺,洪一江,等.團頭魴和日本白鯽血液的比較研究J.動物學報,1996,42(3):260-268.6 林光華,張豐旺.尼羅羅非魚血液研究J.江西大學學報（自然科學版）,1992，16(2):103-107. 7 林光華，張豐旺.革胡子鯰血液常數值的周年變化J.動物學報,1991,37(3):341-342.8 林光華.鯽魚血液的研究J.動物學報,1979,25(3):210-218.9 趙明薊,蘇澤古,黃文郁,等.池養(yǎng)鯉和草魚血液學指標的研究J.水生生物學集刊，1979,6(4