【試驗(yàn)報(bào)告】血液凝固及其影響因素

1、實(shí)驗(yàn)五：血液凝固及其影響因素奚僉人:同A：【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? .學(xué)習(xí)血液凝固的根本過程2 . 了解加速或延緩血液凝固的一些因素【實(shí)驗(yàn)原理】血液凝固是一個(gè)酶的有限水解激活過程,在此過程中有多種凝血因子參與.根據(jù)凝血過程起動(dòng)時(shí)激活因子來 源不同,可將血液凝固分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑.內(nèi)源性激活途徑是指參與血液凝固的所有凝血因 子在血漿中,外源性激活途徑是指受損的組織中的組織因子進(jìn)入血管后與血管內(nèi)的凝血因子共同作用而啟動(dòng)的激 活過程.【實(shí)驗(yàn)材料和用具】家兔清潔小試管7個(gè)、小燒杯2個(gè)、竹簽、秒表、試管架、哺乳動(dòng)物手術(shù)器械一套、兔手術(shù)臺(tái)、動(dòng)脈夾、塑料動(dòng)脈插 管、線、棉花、水浴槽、冰盒液狀石蠟、肝素

2、、草酸鉀12mg腦勻漿?0.1mk生理鹽水【實(shí)驗(yàn)過程】1、動(dòng)物麻醉及頸部手術(shù)此部由助教老師圜付取一只動(dòng)物,稱重.按1g/kgO的齊撞將烏拉坦氨基甲酸乙酯由耳緣靜脈緩慢注入,觀察動(dòng)物肌張力、 呼吸與角膜反射的變化.動(dòng)物麻醉后背位固定于兔手術(shù)臺(tái)上.剪去頸部手術(shù)野的毛,沿頸正中線在喉頭上一指至鎖骨上一指的地方作一 57cm的皮膚切口.別離皮下組織 及肌肉.2、頸總動(dòng)脈插管此部由助教老師操作在氣管兩側(cè)辨并別離頸總動(dòng)脈,頸總動(dòng)脈下方穿兩條線備用.在左側(cè)頸總動(dòng)脈的近心端夾一動(dòng)脈夾在動(dòng)脈 夾遠(yuǎn)心端距動(dòng)脈夾約3cm處結(jié)扎.用小剪刀在邪線的近側(cè)和痰與動(dòng)脈夾之間沿向心方向剪一小斜口約 占管徑的一半,向心臟方向插入

3、動(dòng)脈插管,由備用的線結(jié)扎固定.取血時(shí)將動(dòng)脈夾松開艮呵.3、血液凝固的力度和延緩觀察1 .翻開兔頸總動(dòng)脈夾,血液從動(dòng)脈插管流出棄去獷份1mL動(dòng)脈血后,向每個(gè)試管中注入1mL兔動(dòng)脈 血力搖勻.2 .自血液流出動(dòng)脈插管開始計(jì)時(shí).除第1管外,其他各管每隔15秒鐘將試管傾斜一次,觀察液面是否 傾斜即血液是否流動(dòng),直到試管內(nèi)血液不再流動(dòng)為止,記錄凝血時(shí)間.3 .當(dāng)?shù)?管已經(jīng)凝固時(shí),再傾斜第1管看血液是否凝固,假設(shè)尚未凝固那么按上本方法每隔15秒鐘傾斜一 次苜到血液凝固為止,記錄凝血時(shí)間,即為該兔血的凝固時(shí)間.4 .以第2管為對(duì)照,各管觀察其他各管中血液凝固時(shí)間.5 .向第9管中滴口 2%氯化鈣2滴觀察血液

4、是否凝固.6 .取出第5管中的玻棒,用水洗7氫觀察附著在玻棒上的纖維蛋白.考前須知：Page 1a） 取放試管時(shí)要用拇指和食指捏住試管的上端不要握住試管的底部,以免手的溫度影噬吉果.b） 每支試管口徑及采血量要盡量一致,不可相差太大.c） 記錄凝血時(shí)間要準(zhǔn)確.d） 判斷凝血的標(biāo)準(zhǔn)要前后T.一般以傾斜試管達(dá)45.時(shí)試管內(nèi)血液不見流動(dòng)為準(zhǔn).【實(shí)驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)討論】實(shí)驗(yàn)條件凝血時(shí)間 一組凝1時(shí)間 現(xiàn)象解I1參加0.1 %肝素溶液0.1mL 6 滴E20minE20min肝素是抗凝劑,育環(huán)可逆勺阻止血液凝固.由于肝素鈉具 有帶強(qiáng)負(fù)電荷的理化特T生能干擾血凝過程的許多環(huán)節(jié), 在體內(nèi)外者給抗凝血作用.其作用

