紅霉素納米乳的制備及其藥效學(xué)研究

1、第36卷第3期紅霉素納米乳的制備及其藥效學(xué)研究芮亞培,歐陽(yáng)五慶,邱剛,董紅賓,李樹(shù)珍(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊凌712100)摘要【目的】研制紅霉素納米乳制劑,并檢測(cè)其體外藥效?！痉椒ā坷脗稳鄨D法,以tween280為表面關(guān)鍵詞紅霉素;納米乳;體外藥效中圖分類(lèi)號(hào)R978.1+5;R944.1+6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A29387(2008)0320059205erythromycinnanoemulsionanditspharmacyinvitroRUIYa2pei,OUYANGWu2qing,QIUGang,DONGHong2bin,LIShu2zhen(CollegeofVeterin

2、aryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)Keywords:erythromycin;nanoemulsion;pharmacyinvitro3收稿日期基金項(xiàng)目作者簡(jiǎn)介通訊作者2007204202奶業(yè)發(fā)展重大關(guān)鍵技術(shù)研究與示范項(xiàng)目(2006BAD04A11)芮亞培(1981-),女,河南平頂山人,在讀碩士,主要從事新獸藥開(kāi)發(fā)研究。E2mail:ruiyapei歐陽(yáng)五慶(1960-),男,陜西鳳翔人,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事新獸藥開(kāi)發(fā)、細(xì)胞生物學(xué)和泌乳生理研究。60西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)第36卷紅

3、霉素是大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素,為白色堿性晶體狀物質(zhì),味苦,極微溶解于水,極易溶于有機(jī)溶媒,如醇、丙酮、乙酸乙酯等。紅霉素主要用于耐藥金黃色葡萄球菌,溶血性鏈球菌所引起的嚴(yán)重感染(如肺炎、敗血癥、子宮內(nèi)膜炎、乳腺炎等),對(duì)支原體所引起的慢性呼吸道疾病、霉形體肺炎也有較好療效。紅霉素不但用于人醫(yī),在獸醫(yī)臨床上也有廣闊的應(yīng)用前景。傳統(tǒng)紅霉素制劑因內(nèi)服后易被胃酸破壞,體內(nèi)半衰期短,且在肝內(nèi)有部分藥物會(huì)被滅活,致使服用劑量大,服用頻繁和消化道反應(yīng)明顯。納米乳,也稱(chēng)微乳,是由表面活性劑、助表面活性劑、油相及水在適當(dāng)比例下形成的澄清透明的熱力學(xué)穩(wěn)定體系,液滴粒徑為10100nm。納米乳在藥劑學(xué)上的應(yīng)用始于20世紀(jì)

4、90年代,其作為藥物載體具有多方面的優(yōu)點(diǎn):是熱力學(xué)穩(wěn)定體系,制備時(shí)無(wú)需外界做功,只要組分的比例合適可自發(fā)形成,且一旦形成即保持穩(wěn)定;通過(guò)內(nèi)核的油相和表面活性劑的烴鏈2部分的增溶,可極大地提高難溶性藥物在水中的溶解性;納米乳的粒徑小、粘度低、利于機(jī)體迅速吸收,毒副作用。、費(fèi)用低。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外用新型納米乳載體對(duì)傳統(tǒng)的、難溶性的,藥效低的藥物進(jìn)行改造的研究很多1,如印度的Sheikh等2制備了Ramipril納米乳,法國(guó)的Trimaille等3制備了Cationic納米乳等;在國(guó)內(nèi),利用偽三元相圖法制備紅霉素納米乳。以無(wú)水乙醇作為紅霉素原料藥的溶劑(亦把其當(dāng)作助表面活性劑)、Tween80為表面活

5、性劑、乙酸乙酯為油相,使表面活性劑/助表面活性劑(km=31)與油相分別按照91,82,73,64,55,46,37,28,19的比例(質(zhì)量比),。把紅霉素含量。910211,將制備的納米乳4000r/min離心20min,觀察是否分層,如仍維持透明可判為納米乳。納米乳類(lèi)型的鑒別采用染色法10,利用紅色的油溶性染料蘇丹紅和藍(lán)色的水溶性染料亞甲蘭在納米乳中擴(kuò)散的快慢來(lái)判斷,如果藍(lán)色的擴(kuò)散速度大于紅色,則納米乳為O/W型;反之則為W/O型;二者一樣快,則為雙連續(xù)型。1.4紅霉素納米乳的穩(wěn)定性考察華北制藥集團(tuán)也已經(jīng)開(kāi)始生產(chǎn)環(huán)孢素A口服納米乳4,北京大學(xué)的何蕾等5制備了紫杉醇納米乳,湖北襄樊學(xué)院的李先

