癌前病變、癌旁組織及宮頸鱗狀細胞癌中Survivin和PTEN蛋白的表達分析

1、癌前病變、癌旁組織及宮頸鱗狀細胞癌中Survivin和PTEN蛋白的表達分析    【摘要】  目的 分析癌前病變、癌旁組織、宮頸癌中的凋亡抑制基因蛋白Survivin與抑癌基因蛋白PTEN表達陽性率及相關性，探討Survivin和PTEN在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組化S-P法測定135例慢性宮頸炎、宮頸糜爛伴鱗化（慢鱗20例）、宮頸上皮內瘤變（CIN 31例）、癌旁組織（42例）、宮頸癌（42例）的Survivin和PTEN蛋白表達陽性率，以10例正常宮頸組織作為對照。結果（1）宮頸癌與慢鱗、癌旁組織中，Survivin的表達

2、明顯增強（P<0.05）;而PTEN的表達明顯減弱（P<0.05）；（2）Survivin的表達與宮頸癌組織學分級、浸潤深度、臨床分期有關（P<0.05）;而與不同年齡無關（P>0.05）；PTEN蛋白的表達與宮頸癌浸潤深度、臨床分期有關（P<0.05），而與不同年齡、組織學分級無關（P>0.05）；（3）Survivin和 PTEN蛋白在癌旁不典型增生與慢鱗的表達陽性率差異均有顯著性（P<0.05）；與CIN相比差異無顯著性（P>0.05）；（4） Survivin與PTEN蛋白的表達在CIN、癌旁組織、宮頸鱗狀細胞癌中的表達呈顯著負相關（P&

3、lt;0.05）,而且在宮頸癌中的表達相關性更為密切。結論 Survivin的異常高表達與PTEN的異常低表達參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，與凋亡抑制和增殖能力增強有關，發(fā)生在宮頸癌惡性轉化的早期，并且其表達程度可作為預后不良的標志。 【關鍵詞】  宮頸鱗狀細胞癌 癌旁組織 CIN Survivin PTEN 免疫組織化學    【Abstract】  Objective  The purpose of this paper is to analyze the expression and the relationship of apop

4、tosis inhibition factor Survivin and carcinoma-inhibiting protein PTEN in cervical cancer, adjacent mucosa and precancerous lesions and discuss the expression of Survivin and PTEN on the occurrence and development of cervical cancer.Methods  using tThe immunoassay S-P method was used to determi

5、ne detect the positive rate of Survivin and PTEN, . we choose 135 cases with of chronic cervicitis including 20 cases with of cervcali erosion of metaplasia （CCM20）, cervical intraepithelial neoplasia （CIN31）, cervical carcinoma （42）, adjacent mucosa （42）, with another and 10 cases of normal cervica

6、l specimens as the referencecontrol were selected.Results  （1）To cervix cancer, cervical carcinoma and adjacent mucosa, the expression of CCM and, Survivin expression tends to increased （Wilcoxon test P<0.01）, while; the expression of PTEN tends to decreased （P<0.01）.  （2）Survivin wa

7、s related with the patients histological grade, infiltration depth,  and clinical stages（P<0.05）, but not related with the patients ages of cervical cancer（P>0.05）;PTEN was related with the patients infiltration depth ,   and clinical stages（P<0.05）, but not related with the

8、patients ages or histological grade of cervical cancer（P>0.05）.（3） The positive rate of Survivin and PTEN protein in dysplasia of cervical cancer adjacent mucosa and CCM has had remarkable meaning, but without statistics meaning as comparing comparied with CIN（P>0.05）.（4） The expression of Sur

9、vivin and PTEN was extremely negatively correlated in CIN and, cervical cancer,  and adjacent mucosa（P<0.01）and highly related in cervical carcinoma.Conclusion  The abnormal high expression of Survivin and abnormal low expression of PTEN in cervical carcinoma may be involved in the occu

