高溫曲中產(chǎn)醬香細(xì)菌的分離和篩選試驗(yàn)

1、高溫曲中產(chǎn)醬香細(xì)菌的分離和篩選試驗(yàn)1.產(chǎn)醬香細(xì)菌的分離1.1采樣：曲樣放入無菌袋密閉及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室，用無菌小刀切開曲塊，將大曲外中內(nèi)層混合均勻，粉碎后備用。1.2平板分離培養(yǎng)基：分離培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（g/l）或葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基： 牛肉膏5 蛋白胨10 氯化鈉5 瓊脂15-20 或蛋白胨5 葡萄糖5 K2HPO4 5高鹽培養(yǎng)基：牛肉膏5 蛋白胨10 氯化鈉60 瓊脂15-20 PH均為7.2-7.4斜面培養(yǎng)基：牛肉膏5 蛋白胨10 氯化鈉5 瓊脂15-20 種子培養(yǎng)基：酵母膏5 蛋白胨10 氯化鈉10或蛋白胨5 葡萄糖5 K2HPO4 5篩選培養(yǎng)基：麩皮99g 葡萄糖1g 加水70ml 高壓滅菌

2、30min 或麥粒培養(yǎng)基：小麥粉碎成麥粒麥粉各半，加水1:1.0-1.2 潤浸18h，經(jīng)蒸熟 冷卻 打散，稱取30-50g/250ml三角瓶，高壓滅菌45min。1.3產(chǎn)醬香菌分離：高溫培養(yǎng)法 熱處理培養(yǎng)法 高鹽培養(yǎng)法取1.0g曲粉加入99ml/250ml生理鹽水，150r/min 30min，適當(dāng)稀釋，取三個(gè)梯度涂布于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 45-50培養(yǎng)24h.1.0g曲粉加入50ml/250ml種子培養(yǎng)基中，37 150r/min富集培養(yǎng)24h，80-85熱處理20min，適當(dāng)稀釋，取三個(gè)梯度涂布于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基37培養(yǎng)24h.高鹽培養(yǎng)法：取1.0g曲粉加入99ml/250ml生理鹽水，150r

3、/min 30min，適當(dāng)稀釋，取三個(gè)梯度涂布于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基37培養(yǎng)24h.分離結(jié)果與討論：高溫培養(yǎng)法：花瓣?duì)?光滑狀 毛絨狀三種熱處理培養(yǎng)法：花瓣?duì)?毛絨狀兩種高鹽培養(yǎng)法：光滑狀 毛茸狀 乳頭狀 水滴狀 高溫法 熱處理法 高鹽法 菌落總數(shù)：x106 50 1 4高溫法耐受高溫細(xì)菌和高溫處于休眠的芽孢，高鹽法除芽孢菌外，還有一些耐高鹽的微生物。制曲過程中，隨制曲溫度的升高，水分蒸發(fā)，微生物處于高滲高鹽狀態(tài)，部分耐鹽微生物生長良好。1.4產(chǎn)醬香細(xì)菌的篩選：從三種方法分離得到菌株中選取不同形態(tài)菌株各三個(gè)進(jìn)行培養(yǎng)，通過對發(fā)酵產(chǎn)物的感觀評價(jià)篩選出產(chǎn)醬香的細(xì)菌。將分離純化的不同的單菌落接種于種子培養(yǎng)基

4、中，37 200r/min培養(yǎng)24h.吸取1ml加入麥粒培養(yǎng)基三角瓶中，按37 50 60溫度梯度依次培養(yǎng)48h（14d），感觀評定，選擇產(chǎn)醬香較好的菌株作為鑒定菌株。1.5產(chǎn)醬香細(xì)菌的鑒定 對28株供試菌株發(fā)酵后感觀評定篩選出4株產(chǎn)醬香明顯的細(xì)菌L1 L2 L3 L4菌落形態(tài)： 項(xiàng)目 L1 L2 L3 L4 形狀 不規(guī)則 圓形 絲狀 圓形 大?。╟m） 0.2-0.4 邊緣 不規(guī)則 整齊 波狀 整齊 表面 皺褶 光滑 皺褶 皺褶 干濕 干燥 濕潤 干燥 干燥 透明 不 不 不 不 粘性 無 有 無 無 光澤 無 無 無 無 顏色 灰白 灰白 灰白 灰白 附著程度 易挑 易挑 易挑 易挑菌苔特

5、征： 豐厚 豐滿 豐滿 豐滿 豐滿 邊緣 突起 突起 突起 突起 粘性 無 有 無 無 透明 不 不 不 不 光澤 無 無 無 無 顏色 灰白 灰白 灰白 灰白生長特征： 菌膜 + + + + 渾濁 - - - - 沉淀 - - - -形體特征： 形狀 桿狀 桿狀 桿狀 桿狀 兩端鈍圓 革蘭染色 + + + + 位置 中生 中生 中生 中生 芽孢 孢囊 不膨大 不膨大 不膨大 不膨大 形狀 圓柱 圓柱 圓柱 圓柱 鞭毛 周生 周生 周生 周生 不同溫度生長： 溫度 30 40 50 60 70 L1 + + + + +L2 + + + + +L3 + + + + -L4 + + + + -不同

6、PH下生長： PH 3 5 7 9 11 L1 - + + + - L2 - + + + - L3 - + + + -L4 - + + + -糖醇發(fā)酵：菌株 葡萄糖 蔗糖 乳糖 半乳糖 阿拉伯糖 木糖 三梨糖 甘露醇 L1 + + - + + + + +L2 + + - + + + + +L3 + + - + + + + +L4 + + - + + + + +菌株其他生理生化試驗(yàn)特征： 過氧化氫酶 + + + + 厭氧生長 + + + + 丙酸鹽利用 + + + + V-P反應(yīng) + + + + 硝酸鹽還原 + + + + 卵磷脂酶 + + + + 7氯化鈉 + + + + 石蕊牛奶產(chǎn)酸 - - - - 淀粉水解 + + + + 明膠水解 + + + + 酪素水解 + +