5、機(jī)制比擬復(fù)雜,主要通 過與抗凝血酶出AT-m結(jié)合,而增強(qiáng)后者對(duì)活化 的na、IX& Xa Xia和XHa凝血因子的抑制作用.其 后果涉及阻止血小板凝集和破壞,阻礙凝血激活酶的形 成；阻止凝血酶原變?yōu)槟?；抑制凝血?從而阻礙 纖維蛋白原變成纖維蛋白.中和組織凝血活素因子 出.抑制血小板的聚集和釋放.它對(duì)血中有機(jī)成分和 無機(jī)成分的測(cè)定均無影響.2參加2%草酸鉀溶液0.1mL 6滴E20min血液凝固的多個(gè)環(huán)中都需要鈣離子的參與,故通常用 枸檬酸鈉、草酸鈉和草酸鉀作為體夕梳凝劑,它們可與 鈣離子結(jié)合而除去血漿中的鈣離子,從而起到抗凝作用 理論上當(dāng)繼續(xù)向血液中參加CaC2溶液,CaC2中的鈣離 子

6、會(huì)起到凝血因子IV的作用,從而使再次啟動(dòng)凝血過 程,血液凝固.草酸鹽是可逆性抗凝劑.但本次實(shí)驗(yàn)中 參加CaC2后并沒有出現(xiàn)凝血現(xiàn)象,可能是CaC2溶液 配置有問題,或者由于操作不當(dāng),凝血因子已經(jīng)完全失 活.3室溫6滴生理鹽水 靜置7min30s7min30s血液流出血管后,很快會(huì)凝固.血液流出血管后血小板4室溫6滴生理鹽水 每隔15S麻454min5min傾斜可力感血小板的粘附聚集過程,并加大血小板釋放 的凝MBS*血細(xì)胞的接觸積,從而加快了凝1的過 程該過程是內(nèi)源性凝血過程.5細(xì)玻璃粉少許6滴生 理鹽水2min45s3min玻璃粉是異物,可激活凝血因子口及血/板,啟動(dòng)凝血過 程.6腦組織浸出

7、液6滴15s30s腦組織液中有組織因子途徑抑制物,是外源性凝血途徑 的特異性抑制劑,因而水平度凝血過程.7置于40c水浴6滴 生理鹽水165s165s適當(dāng)升高溫度,育母曾加酶的活性,加快凝血過程.8置于10c水浴6滴生 mkzKE20min降低溫度可以降彳醐的活f延緩凝血過程.9竹簽攪拌6滴生理鹽 水侶曷侶彈 性的纖維 蛋白糾纏 仕竹簽上同上在竹簽白的動(dòng)下特別是！上線的接觸面M糙的竹簽,能 加速凝血過程,使凝血因子S定順序相繼激活而生成 凝血酶,最終使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白而糾結(jié)在他簽 上,形成一層蛋白膜.Page 2機(jī)體凝血系統(tǒng)包括凝血和抗凝兩個(gè)方面,兩者間的動(dòng)態(tài)平衡是正常機(jī)體維持體內(nèi)血液流

8、動(dòng)狀態(tài)和預(yù)防血液丟 失的關(guān)鍵.機(jī)體的正常止凝血,主要依賴于完整的血管壁結(jié)構(gòu)和功能,有效的血小板質(zhì)量和數(shù)量,正常的血漿凝 血因子活f其中,血小板和凝血因子是生理性止凝血的重要成分,見圖1抗凝系統(tǒng)不僅包括抗凝因子,還包括纖 溶系統(tǒng).n小值收州皆白APTTX IPR如管收整|RTCTHMWXX J1 XVII共同也必途口XV DIPT啟動(dòng)BT出血時(shí)間 CFT束臂試驗(yàn) CRTM塊收縮試驗(yàn)BPC血小板計(jì)數(shù)CT凝血時(shí)間RT復(fù)鈣時(shí)間APTT活化局部凝血活酶時(shí)間PT凝血酶原時(shí)間PF3血小板第3因子 TF組織因子 Fb纖維蛋白TXA血栓素A 5-HT5 羥色胺 PK激肽釋放酶原HMW高分子量激肽原圖1正常止血機(jī)

