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文檔簡(jiǎn)介

1、it 1 fl畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)外文資料翻譯學(xué) 院:機(jī)械工程學(xué)院專業(yè)班級(jí):機(jī)械設(shè)計(jì)制造及其自動(dòng)化G機(jī)械132學(xué)生姓名:孫銣學(xué)號(hào):2013150075指導(dǎo)教師:訾克明(副教授)外文出處:Biotech nology Reports 3(2014)99-107附件:1外文資料翻譯譯文;2.外文原文指導(dǎo)教師評(píng)語(yǔ):簽名:在雙螺桿擠出機(jī)中酶法水解預(yù)處理后的玉米穗軸蒸汽爆炸殘留物Jun Zhenga ,Kim Chooa,b ,Chris Bradtc ,Rick Lehouxc ,Lars Rehmanna, *A 化學(xué)工程與生物工程系,西安大略大學(xué),里士滿 1151 街,倫敦,在 N6A3K7。B 加拿

2、大萊姆頓學(xué)院, 1457街,倫敦路,在 N7S 6K4。摘要將結(jié)合有過(guò)濾裝置的改進(jìn)的雙螺桿擠出機(jī)用作液體 /固體分離器,用于從蒸 汽爆炸玉米芯中除去木糖。 面心為中心的復(fù)合設(shè)計(jì)用于研究各種酶水解過(guò)程變量 (酶負(fù)載,表面活性劑添加和水解時(shí)間)與兩種不同擠出的玉米芯(7木糖去除,80木糖去除)對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)化的組合效應(yīng)。結(jié)果表明,擠出過(guò)程導(dǎo)致纖維素 結(jié)晶度的增加,而結(jié)構(gòu)變化也可以通過(guò) SEM 觀察到。開(kāi)發(fā)了用于預(yù)測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn) 化的二次多項(xiàng)式模型,并且擬合的模型提供了通過(guò)方差分析( ANOVA )驗(yàn)證的 真實(shí)響應(yīng)的充分近似。簡(jiǎn)介木質(zhì)纖維素生物質(zhì)向乙醇的生物轉(zhuǎn)化被認(rèn)為是石油基液體燃料的最重要的替 代品之一

3、14-15,17,29,35。木質(zhì)纖維素生物質(zhì)是高度豐富的,具有高能量潛力并且是 用于乙醇生產(chǎn)的低成本材料。 典型來(lái)源是林產(chǎn)品, 農(nóng)業(yè)殘余物, 城市固體廢物和 專用能源作物 18,31。玉米芯,玉米籽粒生產(chǎn)的副產(chǎn)品, 在歐洲的一些地區(qū)曾經(jīng)用于動(dòng)物飼料和肥 料,用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn),而在美國(guó),玉米芯目前被用作纖維素乙醇生產(chǎn)的潛在原料, 由于其低木質(zhì)素和高碳水化合物含量。此外,玉米芯具有產(chǎn)生約 8000Btu / lb 的 高熱值( HHV )。平均玉米棒產(chǎn)量為谷粒產(chǎn)量的約 14,占玉米秸稈總產(chǎn)量的 約 16 4,22,32。在可用于將木質(zhì)纖維素生物質(zhì)轉(zhuǎn)化為合適的發(fā)酵底物的不同技術(shù) 25,33中,纖 維素

4、的酶促轉(zhuǎn)化似乎是獲得高產(chǎn)率的可發(fā)酵糖的最有希望的方法 8 ,因?yàn)樗?高度特異性的,不產(chǎn)生大量的不需要的副產(chǎn)物 38 。酶水解過(guò)程通常由纖維素酶 催化,并且該過(guò)程受到許多因素的影響, 包括半纖維素和木質(zhì)素的纖維素纖維保 護(hù),纖維素結(jié)晶度, 聚合度,半纖維素的乙?;潭群蜕镔|(zhì)的可及表面積 28 。 半纖維素和木質(zhì)素的存在使得纖維素酶難以進(jìn)入纖維素, 這將降低水解效率。 因 此,纖維素生物質(zhì)的結(jié)構(gòu)必須在酶水解之前進(jìn)行預(yù)處理, 使得纖維素更易于酶促轉(zhuǎn)化11,29。各種物理,化學(xué),物理化學(xué)和生物預(yù)處理方法已經(jīng)被充分研究了從木 質(zhì)纖維素生物質(zhì)的乙醇生產(chǎn) 16,35。預(yù)處理的目的主要是通過(guò)溶解半纖維素或

