實驗3環(huán)境微生物的檢測

1、實驗三 環(huán)境微生物的檢測、實驗?zāi)康?. 了解周圍環(huán)境中微生物的分布情況。2. 懂得無菌操作在微生物實驗中的重要性。3. 了解四大類微生物的菌落特征。、實驗原理在我們周圍的環(huán)境中存在著種類繁多的、數(shù)量龐大的微生物。土壤、江 河湖海、塵埃、空氣、各種物體的表面以及人和動物體的口腔、呼吸道、消 化道等都存在著各種微生物。由于它們體積微小，人們用肉眼無法觀察到它 們個體的存在。但是只要稍加留意，我們就可以在發(fā)霉的面包、朽木上看到 某些微生物群體。這些現(xiàn)象表明，自然界只要有微生物可以利用的物質(zhì)和環(huán) 境條件，微生物就可以在其上生長繁殖。據(jù)此，我們在實驗室里就可以用培 養(yǎng)基來培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)基是用人工配制的

2、、適合微生物生長繁殖和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合 養(yǎng)料。其中含有微生物所需要的六大營養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機鹽、生長 因子、氣體和水分。此外，根據(jù)不同的微生物的要求，在配制培養(yǎng)基時還需 用酸液或堿液調(diào)節(jié)至適宜的pH。配制好的培養(yǎng)基必須進行滅菌。所謂滅菌是 指采用各類的物理或化學(xué)因素，使物體內(nèi)外的所有微生物喪失其生長繁殖能 力的措施。經(jīng)過滅菌后的物體是無菌的。消毒是與滅菌完全不同的概念，它 是指用較溫和的物理因素殺死物體表面和內(nèi)部病原微生物的一種常用的衛(wèi)生 措施。滅菌的方法較多，廣泛使用的是高溫滅菌，其中最常用的是高壓蒸汽滅 菌法。此法是把待滅菌的物品放在一個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進行的。在1.05

3、kg/cm2的蒸汽壓力下，溫度可達121C。一般只要維持1520min,就 可殺死一切微生物的營養(yǎng)體和它們的各種孢子。微生物的接種技術(shù)是生物科學(xué)研究中的一項最基本操作技術(shù)。為了確保 純種不被雜菌污染，在整個接種過程中，必須進行嚴(yán)格的無菌操作。在實驗 過程中必須牢固樹立無菌概念，經(jīng)常保持實驗臺及周圍環(huán)境的清潔，嚴(yán)格無 菌操作，避免雜菌的污染，這是保證實驗成功的必要條件。如將微生物接種到適合其生長的固體培養(yǎng)基表面，在適宜的溫度下（一般 細(xì)菌37C :霉菌等28C）,培養(yǎng)一段時間（一般2448h）后，少量分散的菌體 或孢子就可生長繁殖成肉眼可見的細(xì)胞群體，此即菌落。如平板上的菌落是 由單個細(xì)胞 （或

4、單個孢子 ）生長繁殖而成的，就是一個純種細(xì)胞群或克?。蝗?培養(yǎng)后大量菌落聚集在一起形成的為菌苔。不同種的微生物可形成大小、形 態(tài)各異的菌落，根據(jù)微生物菌落形態(tài)的不同，可初步鑒別出四大類微生物: 細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌。細(xì)菌的菌落呈圓形、較小而薄、透明或不透明、質(zhì)地“細(xì)膩” ，有的具有 色澤，有的邊緣不整齊，有的表面濕潤、光滑，有的表面干燥有褶皺。此外， 細(xì)菌常因分解含氮化合物而產(chǎn)生臭味。酵母菌的菌落通常比細(xì)菌菌落大，圓形、厚、不透明、色素單一，多為 乳白，少數(shù)為橙或紅色。酵母菌因普遍能發(fā)酵含碳有機物產(chǎn)醇，故菌落多伴 有酒香味。防線菌菌落小而致密，或堅硬、或呈粉狀。不少放線菌還產(chǎn)生特殊的土