9、制及血栓與止血常用篩選試驗(yàn)檢測(cè)環(huán)節(jié)血小板的作用:在正常的血液循環(huán)中,血小板并不與內(nèi)皮細(xì)胞外表或其他細(xì)胞發(fā)生作用而是沿著毛細(xì)血管內(nèi)壁排列,維持其 搭I(lǐng)性,血管局部受損傷時(shí),血小板的止B兼有機(jī)底性的堵塞傷口和生物化學(xué)性粘附聚集作用止血時(shí),首先是受 損的血管壁發(fā)生收縮使局部血液動(dòng)變慢或減少.血液中的血/收在vWF因子存在下速粘附于暴露的膠原纖 維,此時(shí)血/誠(chéng)被激活,血小板形態(tài)發(fā)生改變而正常的圓盤狀態(tài)變?yōu)閳A球形,偽足突起,血/板發(fā)生聚集血小板 膜僭蛋白IIb/IIIa由纖維蛋白原介導(dǎo)發(fā)生互相粘附、聚集,此為血/板第一相聚集,激活的血/板便發(fā)生釋放反 應(yīng)和花生四烯酸代謝,其中許多物質(zhì),如血小板白ADP等

10、,可加速血小板的聚集、變性成為不可逆的“第/目聚 集,形成白色血栓,構(gòu)成了初期止血的屏障.與此同時(shí),由血小釋放和激活許多促凝物質(zhì)參與血液凝固反響.血小板膜 磷I旨外表提供了凝血反響的場(chǎng)所,血小板第3因子在凝血過程多個(gè)環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要作血小板合成釋放白TXA2 和5-HT促使小步收縮血/收收縮蛋白那么最終可作千維蛋白收縮血塊收縮,使血栓更為鞏固,止血更加 徹底.血液凝固簡(jiǎn)稱凝血,是血液由流動(dòng)狀態(tài)變?yōu)槟z狀態(tài)的過程它是止血功能的您組成局部.凝血過程是一系 列凝血因子被相繼酶解激活的過程,最終生成凝血酶,形成纖維蛋白凝塊.迄今為止,參與凝血的因子共有14個(gè) 其中用羅馬數(shù)字編號(hào)的有12個(gè)RI-W,其中因

11、子V1并不存在.習(xí)慣上,前4個(gè)凝血因子常分別稱為纖維蛋白Page 3 原因子i、凝血酶因子n、組織因子因子出和鈣離子因子W.凝血因子VI是血清中活化的 凝血因子V,故不再視XT蟲立的凝血因子.1 .內(nèi)源性凝血途徑內(nèi)源性凝血途徑是指參加的凝血因子全部來自血液內(nèi)源性.臨床上常以活化局部凝血活酶時(shí)間APTT 來反映體內(nèi)內(nèi)源性凝血途徑的狀況.內(nèi)源性凝血途徑是指從因子刈激活,到因子X激活的過程.當(dāng)血管壁發(fā)生損 傷,內(nèi)皮下組織暴露,帶負(fù)電荷的內(nèi)皮下膠原纖維與凝血因子接觸,因子刈即與之結(jié)合,在HK和PK的參與下被 活化為XH&在不依賴鈣離子的條件下,因子XU a將因子XI激活.在鈣離子的存在下,活化的XIa

12、又激活了因子IX. 單獨(dú)的IXa激活因子X的效力相當(dāng)?shù)?它要與皿a結(jié)合形成1 ： 1的復(fù)合物又稱為因子X酶復(fù)合物這一反響還必 須有Ca2利PL共同參與.2 .外源性凝血途徑外源性凝血途徑：國(guó)旨參加的凝血因子并非全部存在于血液中,還有夕笳的凝血因子參與止血.這一過程是 從組織因子暴露于血液而啟動(dòng),到因子X被激活的過程.臨床上以凝血酶原時(shí)間測(cè)定來反映外源性凝血途徑的狀 況.組織因子是存在于多種細(xì)胞質(zhì)膜中的一種特異性跨膜蛋白.當(dāng)組織損傷后,釋放該因子,在鈣離子的參與下, 它與因子口一起形成1:1復(fù)合物.一般認(rèn)為,單獨(dú)的因子口或組織因子均無促凝活f但因子口與組織因子結(jié)合會(huì)很 快被活化的因子X激活為Vi