5、和木 質(zhì)素,以及通過(guò)降低聚合度和纖維素纖維結(jié)晶度來(lái)增加酶對(duì)纖維素的可達(dá)性 12 。此外,添加表面活性劑還提高了效率的纖維素水解3,10。為了提高酶水解速率, 研究人員集中研究多種酶水解過(guò)程參數(shù), 包括底物濃 度和反應(yīng)條件,如水解時(shí)間,pH,溫度和添加表面活性劑35。最佳參數(shù)高度依 賴于消化的生物質(zhì)的物理化學(xué)結(jié)構(gòu), 并且不同的預(yù)處理方法將產(chǎn)生顯著不同的生 物質(zhì)??梢允褂秒p螺桿擠出機(jī)中的預(yù)處理 (除了其它方面) 以水解和去除半纖維 素級(jí)分 7,23-24。然而,還沒(méi)有系統(tǒng)地表征通過(guò)擠出預(yù)處理的木糖去除以及對(duì)玉米 芯的酶水解的其它工藝參數(shù)的影響。在本研究中,分別使用具有7木糖去除和80木糖去除的兩個(gè)

6、不同擠出的玉米棒作為酶水解的來(lái)源。通過(guò)SEM 和 XRD檢查這兩種材料的特性。 使用面心中心復(fù)合設(shè)計(jì)來(lái)研究各種酶水解過(guò)程變量 (酶 負(fù)載,表面活性劑添加和水解時(shí)間) 與這兩個(gè)擠出的玉米芯 (7木糖移除, 80 木糖移除)的組合效應(yīng)。2材料和方法玉米芯的獲得來(lái)自加拿大安大略省查塔姆的當(dāng)?shù)剞r(nóng)民。 將玉米芯清潔并研磨 至 0.5-1cm 3 的粒徑,并將水分調(diào)節(jié)至 50干物質(zhì)。然后將玉米棒進(jìn)料到連續(xù)蒸 汽爆炸預(yù)處理反應(yīng)器(GreenField Ethanol, Chatham)中。反應(yīng)器設(shè)定在205°C 的溫度。在用飽和蒸汽加壓的系統(tǒng)中具有 pH 4.8。預(yù)處理期間玉米芯的總保留時(shí) 間為

7、5分鐘。在這些條件下半纖維素被水解成木糖或木寡糖。反應(yīng)器的壓力迅速釋放到大氣壓力, 因此將加壓的玉米棒閃蒸到旋風(fēng)分離器中,這增加了酶的纖維的可及表面積。 收集具有 80水分含量的預(yù)處理的玉米棒并調(diào)節(jié)至 60 通過(guò)空 氣干燥以在擠出過(guò)程中進(jìn)一步除去木糖。所有其它化學(xué)品(例如乙酸,無(wú)水硫酸鈉,四環(huán)素,環(huán)己酰亞胺,葡萄糖和 木糖)是分析級(jí)的,并購(gòu)自 Sigma-Aldrich (USA) 。 Cellic CTec 2 纖維素酶獲自 Novozyme( Canada)。2.2 擠出過(guò)程中木糖的去除使用 Leistritz 同向旋轉(zhuǎn)雙螺桿擠出機(jī)(American Leistritz Extruder

8、Corp ,USA) 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。擠出機(jī)由12個(gè)每個(gè)200mm長(zhǎng)的模塊化的桶組成。使用熱感應(yīng)對(duì)桶進(jìn) 行電加熱,并通過(guò)水循環(huán)冷卻。從控制面板監(jiān)測(cè)桶溫度,水流速,進(jìn)料流速和壓 力。通過(guò)重量分析進(jìn)料器(Brabender Technology Canada將材料以4kg / h供 給到擠出機(jī)入口(圖 1 中的料筒 0)中。表1不同處理?xiàng)l件下玉米棒樣品的碳水化合物組成(一式三份的平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差)地面玉米()蒸汽爆炸玉米()擠壓玉米和木糖80%擠壓玉米和7%木糖葡萄糖41.3 ± 0.7555.4 ± 1.6165.5 ± 1.5058.1 ± 1.52木糖29.