6、紅等6制備了醋酸潑尼松龍納米乳,中國(guó)藥科大學(xué)的龔明濤等7制備了羥喜樹(shù)堿納米乳,第四軍醫(yī)大學(xué)的楊青艷等8制備了氟尿嘧啶納米乳等。但目前尚未見(jiàn)關(guān)于紅霉素納米乳研制方面的報(bào)道,為此本試驗(yàn)制備了紅霉素的O/W型納米乳口服液,并對(duì)其理化性質(zhì)及體外藥效進(jìn)行了考察,以期為紅霉素納米乳的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。1材料與方法1.1材料乳,熔封于5mL安瓿瓶中,分別置于-4冰箱、室溫和60恒溫烘箱內(nèi),于0,3,6個(gè)月時(shí)取樣品,進(jìn)行外觀考察和PH值檢測(cè)。1.5紅霉素納米乳的微觀形態(tài)觀察參考文獻(xiàn)14,用透射電鏡檢測(cè)納米乳的微觀形態(tài),將銅網(wǎng)置于蠟板上,在銅網(wǎng)上滴加一小滴紅霉素納米乳,自然晾干,把2%磷鎢酸滴在蠟板上,將第3期芮亞

7、培等:紅霉素納米乳的制備及其藥效學(xué)研究61晾干的銅網(wǎng)倒置于染液上,負(fù)染15min后晾干,在電鏡下觀察納米乳液滴的形態(tài)。1.6紅霉素納米乳最小殺菌濃度(MBC)和最低抑菌濃度(MIC)的測(cè)定參考文獻(xiàn)15的方法,測(cè)定紅霉素納米乳的MBC和MIC。用蒸餾水將紅霉素納米乳稀釋成0.5mg/mL的溶液,對(duì)照藥物紅霉素腸溶片、羅紅霉素片對(duì)照組試驗(yàn)依法進(jìn)行。2結(jié)果與分析2.1紅霉素納米乳的最佳配方通過(guò)偽三元相圖法篩選出的紅霉素納米乳的最佳配方為:紅霉素1%、無(wú)水乙醇10%、Tween8030%、乙酸乙酯4.4%、去離子水54.6%(以上各組分均為質(zhì)量分?jǐn)?shù))。2.2紅霉素納米乳及其類(lèi)型鑒別結(jié)果顯示,按上述配方

8、制取的藥液,經(jīng)離心后仍為澄清透明的淡黃色液體,判定為紅霉素納米乳。染色結(jié)果顯示,在紅霉素納米乳中藍(lán)色的擴(kuò)散速度大于紅色的擴(kuò)散速度,證明該體系為O/W型納米乳。2.3紅霉素納米乳的穩(wěn)定性,無(wú)渾濁、;紅霉素納米乳以10min后仍為淡黃色、澄,表明其穩(wěn)定性良好。留樣觀察結(jié)),3批紅霉素納米乳樣品在不同溫度下長(zhǎng)期放置,均能保持外觀透明、均一和pH值穩(wěn)定不變。片分別以無(wú)水乙醇溶解后用蒸餾水配制成0.5Table1ResultsofsampleobservationtestsonErythromycinnanoemulsion樣品Sample留樣時(shí)間/月Term0-4透明均一Transparentandh

9、omogeneous外觀Appearance25透明均一TransparentandhomogeneouspH60-46.50256.50606.50透明均一Transparentandhomogeneous透明均一060902Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous6.506.506.50透明均一6Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous6.5

10、06.506.50透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous6.506.506.50透明均一060904Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous6.506.506.50透明均一6Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneou

11、s6.506.506.50透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous6.506.506.50透明均一060906Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous6.506.506.50透明均一6Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomogeneous透明均一Transparentandhomoge

12、neous6.506.506.5062西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)第36卷2.4紅霉素納米乳的微觀形態(tài)微觀形態(tài)觀察結(jié)果顯示,納米乳的液滴呈球形(圖1),粒徑在2080nm,液滴分布均勻,無(wú)團(tuán)聚現(xiàn)象,表明分散性良好。2.5紅霉素納米乳的體外藥效明其對(duì)溶血性鏈球菌的體外抑菌效果強(qiáng)于紅霉素腸溶片和羅紅霉素片。圖1紅霉素納米乳的電鏡照片F(xiàn)ig.1TransmissionelectronmicrographofErythromycinnanoemulsion表2紅霉素納米乳與紅霉素腸溶片及羅紅霉素的體外藥數(shù)比較Table2MBCandMICofErythromycinNanoemulsionsEr