10、rrence and development of cervical carcinoma, which maybe also results in the cell apoptosis and proliferation. This phenomenon occurs in theearly period of cervical carcinoma transformation, higher levels of Survivin and lower levels of PTEN may can indicate prognosis for patients with cervical car

11、cinomas.    【Key words】  cervical carcinomas,; adjacent mucosa;  CIN;  Survivin and; PTEN;  immunohistochemistry    宮頸癌是女性最常見惡性腫瘤，全世界每年約有45萬50萬婦女患病，我國每年新增宮頸癌病人13.51萬左右1，是僅次于乳腺癌而引起婦女癌癥相關死亡的重要疾病，尤其是年輕宮頸癌病人的發(fā)病率有上升趨勢。Survivin是新近發(fā)現的一種凋亡抑制基因，其獨特的結構、特殊的組織分布

12、和作用機制及明顯的抗凋亡作用尤其引人注目。PTEN是迄今發(fā)現的第一個具有雙特異性磷酸源性的抑癌基因，在維持細胞的增殖分裂和凋亡的平衡中起重要作用，與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關2。目前國內外PTEN在宮頸癌中的研究少見報道，且結果不一3，4。本研究著重探討新的細胞凋亡基因Survivin及抑癌基因PTEN蛋白在宮頸鱗狀細胞癌前病變、癌旁組織及癌組織中的表達及其兩者的相關性分析。1  材料與方法    1.1  研究對象  選取2000年1月2005年10月手術切除或活檢的慢性宮頸炎、宮頸糜爛伴鱗化（簡稱慢鱗）20例，宮頸上皮內瘤變（CI

13、N）標本31例，癌旁組織（鱗狀上皮并除外癌細胞浸潤）42例，宮頸鱗狀細胞癌42例，其中組織學分級：高分化5例，中分化25例，低分化12例；臨床分期：I期30例，II期以上12例。另選擇10例正常宮頸組織作為對照，患者術前均未接受放療、化療或激素治療，所有組織均經病理學診斷證實。其臨床分期和組織學分級均按FIGO（1986年）和WHO分級標準。    1.2  主要試劑  兔抗人Survivin多克隆抗體（濃縮型）、鼠抗人PTEN單克隆抗體（即用型 28H6）、S-P免疫組化試劑盒（即用型）均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。  

14、  1.3  方法    1.4  判斷標準  根據著色的強弱，不著色為0，輕度著色為1，中度著色為2，強著色為3；著色腫瘤細胞總數的百分比：無著色為0，< 25為1，2550為2，> 50為3；兩種積分相加，依照0為，12為，34為，56為，進行半定量判斷；>2（和）為陽性，< 2（和）為陰性進行定性判斷。2  結果    2.1  發(fā)病年齡  慢鱗患者年齡2552歲，中位數37.2歲；CIN 患者年齡2759歲，中位數39.1歲；宮頸鱗狀

15、細胞癌患者年齡2866歲，中位數45.4歲。    2.2  Survivin、PTEN在慢性宮頸炎、癌旁組織、宮頸鱗狀細胞癌的表達    2.3  Survivin、PTEN在宮頸鱗狀細胞癌的臨床病理特征中的表達   2.4  Survivin和PTEN在CIN、癌旁組織及宮頸鱗狀細胞癌中的相關性分析    3  討論    3.1  Survivin在慢性宮頸炎、癌旁組織及宮頸鱗狀細胞癌中的表達

16、0; Survivin屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosisprotein,IAP）家族新成員，是具有細胞凋亡和調節(jié)細胞分裂的雙功能蛋白，是至今發(fā)現最強的凋亡抑制因子。Caspase級聯式激活并溶解蛋白質是凋亡發(fā)生的核心機制。Survivin能抑制由Fas/caspase-8 和Bax /細胞色素C誘導的caspase活化和凋亡，可能通過作用于各個凋亡途徑的匯集點，即直接抑制終末效應蛋白 caspase-3和 caspase-7，從而抑制凋亡5。    在胚胎及胎兒期，Survivin表達豐富，而在正常成人終末分化組織中，除了胎盤和胸腺微弱

