脂肪來源干細(xì)胞ADC 之生物學(xué)特性分離應(yīng)用前景ppt課件

1、 脂肪組織來源的干細(xì)胞最早是有Zuk等人從抽脂術(shù)中抽取的脂肪組織懸液中分別培育出來的，并證明為多能干細(xì)胞，稱之為adipose-derived stem cell(ADSC)。在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下ADSC能向脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞及神經(jīng)組織定向誘導(dǎo)分化，最近更是有將其定向誘導(dǎo)成為心肌細(xì)胞，證明脂肪組織這種本來不太受人歡迎的物質(zhì)有能夠成為人干細(xì)胞庫的重要來源，并可作為多種組織工程的種子細(xì)胞，有非常重要的研討和運(yùn)用價(jià)值。 干細(xì)胞性質(zhì)體外擴(kuò)增調(diào)理淋巴細(xì)胞反響免疫表型ADSCADSC的的典型特征典型特征對(duì)ADSC進(jìn)展了大量的分子學(xué)和生物化學(xué)鑒定，其結(jié)果為1ADSC表達(dá)的CD免疫抗原和MS

2、C表達(dá)的類似。2經(jīng)過-半乳糖酶染色分析，ADSC在經(jīng)過多次分化后依然堅(jiān)持很低的細(xì)胞衰老程度。3在體外情況下ADSC在不同培育基的條件可以分化成脂肪、骨、軟骨和肌細(xì)胞。這些證據(jù)都可證明ADSC的干細(xì)胞性質(zhì)。用流式細(xì)胞儀和免疫組化方法研討發(fā)現(xiàn)，體外培育的ADSC課表達(dá)如下蛋白：1、粘附分子CD9,CD29,CD49d,CD54,CD102,CD106,CD166.2、分子受體 :透明質(zhì)酸鹽CD44和轉(zhuǎn)鐵蛋白的受體CD713、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白和糖蛋白：I型膠原、骨橋蛋白4、肌蛋白：平滑肌細(xì)胞內(nèi)的機(jī)動(dòng)蛋白和波形蛋白5、補(bǔ)體調(diào)理蛋白：衰變加速因子CD55和補(bǔ)體蛋白6、組織相容性抗原：能表達(dá)I類組織相容性蛋

3、白HLA-ABC，而不能表達(dá)II類蛋白HLA-DR。體外培育條件下，ADSC不像骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)培育基中胎牛血清的來源和質(zhì)量有嚴(yán)厲要求。DMEM，MEM，RPMI1640是ADSC的常用培育基。普通只添加10%胎牛血清，并且血清無消費(fèi)批號(hào)限制。在傳代培育中，ADSC平均倍增時(shí)間為60h，細(xì)胞在3-4d即可增殖一倍，培育的細(xì)胞可以穩(wěn)定增殖和傳代，體外培育10代以后，細(xì)胞的增殖速度亦沒有明顯減速。ADSC并表現(xiàn)低程度衰老，1代時(shí)細(xì)胞沒有出現(xiàn)衰老景象，10代時(shí)少于5%細(xì)胞出現(xiàn)衰老，15代時(shí)仍低于15%，這闡明ADSC體外擴(kuò)增才干很強(qiáng)，傳代培育易于獲得大量有分化才干的細(xì)胞。研討發(fā)現(xiàn)1、ADSC可明顯

4、抑制PHA刺激的淋巴細(xì)胞增殖，IL-2可逆轉(zhuǎn)ADSC的抑制造用。2、ADSC可明顯抑制雙相混合淋巴細(xì)胞反響，抑制造用成脂肪干細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量依賴性；經(jīng)IFN-作用后抑制造用未見明顯減弱。結(jié)果闡明，ADSC可在體外抑制淋巴細(xì)胞增殖反響，具有一定的調(diào)理淋巴細(xì)胞反響的才干。脂肪來源的干細(xì)胞呈梭形生長，并呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣形狀，胞漿和核仁豐富，呈平行陳列或漩渦樣生長。脂肪來源干細(xì)胞原代培育僅有少量細(xì)胞貼壁，在低密度形狀下呈大的扁平狀單層細(xì)胞直徑25-30m，當(dāng)細(xì)胞長滿培育瓶趨于交融時(shí)，細(xì)胞體變得細(xì)長呈梭形，形狀與成纖維細(xì)胞非常類似，該細(xì)胞表達(dá)中胚層來源細(xì)胞的標(biāo)志物波形蛋白，且與骨髓基質(zhì)細(xì)胞形狀類似。細(xì)胞周期

5、分析顯示，G0/G1期的細(xì)胞占69%，S期的細(xì)胞占24%,G2/M期的細(xì)胞占8%。1、來源充足，取材量大，能反復(fù)取材，脂肪細(xì)胞中干細(xì)胞含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于骨髓中的干細(xì)胞含量。2、屬自體移植，無免疫排斥反響。3、不涉及醫(yī)學(xué)倫理問題。4、取材簡便，分別容易，防止抽取骨髓，損傷較小，患者易于接受。5、細(xì)胞增殖快速。1.大鼠腹腔注射10%水合氯醛350mg/kg到達(dá)麻醉效果，用體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇逆毛方向消毒。2.無菌條件下切取雙側(cè)腹股溝脂肪，置入含有1000U/ml青霉素和鏈霉素PBS液中浸泡10min，然后用不含抗生素的PBS液反復(fù)沖洗，仔細(xì)去除大體可見的血管和其他組織。3.將脂肪組織剪成約1mm1mm1mm小塊，置于10ml的0.1%的I型膠原酶中，37中搖床120r/min消化30min，待懸液成糊狀，參與3倍體積PBS液終止消化，以1200g離心10min，棄上清，沉淀用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清(FBS)的L-DMEM制成單細(xì)胞懸液。4.以2105/cm2密度接種于培育瓶中，置37、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培育箱中培育。48h初次換液后每3d換液，每天顯微下察看、記錄。1.輔助或替代骨髓移植治療。 脂肪來源干細(xì)胞表達(dá)和骨髓來源的間充質(zhì)細(xì)胞一樣的粘附分子，也可以分泌和骨髓來源的間充質(zhì)細(xì)胞一樣的細(xì)胞因子。2.作為組織工程的種子細(xì)胞。 (1)修復(fù)損傷的骨、軟骨、神經(jīng)、肌肉等組織的缺損。 (2