13、ythromycinEntericcoatedTabletsandRoxithromycinTablets細(xì)菌Bacteriummg/mL紅霉素納米乳ErythromycinNanoemulsionMBCMIC635Eryt0.5金黃色葡萄球菌Staphylococcus溶血性鏈球菌3討論本試驗(yàn)采用偽三元相圖法篩選出最適合的配方制備紅霉素納米乳。納米乳是自發(fā)形成的,只要配方合適,不需要外力做功,但本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),采用將各組分簡(jiǎn)單混合在一起的方法,雖能形成透明的納米乳,但不如采用轉(zhuǎn)相乳化法形成的速度快。轉(zhuǎn)相乳化法是先將表面活性劑/助表面活性劑相與油相混合,攪拌均勻,然后向體系中緩慢滴加水相,邊加邊攪

14、拌,直到將水加到足夠量,即可得到所需要的O/W型納米乳。納米乳是由水相、油相、表面活性劑和助表面活性劑形成的透明均一的熱力學(xué)穩(wěn)定體系,納米乳液滴呈球形,粒徑為10100nm。本試驗(yàn)制備的紅霉素納米乳為淡黃色、澄清透明、均一的液體,穩(wěn)定性好,符合納米乳的一般性質(zhì)特點(diǎn);在透射電鏡下其液滴呈球形,粒徑在10100nm,且分布均勻、無(wú)團(tuán)聚現(xiàn)象,表明分散性良好。納米乳體系是熱力學(xué)穩(wěn)定體系,一旦形成就非常穩(wěn)定,幾乎不受外界條件的干擾。對(duì)納米乳自發(fā)形成和其所具有的較高穩(wěn)定性,有人提出了瞬時(shí)負(fù)界面張力機(jī)制16表面活性劑存在時(shí)大大降低;在助表面活性劑存在時(shí)可產(chǎn)生混合吸附;在某些非離子表面活性劑達(dá)到一定濃度時(shí),會(huì)

15、進(jìn)一步下降至超低值(10-310-5mN/m),以至產(chǎn)生瞬時(shí)負(fù)界面張力。由于負(fù)界面張力不能存在,體系將自發(fā)擴(kuò)張界面,使更多的表面活性劑和助表面活性劑吸附于界面而使其體積濃度降低,直至界面張力恢復(fù)至零或微小的正值。這種由瞬時(shí)負(fù)界面張力導(dǎo)致的體系界面自發(fā)擴(kuò)張的結(jié)果就形成了納米乳。如果納米乳發(fā)生聚結(jié),則界面面積縮小,又產(chǎn)生負(fù)界面張力,從而對(duì)抗納米乳的聚結(jié),使其保持穩(wěn)定。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,高速離心和在-4、室溫、60時(shí)留樣觀察,紅霉素納米乳體系均未發(fā)生肉眼可見(jiàn)的外觀變化,表明制備的紅霉素納米乳穩(wěn)定性良好。本試驗(yàn)結(jié)果還表明,紅霉素納米乳具有較好的抑菌和殺菌作用,其原因很可能是紅霉素納米乳的粒徑小,更易于使

16、藥物附著于細(xì)菌上,并滲透進(jìn)入細(xì)菌的內(nèi)部干擾細(xì)菌代謝而發(fā)揮抑菌或殺菌作用。從這個(gè)層面上講,若將紅霉素納米乳制成外用藥物也有非常好的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)1楊驚宇,嚴(yán)冬.新型藥物劑型微乳J.中國(guó)醫(yī)學(xué)工程,。該機(jī)制認(rèn)為,油/水界面張力在第3期2005,13(4):3782382.芮亞培等:紅霉素納米乳的制備及其藥效學(xué)研究63YangQY,WuDC,WuH,etal.ThePreparationandCharac2teristicsofFluorouracilNanoemulsionJ.PhaymJChinPLA,2005,21(3):1702173.(inChinese)9SuchatW,NigelMD

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20、splacementmethodJ.ColloidPolymSci,2001,279(10):7842792.4梅興國(guó).生物技術(shù)藥物制劑基礎(chǔ)與應(yīng)用M.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2004:2702271.MeiXG.Biotechnologypharmaceuticalpreparation-baseandapplicationM.BeijingchemicalindustryPublishingHouse:2004:2702271.(inChinese)5何蕾,王桂玲,張強(qiáng).紫杉醇納米乳劑的體內(nèi)外考察J.藥學(xué)學(xué)報(bào),2003,38(3):2272230.HeL,WangGL,ZhangQ.Studi

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