17、表達外，其他組織基本很難檢測到Survivin的表達6。本實驗正常對照宮頸組織的陽性表達率0（0/10），與Kim等7和Michael等8用免疫方法研究所得結果一致。但在慢鱗組織中的陽性表達率25。本實驗中檢測Survivin的表達，其中宮頸癌的陽性表達率顯著高于慢鱗組織、癌旁組織（P<0.05），與CIN的表達差異無顯著性（P>0.05），與王梅等9研究結果類似；癌旁組織的Survivin陽性表達率顯著高于在慢鱗組織的表達（P<0.01），與 CIN的表達差異卻無顯著性（P>0.05），CIN、癌旁組織不典型增生的Survivin表達差異可能與其發(fā)生機制有關，從而提示

18、 Survivin的表達可能出現在宮頸癌惡性轉化的早期，并可能具有促進這些損傷惡性轉化的作用。同時本實驗發(fā)現，從慢鱗CIN宮頸癌的演變中，Survivin的表達率是逐漸升高的，而且差異有非常顯著性（P<0.01），這表明Survivin的再激活可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關。在Survivin表達與宮頸癌臨床病理特征的關系研究中，本實驗結果顯示，Survivin的表達與宮頸癌的組織學分級、浸潤深度、臨床分期顯著相關（P<0.05），但在不同年齡Survivin的表達差異無顯著性（P>0.05），研究提示Survivin的表達異?？梢宰鳛轭A后不良的標志。  

19、;  3.2  PTEN在慢性宮頸炎、癌旁組織及宮頸鱗狀細胞癌中的表達  PTEN基因定位于人類染色體10q23.3。PTEN利用其脂質磷酸酶活性，使其底物3，4，5三磷酸肌醇（PIP3）去磷酸化而失活，從而阻止 PIP3與蛋白激酶B（PKB）的結合激活，誘導細胞凋亡和周期阻滯。此外，PTEN利用其蛋白磷酸酶活性，使局灶粘附激酶（FAK）脫磷酸，從而抑制整合素介導的細胞粘附和遷移。PTEN尚可使接頭蛋白Shc脫磷酸而抑制生長因子受體結合蛋白2（Grb2）的募集，繼之抑制絲裂原激活的蛋白激酶（MAPK）,從而抑制細胞的生長和分化。   

20、 有關PTEN與宮頸癌的關系的研究，在國外目前仍處于探索階段，國內尚未見報道。Su等10的結果表明，鱗癌組織PTEN的異常轉錄為6/30，對應的非癌組織中的異常轉錄為4/30。Yaginuma等4認為PTEN基因的突變在宮頸癌是一個低發(fā)事件，1/6的細胞系及1/43的宮頸癌組織呈現 mRNA的異常表達。Kurose等11的實驗表明，有36.8%的原發(fā)性宮頸癌發(fā)生了LOH，15.0%出現了基因內突變，其中包括純合性陰性表達，由此認為PTEN與宮頸癌有關。    大量研究表明12，PTEN蛋白在多種腫瘤中表達下調，且表達的水平與腫瘤的惡性程度呈負相關。本實驗中檢測PT

21、EN的表達，其中宮頸癌的陽性表達率顯著低于慢鱗組織、癌旁組織（P<0.05），與CIN的表達差異無顯著性（P>0.05）；癌旁組織的Survivin陽性表達率顯著低于在慢鱗組織的表達（P<0.01），與CIN的表達差異卻無顯著性（P>0.05），CIN、癌旁組織不典型增生的PTEN表達差異可能也與其發(fā)生機制有關，從而提示PTEN表達可能是宮頸癌惡性轉化的早期事件。同時本實驗發(fā)現，從慢鱗CIN宮頸癌的演變中，Survivin的表達率是逐漸降低的，而且差異有非常顯著性（P<0.01），這表明PTEN的表達喪失可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關。在PTEN的表達與宮頸癌臨床病理特征的關系研究中，本實驗結果顯示，與宮頸癌的浸潤深度、臨床分期顯