9、0 ± 1.2522.8 ± 1.297.4 ± 0.1019.4 ± 1.00阿拉伯4.2 ± 0.182.4 ± 0.071.5 ± 0.072.3 ± 0.06糖半乳糖1.5 ± 0.10.6 ± 0.050.2 ± 0.030.6 ± 0.03甘露糖0.4 ± 0.030.3 ± 0.030.3 ± 0.030.2 ± 0.02以檢測(cè)過(guò)濾器兩側(cè)的壓力。使用兩種螺桿構(gòu)型(圖I和80%木糖清除的擠出玉米芯。通過(guò)將輸送,捏合和反向螺桿

10、元件放置在不同的位置和間隔來(lái)構(gòu)建這兩個(gè)螺桿; 們的較小節(jié)距可壓縮產(chǎn)品并在每 桿元件用于分解大的固體并混合構(gòu)型輪廓個(gè)桶內(nèi)實(shí)/ 生物質(zhì)詢水以實(shí)現(xiàn)均勻分布輸送螺t元件用于材料輸送,并且它:以不同角度取向的捏合螺此外,在相反方向上承載材料的反向螺桿元件緊接;過(guò)濾器之孑和之后放置圖1用于實(shí)現(xiàn)召集元件:揉捏元素:C1 : GFA-2-30-3K1 : KB2-1K2 :JKB2-=自由bb:cK3木糖去除的螺桿構(gòu)型;'|:;GFA-2-40-60 , C4: GFA-2-40-90 ,KB2-15-90, K4: KB2-15-30 , LiGFA-2-XX-XX, G =同向旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn),距,第二個(gè)

11、XX =螺桿元件的長(zhǎng)度。KB5-2-30-XX-2 =螺紋數(shù),30 =捏合段長(zhǎng)度,XX =各捏合段的扭轉(zhuǎn)角,2 =螺紋數(shù),KB =捏合段,RE = Li =第一個(gè)XX =螺5 =捏合段數(shù),反向元件,X2 =通過(guò)容積泵(Milt on Roy USA )將水注入到桶8中。將固/液分離器置于桶9 中以收集主要含有溶解的木糖的濾液。兩個(gè)壓力傳感器分別定位在桶8和10中, 1A和B)分別產(chǎn)生具有7%兩個(gè)相同的元件圖2未處理和擠出的玉米棒的各種放大倍數(shù)的SEM圖像(A, B)未除去木糖的未處理的玉米棒,(C, D)具有7%木糖除去的擠出的玉米棒,(E, F)擠出的除去80%木糖的玉米棒葡萄糖的濃度通過(guò)

12、Agile nt 1260 Infin ity高效液相色譜(HPLC)使用MetaCarb H Plus Colum n 300。7.8mm (Agile nt Techn ologies, USA),裝備有折射率檢測(cè) 器。在分析前,將水解的液體樣品進(jìn)行50C稀釋并通過(guò)0.2m m醋酸纖維素膜(VWR International ,USA)過(guò)濾。柱溫度保持在 60C。流速為 0.7ml / min(5mM H 2 SO 4)0通過(guò)比較水解產(chǎn)物中產(chǎn)生的葡萄糖的量與預(yù)處理的生物質(zhì)中存在的 葡萄糖單體的總量來(lái)計(jì)算葡萄糖轉(zhuǎn)化。2.4酶水解從Novozyme (Canada獲得的玉米棒的酶水解在具有 C

13、ellic CTec 2酶的 100ml帶螺紋蓋的玻璃小瓶中進(jìn)行。 酶活性測(cè)量為168.2FPU / ml。應(yīng)用的酶負(fù)荷 從1.8至7.2FPU / g DM的擠出玉米芯(具有80%木糖去除)和1.1至4.4FPU / g DM的擠出玉米芯(具有7%木糖去除)變化?;诿總€(gè)擠出的玉米芯中的總纖 維素量確定酶負(fù)載量。水解混合物由12%( w / v)干物質(zhì)/緩沖液和0.1M檸檬 酸鈉緩沖液(pH5.0)組成,其補(bǔ)充有40ml四環(huán)素和30ml環(huán)己酰亞胺以防止消 化過(guò)程中的微生物污染。Tween 80 (Sigma Aldrich , USA)用于這些水解實(shí)驗(yàn)中 以增強(qiáng)未處理和預(yù)處理的玉米芯的相鑒定

14、。將樣品研磨以通過(guò)150卩mm目篩,并且結(jié)晶度由Rigaku (USA)使用CoK是輻射源。樣品以5 a的速度掃描。(2u)/ min,在5? 45C下連續(xù)運(yùn)行。(2u)范圍。纖維素樣品的結(jié)晶指數(shù)(CrI)通過(guò)基于以下關(guān)系 的X射線衍射圖確定:Crlmax lmin 100%1 max其中I max表示纖維素I在2u約26°處的最大強(qiáng)度峰值。I min表示在2u 約19°處非晶區(qū)(纖維素II)的最小強(qiáng)度峰值?;趶?CuK輻射源的布拉格定 律轉(zhuǎn)換。2.7 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇具有四個(gè)因子的面心中心復(fù)合設(shè)計(jì)(FCCD),以評(píng)價(jià)所選變量對(duì)反應(yīng) 模式的影響,并確定酶負(fù)載(2%-8%),吐

15、溫80濃度(0% 6%)和水解時(shí)間(24h-72h),使用具有不同木糖清除率(7%和80%)的擠出玉米芯來(lái)使預(yù)處理 玉米芯的葡萄糖轉(zhuǎn)化最大化。基于初步研究選擇每個(gè)因子水平。來(lái)自完全因子設(shè) 計(jì)的初步結(jié)果顯示出顯著的曲率(數(shù)據(jù)未示出),因此選擇中心復(fù)合設(shè)計(jì),特別 是“面心”設(shè)計(jì),因?yàn)橹挥袃煞N類型的擠出生物質(zhì)可用(7%和80%木糖去除)。選擇水解產(chǎn)物中產(chǎn)生的葡萄糖總量與蒸汽爆炸玉米芯中總葡萄糖理論量(在酸水解后分析)之比作為分析響應(yīng)。使用軟件Design Expert,版本 (Stat Ease Inc.USA)開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。得到的22個(gè)實(shí)驗(yàn)條件以及每種類型的生物質(zhì)的三個(gè)中 心點(diǎn)重復(fù)測(cè)

16、試一式三份,數(shù)據(jù)表示為一式三份的平均值,標(biāo)準(zhǔn)偏差。所有實(shí)驗(yàn)完 全隨機(jī)化進(jìn)行,并且數(shù)據(jù)通過(guò)線性回歸擬合到二階模型:y =卩。+瓦xFix +瓦二0必2 + 瓦:名 %xxj其中y是預(yù)測(cè)響應(yīng),Xi表示獨(dú)立變量,k是變量的數(shù)量,由是截取系數(shù),B 表示每個(gè)獨(dú)立變量的線性系數(shù),ft表示二次項(xiàng)的系數(shù),旬表示相互作用效應(yīng)的 系數(shù)和&是隨機(jī)誤差。進(jìn)行方差分析(ANOVA ),并且使用F檢驗(yàn)基于a = 0.05的顯著性確定每 個(gè)變量的顯著性,相互作用和二次效應(yīng)。通過(guò) R 2,調(diào)整的R 2,適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度和 缺乏用于確定適當(dāng)性的擬合系數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)擬合的模型。此外,擬合模型通過(guò)使用確 定的顯著變量的條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)

17、驗(yàn)證1。3 結(jié)果與討論表2基于中心復(fù)合材料設(shè)計(jì),在不同條件下從擠出的生物質(zhì)中釋放葡萄糖試驗(yàn)因素Emzyme加 載(%wjw)漸變80濃度(%wjw)不同的木糖 刪除(%水解時(shí)間(hr)響應(yīng)葡萄糖轉(zhuǎn)換()180802456.67 ± 1.3425374849.87 ± 1.75353804861.06 ± 0.73426802432.31 ± 2.1158072452.18 ± 1.68620807238.23 ± 1.31753804862.4 ± 0.6682672424.3 ± 1.74920802426.95

18、 ± 1.02102077229.79 ± 1.671186802463.94 ± 0.98122677263.94 ± 0.98135374847.99 ± 1.631480807282.03 ± 0.83155374882.03 ± 0.83168077269.98 ± 1.21172072424.15 ± 1.761853804862.2 ± 0.85198672455.45 ± 1.462026807242.83 ± 0.77218677272.92 ± 0

19、.912286807288.41 ± 0.64235372436.57 ± 0.592453802445.89 ± 2.052583804871.93 ± 1.112623804832.38 ± 1.232750804854.15 ± 1.152856804860.57 ± 1.60在酸水解后測(cè)量在蒸汽爆炸之前和之后以及在不同擠出機(jī)處理之后研究玉 米芯的碳水化合物組成5,9,21。數(shù)據(jù)顯示在表1中(基于總干物質(zhì))。相對(duì)葡萄 糖含量是單糖的最大部分,分別從 41%增加到66%和58%,這取決于不同的 擠出工藝條件。在蒸汽爆炸預(yù)

20、處理期間,半纖維素級(jí)分在高溫和高壓下大量水 解成木糖。通過(guò)在65C的機(jī)筒溫度下的擠出工藝實(shí)現(xiàn)從蒸汽爆炸玉米芯中除去 7%的木糖。在不加水的情況下100rpm的螺桿轉(zhuǎn)速,而當(dāng)機(jī)筒溫度升至 100C時(shí),實(shí)現(xiàn)80%的木糖除去。并且在桶8以2.9kg / h注入水。發(fā)現(xiàn)阿拉伯糖,半 乳糖和甘露糖在少量級(jí)分(5.0%)。3.1 生物量表征表3二階模型方差分析來(lái)源平方和自由度均方F值P值備注模型42.3594.71405.1<0.0001重要的線性X131.62131.622722.2<0.0001X34.3914.39377.56<0.0001X43.2913.29283.48<

21、0.0001X20.3410.3429.37<0.0001交互XlX30.2810.2824.080.0001X3X0.0086X2X40.0910.097.650.0132二次0.4310.4337.41<0.00010.0810.086.840.0181剩余0.2170.1不相稱0.16130.11.370.4111不重要的純誤差0.0440.009032R0.9954Adj-squared0.9929Pre R20.9884足夠的精度69.64C.V.1.54在不同放大倍數(shù)下具有不同木糖清除的未處理和擠出的玉米芯的SEM圖像示于圖1中。基于與SEM顯微照

22、片的差異,顯然未處理的玉米芯表現(xiàn)出高度纖 維狀,有序和剛性的表面結(jié)構(gòu),表面相對(duì)光滑(圖 2A和B)。然而,在擠出預(yù) 處理后,玉米芯被分離成具有不同尺寸的不同不規(guī)則的纖維,并且一些內(nèi)部區(qū)域完全暴露,從而增加內(nèi)表面積。同時(shí),與未處理的玉米芯中的圖像相比,擠出的 玉米棒的表面更加劈裂,破裂和粗糙的結(jié)構(gòu)。此外,在擠壓的玉米芯的表面上觀 察到一些孔,這可能是由于在高溫下的水分蒸發(fā)引起的(圖 2C,D,E和F)。 擠出預(yù)處理為玉米芯提供混合,剪切力和熱量。因此,水分可以在擠出過(guò)程中蒸 發(fā)并深入滲透玉米芯顆粒40。B圖3顯示吐溫80濃度和酶負(fù)載(A, B:恒定水解時(shí)間為24小時(shí)和72小時(shí),分別與具有7 %木

23、糖的擠出玉米芯的相互 作用效應(yīng)的響應(yīng)表面圖;C , D:恒定水解時(shí)間為 24小時(shí),72小時(shí),分別用80%木糖去除亠譽(yù) 更 U9專AUOO的擠出玉米芯)使用粉末X射線衍射儀(XRD )檢查未處理和擠出的玉米芯的結(jié)構(gòu)。纖維 素的晶體結(jié)構(gòu)可以通過(guò)各種預(yù)處理通過(guò)破壞纖維素原纖維的鏈間和鏈內(nèi)氫鍵而 改變29。衍射圖結(jié)果顯示,未處理和擠出的玉米棒在2u = 26時(shí)具有典型的纖維素I和纖維素II變體特征,和2 u = 19時(shí)分別對(duì)于未處理的玉米芯,結(jié)晶峰優(yōu) 于無(wú)定形峰,這可能是由于在未處理的玉米棒中存在更高的結(jié)晶纖維素含量,所述玉米棒是難以酶促水解的纖維素形式。通過(guò)三次重復(fù)從XRD數(shù)據(jù)計(jì)算不同處理的結(jié)晶度指

24、數(shù)(Crl) 0.02,0.462, 0.03和0.510,對(duì)于未處理的,分別為“0.007”, “除去7%木糖”和“除去80%木糖”。在擠出預(yù)處理之后,擠出的玉米棒的峰 高度增加并變得更尖銳,表明纖維素的量增加,這可以從表1中的組成分析證實(shí), 并且表明擠出的玉米棒具有較高的結(jié)晶度。 預(yù)處理后的結(jié)晶度增加可能由于去除 木質(zhì)素和半纖維素的無(wú)定形組分而產(chǎn)生,這與文獻(xiàn)中通常報(bào)道的值一致。這也證實(shí)了擠出預(yù)處理是將纖維素暴露于酶促轉(zhuǎn)化的有效方法。擠出玉米棒的結(jié)晶度的增加對(duì)應(yīng)于纖維素結(jié)構(gòu)的剛性的增加,這導(dǎo)致纖維的更高的拉伸強(qiáng)度2,20,27。擠出的具有80%木糖去除的玉米芯在2u = 26具有更高的晶體性

25、與擠出過(guò)程中除去 7%木糖的擠出玉米芯相比,由此在擠出過(guò)程中除去80%木糖的擠出玉米芯中結(jié) 晶纖維素的含量高于在表1中確認(rèn)的具有7%木糖除去的擠出玉米棒使用Microsoft Office Excel 2007 通過(guò)方差分析(ANOVA )的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)(F 值> Fcrit)也證實(shí)了該結(jié)論3.2 酶水解AB圖4水解時(shí)間和酶負(fù)載對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)化的組合效應(yīng)的響應(yīng)表面圖A :具有7%木糖移除的擠出玉米芯的恒定Twee n 80濃度(3 %),了 匸eeaAUOOB :具有80%木糖移出的擠出玉米棒的恒定Tween 80濃度(3%)基于使用面心中心復(fù)合設(shè)計(jì)(FCCD )的統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)選擇酶水解的測(cè)試

26、 條件。測(cè)試條件和所得葡萄糖轉(zhuǎn)化率示于表 2中。二次響應(yīng)表面模型的結(jié)果顯示 在表3中。模型的F值為405.10,與臨界值(2.80)相比非常高,表明該模型是 非常重要的?!?Prob> F”的值小于0.0001,支持該模型是顯著的。如果它們的 值<0.05,則每個(gè)參數(shù)系數(shù)的顯著性由 P值(Prob> F)確定。P值越小,相應(yīng)的 系數(shù)越顯著。在獨(dú)立變量中,酶負(fù)載,水解時(shí)間,Tween 80濃度和“具有不同木糖清除的擠出玉米棒”對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)化具有顯著影響。酶負(fù)載和水解時(shí)間的二次 效應(yīng)也對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)化具有顯著影響。調(diào)整的R 2為0.99證實(shí)了模型的充分性,并且基于P值沒(méi)有檢測(cè)到顯著的擬

27、合缺乏。所有實(shí)驗(yàn)的信噪比大于4,表示有足夠的信號(hào),其可以用于導(dǎo)航設(shè)計(jì)空間?;谒x擇的顯著變量,回歸分析產(chǎn)生以下二次模型,其是葡萄糖轉(zhuǎn)化率和測(cè)試變量之間的關(guān)于編碼單位(a 1至+ 1)的經(jīng)驗(yàn)關(guān)系:Y = 7.27 1.33X,0.14X20.52X30.37X40.13X.X3 0.071X2X4 0.076X3X4 0.38X2 0.16X32其中,丫是葡萄糖轉(zhuǎn)化率的平方根(); X 1 , X 2 , X 3和X 4分別是酶負(fù)載量,Tween 80濃度,水解時(shí)間和擠出的具有不同木糖清除率的玉米芯( 7%, 80%)。Time 01圖5顯示具有不同木糖清除的擠出玉米芯與水解時(shí)間Tween 8

28、0濃度對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)化的相互作用的2D圖。A :恒定Tween 80濃度(3%),酶負(fù)載為5 % ; B :恒定水解時(shí)間為 48小時(shí),酶負(fù)載為5% ;虛線:擠出的玉米芯,具有 7%木糖移除;實(shí)線:80%木糖去除。符號(hào)表示測(cè)量數(shù)據(jù)3.2.1變量對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)化的綜合影響生成表面圖以進(jìn)一步說(shuō)明相應(yīng)參數(shù)的相互作用。吐溫80濃度和酶負(fù)載對(duì)擠出玉米芯的酶水解的影響顯示在圖3中。對(duì)于擠出的具有7%木糖除去的玉米芯, 如圖1所示。如圖4A和B所示,當(dāng)酶負(fù)載和水解時(shí)間變化時(shí)(P = 0.05),在 Tween 80存在下,葡萄糖轉(zhuǎn)化沒(méi)有顯著影響。這表明木糖可能是限制酶水解的 主要因素。對(duì)于除去80%木糖的擠出玉米穗,

29、吐溫80的作用在24小時(shí)非常小(圖4C)。然而,當(dāng)水解時(shí)間延長(zhǎng)至72小時(shí)(圖4D)時(shí),增加Tween 80濃度導(dǎo)致在高酶水平(P <0.05)下葡萄糖轉(zhuǎn)化顯著增加。然而,隨著水解時(shí)間的增加,預(yù)計(jì)會(huì)看到由于纖維素底物減少, 潛在抑制性 末端和副產(chǎn)物增加以及一般酶失活而導(dǎo)致的水解速率的降低13;在低酶負(fù)載下可能更明顯。該圖顯示在高水平的 Tween 80濃度存在下獲得較高的水解產(chǎn)率。 例如,當(dāng)酶負(fù)載為2%時(shí),葡萄糖轉(zhuǎn)化率的差異從36%變?yōu)?2%,當(dāng)酶負(fù)載下 Tween 80濃度增加至6%時(shí),從80%至88%獲得較高的差異的8%。此外,表 面活性劑還可以通過(guò)吸收到木質(zhì)素的表面中來(lái)防止纖維素酶與

30、木質(zhì)素的非生產(chǎn) 性結(jié)合。這使得更具活性的酶僅與纖維素反應(yīng)以改善葡萄糖轉(zhuǎn)化率10。表4操作條件和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的預(yù)測(cè)和測(cè)量響應(yīng)試驗(yàn)酶加載(%)漸變80濃度(%)不同木糖清除量(%)水解時(shí)間(h)預(yù)測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)換測(cè)量葡萄糖 轉(zhuǎn)換誤差186807287.6690.01 ± 0.692.6125374847.6148.56 ± 1.851.9637.25.9807283.5585.11 ± 0.901.8344276042.9443.70 ± 1.251.74553804858.3759.65 ± 1.042.1562377228.5929.45 ±

31、 2.092.92固定Tween 80濃度(3%)下酶負(fù)載量和水解時(shí)間的聯(lián)合效應(yīng)顯示在圖1中。從圖5可以看出。如圖5A所示,當(dāng)酶負(fù)載量為2%時(shí),葡萄糖的轉(zhuǎn)化率從22% 增加至具有7%木糖去除的擠出玉米芯,但當(dāng)將水解時(shí)間從 24增加至72時(shí),在 8%酶負(fù)載時(shí),葡萄糖從51%增加至68% H。還觀察到水解時(shí)間對(duì)具有80%木 糖去除的擠出玉米芯的葡萄糖轉(zhuǎn)化的影響(圖 5B)。當(dāng)酶負(fù)載為2%時(shí),在水 解24小時(shí)時(shí)葡萄糖轉(zhuǎn)化僅為28%。當(dāng)酶負(fù)載從2%增加到8%時(shí),增加纖維素 酶的量顯著改善葡萄糖轉(zhuǎn)化為59%。酶在纖維素表面上擁擠,在實(shí)驗(yàn)條件下沒(méi) 有觀察到在增加酶濃度時(shí)可導(dǎo)致較低水解速率的效應(yīng) 37。在2

32、%酶負(fù)載下水解 時(shí)間從24小時(shí)增加到72小時(shí)僅導(dǎo)致輕微的。在2%酶負(fù)載下水解時(shí)間從24小時(shí)增加到72小時(shí)僅導(dǎo)致葡萄糖轉(zhuǎn)化率的輕 微增加。這可能是由于沒(méi)有足夠的纖維素酶達(dá)到反應(yīng)混合物中一定量的纖維素水 解的吸附飽和。酶負(fù)載的進(jìn)一步增加將減緩由于混合物溶液中更多未使用的纖維 素酶導(dǎo)致的葡萄糖轉(zhuǎn)化。因此,如所預(yù)期的,葡萄糖轉(zhuǎn)化可以在更高的酶負(fù)載下 隨著更長(zhǎng)的水解時(shí)間而增加。木糖去除的效果(指定為分類參數(shù))可以在二維圖中顯現(xiàn),如圖1所示,圖4和5已經(jīng)顯示高的木糖去除清楚地導(dǎo)致增強(qiáng)的酶消化率。圖6通過(guò)顯示對(duì)于兩種類型的生物質(zhì)分別作為水解時(shí)間和 Tween 80表面活性劑濃度的函數(shù)的葡萄糖 轉(zhuǎn)化的模型結(jié)果

33、,而其余變量在它們的中心點(diǎn)來(lái)突出顯示。 這些發(fā)現(xiàn)與幾個(gè)研究一致,表明如果咼百分比的半纖維素被去除可以促進(jìn)通過(guò)酶水解的纖維素轉(zhuǎn)化19,30,39。3.2.2 模型驗(yàn)證為了確認(rèn)從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)獲得的二階多項(xiàng)式回歸模型的有效性和適用性,進(jìn)行如表4所列的六個(gè)確認(rèn)運(yùn)行以比較預(yù)測(cè)值和測(cè)量值之間的差異。表4中的結(jié)果顯示該差值低于3%。如圖4所示的預(yù)測(cè)值與測(cè)量值的曲線圖。圖 7還驗(yàn)證了建議的 模型的總體良好擬合,表明所提出的模型可以是表達(dá)響應(yīng)和顯著變量之間的實(shí)際 關(guān)系以預(yù)測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)化的有用和準(zhǔn)確的模型。4679Measured Conversion圖6葡萄糖轉(zhuǎn)換的預(yù)測(cè)值與測(cè)量值4.結(jié)論雙螺桿擠出機(jī)可用作木質(zhì)纖維素生

34、物質(zhì)的預(yù)處理方法以產(chǎn)生具有不同木糖 含量的材料??梢曰谒捎玫穆輻U構(gòu)型來(lái)控制木糖含量, 如對(duì)于脫墨玉米芯所 證明的。擠出過(guò)程進(jìn)一步導(dǎo)致纖維素結(jié)晶度的增加,同時(shí)通過(guò)SEM觀察到結(jié)構(gòu)變化。殘留木糖(通過(guò)擠出過(guò)程7%和80%去除),酶負(fù)載,表面活性劑添加和 水解時(shí)間對(duì)酶水解的影響可以用二階多項(xiàng)式模型描述,基于通過(guò)面心為中心的復(fù)合物產(chǎn)生的數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)。所有獨(dú)立變量和酶加載和水解時(shí)間,水解時(shí)間和木糖含量, Tween 80濃度和木糖含量,酶負(fù)載的二次項(xiàng)以及水解時(shí)間的二次項(xiàng)對(duì)酶水解有 顯著影響的相互作用影響。5 致謝,加拿大商業(yè)化和NSERC)和加拿作者想要推薦 GreenField 特種醇公司(加拿大 C

35、hatham) 研究卓越中心(CECR),加拿大自然科學(xué)和工程研究委員會(huì)( 大創(chuàng)新金融基金會(huì)(CFI)支持。6 參考文獻(xiàn)1 A.M. Adel, Z.H. Abd El-Wahab, A.A. Ibrahim, M.T. Al-Shemy, Characterization of microcrystalline cellulose prepared from lignocellulosic materials. Part I.Acidcatalyzed hydrolysis, Bioresour. Tech nol. 101 (2010) 4446455.2 A. Alemdar, M. S

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