5、腥味。霉菌菌落大而疏松、或大而緊密。氣生菌絲會發(fā)育形成一定形狀、構(gòu)造 和色澤的子實器官，所以菌落表面往往有肉眼可見的構(gòu)造和顏色。三、實驗材料人體表和空氣中的微生物。四、實驗器材與試劑1.器材恒溫培養(yǎng)箱、無菌平皿、電爐、酒精燈、火柴、無菌棉簽和記號筆。2.試劑牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、酵母膏葡萄糖培養(yǎng)基（簡稱YPD）、高氏一號 培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基。五、實驗操作I. 融化培養(yǎng)基將裝有無菌培養(yǎng)基的三角瓶置水浴中煮沸，待培養(yǎng)基融化后取出，當(dāng)冷 至5060C左右時，進行下一步。II、倒平板有持皿法和疊皿法，操作要點如下：1.持皿法（1）將無菌培養(yǎng)皿疊放在酒精燈左側(cè)，以便拿取。（2）點燃酒精燈。（3）酒精燈

6、旁，左手握三角瓶底部，傾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手小 指與小尾魚際 （即小指邊緣 ）夾住棉塞并將其拔出 （切勿將棉塞放在桌上 ），隨之 將瓶口在火焰上過一下 （不可灼燒，以防爆裂 ），以殺死可能沾在瓶口的雜菌。 然后將三角瓶從左手換至右手 （用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部 ）。操 作中瓶口應(yīng)保持在火焰23cm,瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污 染。左手拿起一套平皿， 用無名指和小指托住皿底， 用中指和拇指夾住皿蓋， 食指于皿蓋上為支點，在火焰旁，打開皿蓋，讓三角瓶伸入，隨后倒入培養(yǎng) 基。一般倒入 15ml 左右培養(yǎng)基即可鋪滿整個皿底。 蓋上皿蓋， 置水平位置待 凝。然后將三角瓶移

7、至左手，瓶口在次過火并塞緊瓶蓋。2. 疊皿法此法適于在超干凈臺上操作，基本步驟同持皿法。不同之處是左手不必 持皿，而是將瓶皿疊放在酒精燈的左側(cè)并靠近火焰。按上述方法用右手拿三角瓶，左手打開最上面的皿蓋，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋后即移至水平位置待 凝。再依次倒下面的平皿。操作中瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的 污染。III、貼標(biāo)簽待培養(yǎng)基完全凝固后，在皿底帖上標(biāo)簽，注明檢測類型，組別及日期 （也 可用記號筆書寫在皿底 ）IV、檢測方法環(huán)境中微生物種類多樣，檢測方法也各異，先選幾種列舉如下：1. 空氣 檢測實驗室空氣中的微生物時，只要打開無菌平板的皿蓋，讓其 暴露在空氣中一段時間（510min）然

8、后將皿蓋蓋上即可。2. 桌面 檢測實驗臺桌面微生物是，可用一根無菌棉簽，先在無菌平板的精選文檔，供參考！圖4-1含菌棉簽平板劃線示意圖左：開啟皿蓋法右：劃線示意圖一個區(qū)域內(nèi)濕潤和試劃幾下，然后用其擦抹桌面等物體表面，在以此棉簽在 平板的另一區(qū)域作來回劃線接種（如圖4-1）。本操作應(yīng)以無菌操作要求進行, 即在火焰旁用左手拿起平板，用中指 無名指和小指托住皿底部，用食指和大 拇指夾住皿蓋并開成一縫，右手持棉簽在培養(yǎng)基表面劃線接種，無菌棉簽濕 潤和試劑區(qū)可作為無菌對照。3. 頭發(fā)移去放在桌面上的無菌平板的皿蓋，是頭發(fā)部位位于平板的上 方，并用手指撥動頭發(fā)數(shù)次，在蓋上皿蓋即可。4. 手指可用未洗的手指先在無菌平板的培養(yǎng)基一側(cè)（約一半的面積）作劃 線接種，并在皿底作好標(biāo)記。然后用肥皂、流水洗手，用洗凈的手指于平板 培養(yǎng)基的另一側(cè)作同樣的劃線接種，蓋好皿蓋。待培養(yǎng)后比較兩雜菌生長的 情況。5.口腔 打開無菌平板培養(yǎng)基的皿蓋，使口對著平板培養(yǎng)基的表面，以咳 嗽或打噴嚏的方式接種，然后蓋上皿蓋。V、培養(yǎng)將以上各種檢測平板倒置于28C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至下周實驗時觀察并計 數(shù)各平板上的菌落數(shù)。VI、觀察注意觀察不同類型菌落的大小、外形和顏色等特征，將觀察結(jié)果記錄在實驗報告上。VII、清洗觀察記錄完畢后，將含菌平板放在沸水中煮 30min以上，殺死培養(yǎng)基表面生長的