13、la,從而形成口 a組織因子復(fù)合物,后者比口 a單獨(dú)激活因子X增強(qiáng)1600a音外源性凝 血所需的時(shí)間短反響迅速.外源性凝血途徑主要受組織因子途徑抑制物TFPI調(diào)節(jié).TFPI是存在于正常人血漿 及血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞中的一種糖蛋白.它通過與因子Xa或因子Vila-組織因子一因子Xa結(jié)合形成復(fù)合物來 抑制因子Xa或因子口a組織因子的活生 另外,研究說明,內(nèi)源凝血和外源凝血途徑可以相互活化.3 .凝血J勺共同途徑從因子X被激活至纖維蛋白形成,是內(nèi)源外源凝血的共同凝血途f5.主要包括凝！酶生成和纖維蛋白形成 兩個(gè)階段.凝血酶的生成：即因子Xa、因子Va在鈣離子和磷I褪的存在下組成凝血酶原復(fù)合物,即凝血

14、活酶,將 凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?2纖維蛋白形成:纖維蛋白原被凝血酶酶解為纖維蛋白單體,并交牌物或穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,這一過程 可分為三個(gè)階段,纖維蛋白單體的生成,纖維蛋白單體的聚合,纖維蛋白的交聯(lián).纖維蛋原含有三對(duì)多肽鏈,其 中纖維蛋白肽A FPAW口 BFPB帶較多負(fù)電荷,凝血酶將帶負(fù)電荷多的纖維蛋白肽A和肽B水解后除去,轉(zhuǎn)變 解1維蛋白單體.從纖維蛋白分子中釋放出的FPA和FPB可以反映凝血酶的活化程度,因此FPA和FPB的濃度 硬匠也可用于臨床高凝狀態(tài)的預(yù)測(cè).纖維蛋白單體生成后,即以非共價(jià)鍵結(jié)合,形成能溶于尿素或氯醋酸中的纖維 蛋白多聚體,又稱為可溶,性纖維蛋白.纖維蛋白生成后,可促使凝

15、血酶對(duì)因子Xin的激活在Xma與鈣離子的參與 下,相鄰的纖維蛋白發(fā)生,快速共價(jià)交聯(lián),形成不溶的穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊.纖維蛋白與凝血酶有高親和力,因此 纖維蛋白生成后即育跛附凝血酶,這樣不僅有助于局部血凝決的形成,而且可以預(yù)防凝血酶向循環(huán)中擴(kuò)散.在凝血共同途徑中有兩步重要的正反響反響,有效地放大了內(nèi)外源凝血途徑的作用.一是Xa形成后,可反響激活因子V、口、皿、IX;二是凝血酶形成后,可反響激活因子V、口、皿、X、XI、以及凝血酶原.凝血酶還可促使血小板發(fā)生聚集 和釋放反響刺激血小板收縮蛋白引起血塊退縮.但大量凝血的產(chǎn)生卻反過來破壞因子皿、和因子V,這是正常凝 血的負(fù)反響調(diào)節(jié),以預(yù)防不適當(dāng)?shù)倪^度凝血.抗凝劑的選擇：1草酸鉀：常用于尿素、肌酎、纖維蛋白原等測(cè)定,不能用鉀、鈣等測(cè)定,XLDH、丙酮酸激酶、AKP和淀粉 酶有抑制用.2肝素：常用于電解質(zhì)、血?dú)夥治?、血氨等測(cè)定.抗凝劑比例為5061U干弱5ml血.注意鈉鹽可使淀粉酶 開3氟化鈉：常用氟化鈉一草酸鈉混合抗凝劑作血糖測(cè)定的抗凝劑,氟化鈉可以抑止烯醇化酶,它可預(yù)防血細(xì)胞 葡萄糖酵解酶的作用,延長(zhǎng)標(biāo)本的保存時(shí)間.二乙胺四乙酸鈉鹽EDTA-Na2: